骨钙素减轻糖尿病大鼠血- 视网膜屏障的损伤

目的:研究骨钙素(Osteocalcin)对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠血-视网膜屏障的影响。方法:取健康SD大鼠24只,随机分为正常对照组、糖尿病1月(DM1)组、糖尿病骨钙素干预(DM1+OCGY)组。尾静脉注射STZ建立DM模型,成模后DM1+OCGY组腹腔注射骨钙素(2.57 mg.kg-.1d-1),DM1组腹腔注射等量生理盐水,1个月后处死动物。用伊文思蓝方法检测大鼠血-视网膜屏障的改变。结果:造模1月后大鼠视网膜血管渗透性显著增加,共聚焦显微镜显示红色荧光斑点主要分布在视网膜血管周围,给予骨钙素后,红色荧光斑点明显减少,进一步定量显示1M糖尿病大鼠视网膜伊文思蓝含量为57.4±8.7μg.g-1,骨钙素能够改变这种变化,DM1+OCGY组伊文思蓝含量为26.1±3.8μg.g-1。结论:骨钙素能抑制糖尿病视网膜病的血管渗漏,对糖尿病引起的血-视网膜屏障破坏有保护作用。     

骨钙素对高糖低脂饮食引起的糖尿病新西兰兔胰腺的影响

目的:基于一贯性高血糖症能导致胰岛素抵抗的假说,我们研究了高糖低脂饮食导致的非胰岛素依赖糖尿病大鼠的生理功能和组织学改变.方法:取正常新西兰兔24只,随机分为正常组、糖尿病(DM)组、糖尿病骨钙素干预(DM+OCGY)组.采用高唐低脂饮食喂养新西兰兔,建立非胰岛素依赖糖尿病模型.建立模型后,DM+OCGY组腹腔注射骨钙素(2.5 mg/kg·d),DM组腹腔注射相等量生理盐水.一个月后处死新西兰兔.用HE染色方法检测新西兰兔胰腺形态改变.结果:高糖低脂饮食能有效引起新西兰兔血糖的升高,尿糖阳性,HE染色表明胰腺细胞发生相应改变,DM+OCGY组空腹血糖的浓度明显降低,能逆转胰腺的相关改变.结论:高糖低脂饮食能诱导非胰岛素依赖糖尿病的发生,骨钙素对非胰岛素依赖型糖尿病血糖浓度有一定的调节作用.     

丁咯地尔和α-硫辛酸对糖尿病大鼠肾功能的保护作用研究

目的：研究丁咯地尔和α-硫辛酸（ALA）对糖尿病（DM）大鼠肾功能的保护作用。方法：雄性SD大鼠用链脲佐菌素（60mg/kg）腹腔注射诱导DM。大鼠随机分为健康组（NC）、DM组（DMC）、DM＋ALA组（ALA组）、DM＋丁咯地尔组（丁咯地尔组）。ALA组和丁咯地尔组每天给予ALA100mg／kg灌胃和丁咯地尔（0．1g／kg）腹腔注射,NC组和DMC组大鼠给予等量生理盐水每日灌胃。干预4周后,测观察治疗后大鼠血糖、尿素氮、血肌苷,内生肌苷清除率、24小时尿蛋白排泄率,比色法检测血清抗氧化酶和丙二醛（MDA）含量。结果：①丁咯地尔和α-硫辛酸降低糖尿病大鼠的尿素氮、血肌苷、24h尿白蛋白排泄率、丙二醛,增加超氧化物歧化酶②两种药物联合用药具有协同作用。结论：丁咯地尔和ALA可能通过抑制机体氧化应激水平,减低早期DM大鼠肾脏损害。     

