miR-19a 在正常妊娠及重度子痫前期患者胎盘中的表达

目的:通过检测正常妊娠及重度子痫前期患者胎盘组织中miR-19a的表达,探讨其与子痫前期发病的关系。方法:收集10例重度子痫前期患者胎盘组织(实验组)和10例正常产妇胎盘组织(对照组),应用荧光实时定量PCR(Real Time PCR)的方法检测两组miR-19a的表达差异。结果:重度子痫前期患者胎盘组织中miR-19a表达升高(P<0.05)。结论:子痫前期患者胎盘组织中存在差异表达的miRNA,miR-19a在胎盘组织中的高表达可能与子痫前期的发病有关。     

葡萄糖调节蛋白78在子痫前期中的表达及其意义

目的：探讨葡萄糖调节蛋白78（GRP78）mRNA及蛋白在胎盘组织的表达水平及其与子痫前期的发病关系。方法：选择2010年1月-2010年12月在南京医科大学第一附属医院江苏省人民医院产科住院的子痫前期患者35例（子痫前期组）,以同期正常孕妇35例为对照组。采用RT-PCR技术、蛋白印迹（western-blot）法和免疫组化检测两组孕妇胎盘组织中GRP78的mRNA与蛋白表达水平差异。结果：子痫前期组患者胎盘组织中GRP78mRNA与蛋白表达水平均显著高于相应孕周正常妊娠组。结论：子痫前期能够诱导GRP78表达,CHOP/GADD153表达的增高与子痫前期的发病有关。     

MiR-30a-3p对人滋养肿瘤细胞系JEG-3细胞侵袭功能的影响

目的：MiRNAs对于胎盘的形成和正常妊娠的维持起着至关重要的作用,它在胎盘中的表达失衡的可能导致了妊娠相关疾病的发生,我们前期研究发现miR-30a-3p在子痫前期患者胎盘上特异性高表达,推测miR-30a-3p可能参与了子痫前期的发生发展过程,本课题通过观察miR-30a-3p对人滋养肿瘤细胞系JEG-3细胞侵袭能力的影响,深入探讨miR-30a-3p在子痫前期发病过程中的作用。方法：应用瞬时转染技术在人滋养肿瘤细胞系JEG-3细胞中分别转染miR-30a-3p mimics、mimics NC为miR-30a-3p过表达组和阴性对照组,空白转染组为空白对照组,利用荧光实时定量PCR技术检测各组细胞中miR-30a-3p的表达,Transwell实验检测各组细胞侵袭能力的差别。结果：荧光实时定量PCR结果显示miR-30a-3p过表达组与阴性对照组、空白对照组相比miR-30a-3p的表达量明显升高,差异具有统计学意义（P〈0.05）;Transwell实验结果显示miR-30a-3p过表达组细胞的侵袭能力与阴性对照组、空白对照组相比均有降低,差异具有统计学意义（P〈0.05）。阴性对照组与空白对照组的侵袭能力差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：miR-30a-3p可以显著下调JEG-3细胞的侵袭力,miR-30a-3p有可能通过降低滋养细胞的浸润能力,导致滋养细胞对子宫肌层和螺旋动脉的浸润不足,造成＂胎盘浅着床＂,从而在子痫前期的发病过程中发挥了重要的作用,miR-30a-3p有望成为诊治子痫前期疾病的靶点。     

MiR-30a-3p 对人滋养肿瘤细胞系JEG-3 细胞侵袭功能的影响

目的：MiRNAs 对于胎盘的形成和正常妊娠的维持起着至关重要的作用,它在胎盘中的表达失衡的可能导致了妊娠相关疾 病的发生,我们前期研究发现miR-30a-3p 在子痫前期患者胎盘上特异性高表达,推测miR-30a-3p 可能参与了子痫前期的发生发 展过程,本课题通过观察miR-30a-3p 对人滋养肿瘤细胞系JEG-3 细胞侵袭能力的影响,深入探讨miR-30a-3p 在子痫前期发病过 程中的作用。方法：应用瞬时转染技术在人滋养肿瘤细胞系JEG-3 细胞中分别转染miR-30a-3p mimics、mimics NC为miR-30a-3p 过表达组和阴性对照组,空白转染组为空白对照组,利用荧光实时定量PCR 技术检测各组细胞中miR-30a-3p的表达,Transwell 实验检测各组细胞侵袭能力的差别。结果：荧光实时定量PCR结果显示miR-30a-3p 过表达组与阴性对照组、空白对照组相比 miR-30a-3p 的表达量明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）;Transwell 实验结果显示miR-30a-3p过表达组细胞的侵袭能力与 阴性对照组、空白对照组相比均有降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。阴性对照组与空白对照组的侵袭能力差异无统计学意义 (P>0.05)。结论：miR-30a-3p 可以显著下调JEG-3 细胞的侵袭力, miR-30a-3p 有可能通过降低滋养细胞的浸润能力,导致滋养细胞 对子宫肌层和螺旋动脉的浸润不足,造成“胎盘浅着床”,从而在子痫前期的发病过程中发挥了重要的作用,miR-30a-3p 有望成为 诊治子痫前期疾病的靶点。     

