杨梅黄酮减弱MPP+ 诱导的MES23.5 细胞的细胞毒性

目的:探讨杨梅黄酮对MPP+处理的MES23.5细胞的保护作用。方法:实验分为空白对照组,MPP+处理组,MPP+和杨梅黄酮共处理组,分别处理MES23.5细胞24h后,应用Hoechst 33258染色观察各组细胞细胞核形态的改变,应用RT-PCR技术观察Bcl-2和Bax mRNA表达的改变。结果:杨梅黄酮能明显抑制MPP+引起的MES23.5细胞核固缩,核碎裂等形态学的改变,杨梅黄酮还可以对抗MPP+处理造成的MES23.5细胞的Bcl-2/Bax比率的降低。结论:杨梅黄酮对MPP+处理的MES23.5细胞具有保护作用。     

杨梅黄酮通过Wnt通路改善细胞因子诱导的胰岛β细胞功能障碍的实验研究

本文探讨杨梅黄酮对细胞因子诱导的胰岛β细胞功能障碍的影响及Wnt通路在其中的作用.MTT法检测细胞的存活率;放射免疫法检测RIN-m5fβ细胞在基础状态和高糖状态下胰岛素的分泌水平;Western blot法检测Wnt通路相关蛋白的表达情况.肿瘤坏死因子α、白介素1β和γ干扰素联合作用细胞48 h后,与空白对照组相比,细胞的存活率显著下降;基础状态下胰岛素的分泌量增加至空白对照组的2.45倍,而高糖刺激状态下胰岛素的分泌量减少至空白对照组的39.6%.Western blot结果显示,细胞因子处理后使Wnt通路相关蛋白的表达量下降.而杨梅黄酮作用后,与细胞因子组相比,可使细胞存活率上升.另外,20μmol/L杨梅黄酮可逆转细胞因子对胰岛素分泌的影响,使基础状态下胰岛素的分泌减少,高糖刺激状态下胰岛素分泌量显著增加.Western blot结果显示,杨梅黄酮提高了Wnt通路相关蛋白的表达水平.上述结果表明,细胞因子联合作用48 h能诱导RIN-m5f细胞功能障碍,杨梅黄酮干预后能减少这种细胞损伤,保护机制可能与其激活Wnt通路有关.     

Ap5A延迟TRAIL诱导Novikoff细胞的凋亡

通过荧光分子标记和CONFOCAL技术检测方法,建立了TRAIL（TNF-related apoptosis inducing ligand, 一种类肿瘤坏死因子）诱导Novikoff细胞凋亡的模型,并探讨了TRAIL诱导凋亡的机制和Ap5A（P¹, P⁵-Di（adenosine-5′）pentaphosphate）在其中的作用.结果显示：TRAIL可诱导Novikoff细胞凋亡,且具有剂量和时间依赖性,同时胞内钙离子浓度显著上调.Ap5A能延迟TRAIL诱导的Novikoff细胞凋亡,同时下调胞内钙离子浓度.TRAIL和Ap5A分别上调和下调胞内钙离子浓度的作用可能是其诱发和延迟Novikoff细胞凋亡的一个机制.     

2'-羟基二氢黄酮诱导白血病HL-60细胞凋亡过程中抗氧化酶活性的变化

目的:观察2'-羟基二氢黄酮诱导白血病细胞HL-60凋亡过程中胞内抗氧化酶活性的变化,并探讨其抗肿瘤作用机制.方法:采用CASY-TT亚流式细胞术测定2′-羟基二氢黄酮对HL-60细胞存活率的影响;Annexin V/PI双染流式细胞仪检测分析细胞凋亡变化;化学比色法测定2′-羟基二氢黄酮作用后,HL-60细胞胞内抗氧化酶SOD、CAT、GSH-Px的活性变化.结果:2′-羟基二氢黄酮显著降低HL-60细胞存活率,其作用呈剂量和时间依赖性;凋亡分析结果显示,20 μM的2′-羟基二氢黄酮作用HL-60细胞后,细胞凋亡率逐渐升高,并在12 h后显著高于作用前水平;酶活性检测表明,20 μM 2′-羟基二氢黄酮作用后,HL-60细胞胞内抗氧化酶SOD、CAT、GSH-Px活性均显著降低.脂质过氧化产物MDA含量显著升高.结论:2′-羟基二氢黄酮显著降低白血病HL-60细胞存活率并诱导细胞凋亡,其中伴随着胞内抗氧化酶活性的显著降低.     