miR-939-5p对糖尿病视性网膜病变和视网膜微血管内皮细胞的调控作用

摘要 目的：探究miR-939-5p对糖尿病性视网膜病变和人视网膜微血管内皮细胞（HRMEC）的调控作用。方法：将miR-939-5p模拟物（miR-939-5p-mimic）或miR-939-5p抑制剂（miR-939-5p-inhibitor）转染到HRMEC中,并将细胞用高糖（HG组,25 mM）或低糖（LG组,5 mM）处理24 h。通过细胞计数试剂盒8（CCK-8）来检测细胞活力,EdU法检测细胞DNA的复制能力,Hoechst 33258染色检测细胞凋亡,使用双荧光素酶试剂盒E2920验证miR-939-5p与NOS2 3''-UTR之间的结合关系。对大鼠腹腔注射65 mg/kg的链脲佐菌素（STZ）诱导DR模型,通过RT-qPCR检测miR-939-5p水平,Western Blot检测诱导型一氧化氮合酶（NOS2）水平,苏木精伊红（HE）染色检查大鼠视网膜形态,免疫组织化学染色检测视网膜Claudin-5和Occludin的表达,伊文思蓝染色检测大鼠血视网膜屏障（BRB）通透性,ELISA法检测大鼠房水中白介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的水平。结果：与LG组的HRMEC相比,HG组的miR-939-5p显著降低,而NOS2蛋白水平显著升高（P<0.05）。荧光素酶活性测定显示,与NC-mimic组相比,miR-939-5p-mimic与pGL3-NOS2-WT共转染组的荧光素酶活性显著降低（P<0.05）。与HG+NC-mimic组相比,HG+miR-939-5p-mimic组的miR-939-5p水平和细胞活力显著升高,而NOS2蛋白水平和细胞凋亡率显著降低（P<0.05）。与DR组相比,miR-939-5p-Agomir组大鼠视网膜组织病变减轻,Claudin-5和Occludin的表达水平明显升高,伊文思蓝浓度显著降低（P<0.05）;与DR组相比,miR-939-5p-Agomir组大鼠房水中IL-1β和TNF-α的水平均显著降低（P<0.05）。结论：在高糖培养的HRMEC中和DR大鼠视网膜中,miR-939-5p为低表达模式,NOS2为高表达模式。上调miR-939-5p通过靶向抑制NOS2对DR大鼠视网膜和HRMEC提供保护作用。     

米诺环素对糖尿病大鼠视网膜神经细胞凋亡的影响

目的：观察米诺环素对糖尿病大鼠视网膜神经细胞的凋亡的影响,研究米诺环素对糖尿病视网膜神经保护作用,对米诺环素在糖尿病视网膜疾病中抑制神经细胞凋亡提供理论支持。方法：选择健康成年雄性SD大鼠30只,随机分成正常对照组、糖尿病模型组和米诺环素治疗组,每组10只。腹腔内注射链脲佐菌素（STZ）诱发大鼠糖尿病。米诺环素治疗纽给予米诺环素腹腔注射（45mg／kg）,共注射10d,模型组和对照组腹腔注射等体积生理盐水,于给药后8周的3组动物处死,冰浴下取其视网膜组织,随后制备视网膜石蜡切片,采用末端脱氧核糖核酸介导生物素化脱氧尿嘧啶缺口末端标记L（TUNEL）法进行凋亡细胞原位标记,行视网膜神经细胞凋亡计数,对所有数据进行统计学分析。实验结果拟用均数和标准差（x±s）表示,P〈0．05为差异有统计学意义。结果 相同观察时相,与阴性对照组比较,模型对照组大鼠视网膜TUNEL阳性细胞显著增多（P〈0．01）,在米诺环素组,大鼠视网膜TUNEL阳性细胞数比模型对照组明显减少,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：米诺环素能有效降低糖尿病大鼠视网膜神经细胞的凋亡,对糖尿病视网膜神经细胞有保护作用。     

