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1.
目的:研究重组人p53腺病毒转染淋巴瘤源性树突状细胞的抗肿瘤免疫效应。方法:采集本科室初诊的弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)肿大淋巴结分离单个核细胞(MNC)进行体外DC的诱导培养,分为实验组A(rAd-p53-DC)、对照组A(rAd-DC)、空白对照组A(N-DC),同时采集患者的外周血分离单个核细胞(MNC),进行体外DC的诱导培养,分为实验组B(rAd-p53-DC)、对照组B(rAd-DC)、空白对照组B(N-DC),用重组人p53腺病毒(rAd-p53)转染2种来源的DCS,流式检测DCS免疫表型,用Western-blotting鉴定P53蛋白的表达,ELISA法检测上清中的细胞因子IL-12的含量,混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reac-tion,MLR)测定DCS刺激同种异体淋巴细胞增殖能力,用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放法检测经rAd-p53转染的两种来源DCS的细胞毒性T淋巴细胞反应(CTL)。结果:DC的表型(CD1a除外)CD83、CD80、CD86和HLA-DR实验组均较对照组及空白对照组明显增高(p<0.05)。Western-blotting可检测到实验组P53蛋白的表达。上清液中IL-12分泌水平实验组均较对照组及空白对照组明显增高(p<0.05)。实验组具有明显的刺激自体淋巴细胞增殖的能力,且刺激能力随rAd-p53-DC与淋巴细胞比例的增加而升高。对照组及空白对照组也能刺激同种自体淋巴细胞增殖的能力,但较实验组差(p<0.05)。对靶细胞的细胞毒作用(CTL效应)结果显示,实验组介导同种异体的淋巴细胞杀伤率显著高于对照组及空白对照组(P<0.05)。且实验组A的CTL效应明显高于实验组B,两者之间有显著性差异(P<0.05)。结论:rAd-p53-DC为基础的肿瘤疫苗有可能在解决淋巴瘤的MRD、DC免疫耐受等问题上发挥强大的治疗作用。 相似文献
2.
利用野生型p53质粒转染黑色素瘤B16细胞,反复冻融法提取p53修饰的肿瘤抗原(p53-Ag),将抗原体外冲击同基因小鼠骨髓来源的树突状细胞(dendritic cells,DC)制备特异性DC肿瘤疫苗;观察DC诱导的淋巴细胞增殖反应和细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)对黑色素瘤细胞的细胞毒效应,分析其诱导肿瘤抗原特异性免疫应答的机制。结果显示,p53-肿瘤抗原冲击的DC可显著刺激淋巴细胞增殖,其诱导的CTL效应对肿瘤细胞也有很好的杀伤效果。 相似文献
3.
培养小鼠髓系DC2.4细胞,加入LPS(阳性对照组)或甘草甜素,用扫描电镜观察DC的超微结构、流式细胞仪检测DC表面分子MHCII、CD86及CD40的表达、4-氨基安替比林(4-AAP)比色检测DC内酸性磷酸酶活性、ELISA方法检测DC培养上清中IL—12的浓度,体外刺激淋巴细胞增殖实验检测DC对同种异体T淋巴细胞的刺激能力。结果表明,与对照组相比,甘草甜素刺激后,DC表面树突状突起增多,表面分子MHCⅡ、CD86及CD40表达增加,酸性磷酸酶活性下降,培养上清中IL-12浓度升高,刺激同种异体T淋巴细胞的能力也明显增强。结果表明,甘草甜素能够促进小鼠髓系DC2.4表型及功能的成熟。 相似文献
4.
采用反复冻融法制备Rac-1淋巴瘤细胞总抗原,与树突状细胞(DC2.4)共培养制备DC瘤苗;设置不同实验组,M组及RM组加入蛋氨酸脑啡肽(MENK),研究MENK对DC瘤苗抗肿瘤细胞的杀伤活性影响。结果表明:MENK作用于DC瘤苗后,DC2.4形态上更趋向于成熟,且CD86、MHC-Ⅱ类分子表达水平与对照组相比较明显升高;DC2.4酸性磷酸酶(ACP)含量与对照组相比较明显减少而IL-12的分泌水平升高;同时,DC2.4诱导淋巴细胞增殖能力增强,且诱导活化的淋巴细胞对Rac-1淋巴瘤细胞的杀伤活性与对照组相比较明显增强。结果可见,MENK可明显促进特异性负载Rac-1淋巴瘤抗原的DC2.4的成熟,并增强特异性诱导活化的淋巴细胞对Rac-1淋巴瘤细胞的杀伤活性。 相似文献
5.
