伴海马硬化的颞叶癫痫患者海马组织内BDNF 表达变化

目的:研究伴海马硬化的难治性颞叶癫痫(TLE)患者海马组织内脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)的表达变化,探讨其在难治性颞叶癫痫发病机制中的作用。方法:采集5例伴海马硬化的难治性TLE患者手术中切除的海马组织,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测BDNF mRNA表达,并与3例非海马硬化TLE患者对照。结果:与非海马硬化组比较,伴海马硬化的难治性TLE患者海马组织中的BDNF mRNA表达明显增加(P<0.01)。结论:伴海马硬化的难治性TLE患者海马组织中BDNF mRNA表达表达增高,可能在海马硬化和难治性颞叶癫痫发生、发展中具有重要作用。     

MicroRNA-134/CREB/pCREB通路在癫痫中的表达及意义

目的探讨miR-134、CREB、pCREB在癫痫大鼠海马及难治性癫痫患者颞叶脑组织中的表达及意义。方法难治性癫痫患者及非癫痫对照组颞叶组织、氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠及空白对照组海马组织中,应用实时荧光定量PCR技术检测microRNA-134（miR-134）的表达,用Western blot方法检测CREB及p CREB的表达,用免疫组织化学方法检测人脑颞叶皮质及大鼠海马区CREB、p CREB的表达。结果与对照组相比miR-134表达在难治性癫痫患者中明显降低（P〈0.05）,在癫痫模型组中点燃后3、7、14、60 d明显降低（P〈0.05）,1 d与30 d表达降低较对照组差异无显著性（P〉0.05）;癫痫模型组CREB在3、7、14、60 d时间点明显升高（P〈0.05）、pCREB各时间点表达均高于空白对照组（P〈0.05）。结论难治性癫痫患者颞叶皮质及癫痫动物海马中miR-134表达下降,CREB、pCREB表达升高,提示其可能在癫痫发生发展机制中起重要作用。     

颞叶癫痫脑“默认模式”的fMRI研究

功能磁共振成像(functional magnetic resonance imaging,fMRI)被用于检测静息时脑功能神经网络.作者运用静息fMRI检测海马硬化颞叶癫痫(temporal lobe epilepsy,TLE)脑"默认模式",采用感兴趣区域功能连接分析检测16例TLE患者和16名正常对照静息时脑的"默认模式",并进行组内和组间分析.研究发现,与正常对照相比,TLE静息时海马、颞极、额叶、颞叶、壳核及楔前叶等脑区与后扣带回的功能连接增强.研究结果表明TLE患者的固有脑功能组织模式有可能出现紊乱.这一研究将有助于从脑功能的角度了解癫痫患者某些临床症状的发病机理,为今后癫痫诊治的发展提供一定的帮助.     

癫痫患者额叶及颞叶脑组织A型GABA受体α_1亚型基因表达定量研究

为研究A型GABA受体α1亚型(GABRA1)在癫痫患者病灶额叶及颞叶脑组织中的表达变化与癫痫发病机制的关系,采用TaqMan探针荧光定量PCR检测GABRA1在癫痫患者病灶额叶和颞叶脑组织及对照组额叶和颞叶脑组织中的表达量的差异.结果表明,对照组及癫痫患者额叶GABRA1平均相对表达强度为3.785±1.444和4.399±2.89,两者间无显著差异(P>0.05).对照组颞叶脑组织中GABRA1平均表达量是癫痫患者的4.5倍,对照组及癫痫患者颞叶GABRA1平均相对表达强度为26.802±8.983和5.986±5.07,结果具有统计学意义(P<0.05).提示,难治性癫痫患者GABRA1表达在不同组织中的改变并非单一性改变,GABRA1表达量的改变导致癫痫的发生存在组织特异性;GABRA1在颞叶脑组织中的表达减少与癫痫的发生,尤其是难治性癫痫的发生有密切的关系,可能是难治性癫痫致病的因素之一.该研究结果为进一步研究癫痫的发病机制及防治提供了科学依据.     

慢性颞叶癫痫大鼠行为、电图发作和核磁共振研究--海马-内嗅皮质-颞叶新皮质通路

目的和方法：强直电刺激（６０Ｈｚ,０．４￣０．６ｍＡ,２ｓ）左、右侧背侧海马或中部颞叶新皮质制作慢性大鼠癫痫模型,观察大鼠行为、ＥＥＧ、深部电图以及各脑区Ｔ２（质子横向驰豫时间）加权核磁共振成象（Ｔ２－ＭＲＩ）结构改变,研究海马－内嗅皮质－颞叶新皮质、大脑皮层神经通路在诱发颞叶癫痫中的可能作用。结果：右侧海马刺激组的原发性、继发性湿狗样抖动及癫痫“点燃”效应的发生率明显高于左海马和左、右颞叶新皮质     