2’-羟基二氢黄酮诱导白血病HL-60细胞凋亡过程中抗氧化酶活性的变化

目的：观察2’-羟基二氢黄酮诱导白血病细胞HL-60凋亡过程中胞内抗氧化酶活性的变化,并探讨其抗肿瘤作用机制。方法：采用CASY-TT亚流式细胞术测定2’-羟基二氢黄酮对HL-60细胞存活率的影响;Annexin V／PI双染流式细胞仪检测分析细胞凋亡变化;化学比色法测定2’-羟基二氢黄酮作用后,HL-60细胞胞内抗氧化酶SOD、CAT、GSH—Px的活性变化。结果：2’-羟基二氢黄酮显著降低HL-60细胞存活率,其作用呈剂量和时间依赖性;凋亡分析结果显示,20μM的2’一羟基二氢黄酮作用HL-60细胞后,细胞凋亡率逐渐升高,并在12h后显著高于作用前水平;酶活性检测表明,20μM2’一羟基二氢黄酮作用后,HL-60细胞胞内抗氧化酶SOD、CAT、GSH．Px活性均显著降低,脂质过氧化产物MDA含量显著升高。结论：2’-羟基二氢黄酮显著降低白血病HL广60细胞存活率并诱导细胞凋亡,其中伴随着胞内抗氧化酶活性的显著降低。     

二苯乙烯苷通过抑制NF-κB的激活减轻MPP＋诱导的PC12细胞凋亡

目的：探讨2,3,5,4＇-四羟基二苯乙烯-2-o-β-D-葡萄糖苷（2,3,5,4＇-tetrahydroxystibene-2-o-β-D-glucoside,TSG）对1-甲基-4-苯基吡啶离子（1-methy-4-phenylpyridinium,MPP＋）诱导PC12细胞凋亡的影响及其可能机制。方法：四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色试验检测PC12细胞活性;Hoechst33258染色法测定细胞凋亡;Westernblotting检测NF-κB（P65）和IκBα蛋白的表达。结果：MPP＋（300μmol/L）作用于PC12细胞24h后,与正常对照组比较,细胞存活率降低（53.3±3.4%）（P〈0.01）;细胞染色质固缩,细胞核呈致密浓染。TSG（1,5,10μmol/L）预处理24h后,细胞存活率增加（60.8±1.9%）,（70.1±1.8%）（P〈0.01）,（81.2±1.9%）（P〈0.01）;细胞核凝聚明显减少,且具有量一效关系。另外,MPP＋可使PC12细胞核中NF-κB（P65）蛋白表达升高,细胞浆中IκBα蛋白表达降低;与MPP＋处理组细胞相比,TSG预处理后,PC12细胞核中高表达的NF-κB（P65）蛋白水平明显降低,细胞浆中低表达的IκBα蛋白水平升高。结论：TSG对MPP＋诱导的PC12细胞凋亡具有浓度依赖性的抑制作用,其作用机制可能与抑制NF-κB的激活有关。     

AcMNPVP35抑制HaSNPV诱导的Tn-Hi5细胞凋亡

苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multicapsid nuclear polyhedrosis virus,AcMNPV)能够抑制棉铃虫核多角体病毒(Helicoverpa armigera Nucleopoly hedrovirus,HaSNPV)诱导的Tn Hi5 细胞凋亡,并能辅助HaSNPV在Tn Hi5细胞中复制,产生具有感染能力的子代病毒。瞬时表达实验证明,在Tn Hi5细胞中,p35具有明显抑制凋亡的能力,但是不能辅助HaSNPV在Tn Hi5细胞中的复制;进一步构建超表达p35 的重组病毒:vHap35,发现vHap35能够抑制Tn Hi5细胞凋亡,但是不能产生具有感染力的病毒粒子。电镜观察发现感染重组病毒的部分细胞中存在单粒包埋的病毒粒子(ODV)。     

AcMNPV P35抑制HaSNPV诱导的Tn-Hi5细胞凋亡

苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multicapsid nuclear polyhedrosis virus,AcMNPV)能够抑制棉铃虫核多角体病毒(Helicoverpa armigera Nucleopoly-hedrovirus,HaSNPV)诱导的Tn-Hi5细胞凋亡,并能辅助HaSNPV在Tn-Hi5细胞中复制,产生具有感染能力的子代病毒.瞬时表达实验证明,在Tn-Hi5细胞中,p35具有明显抑制凋亡的能力,但是不能辅助HaSNPV在Tn-Hi5细胞中的复制;进一步构建超表达p35的重组病毒vHap35,发现vHap35能够抑制Tn-Hi5细胞凋亡,但是不能产生具有感染力的病毒粒子.电镜观察发现感染重组病毒的部分细胞中存在单粒包埋的病毒粒子(ODV).     