目的研究两歧双歧杆菌完整肽聚糖(WPG)对脐血来源树突状细胞(DC)形态及分泌细胞因子的影响,了解双歧杆菌WPG对DC分化、成熟及免疫调节功能的作用;并为益生菌及其生物活性成分的进一步开发提供依据。方法分离正常孕妇脐血单个核细胞诱导生成未成熟树突状细胞(Dendritic cells,DCs),实验组在培养的第7天分别加入两歧双歧杆菌WPG(5μg/ml)、两歧双歧杆菌全菌(100μg/ml),阳性对照组加入脂多糖(LPS),阴性对照组仅加入培养基。倒置显微镜在培养各期形态学观察,流式细胞术检测表面标志物CD83及CD1a的表达,NLR检测DCs刺激同种异体T淋巴细胞能力,ELISA法测定DCs培养上清中IL-12p70、IL-10的分泌。结果脐血单核细胞在双歧杆菌WPG与GM-CSF、IL-4协同诱导作用下,能成为形态上具有典型树突状突起的DCs;诱导后的CB-MDDCs刺激同种异体T细胞的增殖能力及分泌IL-12:p70、IL-10的水平显著高于阴性对照组(P〈0.01)且细胞表面标志物CD83及CD1a的表达增加。结论(1)双歧杆菌WPG能影响CB-MDDCs的成熟状态。(2)双歧杆菌WPG对CB-MDDCs成熟程度及分泌细胞因子水平的影响强于双歧杆菌全菌,说明WPG是双歧杆菌主要免疫活性成分。 相似文献
6.
应用siRNA技术探讨MCF-7乳腺癌细胞分泌的VEGF对树突状细胞的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
为探讨MCF-7乳腺癌细胞分泌的血管内皮生长因子( vascular endothelial growth factor, VEGF)对树突状细胞(dendritic cell, DC)功能及其分化的影响,针对VEGF基因设计siRNA(small interfering RNA, siRNA),采用脂质体转染法以100 nmol/L最佳转染浓度导入MCF-7乳腺癌细胞(siRNA组),以脂质体Lipofectamine 2000TM转染MCF-7 乳腺癌细胞培养上清培养正常DC作为对照(对照组),采用ELISA法检测经siRNA 干扰VEGF基因后的MCF-7 乳腺癌细胞分泌的VEGF因子含量, Western 印迹检测VEGF蛋白表达,以探讨siRNA的基因沉默效果;以siRNA组和对照组培养上清分别培养外周血单个核细胞,用流式细胞仪检测所诱导DC表型CD1a、CD80、CD83、CD86和HLA-DR的表达,用MTT法检测转染前后两组DC 诱导的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte, CTL)对MCF-7细胞的细胞毒作用.结果显示,MCF-7 乳腺癌细胞培养上清能明显抑制正常DC分化成熟及抗原递呈能力,干扰VEGF基因后MCF-7 乳腺癌细胞培养上清对DC的影响明显降低,CD80、CD83、CD86和HLA-DR的表达较对照组显著升高,而CD1a表达下降(P<0.01).转染前后DC 诱导的CTL对MCF-7细胞的杀伤活性有明显差异(P<0.01).由此可见,siRNA可靶向抑制MCF-7乳腺癌细胞VEGF的表达,下调VEGF后的MCF-7 细胞上清对DC分化成熟及功能的抑制作用明显降低,从而推测VEGF在肿瘤的发生、发展和免疫抑制方面可能起着重要的作用. 相似文献
7.
