滤泡辅助性T 细胞在特发性血小板减少性紫癜患者的变化及其意义*

目的:研究滤泡辅助性T细胞(T follicular helper cells,Tfh)在免疫性血小板减少性紫癜(immune thrombocytopenic purpura,ITP)患者的表达并探讨其临床意义。方法:用流式细胞术检测20例健康人、25例ITP患者外周血CXCR5+CD4+T细胞占CD4+T细胞的比例。结果:与健康对照组相比,ITP患者外周血CXCR5+CD4+T细胞占CD4+T细胞的比例显著增高(P<0.05)。结论:Tfh在ITP患者外周血比例增高,为Tfh能否为ITP的免疫调节和干预提出新的方向提供了证据。     

慢性阻塞性肺疾病患者外周血CD4~＋CD25~＋CD127~（（Low/-））调节性T细胞的检测及临床意义

目的：研究CD4＋CD25＋CD127（Low/-）调节性T细胞在慢性阻塞性肺疾病（COPD）急性发作期外周血中的比例改变及其临床意义。方法：以25例COPD急性发作期患者外周血为研究组,20名正常人外周血作为对照组,采用三色直接荧光素标记法和多参数流式细胞仪检测外周血CD4＋CD25＋CD127（Low/-）调节性T细胞的比例,同时检测外周血C-反应蛋白（CRP）、血沉（ESR）、免疫球蛋白（Ig）等水平。结果：COPD急性发作期患者外周血CD4＋CD25＋CD127（Low/-）调节性T细胞占外周血CD4＋T淋巴细胞的比例明显低于健康对照组（P〈0.01）。而COPD急性发作期患者外周血CRP、ESR、Ig等水平明显高于健康对照组（P〈0.05）。COPD患者外周血调节T细胞下降与CRP和IgG升高成负相关。结论：COPD患者外周血CD4＋CD25＋CD127（Low/-）调节性T细胞在CD4＋T淋巴细胞的比例明显减少,调节性T细胞等免疫调节因素可能在COPD的发病机制发挥重要作用。     

循环滤泡辅助性T细胞亚型与重症肌无力患者临床特点之间的相关性分析

目的:分析循环滤泡辅助性T(c Tfh)细胞亚型与重症肌无力(MG)患者临床特点之间的关系。方法:横断面研究30例MG患者外周血c Tfh细胞各个亚型百分比和临床特点之间的关系。c Tfh细胞亚型的百分比是通过流式细胞术获取的。MG患者的临床特点包括性别、年龄、病程、胸腺情况、美国重症肌无力协会(MGFA)分型和重症肌无力量化(QMG)评分。结果:CD4~+CXCR5~+ICOS~+、CD4~+CXCR5~+PD-1~+和CD4~+CXCR5~+CXCR3-CCR6~+(Th17样)c Tfh细胞亚型百分比与QMG评分之间存在正相关关系;全身型重症肌无力(GMG)患者在CD4~+CXCR5~+ICOS~+、CD4~+CXCR5~+PD-1~+和Th17样c Tfh细胞亚型百分比要高于眼肌型重症肌无力(OMG)患者,OMG患者在CD4~+CXCR5~+CXCR3-CCR6-(Th2样)c Tfh亚型细胞百分比要高于GMG患者。c Tfh细胞各个亚型百分比与MG患者的性别、年龄、病程、胸腺情况均无显著相关性。结论:CD4~+CXCR5~+ICOS~+、CD4~+CXCR5~+PD-1~+和Th17样c Tfh细胞亚型百分比与MG病情严重性间存在正相关关系,提示c Tfh细胞与MG之间的密切关系。     

