产植酸酶菌株的筛选及产酶条件的研究

通过初筛和复筛,得到一株产植酸酶较高的黑曲霉AN00101菌株,并对该菌种的产酶条件进行了研究.结果表明:配制加水量为35%的麸皮固体培养基,在37℃培养114h,用3%CaCl2进行提取,每g固体发酵物酶活高达1.3×104IU.经L9(34)正交实验表明,硫酸铵和硫酸镁对产酶有显著的促进作用,适宜添加量分别为4%和0.3%.     

激光诱变筛选高产植酸酶黑曲霉菌株的研究

用1.06um,15KHz高重复率声光调QNd：YAG激光以20W和15W的辐照功率分别照射产植酸酶的黑曲霉孢子液和原生质体液不同时间,检定再生菌落数并经透明圈初筛和摇瓶复筛,测定诱变菌株所产植酸酶酶活。结果表明：20W的功率辐照黑曲霉孢子1′以上,致死率近乎100…,15W功率辐照原生质体液20″-4′,存活率在8.571％-117.14％之间,正变率在27.45％-100％之间,正变辐度60.69％-124.96％,说明原生质体比孢子耐受激光诱变的能力强,并且诱变效果好。筛选到了一株酶活提高达3.75倍的单个变异菌株。     

中性植酸酶高产菌株的筛选及产酶条件研究

以地衣芽孢杆菌为原始出发菌株,用紫外线反复诱变,最终获得一株中性植酸酶高产菌株B.licheniformis LL8,其酶活性约为原始出发菌株的2倍。该菌株具有稳定的遗传性能。通过单因素试验和正交试验对发酵条件进行了优化,当培养温度为55℃,pH为7.5,接种量为10%时,经30h培养后,中性植酸酶活力最高达到2268.4U/mL。     

平菇产植酸酶菌株的筛选及植酸酶基因区域的克隆

从平菇（Pleurotus ostreatus）8个菌株中筛选出3株高产植酸酶菌株,并根据GenBank中植酸酶基因的保守区设计并合成一对特异性引物,以平菇菌丝的总DNA为模板,通过PCR扩增,获得了一条长约920 bp的片段.DNA序列测定结果表明,该片段长度为919 bp.采用blast进行序列比对,结果表明：该片段与曾报道的源于Trametes pubescens的植酸酶phyA（GenBank Accession：AJ310700）基因相比较,其DNA序列同源性为93%.该片段含有3个内含子,含有植酸酶基因的活性位点保守序列（Active-site sequence）RHGARYPT.     

中性植酸酶菌株的筛选及性质

从天然土壤中筛选出产胞外中性植酸酶的细菌20余株,通过钼蓝法对菌种进行复筛,确定phy7为研究菌。通过16SrDNA测序分析方法鉴定该菌株属于绿脓假单胞菌属。结果表明：该菌株分泌中性植酸酶,其最适反应pH为7．0、最适反应温度为40℃;在37℃时以植酸钠为底物的Km为0．26mmol／L,max为0．0506nmol／min。金属离子zn2＋、Al3＋、Cu2＋和Mn2＋等对该酶有抑制作用,而Fe2＋等则有一定的激活作用。     

产植酸酶菌株的筛选及其植酸酶基因的克隆

从土壤中筛选到产植酸酶活性较高的烟曲霉菌株WY-2,其植酸酶最适pH为5.5,最适温度为55℃。通过对烟曲霉WY-2植酸酶基因进行PCR扩增,获得了一个1.5kb大小的特异性产物,将其克隆到载体pMD18-T中。测序结果分析表明,该基因片段含有植酸酶基因完整的阅读框架(ORF),基因全长1459bp,其中包含一个61bp的内含子,编码465个氨基酸,有7个潜在的糖基化位点,5′端有一编码26个氨基酸的信号肽序列。该基因与已报道的烟曲霉ATCC34625植酸酶基因有91%同源性,编码的氨基酸序列同源性为91%。     

植酸酶高产菌株的诱变选育

以黑曲霉MAO21为出发菌株,经紫外线、亚硝基胍单独处理和复合处理,获得一株植酸酶高产菌株UN-02－10。该菌株具有稳定的遗传性能,在经过优化的摇瓶培养基上发酵108h,其植酸酶活力达到2950～3O15u／ml,是原始出发菌株的3.6倍。     