目的探讨最佳体外诱导培养小鼠成熟树突状细胞(dendritic cells,DC)的方法。方法分离、纯化6周龄C57BL/6小鼠骨髓单核细胞,以含10%胎牛血清、20ng/ml重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM—CSF)和10ng/ml重组小鼠白细胞介素-4(IL-4)的RPMI-1640培养基培养7d,然后将细胞分成对照未刺激组、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激组和TNF-α+脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激组。继续培养48h后,观察各组细胞形态,检测IL-12、IL-6浓度及细胞表面标志CD11c、CD80、CD86和MHC II。结果培养9d后,两刺激组培养的细胞经相差显微镜观察有DC生长。TNF—α刺激组细胞培养上清液中IL-6、IL-12含量显著高于对照组(P〈0.01),但显著低于TNF—α+LPS刺激组(P〈0.05)。3组均高表达CD11c,各组间无显著差异;而CD80、CD86和MHC II表达阳性率TNF-α刺激组显著高于对照组(P〈0.01),TNF-α+LPS刺激组显著高于单纯TNF—α刺激组(P〈0.05)。结论联合使用TNF-α与LPS刺激可使DC成熟度提高,分泌IL-6、IL-12增加。 相似文献
8.
目的探讨普罗布考防治动脉粥样硬化(AS)的机制。方法选用雄性大鼠,复制大鼠AS模型,随机分为动脉粥样硬化模型组、普罗布考组和正常对照组。大鼠造模成功后给予普罗布考治疗,6周后处死大鼠,采用流式细胞术检测平滑肌细胞凋亡率及凋亡相关基因p53和Fas蛋白的表达。结果模型组大鼠血管平滑肌细胞凋亡率明显高于对照组(P〈0.05),p53和Fas蛋白的表达增强(P%0.05),主动脉壁可肉眼观测典型斑块。普罗布考组大鼠平滑肌细胞的凋亡率明显低于模型组(P〈0.05),p53和Fas蛋白表达下调(P〈0.05),主动脉斑块面积较模型组减小明显。结论普罗布考通过调节p53和Fas蛋白表达来调节AS大鼠平滑肌细胞的凋亡。 相似文献
9.
目的:探讨哮喘小鼠与正常小鼠骨髓源性树突状细胞(DC)负荷Der p2抗原后表达表面分子(CD11c、CD86)和细胞因子(IL-10、IL-12p70)的差异及其对Th1和Th2型细胞因子平衡的影响,进一步研究过敏性哮喘发生中DC的可能作用。方法:分别从哮喘组和对照组提取骨髓培养DC,第五天负荷Der p2,24小时后吹打收集细胞,观察DC形态,用流式细胞仪检测孵育后细胞表面CD11c、CD86表达。并留取负荷Der f2前后培养上清,ELISA法检测IL-10及IL-12p70含量。同时以DC:反应细胞比例为1:10混合培养,72 h后ELISA法检测混合培养上清中IL-4、IL-5、IFN-γ的水平。结果:1负荷Der p2后,哮喘组CD86、CD11c表达比对照组高,分别为(t=11,P0.05)(t=4.9,P0.05),差异有统计学意义;2在细胞因子分泌方面,Der p2负荷前,两组DC均能分泌IL-10与IL-12p70,IL-10水平哮喘组高(t=9.5,P0.05),而IL-12p70水平对照组高(P0.05);负荷Der p2后,对照组IL-10、IL-12p7分泌量比负荷前明显增加(P0.05),哮喘组无明显差异(P0.05);3在DC刺激同种T细胞因子分泌方面,负荷Der p2后哮喘组DC刺激T细胞分泌IL-4、IL-5分泌能力明显增强(P0.05),而刺激INF-γ能力降低(P0.05)。结论:DC在过敏性哮喘中起着重要作用,异常DC通过增加CD86、CD11c的表达和减少IL-10及IL-12的合成,致使T细胞向Th2细胞优势分化。 相似文献
10.