非霍奇金淋巴瘤患者外周血中CD4＋CD25＋调节性T细胞亚群变化初探

目的：检测非霍奇金淋巴瘤（non—Hodgkin’s lymphoma,NHL）患者外周血中CD4＋CD25＋调节性T细胞（CD4＋CD25＋regulatoryTcell,Treg）的改变,探讨Treg与NHL的相关性。方法：病例组（n=60）为本院收治的初诊NHL患者,对照组（n=60）为本院健康体检者,用流式细胞技术联合标记CD4、CD25检测对照组及病例组化疗前、化疗后的外周血中CD4＋CD25＋调节性T细胞的分布特点。结果：（1）病例组化疗前外周血中CD4＋细胞比例显著低于对照组（P〈0．05）,CD4＋CD25＋调节性T细胞比例显著高于对照组（P〈0．05）;（2）病例组化疗后,CD4＋细胞比例明显高于化疗前（P〈0．05）,CD4＋CD25＋调节性T细胞比例明显低于化疗前（P〈0．05）;（3）病例组化疗后CD4＋细胞比例与对照组无显著差异（P〉0．05）,而CD4＋CD25＋调节性T细胞比例显著高于对照组（P〈0．05）。结论：非霍奇金淋巴瘤患者外周血中CD4＋CD25＋调节性T细胞比例升高,存在机体免疫抑制,化疗可降低CD4＋CD25＋调节性T细胞比例。     

多发性骨髓瘤患者外周血淋巴细胞亚群分析及与预后因子的相关性

目的通过对多发性骨髓瘤（MM）患者外周血淋巴细胞亚群的检测以评价MM患者机体的免疫功能状态。方法采用流式细胞术检测36例MM患者和25例健康志愿者外周血T、B淋巴细胞、NK细胞及CD4＋CD25＋T细胞的表达。结果与正常对照组相比,MM患者外周血的CD4、CD19细胞的表达显著下调,CD8细胞的表达显著上调,CD4/CD8比值则显著降低（P〈0.05或〈0.01）;MM患者外周血的CD4＋CD25＋T细胞占CD3＋T细胞的比例明显增高（P〈0.01）,且与血清中的β2-MG浓度成正相关（γ=0.56,P〈0.05）。结论 MM患者体内存在淋巴细胞亚群的异常表达、CD4＋CD25＋Treg细胞的异常扩增,可能是MM患者体内广泛存在免疫缺陷的一个主要原因。     

生殖器疱疹初发患者外周血淋巴细胞检测结果分析

目的检测生殖器疱疹初发患者（GH）外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞和B细胞的表达水平,探讨其发病机制与细胞免疫功能之间的关系。方法应用流式细胞仪检测20例初发生殖器疱疹患者外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞和B细胞的表达水平,并与60例复发性生殖器疱疹患者（RGH）、35例健康对照者外周血检测结果相比较。结果（1）初发组和对照组相比,除NK细胞降低差异有显著性外,其他差异无显著性;（2）初发组与复发组相比,初发组T细胞、CD4^＋细胞、CD4^＋／CD8^＋均高于复发组,CD8^＋细胞百分比低于后者,差异有显著性;B细胞、NK细胞比例差异无显著性;（3）复发组与对照组相比,外周血中T细胞、CD4^＋细胞、NK细胞所占比例,CD4^＋／CD8^＋均降低,差异有显著性;CD8^＋细胞百分比升高,差异有显著性;B细胞比例差异无显著性。结论生殖器疱疹初发患者存在细胞免疫功能异常。     

哮喘患者诱导痰和外周血CD3~＋CD56~＋NKT细胞的检测及意义

目的：研究CD3＋CD56＋NKT细胞在哮喘患者急性发作期诱导痰和外周血中的比例改变,并探讨其临床意义。方法：以28例哮喘急性发作期患者为研究组,22名正常人作为对照组,采用二色直接荧光素标记法和多参数流式细胞仪检测诱导痰和外周血CD3＋CD56＋NKT细胞的比例,同时检测外周血IL-4、Ig-E及INF-γ等水平。结果：哮喘患者急性发作期诱导痰和外周血CD3＋CD56＋NKT细胞明显高于健康对照组（P〈0.01）。哮喘患者急性发作期外周血IL-4、Ig-E及INF-γ等水平明显高于健康对照组（P〈0.05）。哮喘患者外周血中CD3＋CD56＋NKT细胞比例与IL-4、Ig-E及INF-γ升高成正相关。结论：哮喘患者急性发作期诱导痰和外周血中的CD3＋CD56＋NKT细胞明显增高,CD3＋CD56＋NKT细胞可能通过调节IL-4、Ig-E及INF-γ等细胞因子从而在哮喘的发病机制发挥重要作用。     