采用D-饱和试验设计确定产植酸酶菌株代谢的营养条件

本研究对黑龙江海伦市种植大豆作物的黑色土壤中筛选得到的产植酸酶菌株(穗霉属26-13-4)的最佳营养条件进行优化。针对发酵培养基中的碳源、氮源、麸皮的添加量进行D-饱和最优化设计, 拟合三者之间的方程, 并确定最优化添加量。     

植酸酶产生菌的抗性突变体的筛选

植酸酶产生菌原始出发菌株,黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒ）Ｇ２株,其在液体发酵时,其酶活可达２．６ＩＵ／ｍｌ发酵液,但离工业化生产相差甚远,必须进行菌株改良。诱变育种的方法及策略的设计必须建立在对目的菌株生理及其有关代谢途径的深入了解的基础上,菌株基因发生突变后常伴随着某些形态和生理特征的改变,如出现分泌色素,对初级代谢及次级代谢产物的调节作用解除,出现对某些抗生素的抗性和形成营养缺陷型等,而这些特征的出现常伴随着其产量的提高,并且两者具有一定的理论联系。因此这些特征常用于富集目的菌…     

菊粉酶酶源菌株筛选及其基因克隆

筛选出一株产菊粉酶酶源菌株AF10,鉴定为黑曲霉(Aspergillus niger)。PCR扩增AF10的内切菊粉酶基因inuA1并进行核苷酸序列分析。结果表明inuA1全长1551bp,没有内含子,所编码的氨基酸序列中,存在4个潜在的N糖基化位点,其中存在菊粉酶的保守序列WMNEPN。以pUC118为克隆载体,以E.coli JM109为受体菌株,获得菌粉酶基因克隆。     

苹果渣基质柠檬酸高产菌株选育

分别以固态苹果渣、苹果渣固态酶解物、苹果渣酶解液和10%葡萄糖溶液为发酵基质研究了17株野生黑曲霉的柠檬酸产生能力,并对获得的4株柠檬酸高产菌进行了诱变育种。结果表明:17株黑曲霉在4种发酵基质中均能良好生长并发酵产生柠檬酸,不同菌株在同一发酵基质中产酸能力间存在差异。FG17、FG23、FG26、FG30等4株菌苹果渣基质柠檬酸产生能力较高,且在4种不同发酵基质中产酸性能稳定。4株菌分别经紫外线和60Co-γ射线诱变后得到的正向突变株柠檬酸产率均显著提高,突变株中FG26-15-4(UV)发酵苹果渣后柠檬酸产率最高,达11.32%,FG23-13-3(γ)发酵苹果渣酶解液后柠檬酸产率最高,达2.73 mg/mL,均高于现有研究报道,可作为不同类型苹果渣基质柠檬酸发酵用菌种。     

微生物酶解法产生阿拉伯糖——菌种筛选与初步鉴定

使用半纤维素平板法从土壤分离菌中筛选到产半纤维素酶活较高的真菌。将这些菌株在含玉米芯半纤维素的培养基中发酵,鉴定发酵液中还原糖产量,从中筛选出3株产还原糖较多的菌。将其发酵产物经柱前衍生,HPLC检测,发现其中DHC菌株的发酵产物以木糖和阿拉伯糖为主,而培养基中的葡萄糖大部分被利用,可用于发酵法联产阿拉伯糖和木糖。对DHC菌株通过菌落形态、孢子形态以及ITS区基因序列测序分析,初步确定该菌为亮白曲霉(Aspergillus candidus)。对于亮白曲霉产生的半纤维素酶国内外尚较少研究报导,可为开发利用新的微生物资源奠定基础。     

一株产纤维素酶真菌的筛选、鉴定及酶学性质初步研究

经过初筛和复筛从土样中分离出1株高产纤维素酶真菌SNB9,经形态学和ITS序列分析。鉴定为黑曲霉（Aspergu Uusniger）。生长条件的测定显示该菌生长范围偏酸。发酵后纤维素酶的最适作用pH在4．0—5．0,最适作用温度在45—55℃。滤纸酶活为9．29U／mL,C,酶活为23．69U／mL,CMCase酶活为38．23U／mL,β-葡萄糖苷酶活为65．52U／mL。发酵液中除了纤维素酶,还发现有辅助酶,包括木聚糖酶、淀粉酶、果胶酶、蛋白酶。     