恶性肿瘤患者外周血中CTL、Ts细胞绝对数值的变化及临床意义分析 总被引:1,自引:0,他引:1
观察肿瘤患者外周血中CD8 CD28 (CTL)、CD8 CD28-(Ts)T细胞绝对数值的变化,分析其与肿瘤的相关性。方法:采用流式细胞术测定118例肿瘤患者外周血CTL、Ts细胞数,按能否手术和复发转移分成3组,即A组:手术后组;B组:肿瘤无法切除组;C组:复发转移组。并选择15例健康者作为对照,采用SPSS10.0软件进行各组间比较分析。结果:恶性肿瘤患者外周血中CTL细胞绝对数明显下降,Ts细胞显著升高,与对照组有显著差异(p<0.05)。A组CTL细胞计数与B、C组有显著性差别,三组的CTL、Ts细胞与对照组有显著差别(p<0.05),B、C两组之间CTL、Ts细胞均没有明显差别。结论:肿瘤患者外周血CTL细胞低表达、Ts细胞高表达,而且在肿瘤的不同发展阶段,其绝对值也存在显著差异。观察肿瘤患者外周血中CTL、Ts细胞绝对数值的变化,对了解肿瘤患者细胞免疫功能状态有一定的价值,从而为肿瘤的免疫治疗提供参考。 相似文献
11.
通过研究香菇多糖(Lentinan,LNT)对小鼠骨髓源树突状细胞(bone marrow dendritic cells,BMDCs)功能调节的机制,进一步阐明香菇多糖的免疫活性。本实验将BMDCs分成脂多糖(LPS)阳性对照组、LNT处理组和RPMI1640空白对照组,应用酸性磷酸酶活性检测、流式细胞仪检测技术、吞噬实验、酶联免疫吸附试验检测各组BMDCs表型和功能的各种指标。结果显示,LNT(50μg/mL)处理组BMDCs酸性磷酸酶活性降低;BMDCs吞噬能力比RPMI1640空白对照组明显下降;BMDCs表面MHCⅡ、CD40、CD83、CD80、CD86和DEC205的表达增加;BMDCs白细胞介素12(IL-12)、白细胞介素10(IL-10)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达增加。证明了适宜浓度的LNT可以促进BMDCs表型及功能的成熟。 相似文献
12.
目的:观察聚乙二醇干扰素α-2a对慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞功能及B7-H1的影响,探讨慢性乙型肝炎病毒逃逸的的机制。方法:慢性乙型肝炎患者31例,给予聚乙二醇干扰素α-2a180txg抗病毒治疗52周,分别于0、12、26、52周检测肝功能、HBV-DNA;流式细胞术检测外周血mDC表面HLA-DR、CD80、CD86、CD83、CDla、B7一H1水平。根据患者HBV—DNA水平,将患者分为应答组(A组)、非应答组(B组),10例健康志愿者作正常对照组(C组)。结果:慢性乙肝患者的树突状细胞膜表面分子HLA-DR、CD80、CD86、CD83、CDla的表达均降低。聚乙二醇干扰素α-2a治疗后应答组膜表面分子HLA-DR、CD80、CD86、CD83、cDla的表达高于非应答组65.3±6.2%VS44.2±5.5%,67.2±7.4%VS37.3±7.2%,68.4±3.6%VS42.5±7.3%,65.6±6.8%VS43.2±3.9%,49.4±9.5%VS37.5±7.9%,(P〈0.05)。应答组B7-H1表达水平较治疗前下降,非应答组B7-H1水平无明显变化12.73±3.8%VS25.24±2.92%,(P〈0.05)。结论:慢性乙型肝炎患者树突状细胞功能低下,聚乙二醇干扰素α-2a治疗可以提高树突状细胞功能,降低B7-H1表达,促进HBV-DNA的清除。树突状细胞功能低下及B7-H1高表达是乙型肝炎病毒免疫逃逸的因素之一。 相似文献
13.