癫痫患者额叶及颞叶脑组织A型GABA受体α1亚型基因表达定量研究

为研究A型GABA受体α₁亚型(GABRA1)在癫痫患者病灶额叶及颞叶脑组织中的表达变化与癫痫发病机制的关系, 采用TaqMan探针荧光定量PCR检测GABRA1在癫痫患者病灶额叶和颞叶脑组织及对照组额叶和颞叶脑组织中的表达量的差异. 结果表明, 对照组及癫痫患者额叶GABRA1平均相对表达强度为3.785±1.444和4.399±2.89, 两者间无显著差异(P>0.05). 对照组颞叶脑组织中GABRA1平均表达量是癫痫患者的4.5倍, 对照组及癫痫患者颞叶GABRA1平均相对表达强度为26.802± 8.983和5.986±5.07, 结果具有统计学意义(P<0.05). 提示, 难治性癫痫患者GABRA1表达在不同组织中的改变并非单一性改变, GABRA1表达量的改变导致癫痫的发生存在组织特异性; GABRA1在颞叶脑组织中的表达减少与癫痫的发生, 尤其是难治性癫痫的发生有密切的关系, 可能是难治性癫痫致病的因素之一. 该研究结果为进一步研究癫痫的发病机制及防治提供了科学依据.     

基于ICA的颞叶癫痫缺省模式网络的研究

很多fMRI研究表明部分癫痫患者缺省模式网络存在中断现象,但均采用广义线性模型的假设驱动方法。作者尝试运用独立成分分析（independent component analysis, ICA）分离出l5例单侧颞叶癫痫（temporal lobe epilepsy,TLE）患者和17例正常对照的缺省模式网络,并采用拟合度值（goodness-of-fit scores）分析对感兴趣成分进行挑选,将其结果进行组内分析和组间分析。结果表明颞叶癫痫患者的缺省模式网络犬部分区域功能连接度下降,以前额叶和同侧颞上回为著,这可能是由于颞叶癫痫患者的大脑功能内源性组织发生破坏所致。拟合度值下降表明缺省模式网络激活区域为单侧TLE患者提供了一个灵敏的生物信号特征。     

海马中的内源性爆发式放电神经元与颞叶癫痫

颞叶癫痫(temporal lobe epilepsy,TLE)是常见的难治性癫痫,主要累及到海马及海马旁结构等边缘网络。爆发式放电神经元(bursting—firing neurons,BFNs)的活动是促使海马结构产生癫痫电活动及相关病理性改变的重要因素之一。BFNs是一类能够由刺激引起、甚至自发产生成串高频爆发式放电(bursting)的神经元。爆发式放电增加了突触传递的效率,促使突触活动产生短时程和长时程可塑性变化,募集邻近神经元产生同步化放电。BFNs的电活动在癫痫相关性电活动中可能具有起搏点的作用。同时,癫痫电活动也促使内源性BFNs的改变,以及调制非爆发式放电神经元向BFNs的转变,导致海马结构内癫痫电活动的进展和扩散,最终促使癫痫相关性病理性改变和脑的高级功能的损害。     

基于动脉自旋标记技术的内侧颞叶癫痫病人脑血流灌注成像研究北大核心CSCD

基于动脉自旋标记(arterial spin labeling,ASL)技术,分析内侧颞叶癫痫(mesialtemporal lobe epilepsy,mTLE)患者大脑血流灌注(perfusion)的改变情况。在静息态下,采集了30例内侧颞叶癫痫伴单侧海马硬化发作间期患者(其中左侧16例,右侧14例)及22例健康志愿者的ASL数据,并通过计算获取其相对脑血流量(relative CBF,rCBF)及灌注不对称率(asymmetric index,AI)。癫痫病人与正常人的比较结果表明:左侧mTLE患者在两侧海马旁回、梭状回、额叶、颞叶和患侧海马回及岛叶,右侧mTLE患者在两侧海马回、海马旁回、额叶、颞叶和患侧杏仁核及岛叶,rCBF均有所下降,且患侧的下降程度和范围均大于对侧。说明mTLE患者的海马硬化可能导致了痫灶区功能异常,并通过癫痫的发作影响到全脑。     

癫痫大鼠海马内COX-2表达的时间过程

目的：观察癫痫大鼠海马内环氧化酶-2（COX-2）表达的时间过程。方法：采用匹罗卡品（pilocarpine,30mg·kg^-1）诱导大鼠癫痫发作后,分别于不同时间点取脑和海马组织,通过Western blot分析、免疫组织化学方法检测COX-2的表达。结果：pilocarpine诱导大鼠癫痫发作后,海马内COX-2表达6h开始明显增加,24h达到最高水平,2d开始有所下降,4d时恢复到正常水平。结论：癫痫大鼠海马内COX-2表达有一定时间过程,在癫痫发作24h达到高峰。     

