氧胁迫对人肝癌细胞生长分化和凋亡的影响

The human hepatoma cells SMMC-7721 were treated with different concentrations of ascorbic acid (50-800 mumol/L) and FeSO4 (2.5-40 mumol/L) system to generate oxidative stress at various degrees. The oxidative stress induced by the system were mainly contributed to hydroxyl radical. All the various degrees of oxidative stress in this study are able to inhibit the proliferation of hepatoma cells. While low levels of oxidative stress may cause hepatoma cells lost some malignant features, such as aggregation of Con-A to the cell surface, alpha-fetoprotein, gamma-glutamyltransepeptidase and tyrosine-alpha-ketoglutarate transaminase, all of the 4 indices tended to cell differentiation, coloning efficiency potential decreased significantly, and apoptotic cells appeared. The numbers of apoptotic cells increased with the increasing of oxidative stress. The apoptotic cells exhibited non-adherent, smaller, chromatin condensed around the periphery of the nucleus in the shape of crescent, nuclear fragmentations but with intact cellular membrane, and DNA degraded to around 21.2 kbp fragment. All of the results showed that there is possibility to inhibit hepatoma cells growth, to promote differentiation and apoptosis, and therefore to initiate reverse transformation via strict regulation of oxidative stress.     

异视黄酸对人肝癌细胞的诱导分化作用

10μmol/L的异视黄酸(13顺视黄酸,IRA)可使培养的人肝癌细胞株SMMC-7721中肝癌标志酶γ-GT逐日下降,而肝细胞分化酶TAT明显增加,峰值从对照的第4天延至第6天。这些作用基本上和视黄酸(全反式视黄酸,RA)相仿,唯IRA培养后期(第6、8天)的作用强于RA。用ABC免疫组织化学法发现:IRA还可使该细胞生成的甲胎蛋白(AFP)减少,尤其在培养的第4天作用最为明显,仅为对照细胞的1/3—1/4。并且,在IRA培养4天后,细胞表面的纤维连接蛋白Fn增高至对照的6.7—8.2倍。这些结果提示IRA能使肝癌细胞某些恶性表型转变,向正常细胞的方向诱导分化。     

重楼皂苷Ⅰ对肝癌细胞的增殖及凋亡的影响

探讨重楼皂苷Ⅰ(paris saponinⅠ,PSⅠ)在体外对人肝癌SMMC-7721细胞株增殖和凋亡的影响及相关机制.MTT法检测PSⅠ对肝癌SMM-C7721细胞株的增殖抑制作用,Hoechst 33528染色法观察细胞核的形态学变化,流式细胞术Propidium iodide(PI)染色检测细胞周期及凋亡的情况,免疫印迹的方法检测Fas、Bcl-2、Bax、细胞周期素D1(cell cycle regulatory factor D1,Cyclin D1)和细胞周期素E(cell cycle regulatory factor E,Cy-clin E)的表达情况.PSⅠ能时间和浓度依赖性的抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05).干预后的SMMC-7721细胞染色质浓缩,核碎裂,凋亡小体形成,呈典型的凋亡变化.细胞周期阻滞于G1期,并且有凋亡峰形成,呈浓度依赖性.PSⅠ能浓度依赖性地上调Fas和Bax的表达,下调Bcl-2、Cyclin D1和Cyclin E蛋白的表达水平.PSⅠ可能是通过阻滞肿瘤细胞的生长及诱导细胞凋亡等机制,从而抑制肝癌细胞的增殖.     

骨形成蛋白7基因诱导人肝癌细胞的凋亡

目的 构建表达重组人骨形成蛋白7 （bone morphogenic protein 7, BMP7）基因的重组逆转录病毒,观察其对人肝癌细胞HepG2的凋亡诱导活性,并探讨其作用机制。方法 克隆BMP7基因,以loxP同源重组法构成逆转录病毒载体pLP-LNCX-BMP7（pLLBMP7）,转染包装细胞PT67进行病毒包装并测定病毒滴度;将逆转录病毒感染人成骨细胞,MTT法检测细胞生长变化,琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡;Western blotting检测BMP7,caspase-3和bcl-2蛋白表达。结果 重组逆转录病毒载体pLLBMP7经鉴定连接正确,转染PT67细胞后上清液中可得到病毒,滴度达1×109pfu;MTT检测见pLLBMP7病毒组48和72h细胞抑制率高于对照组（35.1% vs. 5.3%,68.5% vs.18.3%,均p<0.05）,48h可见BMP7蛋白高表达。琼脂糖凝胶电泳出现典型梯形条带;流式细胞仪检测出现凋亡峰,于转染48h后达最高峰,其凋亡百分率高达14.42%;BMP7蛋白高表达时caspase-3蛋白的表达亦有显著升高,但bcl-2蛋白未见表达差异。结论 构建了BMP7逆转录病毒,在体外能够有效地诱导人肝癌细胞HepG2的凋亡,其可能是通过激活caspase-3而发生作用。     