研究玉竹生物活性成分C对小鼠细胞免疫功能的影响,并探讨其作用机制.采用MTT比色法和CFSE检测小鼠淋巴细胞转化情况,流式细胞术检测对αβT和γδT细胞增殖及CD4+ αβT细胞/CD8+αβT细胞比值的影响,ELISA法检测脾细胞培养上清中Th1细胞因子IFN-γ和Th2细胞因子IL-4的分泌水平.结果显示,玉竹生物活性成分C在一定浓度范围内可促进小鼠脾αβT细胞增殖,其中以1 000μg/mL的浓度作用最强.1 000 μg/mL浓度的玉竹生物活性成分C具有降低CD4+ αβT细胞与CD8+ αβT细胞比值,提高CD8+αβT细胞教量的作用.1 000 μg/mL浓度的玉竹生物活性成分C能有效刺激小鼠脾淋巴细胞释放细胞因子IFN-γ,而对IL-4的产生没有明显的影响.本研究为开发玉竹生物活性成分C提供实验依据. 相似文献
14.
目的:本研究初步探究甘草酸二铵(Diammonium Glycyrrihizinate,DG)对HCV相关性B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-cellnon-Hodgkin-Slymphoma,B-NHL)CD25-T细胞、CD25+T细胞的免疫调控作用。方法:应用流式细胞分析仪检测HCV相关性B-NHLCD4+CD25+T细胞占CD4+1r细胞的比例、CD25+细胞占总PBMC比例,并与单纯HcV感染患者、健康人检测结果相对照。应用免疫磁珠分离法(MACS)分选获得CD25-和CD25+细胞,将两者和未分选的外周血单个核细胞(peripheralblood mononuclear cell。PBMC)以CFSE标染孵育72小时后,应用流式细胞分析仪将APCCD3阳性细胞设定为门检测CD25T细胞、未分选T细胞、CD25+T细胞的增殖情况,及甘草酸二铵干预后的CD25-T细胞、CD25+T细胞增殖情况。结果:应用流式细胞分析仪检测健康人、单纯HCV感染者和HCV相关性B—NHL患者在CD4+CD25+占总CD4+细胞比例和CD25+占总细胞比例上均呈现逐步递增的关系(分别为33.94%±2.18%,57.95%±1.77%,70.24%±12.75%,P〈0.05;18.16%±2.23%,33.45%±1132%,54.69%±8.66%,P〈0.05)。CFSE标染后孵育72小时检测(MI+M2)分裂相百分比呈现CD25-T细胞最高、未分选T细胞其次、CD2YT细胞最低的表现(分别为74.4%±1.2%,63.1%±5.4%,47.2%±5.9%,P〈0.05)。甘草酸二铵干预后CD25-T细胞较未干预CD25T细胞M1分裂相百分比增加(分别为57.7%±4.2%,46.5%±5.6%,P〈0.05)。甘草酸二铵干预后CD25+T细胞较未干预cD25+1r细胞M1分裂相百分比减少(分别为14.7%±1.3%,22.1%±4.1%,P〈0.05)。结论:HCV相关性B-NHLCIM+CD25+、CD25+细胞百分比较单纯HCV感染者、健康人明显增加,提示存在T细胞免疫抑制,且抑制程度重于单纯HCV感染。去除CD25+细胞后CD25T细胞增殖较未去除CD25+的T细胞增殖活跃,说明HCV相关性B-NHL患者的CD25+细胞能够抑制CD25-T细胞增殖。而DG干预后HCV相关性B-NHLCD25+T细胞增殖M1分裂相减少,而CD25T细胞增殖M1分裂相增加,表明DG对HCV相关性B-NHL具有抑制CD25+T细胞增殖而促进CD25-T细胞增殖的积极免疫调节作用。 相似文献
15.