产果胶酶菌株的筛选

从不同来源的生物样品中分离到产果胶酶菌株,采用刚果红染色法和十六烷基三甲基溴化铵沉淀法进行初筛,通过摇瓶发酵试验进行复筛,最终获得2株果胶酶活力较高的细菌G16和G25,其酶活力分别达到6．37万U／mL和6．84万U／mL。     

用原生质体诱变选育高植酸酶活的黑曲霉变异株

将 2株黑曲霉菌株 (I,II)在诱导产植酸酶的条件下分别制备成原生质体 ,并考察其原生质体形成及再生 ,经紫外诱变后 ,发现涂平板的黑曲霉 (II)原生质体在再生过程中菌落形态发生明显变化。考查突变菌种的植酸酶酶活 ,筛选到其中一个变异株比原始黑曲霉 (II)亲本株的植酸酶酶活提高了 2 .2倍。     

手性拆分环氧氯丙烷菌株的筛选、鉴定及产酶条件研究

从土壤中筛选到5株环氧化物水解酶生产菌,并通过ITS序列鉴定了其中的C375菌,结果为黑曲霉（Aspergillus nigerZJB-09103）。考察了培养基不同碳源、氮源、金属离子和pH等对产酶的影响,得到了较佳的培养基条件：淀粉16g／L,豆饼粉3g／L,蛋白胨3g／L,KH2PO4 0．4g／L,K2HPO4 0．8g／L,MgSO4 0．2g／L,ZnSO4 0．03g／L,pH6．5。采用优化后的培养基条件,酶活力达到156．1U／L,比优化前初始发酵培养条件下的酶活提高了252％,当环氧化物水解酶催化时间为10h时,（s）-环氧氯丙烷的对映体过量值（e．e．）可达99．0％。产率为18．6％。     

The type III secretion system is involved in the invasion and intracellular survival of Escherichia coli K1 in human brain microvascular endothelial cells

Two thermostable phytases were identified from Thai isolates of Aspergillus japonicus BCC18313 (TR86) and Aspergillus niger BCC18081 (TR170). Both genes of 1404 bp length, coding for putative phytases of 468 amino acid residues, were cloned and transferred into Pichia pastoris . The recombinant phytases, r-PhyA86 and r-PhyA170, were expressed as active extracellular, glycosylated proteins with activities of 140 and 100 U mL⁻¹, respectively. Both recombinant phytases exhibited high affinity for phytate but not for p -nitrophenyl phosphate. Optimal phytase activity was observed at 50 °C and pH 5.5. High thermostability, which is partly dependent on glycosylation, was demonstrated for both enzymes, as >50% activity was retained after heating at 100 °C for 10 min. The recombinant phytases also exhibited broad pH stability from 2.0 to 8.0 and are resistant to pepsin. In vitro digestibility tests suggested that r-PhyA86 and r-PhyA170 are at least as efficient as commercial phytase for hydrolyzing phytate in corn-based animal feed and are therefore suitable sources of phytase supplement.     

黑曲霉N25株产植酸酶及酶促反应条件研究

从植物种子中研究筛选出高产植酸酶的黑曲霉N25,进行了最适液体培养基的筛选,研究了黑曲霉N25在玉米半合成液体培养基中所产植酸酶的最适酶促反应条件。结果表明：在四种培养基中,玉米半合成液体培养基为最适培养基,黑曲霉N25产植酸酶高峰期在96h,黑曲霉N25所产植酸酶的酶促反应最适pH为2.6和4.6,并具有很好的热稳定性,一定浓度的Ca^2 ,Mg^2 ,Mn^2 ,Cr^3 ,Li^ ,EDTA和高磷是植酸酶活性的抑制剂,1.0mmol/ml聚乙二醇1000,0.3nmol/mL Fe^2 和低磷对植酸酶活性具有激活作用。