CD4＋CD25＋FoxP3＋调节性T细胞与黑龙江省HIV／AIDS患者病情相关性的研究

目的：比较黑龙江省H1V／AIDS患者与健康对照者（healthy controls,HCs）外周血cD4＋CD25＋F0xP3＋调节性T细胞数量、免疫抑制功能的变化,探讨CD4＋CD25＋FoxP3＋调节性T细胞在HIV／AIDS感染过程中的作用。方法：采用流式细胞仪检测21例HIV／AIDS患者及20例健康对照组的外周血CD4＋CD25＋FoxP3＋调节性T细胞数量的百分比及绝对数量;采用共同培养方法检测HIV／AIDS患者外周血cD4℃D25十FoxP3＋调节性T细胞免疫抑制功能的变化;实时荧光定量聚合酶链反应（RT-FQ-PCR）检测HIV／AIDS患者外周血CD4＋CD25＋FoxP3＋调节性T细胞中FoxP3mRNA的表达。结果：黑龙江省HIV／AIDS患者外周血CD4＋CD25下oxP3＋调节性T细胞比率明显高于HCs（P〈O．01）,而CD4-CD25＋FoxP3＋调节性T细胞的绝对计数显著下降,且与CD4＋T细胞绝对计数成反比;混合淋巴细胞共同培养结果显示,HIV／AIDS患者外周血CD4＋CD25＋FoxP3＋调节性T细胞的抑制功能无明显变化;HIV／AIDS患者外周血CD4＋CD25＋FoxP3＋调节性T细胞的FoxP3mRNA相对表达量无显著变化。结论：黑龙江省HIV／AIDS患者cD4℃D25＋FoxP3＋调节性T细胞的数量变化与病情相关。     

高压氧对正常及SIRS大鼠脾T淋巴细胞的影响

本实验以SIRS为基础,以免疫功能和炎症反应中具有代表性的脾T淋巴细胞为研究对象,观察高压氧对正常机体以及SIRS状态机体的影响并探讨其可能的机制。健康雄性SD大鼠40只,体重约140~180 g,随机分为5组,每组8只。A组：腹腔注射生理盐水（5 mL/kg）;B组：腹腔注射等量生理盐水,做3次高压氧;C组：腹腔注射酵母多糖-石蜡悬液（500 mg/kg）;D组：腹腔注射酵母多糖-石蜡悬液（500 mg/kg）,做1次高压氧治疗;E组：腹腔注射酵母多糖-石蜡悬液（500 mg/kg）,做3次高压氧治疗。采用流式细胞仪计算大鼠脾脏淋巴细胞数量及比例。高压氧治疗（B组）降低正常大鼠外周血CD4＋T细胞百分比（P〈0.01）,对CD8＋T细胞无影响,因此CD4＋/CD8＋T细胞比值下降（P〈0.05）。酵母多糖腹腔注射（C组）使大鼠外周血CD4＋、CD8＋T细胞均减少（P〈0.01）,但CD4＋/CD8＋T细胞比值不变。1次和3次HBO治疗（D和E组）可使酵母多糖所致CD4＋T细胞减少（C组）明显恢复（P〈0.01,P〈0.05）,故CD3＋CD4＋/CD3＋CD8＋比值升高（P〈0.01,P〈0.05）,HBO几乎不影响CD8＋T细胞比例（P〉0.05）。酵母多糖导致大鼠脾脏CD4＋和CD8＋T细胞比例减少;高压氧可减少正常大鼠脾脏CD4＋T细胞比例,而增加SIRS脾脏的CD4＋T细胞比例,而对CD8＋T细胞无影响。     