靶向VEGF小干扰RNA协同5-FU诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡机制的研究

探讨慢病毒介导的靶向VEGF小干扰RNA联合应用化疗药物5 FU诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的机制。以携带VEGF siRNA的慢病毒载体感染MCF-7细胞,应用RT-PCR和Western blot分别检测各组VEGF mRNA、VEGF蛋白及凋亡相关蛋白的表达,流式细胞术检测细胞凋亡。结果表明,慢病毒VEGF siRNA干扰组细胞VEGF mRNA和蛋白表达水平明显低于对照组,凋亡相关蛋白P53及P21表达上调,而SIRT1、Bcl-2及Survivin表达下调。流式细胞术检测显示慢病毒干扰组及5-FU组细胞凋亡率显著升高,联合治疗组的协同作用更为明显。上述结果表明：慢病毒介导的RNA干扰能明显抑制MCF-7细胞VEGF的表达,通过下调SIRTI蛋白的表达,导致P53蛋白表达上调,并调控其下游P21、bcl-2和Survivin的表达,从而诱导MCF-7细胞的凋亡,并且提高了MCF-7对5-FU的敏感性。     

TIMP-1基因缄默削弱SH-SY5Y细胞的增殖潜能并诱导其凋亡增强

前期研究发现,人基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitors of metalloproteinases-1,TIMP-1)在唐氏综合征（Down’s syndrome ,DS)胎儿脑组织内表达下调．为了探讨TIMP-1表达下调参与DS脑病变发生的可能机制,本研究以人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）为模型,观察TIMP-1基因沉默后对其增殖和凋亡的影响．应用LipofectaminTM2000将TIMP-1特异性短发卡 RNA( short hairpin RNA,shRNA)导入SH-SY5Y细胞,经嘌呤霉素筛选获得稳定表达TIMP-1-shRNA细胞株;应用RT-PCR、real-time PCR和Western 印迹对干扰效率进行鉴定：与SH-SY5Y细胞相比,无论在mRNA水平还是蛋白水平,SH-SY5Y-TIMP-1-shRNA细胞中TIMP-1的表达显著下调（下调率接近100%）．结果显示,已成功构建了TIMP-1基因沉默的SH-SY5Y细胞模型．在此基础上,通过MTT检测发现,TIMP-1基因沉默后SH-SY5Y细胞增殖减慢;流式细胞仪和荧光显微镜凋亡检测显示,TIMP-1基因沉默后SH-SY5Y细胞凋亡明显增加．这些研究结果表明,TIMP-1基因沉默能削弱SH-SY5Y细胞的增殖能力并增强SH-SY5Y的凋亡效应,提示TIMP-1可能是通过影响神经细胞的增殖和凋亡参与DS智力低下的发病过程．     

5-氨基酮戊酸声动力疗法诱导人骨肉瘤细胞凋亡的研究

目的:探讨5-氨基酮戊酸声动力疗法(5-ALA-SDT)对人骨肉瘤细胞株U2-OS细胞凋亡的影响。方法:对数生长期的U2-OS细胞随机分为空白对照组(control)、声敏剂组(5-ALA)、超声组(ultrasound),声动力组(5-ALA-SDT)。采用流式细胞术检测细胞凋亡率,荧光探针及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞内荧光定位,用DCFH-DA检测活性氧(ROS)的产生情况。结果:与单纯超声组,单纯5-氨基酮戊酸组和对照组相比较,5-氨基酮戊酸介导的声动力组细胞存活率(40.18%±1.35%)均明显下降(P0.01),细胞内荧光定位表明5-ALA扩散在细胞质和主要累积在U2-OS细胞线粒体内,并且5-氨基酮戊酸介导的声动力组ROS产生的百分率(34.3±2.4)%较单纯超声组、单纯5-氨基酮戊酸组和对照组明显升高,差异有统计学意义(P0.01)。结论:5-氨基酮戊酸介导的声动力作用可能通过线粒体途径对诱导U2-OS细胞凋亡。     