花生油对2型糖尿病大鼠海马CA1区神经生长因子及胆碱乙酰转移酶表达的影响

目的通过观察2型糖尿病大鼠海马CA1区神经生长因子（NGF）和胆碱乙酰转移酶（ChAT）表达的改变,研究花生油对2型糖尿病大鼠海马神经元NGF及ChAT表达的影响,探讨花生油在防治糖尿病脑病中的作用。方法 60只健康雄性SD大鼠随机分为4组：正常对照组（C组）、2型糖尿病组（T2DM组）、2型糖尿病给予2 mL花生油组（T2DM＋2 mL组）及2型糖尿病给予5 mL花生油组（T2DM＋5 mL组）。其中C组给予正常饮食,糖尿病组大鼠给予高脂饮食喂养,2个月后,按25 mg/kg体质量腹腔注射链脲佐菌素（STZ）制成2型糖尿病模型,T2DM组、T2DM＋2 mL组及T2DM＋5 mL组大鼠继续给予高脂饮食。糖尿病造模1个月后处死全部大鼠,行脑冰冻切片,用免疫组织化学方法检测各组大鼠海马CA1区NGF和ChAT的表达。结果 （1）T2DM组大鼠海马CA1区NGF表达比C组明显降低（P〈0.05）,T2DM＋2 mL组及T2DM＋5 mL组大鼠海马CA1区NGF表达均明显高于未给予花生油的T2DM组（P〈0.05）。（2）T2DM组大鼠海马CA1区ChAT表达显著低于C组（P〈0.05）,T2DM＋2 mL组和T2DM＋5 mL组大鼠海马CA1区ChAT表达均明显高于未给予花生油的T2DM组（P〈0.05）。结论 2型糖尿病大鼠海马CA1区神经生长因子表达降低,胆碱能神经元数量减少,这可能是2型糖尿病脑病发生的原因之一。花生油能增加2型糖尿病大鼠海马区内神经生长因子表达,促进胆碱能神经元存活,表明花生油具有一定的保护大鼠糖尿病脑病的作用。     

HbA1c和FPG水平与2型糖尿病患者视网膜病变的相关性分析

目的：探讨糖化血红蛋（HbA1c）、空腹血糖（FPG）与2型糖尿病患者视网膜病变（DR）的相关性。方法：对我院2010年1月-2012年12月住院或门诊的336例2型糖尿病（T2DM）患者进行眼底检查或眼底血管荧光素造影检测,按有无视网膜病变分为视网膜病变（DR）组和无视网膜病变（NDR）组,并对HbA1c、FBG水平进行检测。结果：DR组较NDR组HbA1c水平高,差异有统计学意义（P〈0．05）,HbA1c水平和DR分期呈正相关（I=0．526,P〈0．001）,而DR组和NDR组FPG水平差异无无统计学意义（P〉0．05）。结论：可将HbA1c作为2型糖尿病患者视网膜病变发生和发展的监测指标之一。     

2型糖尿病大鼠心肌IR、IRS-1的表达与罗格列酮及APP5肽类似物P165的干预效应

目的研究2型糖尿病大鼠心肌胰岛素信号转导通路蛋白胰岛素受体（IR）、胰岛素受体底物-1（IRS-1）的表达与正常SD大鼠的区别,并探讨进行罗格列酮及APP5肽类似物P165干预后对上述蛋白表达的影响。方法60只SD大鼠随机分为正常对照组（C组）、正常对照＋罗格列酮组（C＋RSG组）、2型糖尿病组（T2DM组）、2型糖尿病＋罗格列酮组（T2DM＋RSG组）、糖尿病给予P165小剂量组（T2DM＋P165小剂量组）、糖尿病给予P165大剂量组（T2DM＋P165大剂量组）,其中糖尿病动物采用高脂饮食后给予小剂量STZ腹腔注射的方法造模。后将各组SD大鼠处死,采用免疫组织化学染色和Western blot的方法检测心肌组织IR、IRS-1的表达。结果（1）2型糖尿病组（T2DM组）心肌组织IR、IRS-1的表达水平显著低于对照组（C组）;（2）2型糖尿病＋罗格列酮组（T2DM＋RSG组）心肌组织IR、IRS-1的表达水平显著高于T2DM组;（3）免疫组化染色发现2型糖尿病＋P165小/大剂量组（T2DM＋P165小/大剂量组）心肌组织IR、IRS-1免疫反应阳性颗粒沉着的累积光密度值显著高于T2DM组;Western blot结果显示T2DM＋P165小/大剂量组心肌组织IRS-1的表达水平显著高于T2DM组;而IR的表达水平与T2DM组相比无差别。结论（1）2型糖尿病大鼠心肌存在胰岛素抵抗或信号转导障碍;（2）罗格列酮干预后可以改善2型糖尿病心肌的胰岛素信号转导异常;（3）P165对2型糖尿病大鼠心肌胰岛素信号转导具有调节作用,其作用靶点可能为胰岛素受体底物。     