葡萄糖调节蛋白78在子痫前期中的表达及其意义

目的:探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)mRNA及蛋白在胎盘组织的表达水平及其与子痫前期的发病关系。方法:选择2010年1月-2010年12月在南京医科大学第一附属医院江苏省人民医院产科住院的子痫前期患者35例(子痫前期组),以同期正常孕妇35例为对照组。采用RT-PCR技术、蛋白印迹(western-blot)法和免疫组化检测两组孕妇胎盘组织中GRP78的mRNA与蛋白表达水平差异。结果:子痫前期组患者胎盘组织中GRP78mRNA与蛋白表达水平均显著高于相应孕周正常妊娠组。结论:子痫前期能够诱导GRP78表达,CHOP/GADD153表达的增高与子痫前期的发病有关。     

检测人老化胎盘组织中miR-182的表达

目的：通过检测miR-182在正常妊娠各期、老化胎盘组织中的表达,探讨miR-182在胎盘发育过程中的调控作用,并同时探讨miR-182与血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达的相关性,为寻找胎盘老化特别是胎盘提前老化发生机制提供依据。方法：采用实时荧光定量PCR方法检测42例标本（早孕绒毛和胎盘组织）中miR-182的表达情况。结果：miR-182在正常妊娠早孕绒毛组织、正常妊娠胎盘组织及老化胎盘组织中均表达。miR-182表达水平各个组间比较：早期与中期妊娠组、中期与晚期未足月妊娠组、晚期未足月与晚期足月妊娠组有显著差异（P〈0.05）;胎盘老化组与正常妊娠早期、中期、晚期未足月、晚期足月组有极显著差异（P〈0.01）;妊娠的早期、中期、晚期,miR-182的表达逐渐增多,老化胎盘组织中miR-182高水平表达。结论：miR-182与胎盘老化的发生高度相关,可能在胎盘老化机制中起重要的调控作用。     

解整合素金属蛋白酶19(ADAM19)与子痫前期的相关性研究

通过对孕妇胎盘组织和外周血中解整合素金属蛋白酶19(ADAM19)的检测,探讨ADAM19与子痫前期发病的关系.将病人分为研究组(子痫前期组)和对照组(正常妊娠组),子痫前期组病人中早发型50例,晚发型44例,对照组病人50例.于临近分娩时取静脉血,分娩后取胎盘组织,应用免疫组织化学技术和免疫印迹技术对胎盘组织中ADAM19蛋白进行检测,用ELISA法检测两组血浆中ADAM19的水平.结果显示,胎盘组织中ADAM19分布在多种滋养层细胞中,包括细胞滋养层细胞、合体滋养层细胞和一些绒毛间质结缔组织细胞、毛细血管中,其阳性信号定位于细胞膜上和细胞质中;ADAM19的蛋白表达正常胎盘中为0.34±0.03,晚发型子痫前期组为0.53±0.02,早发型子痫前期组为0.82±0.03,三者间比较差异均有统计学意义(P<0.01).正常孕妇血浆中ADAM19为(4.52±0.10)μg/L,晚发型子痫前期为(4.32±0.11)μg/L,早发型子痫前期(3.78±0.10)μg/L.早发型子痫前期组与对照组比较有统计学差异(P<0.001),晚发型子痫前期组与对照组比较无统计学差异(P>0.05),早发型与晚发型子痫前期比较有统计学差异(P<0.001).结果表明,子痫前期胎盘组织中ADAM19过度表达可能与子痫前期的发生和发展有关,ADAM19有可能作为预测子痫前期发病的分子标志.     