阿魏酸钠生物学活性——对高糖诱导SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

探讨阿魏酸钠对高糖诱导的人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞凋亡的保护作用及其机制。分别通过葡萄糖培养液,以及具有阶梯阿魏酸钠含量的葡萄糖混合培养液进行SH-SY5Y细胞培养,持续时间为48 h。对其中细胞的存活率使用MTT比色法检测;通过Hoechst33258染色观察细胞核形态改变;细胞凋亡率引入流式细胞仪进行测验;离心获得细胞上清液后,使用对其中含有的8-羟基脱氧鸟苷酸(8-OHd G)组分使用酶联免疫吸附法检测。结果显示阿魏酸钠保护组细胞存活率明显升高,细胞核形态明显改善,组细胞早期凋亡率、上清液中8-OHd G的分泌量均明显降低。结果可见,阿魏酸钠对高糖诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有保护作用,其机制可能与阿魏酸钠的抗氧化作用有关。     

不同浓度的5-氮杂胞苷对RPMI 8226细胞系的诱导凋亡作用分析

目的:探讨不同浓度的5-氮杂胞苷对RPMI 8226细胞系的诱导凋亡作用.方法:对RPMI 8226细胞系采用5-氮杂胞苷0μmol/L、2μmol/L、5μmol/L、10 μrnol/L、20 μmol/L、50 μmol/L处理24 h、48 h、72 h,并对RPMI 8226细胞系处理后进行刮痕实验,12h后对细胞迁移进行比较.结果:在作用24h、48h时,随着作用浓度的增加,RPMI-8226细胞的抑制率出现明显的增加,但在作用72 h时,我们发现10 μmol/L、20μmol/L、50μnol/L其对RPMI-8226细胞的抑制效果无明显的差异性;刮痕实验后12h后其出现差异性,其中药物浓度越大其对RPMI-8226细胞的运动迁移能力越弱.结论:DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮杂胞苷可对RPMI-8226细胞的凋亡具有良好的诱导效果,同时可抑制RPMI-8226细胞的增殖以及迁移.     

miR-186-5p在酒精诱导的心肌细胞中高表达并通过靶基因XIAP调控细胞凋亡水平

目的:证实酒精可诱导AC16心肌细胞凋亡及其与酒精浓度和作用时间的关系,研究不同浓度酒精干预下AC16心肌细胞中miR-186-5p与X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)表达水平以及心肌细胞凋亡水平的改变,探究miR-186-5p以XIAP为靶基因调控酒精诱导的心肌细胞凋亡。方法:流式细胞术检测细胞凋亡水平,Western blot、实时定量PCR技术分别在蛋白质及基因水平检测细胞miR-186-5p与XIAP表达水平的变化,双萤光素酶报告基因靶基因荧光检测miR-186-5p与XIAP的靶际关系。结果:酒精诱导AC16心肌细胞发生凋亡,且与酒精浓度及作用时间呈正相关;酒精摄入上调AC16心肌细胞中miR-186-5p表达,下调XIAP表达; miR-186-5p参与酒精诱导的AC16心肌细胞凋亡过程,XIAP抑制酒精诱导的AC16心肌细胞凋亡; miR-186-5p以XIAP为靶基因调控酒精诱导的心肌细胞凋亡。结论:AC16心肌细胞经过酒精处理后,细胞的凋亡水平升高,并且随着酒精作用浓度和作用时间的延长,凋亡水平进一步升高;酒精处理后心肌细胞中miR-186-5p表达量上调,XIAP表达量下调,miR-186-5p以XIAP为靶基因,调控酒精处理后心肌细胞的凋亡。     

姜黄素与5-FU联用对结肠癌SW480细胞的生长抑制与凋亡诱导作用的研究

本文应用MTT检测法、基于EB/AO双染的荧光显微观察法和FITC/PI双染的流式细胞检测技术,从细胞生长、细胞凋亡和细胞周期等方面研究了姜黄素与5-FU联用对结肠癌SW480细胞的效应。结果显示,姜黄素(25μM)分别与低剂量(2.4μM)、中剂量(4.8μM)5-FU联合作用能有效地抑制SW480细胞的生长,诱导细胞凋亡并将细胞周期阻滞在S期。姜黄素与低剂量5-FU联用组的效果好于中剂量(4.8μM)5-FU单用组(P0.05),而姜黄素与中剂量5-FU联用组的效果好于高剂量(9.6μM)5-FU单用组(P0.05),提示姜黄素能增强5-FU抗结肠癌SW480细胞的作用或对5-FU有协同效应。本研究为临床上应用姜黄素作为5-FU治疗结肠癌的辅助用药,以减少5-FU的使用剂量,从而降低其毒副作用提供了初步的实验依据。     