甘草酸二铵对于HCV相关性B—NHLCD25-和CD25＋T细胞增殖影响研究

目的：本研究初步探究甘草酸二铵（Diammonium Glycyrrihizinate,DG）对HCV相关性B细胞非霍奇金淋巴瘤（B-cellnon-Hodgkin-Slymphoma,B-NHL）CD25-T细胞、CD25＋T细胞的免疫调控作用。方法：应用流式细胞分析仪检测HCV相关性B-NHLCD4＋CD25＋T细胞占CD4＋1r细胞的比例、CD25＋细胞占总PBMC比例,并与单纯HcV感染患者、健康人检测结果相对照。应用免疫磁珠分离法（MACS）分选获得CD25-和CD25＋细胞,将两者和未分选的外周血单个核细胞（peripheralblood mononuclear cell。PBMC）以CFSE标染孵育72小时后,应用流式细胞分析仪将APCCD3阳性细胞设定为门检测CD25T细胞、未分选T细胞、CD25＋T细胞的增殖情况,及甘草酸二铵干预后的CD25-T细胞、CD25＋T细胞增殖情况。结果：应用流式细胞分析仪检测健康人、单纯HCV感染者和HCV相关性B—NHL患者在CD4＋CD25＋占总CD4＋细胞比例和CD25＋占总细胞比例上均呈现逐步递增的关系（分别为33．94％±2．18％,57．95％±1．77％,70．24％±12．75％,P〈0．05;18．16％±2．23％,33．45％±1132％,54.69％±8．66％,P〈0．05）。CFSE标染后孵育72小时检测（MI＋M2）分裂相百分比呈现CD25-T细胞最高、未分选T细胞其次、CD2YT细胞最低的表现（分别为74．4％±1．2％,63．1％±5．4％,47．2％±5．9％,P〈0．05）。甘草酸二铵干预后CD25-T细胞较未干预CD25T细胞M1分裂相百分比增加（分别为57．7％±4．2％,46．5％±5．6％,P〈0．05）。甘草酸二铵干预后CD25＋T细胞较未干预cD25＋1r细胞M1分裂相百分比减少（分别为14．7％±1．3％,22．1％±4．1％,P〈0．05）。结论：HCV相关性B-NHLCIM＋CD25＋、CD25＋细胞百分比较单纯HCV感染者、健康人明显增加,提示存在T细胞免疫抑制,且抑制程度重于单纯HCV感染。去除CD25＋细胞后CD25T细胞增殖较未去除CD25＋的T细胞增殖活跃,说明HCV相关性B-NHL患者的CD25＋细胞能够抑制CD25-T细胞增殖。而DG干预后HCV相关性B-NHLCD25＋T细胞增殖M1分裂相减少,而CD25T细胞增殖M1分裂相增加,表明DG对HCV相关性B-NHL具有抑制CD25＋T细胞增殖而促进CD25-T细胞增殖的积极免疫调节作用。     