15-脂氧酶在子痫前期中的表达

目的：探讨15-脂氧酶（15-LO）在子痫前期的病理生理过程中的作用。方法：采用蛋白印迹法检测15-LO的两种同工酶15-LO1和15-LO2在12名正常妊娠和16名子痫前期的孕妇胎盘和脐动脉组织中的表达。结果：在子痫前期的孕妇胎盘和脐动脉组织中,15-LO1蛋白质表达明显高于其在正常妊娠中的表达（P〈0.01）;而15-LO2在正常妊娠组不表达,其在子痫前期的孕妇胎盘和脐动脉组织中的表达显著高于其在正常妊娠中的表达（P〈0.01）。结论：15-LO在子痫前期的孕妇胎盘和脐动脉组织中高表达,可能与子痫前期的发生发展密切相关。     

IL-4 和IFN-γ mRNA 在子痫前期患者胎盘组织中的表达及意义

目的:检测胎盘组织中IFN-γ和IL-4的表达,探讨IFN-γ和IL-4在子痫前期的发病中的作用.方法:采用原位杂交法检测了20例正常妊娠孕妇和34例子痫前期组(包括16例轻度和18例重度)中的IFN-γ、IL-4 mRNA的表达水平,并通过图像分析系统对染色结果进行定量分析.结果:(1)IL-4 mRNA的表达在正常妊娠组、子痫前期轻度组和子痫前期重度组的表达无差异(P＞0.05).(2)与正常妊娠组、子痫前期轻度组相比,子痫前期重度组IFN-γ mRNA的表达有差异性(P＜0.05);子痫前期轻度组与正常妊娠组相比无差异(P＞0.05).(3)与正常妊娠组相比,子痫前期轻度组、重度组IFN-γ mRNA/IL-4 mRNA的比值均有差异性(P＜0.05),且随病情的加重比值增大.结论:Th1/Th2细胞因子的平衡偏离可能是导致子痫前期发病的病因之一.     

PEDF蛋白在子痫前期患者胎盘上的表达及意义

目的:研究子痫前期患者胎盘组织中色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)的表达,探讨PEDF在子痫前期发病中的作用。方法:选取2012年3月至2013年3月在我院产科住院剖宫产的20例子痫前期孕妇作为研究对象,另选取同期正常分娩的孕妇20例作为对照组。采用Western blot、免疫荧光组织化学方法检测子痫前期患者和正常对照组妇女胎盘组织中PEDF和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,并通过免疫荧光方法计数胎盘微血管密度(MVD)。结果:同正常对照组相比,子痫前期患者胎盘组织中PEDF表达升高,而VEGF表达则减少。PEDF与VEGF组织表达位置大致相同。子痫前期患者胎盘组织中PEDF表达与24h尿蛋白定量呈正相关,与VEGF表达及MVD计数呈负相关;VEGF表达与MVD计数呈正相关。结论:PEDF与子痫前期疾病发生发展及病情轻重程度有关;PEDF可能是通过影响胎盘血管的重铸,而参与子痫前期疾病的发生发展。     

MicroRNA-21介导非对称性二甲基精氨酸诱导的内皮细胞衰老

目的：观察非对称性二甲基精氨酸（ADMA）对内皮细胞中microRNA-21（miR-21）表达的影响,探讨microRNA-21在ADMA诱导的内皮细胞衰老中的作用。方法：人脐静脉内皮细胞（HUVEC）与10uM的ADMA孵育48小时后收集细胞提取总RNA及蛋白,荧光定量实时RT—PCR检测miR-21表达,Westernblot检测超氧化物歧化酶2（SOD2）表达,衰老相关半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色鉴定衰老的内皮细胞;然后HUVEC与miR-21抑制剂转染6小时后继续与10uM的ADMA孵育48小时留取细胞按上述方法检测相关指标。结果：HUVEC与ADMA孵育后miR-21表达量明显增加（P〈0．01）,同时衰老的内皮细胞数量增多（P〈0．05）,而SOD2表达减少（P〈0．01）;MiR-21抑制剂转染HUVEC后ADMA诱导的miR-21表达明显减少,同时衰老的内皮细胞减少,而SOD2表达明显增加（所有P〈0．01）。结论：ADMA诱导了HUVEC中miR-21表达及细胞衰老,miR-21介导了ADMA诱导的内皮细胞衰老作用,其机制可能与其抑制SOD2表达有关。     