塞来西布及5- 氟尿嘧啶对人胆管癌QBC939 细胞生长抑制 及诱导凋亡的影响

目的:研究塞来西布(Celecoxib)和5-氟尿嘧啶(5-FU)对人胆管癌QBC939细胞生长抑制和凋亡的影响。方法:体外培养人胆管癌QBC939细胞,噻唑兰比色实验(MTT)观察Celecoxib和5-FU对胆管癌QBC939细胞生长抑制作用;流式细胞术检测细胞生长周期和凋亡率改变。结果:不同浓度的Celecoxib和5-FU可抑制胆管癌QBC939细胞的生长,细胞生长抑制率呈时间-浓度依赖性(P<0.01);实验组QBC939细胞凋亡率随药物浓度的升高逐渐增高(P<0.01),S期细胞逐渐减少(P<0.05),G1期细胞逐渐增加(P<0.05),G2期细胞无明显变化。结论:Celecoxib和5-FU可抑制人胆管癌QBC939细胞的增殖,诱导其凋亡;联合用药效果优于Celecoxib和5-FU单药效果。     

转录激活因子5参与表没食子儿茶素没食子酸酯诱导的胰腺癌SW1990细胞凋亡

目的:研究转录激活因子5(ATF5)是否参与中国绿茶有效成分——表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)诱导的人胰腺癌SW1990细胞凋亡。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的EGCG作用SW1990细胞不同时间后细胞的增殖情况;以100 mg/L EGCG作用SW1990细胞不同时间,观察细胞的形态学变化,并采用SR-VAD-FMK/7-AAD双染法,流式细胞仪检测细胞凋亡情况;采用RT-PCR检测100 mg/L EGCG作用不同时间后ATF5mRNA的表达变化。结果:EGCG可抑制胰腺癌SW1990细胞增殖,引起细胞皱缩,诱导细胞凋亡。随着EGCG作用时间的延长,细胞凋亡率显著提高(P<0.05),ATF5 mRNA的表达明显增强(P<0.05)。结论:胰腺癌SW1990细胞中存在ATF5的表达,在EGCG诱导的细胞凋亡过程中,ATF5表达量上升,提示ATF5参与EGCG诱导的细胞凋亡。     

5-脂氧合酶激活蛋白小干扰RNA诱导人乳腺癌细胞凋亡的初步研究

目的：研究5-脂氧合酶激活蛋白（FLAP）的表达抑制对乳腺癌细胞凋亡的诱导作用。方法：通过小干扰RNA（siRNA）抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231中FLAP的表达,用流式细胞仪检测膜联蛋白（annexin）-V标记的早期凋亡细胞,用Western印迹检测细胞凋亡相关蛋白的水平。结果：转染了FLAP siRNA的乳腺癌细胞,24h后FLAP的表达被抑制,17％的细胞出现早期凋亡;48h时早期凋亡细胞增加到32．1％;72h时早期凋亡细胞下降到13．8％,而死亡或凋亡晚期细胞占到61．3％。在细胞凋亡过程中,Bcl-2水平下降,而细胞色素c、胱冬蛋白酶（caspase）-3的水平逐渐增高。结论：FLAP的表达抑制可以诱导乳腺癌细胞通过Bcl-2和胱冬蛋白酶-3途径发生凋亡。     

姜黄素与5-FU联用对结肠癌SW480细胞的生长抑制与凋亡诱导作用的研究北大核心CSCD

本文应用MTT检测法、基于EB/AO双染的荧光显微观察法和FITC/PI双染的流式细胞检测技术,从细胞生长、细胞凋亡和细胞周期等方面研究了姜黄素与5-FU联用对结肠癌SW480细胞的效应。结果显示,姜黄素(25μM)分别与低剂量(2.4μM)、中剂量(4.8μM)5-FU联合作用能有效地抑制SW480细胞的生长,诱导细胞凋亡并将细胞周期阻滞在S期。姜黄素与低剂量5-FU联用组的效果好于中剂量(4.8μM)5-FU单用组(P<0.05),而姜黄素与中剂量5-FU联用组的效果好于高剂量(9.6μM)5-FU单用组(P<0.05),提示姜黄素能增强5-FU抗结肠癌SW480细胞的作用或对5-FU有协同效应。本研究为临床上应用姜黄素作为5-FU治疗结肠癌的辅助用药,以减少5-FU的使用剂量,从而降低其毒副作用提供了初步的实验依据。