蛋白激酶B对活性氧调节7721人肝癌细胞生长的影响

以有义和反义人猛型超氧化物歧化酶（MnSOD）、蛋白激酶B（PKB）cDNA分别转染入7721肝癌细胞系建立高、低表达MnSOD和PKB的模型,通过改变细胞内、外源性活性氧和抗氧水平及PKB的活性,研究活性氧调节肝癌细胞生长过程中与PKB信号转导途径的关系。结果表明,低浓度外源性活性氧过氧化氢（1～10umol/L）应激及MnSOD低表达细胞中内源性活性氧水平升高,都可促进肝癌细胞增殖,而抗氧化剂丹参素(40mg/L）干预及MnSOD高表达使细胞内源性活性氧水平相对下降,都可一定程度抑制细胞的生长。采用^32P参入法检测细胞PKB酶活性,发现细胞内、外源性活性氧均能激活PKB,而采用抗氧化干预,能明显抑制PKB的酶活性。采用PT-PCR法检测AP-1转录因子组成成员c-fos和c-jun基因的mRNA表达,发现与PKB活性呈正比。说明活性氧在特定细胞内氧化/还原环境下可通过激活PKB途径传递信号、调控转录因子AP-1表达、促进肝癌细胞生长。     

重组荞麦胰蛋白酶抑制剂对人肝癌细胞的凋亡及半胱氨酸天冬酶活性的影响

先前的研究表明,基因重组荞麦胰蛋白酶抑制剂 (rBTI) 具有诱导不同肿瘤细胞凋亡的作用.为了揭示其诱导肿瘤细胞凋亡的可能机理,从基因水平上探讨与凋亡有关的分子事件,本研究用不同浓度的 rBTI 体外作用于人肝癌细胞 HepG2 后,采用 MTT 比色法检测抑制剂对epG2 细胞的抑制率,用 DNA 凝胶电泳和细胞核的形态学观察检测 HepG2 细胞的凋亡.结果表明,rBTI 在体外能够明显抑制 HepG2 细胞的增长,并诱导细胞凋亡.另外,细胞凋亡与Bcl-2/Bax mRNA 水平有关.通过 RT-PCR 检测发现,细胞经过rBTI处理后,抗凋亡基因Bcl-2 mRNA 水平下调,促凋亡基因 Bax mRNA 有所上调,而对照 GAPDH 无变化.对 HepG2细胞中 Fas/Fas 配体及半胱氨酸天冬酶（caspase）的研究证明,细胞经过 rBTI 处理后,对死亡受体 Fas mRNA没有影响; rBTI 可明显激活caspase-3 和 caspase-9 酶活性, 对caspase-8 活性几乎无影响.上述结果表明,rBTI 对HepG2 细胞具有明显的诱导凋亡作用,其诱导细胞凋亡的机制与 caspase-3 依赖性凋亡调节信号通路有关,未涉及 Fas/Fas 配体途径.     

不同浓度胆汁酸盐对人肝胆管癌细胞凋亡的影响

目的:探讨不同浓度胆汁酸盐对人肝胆管癌细胞RBE凋亡的影响。方法:采用0、100μM、500μM、1 m M胆汁酸盐作用于人肝胆管癌细胞后,采用流式细胞术检测细胞的凋亡率,Western-blot法检测细胞Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果:胆汁酸盐浓度为0、100μM、500μM、1 m M时,人胆管癌细胞的凋亡率分别为(0.7±0.12)%、(0.9±0.15)%、(1.4±0.17)%、(4.8±0.14)%,以1 m M胆汁酸盐所致人胆管癌细胞的凋亡最明显,Bcl-2蛋白表达量逐渐减少,Bax表达量逐渐增多,以1 m M胆汁酸盐时作用最明显,差异具有统计学意义(P0.05)。1 m M胆汁酸盐处理的人肝胆管癌细胞的形态由原来的梭形变成圆形,细胞核固缩、碎裂。结论:胆汁酸盐可以以浓度依赖性的方式导致人胆管癌细胞凋亡,以1 m M胆汁酸盐的作用最明显。     

HMBA诱导人肝癌SMMC-7721细胞分化的观察

本文研究HMBA对人肝癌SMMC-7721细胞的诱导分化作用.细胞生长曲线测定和细胞分裂指数观察显示HMBA可明显抑制细胞增殖,细胞生长抑制率达64.14%,分裂指数抑制率为53.88%.光镜和透射电镜观察可见HMBA能诱导人肝癌SMMG-7721细胞形态和超微结构发生恢复性改变.生化检测或免疫细胞化学方法观察显示,HM-BA处理后细胞γ.谷氨酸转肽酶(γ-GT)活性和甲胎蛋白(AFP)、增殖细胞核抗原(PCNA)表达均降低,而酪氨酸.酮戊二酸转氨酶(TAT)活性增强.流式细胞仪分析表明HMBA引起细胞发生G0/G1期阻滞.以上结果表明HMBA能有效抑制人肝癌细胞恶性增殖活性,逆转肝癌细胞恶性形态与超微结构特征,改变肝癌细胞相关酶活性和抗原表达,引发G0/G1期阻滞,从而对肝癌细胞具有明显的诱导分化作用.     