MicroRNA-141在上皮性卵巢癌患者组织和血清中的表达及临床意义的探讨

目的：探讨微小RNA-141（miR-141）在卵巢癌患者组织和血清中的表达情况并初步探讨其作为肿瘤标记物早期诊断上皮性卵巢癌的可行性。方法：采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（real-timeRT—PCR）检测16例上皮性卵巢癌患者和4例正常人卵巢组织及血清标本中miR-141的表达;检测4例良性卵巢肿瘤血清中miR-141的表达。结果：miR-141在卵巢癌患者组织中相对表达量分别为（72．846±76．671）显著高于正常人（2．869±3．201）（P〈0．05）;miR-141在卵巢癌患者血清中相对表达量（31．581±52．885）显著高于良性卵巢肿瘤患者（0．668±1．196）和正常人（1．690±1．697）（P〈0．05）,后两组间表达无差异（P〉0．05）;miR-141表达随卵巢癌临床分期的进展呈上升趋势（P〈0．01）,在无淋巴结转移组明显高于有淋巴结转移组（P〈0．05）,与组织分级和CA125的升高无关（P〉0．05）。在组织中miR-141表达水平与上皮性卵巢癌临床病理特征均未见明显差异（P〉0．05）。结论：miR-141可能在上皮性卵巢癌的发生发展中发挥癌基因的作用;miR-141用于检测上皮性卵巢癌敏感性和特异度较高,有望成为上皮性卵巢癌早期诊断的新指标。     

微小RNAmiR-21和miR-31在13腔鳞癌组织中的表达及意义

目的：检测口腔鳞癌中微小RNA miR-21和miR-31的表达,探讨其与肿瘤发展的关系。方法：应用实时荧光定量PCR的方法检测72例口腔鳞癌,38例正常口腔粘膜miR-21和miR-31的表达,统计学分析其表达与肿瘤临床分期和病理分型的关系。结果：①口腔鳞癌组织与对照组比较,微小RNA miR-21和miR-31的表达都有显著增高（P〈0.05）,其中miR-21的增高更为显著（P〈0.001）。②统计学分析表明,miR-21的表达在晚期鳞癌组织较早中期鳞癌组织增高更为显著（P〈0.01）,在低分化鳞癌组织较中、高分化鳞癌组织增高更为显著（p〈0.001）;MiR-31的表达水平在不同肿瘤临床分期和病理分型鳞癌组织中无明显差异（P〉0.05）。结论：miR-21和miR-31在口腔鳞癌发生发展过程中表达有明显增高,其中miR-21表达水平可作为潜在的口腔鳞癌临床分期分级和预后的指标。     

miR-134在人垂体腺瘤组织中的表达及其意义(英文)

目的:探讨垂体腺瘤患者miR-134的表达及意义,分析其表达水平与无功能垂体腺瘤(non-functioningpituitaryadenomas,NFPA)增殖侵袭能力的相关性。方法:选择2010年6月至2013年7月本院收集垂体腺瘤标本104例以及8例尸检正常腺垂体的临床资料。采用实时荧光定量PCR、免疫组织化学技术检测Ki-67、MEG3、miR-134等在NFPA组织中的表达水平,并分析数据。结果:miR-134在NFPA组织中表达水平显著低于正常腺垂体和其他类型垂体腺瘤(P0.01);miR-134的表达水平与NFPA患者肿瘤侵袭性、肿瘤细胞Ki-67阳性率及发病年龄呈负相关(P0.01)。结论:miR-134表达下调可能是NFPA肿瘤发生及肿瘤呈侵袭样生长的重要因素,miR-134可作为诊断和评估NFPA预后的参考指标。     

miRNA-105在胃癌组织中的表达情况

目的:分析胃癌组织与癌旁正常胃黏膜组织中miRNA的差异表达情况。方法:收集胃癌组织和其相应癌旁正常胃黏膜组织共33对,经抽提、纯化RNA后,反转录合成荧光分子Hy3的cDNA探针,将其与miRCURYTMLNA Array(v.16.0)(Exiqon公司)芯片进行杂交,应用Axon GenePix 4000B芯片扫描仪来扫描miRNA芯片的荧光强度,GenePix Pro 6.0软件(Axon)把图像转化为数字信号,以差异大于2倍的为标准来确定胃癌黏膜组织中差异表达的miRNA。再用实时荧光定量PCR方法验证芯片结果中表达异常增高的miR-105在33例胃癌组织中的表达情况。结果:miRNA表达谱芯片结果显示:胃癌组织共中有51种miRNA表达异常,其中miR-105、miR-548n、miR-214*、miR-4309等31种miRNA表达上调,miR-31、miR-1275、miR-26b*、miR-744等20种miRNA表达下调;实时荧光定量PCR证实与癌旁正常胃黏膜组织相比,胃癌组织中miR-105表达显著上调(P0.01)。结论:miR-105在胃癌组织的表达明显高于正常胃黏膜组织,可能与胃癌的发生、发展相关。我们的研究为胃癌的发病机制和诊断治疗提供了一个新的研究方向。