zVAD-fmk对未成熟树突状细胞诱导初始性CD4＋T细胞分化为调节性T细胞影响的体外研究

目的 研究 Caspase 通路在未成熟树突状细胞（imDC）诱导同种异体 CD4＋ T 细胞转化为调节性 T 细胞（Treg）中的作用及探讨免疫耐受机制建立可能的分子机制.方法 将人外周血分离、培养出的imDC 与健康胎儿脐血中分离CD4＋ T 细胞混合培养,同时加入zVAD-fmk,以流式细胞仪检测CD4＋CD25＋ T 细胞（Treg 细胞）转化率.结果 （1）imDC 的鉴定：外周血经诱导后分离的imDC,以流式细胞仪检测细胞表面分子,imDC 表面分子表达的结果：CD80（7.27 ± 0.13）、CD83（3.53 ± 0.35）、CD1a（4.29 ± 0.27）;（2）混合培养后CD4＋CD25＋T细胞的转化率结果为：空白组（1.78 ± 0.11）﹪、对照组（22.23 ± 0.77）﹪、低浓度zVAD-fmk 组（21.63 ± 0.82）﹪、中浓度zVAD-fmk 组（12.24 ± 0.54）﹪、高浓度zVAD-fmk 组（12.20 ± 0.96）﹪,结果对照组和低浓度组、中浓度组和高浓度组间比较,P 〉 0.05,其余各组间比较,P 〈 0.05.加入zVAD-fmk 并与imDC 细胞混合培养的T 细胞转化率相对于未加入阻断剂的T 细胞较低,同时Caspase 信号通路对zVAD-fmk 无浓度依赖性.结论 imDC 可以诱导同种异体初始性CD4＋ T 细胞分化为Treg.Caspase 信号通路特异性的阻断剂zVAD-fmk 可以部分抑制Treg 的转化,说明Caspase 信号通路在诱导免疫耐受中可能起了较为重要的作用.     

哮喘患者外周血Treg和Th1/Th2的变化及其与哮喘病情的关系

目的：探讨哮喘患者外周血调节性T细胞（Treg）以及辅助性T细胞（Th1/Th2）的比例的变化,探讨其在哮喘的临床治疗中的作用。方法：80例哮喘患者（哮喘组）按临床表现分为急性发作期组（54例）和缓解期组（26例）,同时选择50例健康体检者。应用流式细胞仪检测上述各组外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg、CD4＋IFN-γ＋Th1和CD4＋IL-4＋Th2细胞水平,并进行统计学分析。结果：哮喘组CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg水平亦明显低于正常对照组（P〈0.05。其中急性发作期组Treg水平明显低于缓解期组和正常对照组（P〈0.05）。而哮喘组Th1/Th2比值显著低于对照组（P〈0.05）,且在哮喘急性发作组中Th1/Th2比值显著低于缓解期组和正常对照组（P〈0.05）。结论：提示Treg和Th在哮喘的发生和发展中起着重要的作用。     

北京地区实验恒河猴外周血T淋巴细胞亚群分析

目的测定正常实验恒河猴外周血T淋巴细胞亚群,获取基础数值。方法使用BD FACS Calibur流式细胞仪,Cell QuestTM3.3分析软件,应用CD3-Percp、CD4-FITC、CD8-PE荧光标记的抗体,对北京地区84只实验恒河猴的外周血T淋巴细胞亚群进行统计分析。结果北京地区实验恒河猴外周血CD3＋,CD4＋T淋巴细胞占淋巴细胞（LYM）的百分比为32.82%±5.93%;CD3^＋CD8^＋T淋巴细胞占淋巴细胞百分比为（23.99±6.34）%;CD4^＋/CD8^＋的比值为1.45±0.41;LYM百分比为白细胞的（49.70±14.00）%;LYMF为（4.634±2.181）×106/mL。结论实验用恒河猴T淋巴细胞亚群的基础数值测定为相关比较医学研究奠定基础。     

不同临床类型乙型病毒感染者外周血T细胞亚群与血清HBVDNA载量及HBeAg滴度相关性分析

目的：探讨慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染患者外周血T细胞亚群与血清HBVDNA载量及HbeAg滴度的关系。方法：选取103名HBV感染患者和20名健康者为研究对象。流式细胞术检测外周血T细胞亚群,聚合酶链式反应及酶免疫分析法分别检测血清HBVDNA载量及HbeAg滴度。结果：慢性乙型肝炎患者和慢性HBV携带者外周血CD3可、CD4T淋巴细胞亚群百分数低于健康对照组,结果有统计学意义（P〈0．05或0．01;而CD8＋T细胞亚群则呈现相反趋势,结果亦有统计学意义（P〈0．05或0．01）。HBeAg阴性组中,HBVDNA水平与CD8T细胞亚群百分数呈正相关（r=0．567,P〈0．01）,与CD47CD8＋T细胞亚群百分数比值呈负相关（r=-0．601,P〈0．01）,而与CD3＋T、CD4＋T细胞亚群百分数无相关性。HBeAg阳性组中,HBVDNA水平及HbeAg滴度与cD3＋1r、cD41、CD8叮细胞百分数及CD47CD8＋T细胞百分数均无相关性（P〉0．05）。结论：不同临床类型的慢性乙型肝炎病毒感染患者外周血T细胞亚群存在不同程度细胞免疫功能降低和细胞免疫调节异常。HbeAg阴性的HBV感染患者,其血清HBVDNA水平与外周血T淋巴细胞免疫存在相关性。     