APOPTOSIS,REDIFFERENTIATION AND ARRESTING PROLIFERATION SIMULTANEOUSLY TRIGGERED BY OXIDATIVE STRESS IN HUMAN HEPATOMA CELLS

The effects of oxidative stress (ascorbic acid—ferrous system) on the proliferation, differentiation and apoptosis of the human hepatoma cell SMMC-7721 were studied. Oxidative stress significantly inhibited cell proliferation and induced morphological differentiation. Whatever the indices related with cell malignancy, such as α-fetoprotein and c-glutamyltranspeptidase or the index related with cell differentiation, such as tyrosine-α-ketoglutarate transaminase, all inclined evidently to normalization. The tumour's clonogenic potential decreased significantly. Moreover, together with differentiation, the phenomenon of apoptosis was found by the appearance of apoptotic bodies, detached cells, and apoptotic morphological feature. Although, their DNA was not degraded into oligonucleosomal fragmentation, the DNA was cut into larger fragments (about 21.2kbp) of a size associated with chromatin loops. These findings indicated that oxidative stress can induce both differentiation and apoptosis simultaneously in tumour cells. All the results showed that oxidative stress may initiate the tumour cells reverse transformation. The possible mechanism of the differentiation and apoptosis induced by oxidative stress may be related to the lipid peroxidation of cell membrane.     

流式双参数检测在肿瘤增殖,分化与凋亡中的应用

流式细胞术已在生物医学研究中有广泛应用,双参数流式术显著特点是给同一细胞群提供双重信息。本文成功地将这一先进技术用于食管癌增殖、分化与凋亡的检测,显示流式双参数的广阔应用前景。     

氧化型胆固醇引起的血管平滑肌细胞氧化应激损伤研究

以胆固醇为对照,研究动脉粥样硬化症中常见的两种氧化型胆固醇（３β,５α,６β－三羟胆固烷、２５－羟胆固醇）对血管平滑肌细胞损伤及损伤机制。结果表明,于损伤早期,细胞的谷胱甘肽过氧化物酶活性增高,还原型谷胱甘肽含量减少。损伤后期谷胱甘肽过氧化物酶活性下降,细胞谷胱甘肽耗竭,细胞总巯基含量下降,细胞脂质过氧化产物含量和细胞羰基含量明显增高,表明细胞出现严重的氧化性损伤。而纯胆固醇,在与这两种氧化型胆固醇相同的作用时间,作用条件及剂量大于这两种氧化型胆固醇两倍以上的情况下,未曾引起细胞抗氧化酶、谷胱甘肽、蛋白质及脂质的任何明显改变。外给金属硫蛋白可减轻细胞损伤,外给Ｌ－ｂｕｔｈｉｏｎｅｉｎ－［Ｓ,Ｒ］－ｓｕｌｆｏｘｉｍｉｎｅ使细胞损伤加重,说明损伤与巯基含量有关。结果提示氧化型胆固醇引起的细胞损伤可能是通过氧应激产生。     

端粒酶RNA组分的反义寡核苷酸对BEL-7404人肝癌细胞端粒酶活性的抑制和细胞凋亡的诱导

端粒酶在四株人肝癌细胞中均有表达,而在正常人肝组织标本中却为阴性.在终浓度为1μmol/L时,针对端粒酶RNA组分的反义寡核苷酸对BEL7404人肝癌细胞端粒酶活性具明显抑制作用,而正义和错义寡聚物则对该细胞端粒酶活性几乎没有影响.随着反义物浓度的降低,抑制作用亦随之减弱.用终浓度为5μmol/L的反义物处理培养的BEL-7404人肝癌细胞96 h后,细胞形态发生变化.原位末端标记法(TLUNEL)显示阳性标记细胞,流式细胞仪分析表明反义物作用后细胞凋亡率达到42.58%.     