Induction of primary human CD8+ T lymphocyte responses in vitro using dendritic cells 总被引:5,自引:0,他引:5
Zarling AL Johnson JG Hoffman RW Lee DR 《Journal of immunology (Baltimore, Md. : 1950)》1999,162(9):5197-5204
The ability of two different human professional APCs, specifically macrophages (Mphi) and dendritic cells (DC), to stimulate primary responses in human CD8+ T lymphocytes was examined using both allogeneic and Ag-pulsed autologous APCs. CTL responses in CD8+ T lymphocytes isolated from HIV-uninfected donors were evaluated against six different HIV epitopes that are restricted by four different HLA alleles using autologous human PBMC-derived Mphi and DCs for primary stimulation. In a side-by-side experiment, immature DCs, but not Mphi, were able to prime a CTL response against the B14-restricted p24gag 298-306 epitope; mature DCs were also able to prime a response against this epitope. In addition, DCs were capable of priming CD8+ CTL responses against the B8-restricted p24gag 259-267 epitope. In contrast, Mphi were unable to prime strong CTL responses against other epitopes. Since the Ag-specific cytotoxic responses required subsequent rounds of restimulation before they could be detected, the ability of the allogeneic Mphi and DCs to directly prime CD8+ T lymphocyte responses without subsequent restimulation was examined. Similar to the aforementioned peptide-specific results, DCs were more efficient than Mphi in priming both allogeneic proliferative and cytotoxic responses in human CD8+ T lymphocytes. Collectively, these results promote an enhanced status for DCs in the primary stimulation of human CD8+ T lymphocytes. 相似文献
16.
目的:研究褪黑素(MLT)对小鼠肝癌细胞株H22的促凋亡作用及其机理。方法:采用丫啶橙(AO)染色、培养液乳酸脱氢酶(LDH)活性检测和流式细胞术(FCM)观察MLT的促凋亡作用;采用RT-PCR方法检测MLT处理前后细胞的p53 mRNA、Fas mRNA的水平。结果:AO染色后H22细胞呈现明显核浓缩的凋亡形态;培养液LDH活性检测及FCM分析均提示MLT诱导H22细胞发生凋亡;RT-PCR结果显示p53、Fas表达增强。结论:MLT能促进H22细胞p53和Fas的表达,从而诱导细胞发生凋亡。 相似文献
17.
目的:研究银屑病和系统性红斑狼疮(systemic lulups erythematosus,SLE)患者T淋巴细胞CD2、CD4+、CD8+以及CD4+/CD8+的变化及其相关性。方法:应用流式细胞仪检测我院收治的62例银屑病和31例SLE患者T淋巴细胞CD2、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+分子的表达水平并统计学分析其相关性。结果:银屑病患者T淋巴细胞CD4+/CD8+的比值与正常对照组比较显著增高,而SLE患者与正常对照组比较显著降低。银屑病患者CD4+百分率与正常对照组比较显著增高,SLE患者CD8+与正常对照组比较显著增高。银屑病患者CD2与CD4+之间呈正相关(γ=0.309,P〈0.05),CD4+与CD4+/CD8+之间呈显著正相关(γ=0.536,P〈0.05),SLE患者CD2仅与CD4+之间呈正相关(γ=0.378,P〈0.05)。结论:T淋巴细胞免疫功能紊乱可能在银屑病的发病机制中发挥了重要作用,CD2可能使银屑病的T淋巴细胞紊乱致炎症加重。SLE患者T细胞亚群CD4+/CD8+比值下降,CD2与CD4呈正相关亦可能使SLE的T淋巴细胞加速信号传导紊乱,CD8+百分率增高可能在SLE的发病机制中起重要作用。 相似文献
18.
Asim Ejaz Christoph G. Ammann Roland Werner Georg Huber Verena Oberhauser Susanne H?rl Simone Schimmer Ulf Dittmer Dorothee von Laer Heribert Stoiber Zoltán Bánki 《PloS one》2012,7(9)
Dendritic cells (DC) represent the most potent antigen presenting cells and induce efficient cytotoxic T lymphocyte (CTL) responses against viral infections. Targeting antigens (Ag) to receptors on DCs is a promising strategy to enhance antitumor and antiviral immune responses induced by DCs. Here, we investigated the potential of CD11c-specific single-chain fragments (scFv) fused to an immunodominant peptide of Friend retrovirus for induction of virus-specific T cell responses by DCs. In vitro CD11c-specific scFv selectively targeted viral antigens to DCs and thereby significantly improved the activation of virus-specific T cells. In vaccination experiments DCs loaded with viral Ag targeted to CD11c provided improved rejection of FV-derived tumors and efficiently primed virus-specific CTL responses after virus challenge. Since the induction of strong virus-specific T cell responses is critical in viral infections, CD11c targeted protein vaccines might provide means to enhance the cellular immune response to prophylactic or therapeutic levels. 相似文献