癫痫大鼠海马NMDA受体亚基NR2A和BDNFmRNA水平的检测

目的通过锂一匹罗卡品癫痫模型（ithium—pilocarpine seizures rats model of epilepsy,LPS）,研究NMDA受体亚基NR2A、BDNF mRNA的表达,探讨NR2A、BDNF在LPS中的作用。方法建立氯化锂-匹罗卡品大鼠模型,运用原位杂交技术检测致痫后各组不同时间点海马CAI、CA3及DG区NR2A与BDNF mRNA的表达。结果LPS海马NR2A、BDNF mRNA在各观察时间点及部位模型组与正常对照组比较均有明显上调,且有显著统计学差异（P〈0．05）。模型组NR2A mRNA的表达上调7d达峰值（P〈0．05）;而BDNF mRNA表达上调14d达峰值。VPA干预组NR2A mRNA在大鼠海马不同时间及部位（除1d的CA3区）的表达较模型组明显下调（P〈0．05）;BDNF mRNA在大鼠海马不同时间及部位（除28d的DG区）的表达较模型组明显下调（P〈0．05）。结论锂－匹罗卡品腹腔注射可诱导大鼠海马NR2A和BDNF mRNA的表达明显上调;NR2A mRNA表达的增强可能是诱导调控BDNF mRNA表达增强的重要机制之一,说明NMDA受体亚基NR2A可能成为抑制癫痫发作的新靶点。     

Induction of astrocytic cyclooxygenase-2 in epileptic patients with hippocampal sclerosis

Induction of cyclooxygenase-2 (COX-2) has been described in a wide range of neurological diseases including animal models of epilepsy. The present study was undertaken to assess COX-2 expression in hippocampal biopsies from patients with therapy-refractive temporal lobe epilepsy (TLE). For this purpose, hippocampal CA1 subfield was dissected from epileptic patients with (n=5) or without (n=2) hippocampal sclerosis (HS). COX-2 expression was investigated using immunohistochemistry and semi-quantitative RT-PCR. COX-2 immunoreactivity in TLE patient material in the absence of HS was restricted to a few neurons of the hippocampus. In the presence of HS, on the other hand, a significant induction of astrocytic COX-2 immunoreactivity associated with a concomitant increase in the steady-state level of COX-2 mRNA was observed in the CA1 subfield. These findings suggest that induction of astrocytic COX-2 is implicated in the pathogenesis of HS in TLE and is consistent with the previous findings of increased concentrations of prostaglandins in the cerebrospinal fluid of these patients.     

Mitophagy in Refractory Temporal Lobe Epilepsy Patients with Hippocampal Sclerosis

This study aimed to determine if there is an association between mitophagy and refractory temporal lobe epilepsy (rTLE) with hippocampal sclerosis. During epilepsy surgery, we collected tissue samples from the hippocampi and temporal lobe cortexes of rTLE patients with hippocampal sclerosis (as diagnosed by a pathologist). Transmission electron microscopy (TEM) was used to study the ultrastructural features of the tissue. To probe for mitophagy, we used fluorescent immunolabeling to determine if mitochondrial and autophagosomal markers colocalized. Fourteen samples were examined. TEM results showed that early autophagosomes were present and mitochondria were impaired to different degrees in hippocampi. Immunofluorescent labeling showed colocalization of the autophagosome marker LC3B with the mitochondrial marker TOMM20 in hippocampi and temporal lobe cortexes, indicating the presence of mitophagy. Mitochondrial and autophagosomal marker colocalization was lower in hippocampus than in temporal lobe cortex (P < 0.001). Accumulation of autophagosomes and mitophagy activation are implicated in rTLE with hippocampal sclerosis. Aberrant accumulation of damaged mitochondria, especially in the hippocampus, can be attributed to defects in mitophagy, which may participate in epileptogenesis.     

局部高频电刺激海马对海人酸致痫大鼠海马细胞外谷氨酸和γ-氨基丁酸释放的影响

目的：通过高频电刺激海人酸癫痫模型大鼠海马,观察海马细胞外谷氨酸（Glu）和γ-氨基丁酸（GABA）的动态变化。方法：将SD大鼠分成4大组（n=10）：①空白组;②海人酸组;③假刺激组：植入刺激电极未予电刺激;④电刺激组：海人酸注射后予130 Hz电刺激。利用微透析技术收集不同时段海马细胞外液,应用高效液相-荧光检测法测定收集液Glu、GABA的浓度。结果：注射海人酸后Glu明显升高,并持续至第14天,电刺激使Glu明显下降;而注射海人酸后GABA呈短暂性升高,后逐渐下降于第4天后保持稍高于正常水平,电刺激并无明显改变GABA的水平。结论：海马细胞外Glu下降在海马电刺激治疗癫痫中起到重要作用;高频电刺激海马选择性地减少谷氨酸能神经元活动,但不影响GABA的释放。