HPI在肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞特异性抑增殖效应研究

肝细胞增殖抑制因子（Ｈｅｐａｔｉｃｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｎｈｉｂｉｔｏｒ,ＨＰＩ）粗制品、半纯品和纯品对体外培养的人肝癌细胞具有显著抑增殖作用,随样品纯度提高抑制活性逐渐增强。纯品（浓度５μｇ／ｍｌ）的抑制率达７７．７１％。正常成年大鼠肝细胞呈ＨＰＩ阳性表达。在ＤＥＮ诱发大鼠肝细胞癌的发生发展过程中,转化的癌前期细胞和肝癌细胞呈ＨＰＩ阴性表达。表明肝细胞ＨＰＩ的表达能力在其癌变过程中消失,从而失去了自身的抑癌作用。     

EFFECTS OF BETA MERCAPTOETHANOL ON THE PROLIFERATION AND DIFFERENTIATION OF HUMAN OSTEOPROGENITOR CELLS

Antioxidants are known to influence metabolism and promote cell survival in a number of cell culture systems. However, their effects on the modulation of bone cell differentiationin vitroare not clearly defined. In the present studies we have investigated the effects of β-mercaptoethanol (βME) and ascorbate alone and in combination on human osteoprogenitors derived from bone marrow fibroblasts. In primary marrow cultures, βME stimulated colony formation (2-fold), alkaline phosphatase activity (3.5-fold) and, increased DNA synthesis (8-fold) after 21 days. Cell proliferation was increased significantly by βME during the first 4 days of a 10-day culture period, indicating stimulation of marrow osteoprogenitor proliferation. Ascorbate did not significantly augment the effects of βME in primary cultures or long-term cultures of passaged bone marrow fibroblasts. These findings indicate a potential beneficial role for βME addition for the optimal maintenance of colony formation, cell proliferation and differentiation of marrow osteoprogenitor cells in primary human bone marrow fibroblast cultures.     

甲胎蛋白在体外对人肝癌细胞生长的影响

本文用MTT比色法观察了甲胎蛋白(AFP)在体外对人肝癌细胞生长的影响。结果表明,AFP能促进SMMC-7721人肝癌细胞的生长。当AFP与AFP抗体合用时,AFP抗体能减弱AFP对SMMC-7721细胞生长的促进作用;AFP抗体单用对此种细胞的生长亦有抑制作用。另一方面,在相同的实验条件下,AFP和AFP抗体对HL-60人白血病细胞的生长无明显影响;提示AFP的促生长作用具有一定的肿瘤细胞特异性,并非一种蛋白质对培养细胞的非特异性营养作用。此外,AFP亦能促进MCF-7人乳腺癌细胞的生长,AFP抗体对此种细胞的生长有抑制作用。由于MCF-7细胞存在功能性AFP受体,也能合成和分泌AFP。这就提示,人肝癌细胞中的AFP很可能与其受体特异性结合,产生促生长效应。确切机制尚待进一步阐明。     

睾丸酮对离体培养人蜕膜细胞形态的影响

实验选用早孕人工流产蜕膜组织进行体外培养,观察睾丸酮对蜕膜细胞形态的影响并与RU 486加以比较。研究结果提示:(1)睾丸酮(6.9×10~(-5)mol/L)能抑制离体培养人蜕膜细胞的生长发育,但这种抑制作用是暂时和可恢复的且与用药剂量及持续时间有关。(2)睾丸酮对蜕膜细胞形态的影响与RU 486(4.7×10~(-4)mol/L)的作用效果相似。     

血管平滑肌细胞的体外氧化应激反应及雌激素的影响

目的探讨雌激素对VSMC氧化应激反应的影响及机制。方法第3-4代雌性大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)在有或无10-8mol/L 17b-雌二醇(E2)存在下用不同浓度(0-250mmol/L)H2O2诱导氧化应激;MTT法,流式细胞术,Western blot分别检测VSMC活力,细胞周期,MAPK信号通路活性的变化。结果当浓度低于25mmol/L时,H2O2对VSMC活力无影响;当浓度为50-150mmol/L时,VSMC活力呈剂量依赖性下降,并伴随G0/G1期细胞升高;当浓度达到200mmol/L时,细胞活力下降至最低点并出现凋亡峰。10-8mol/L E2可显著抑制150mmol/L H2O2诱导的VSMCERK和p38的磷酸化、从而缓解VSMC G0/G1期阻滞,并降低高浓度H2O2诱导的VSMC凋亡。结论中等浓度的H2O2(50-150mmol/L)抑制VSMC增殖;高浓度H2O2(≥200mmol/L)不仅抑制VSMC生长、且导致部分VSMC凋亡;雌激素可通过抑制ERK和p38活性对氧化应激的VSMC起保护作用。     

Aroclor 1248对大弹涂鱼的毒性与氧化胁迫

<正>多氯联苯(PCBs)是典型的持久性有机污染物(POPs),具有难降解性、生物毒性、生物蓄积性、远距离迁移性,因此可通过食物链而富集并直接危害人类健康,已成为全球性的重要污染物之一。近20年来,虽然在多数工业化