纯化自体外周血CD34^＋细胞移植治疗肢体重度缺血的中期疗效

目的探讨纯化CD34^＋细胞移植治疗肢体重度缺血的中期疗效。方法自2009年5月至2011年12月录入30例肢体重度缺血患者,男性29例,女性1例,平均年龄43 ± 12岁（23 - 75岁）,均不具备外科血管重建条件,共治疗31条下肢和4条上肢。G-CSF（5-10μg/kg）动员,第5天采集外周血单个核细胞,分选获得纯化CD34^＋细胞,肢体肌肉局部注射。根据移植细胞数分为3组：低剂量组（105/kg）、中剂量组（5 × 105/kg）和高剂量组（106/kg）。结果随访16 - 48个月,1个月和2个月时Wong-Baker FACES疼痛评分由术前7 ± 2降到3 ± 3（P〈 0.001）和1 ± 2（P〈 0.001）。术后3个月和6个月：最长无痛步行时间由术前的（5 ± 3）min分别延长至（12 ± 6）min（P〈 0.001）和（19 ± 5）min（P〈 0.001）;踝肱指数由术前的0.44 ± 0.20提高至0.62 ± 0.18（P= 0.04）和0.66 ± 0.14（P〈 0.001）;经皮氧分压由术前（26 ± 11）mmHg分别上升至（42 ± 11）mmHg（P 〈 0.001）和（56 ± 12）mmHg（P〈 0.001）。16例溃疡患者愈合11例。Kaplan Meier生存分析法计算16个月保肢率为84﹪（95﹪可信区间为0.63 - 0.94）。3个不同剂量组之间的比较,治疗效果差异无统计学意义,除了1个月时WFPRSC检测结果显示：高剂量组明显优于低、中剂量组。结论纯化自体外周血CD34^＋细胞移植治疗肢体重度缺血性疾病安全、可行,能够较为持久地缓解缺血,挽救肢体,改善患者生活质量。     

肝癌肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）体外扩增及特性研究

探讨从原发性肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）患者的术后肿瘤组织中分离肿瘤浸润性淋巴细胞（tumor-infiltrating lymphocyte,TIL）,并进行体外大量扩增的方法。在该研究工作中,组织标本来源于术后的肿瘤癌旁组织,经过组织破碎、酶消化后,采用不连续密度梯度离心分离其中淋巴细胞。分离的淋巴细胞先采用大剂量重组人白介素2（IL-2）（2 000 U/mL）进行引发,然后采用同种异体的外周血单核细胞作为饲养细胞进行扩增。针对9例原发性肝癌术后标本,所分离的TIL均能成功进行培养扩增,扩增后细胞数为（1~5.5）×10^9。扩增倍数为111~572。扩增后的TIL,表型检测发现CD3＋细胞的比例为（90.3±9.4）%,CD3＋CD4＋细胞的比例为（24.9±14.1）%,CD3＋CD8＋细胞的比例为（56.4±20.2）%,CD3＋CD56＋细胞的比例为（14.8±12.6）%。杀伤检测结果显示,肝癌TIL对非自体肿瘤细胞系HepG2和Bel-7402有较强的杀伤作用。因此,采用该改良的方法,原发性肝癌的TIL在体外可以成功进行培养扩增,并具有较强抗肿瘤活性,可以作为肝癌术后巩固性免疫治疗的一种手段。