红参粉末治疗糖尿病视网膜病变的临床观察

目的：观察红参粉末治疗糖尿病视网膜病变的临床效果。方法：随机选取2012年1月至2012年12月在我院接受治疗的2型糖尿病合并糖尿病视网膜病变（Diabetic Retinopathy,DR）患者103例。其中30例（57眼）仅采用常规方法治疗,即对照组;其余73例（125眼）在常规治疗的基础上加用红参粉末,即观察组。治疗180天后,观察并比较两组患者的视力、眼底镜、荧光血管造影等检查结果的变化情况。结果：在观察组中,患者经红参粉末治疗后的视力与治疗前相比有所提高,差异具有统计学意义（P〈0．05）;而对照组中,患者治疗前后的视力变化无统计学意义（P〉0．05）;观察组治疗有效率为76．7％,而对照组治疗有效率为46．7％,差异有显著意义（P〈0．05）。观察组中,男性DR患者治疗有效率为68．8％、女性为92．0％;早期DR治疗有效率为85．4％、晚期为65．1％;糖尿病病程不超过10年的DR患者治疗有效率为88．9％、超过10年的为64．9％,差异均具有统计学意义（P〈0．05）。结论：尽早的发现和及时的治疗可减少糖尿病患者视网膜病变的发生率,从而避免因视网膜病变而引起的严重的视力下降,甚至失明。红参粉末治疗糖尿病视网膜病变有显著的临床效果,特别是对早期糖尿病视网膜病变的疗效更佳,值得临床推广。     

枸杞多糖对糖尿病大鼠视网膜神经元的保护作用及其机制

目的:观察枸杞多糖(LBP)对糖尿病大鼠视网膜神经细胞的保护作用,并探讨其作用机制。方法:18只SD大鼠随机分为3组(n=6):正常对照组(NC),糖尿病模型组(DM)和LBP治疗组(DM+LBP),通过一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法制备糖尿病大鼠模型。DM+LBP组按1 mg/(kg·d)剂量的LBP灌胃12周。治疗结束后检测大鼠体重、空腹血糖、视网膜活性氧簇(ROS)的生成、视网膜神经节细胞(RGCs)和无长突细胞的表达、视网膜NF-E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶-1(HO-1)的蛋白表达。结果:STZ诱导糖尿病大鼠模型造模成功率100%。与NC组相比,DM组大鼠体重明显降低、空腹血糖值升高、ROS的生成明显增加、RGCs和无长突细胞的数量均明显减少(P<0.01)。与DM组相比,LBP治疗组大鼠体重升高、血糖降低、ROS的生成减少、RGCs和无长突细胞的数量均明显增加(P<0.01或P<0.05);视网膜Nrf2和HO-1的蛋白表达均明显升高(P<0.01)。结论:LBP能改善糖尿病大鼠视网膜的氧化应激状态,对糖尿病大鼠视网膜神经细胞有一定的保护效应,其作用机制可能与其激活Nrf2/HO-1信号通路有关。     

Effect of endothelin dual receptor antagonist on VEGF levels in streptozotocin-induced diabetic rat retina

Diabetic retinopathy (DR), one of the most serious causes of blindness, is often associated with the upregulation of vascular endothelial growth factor (VEGF) in retina. Recently, leukocyte adhesion (leukostasis) is blamed for the occlusion of retinal capillary vascularity, which ultimately contributes to the progression of diabetic retinopathy. In addition, intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1), a representative factor for leukostasis, is increased in the diabetic retina. Endothelin (ET)-1, a potent vasoconstrictor peptide, is deeply linked to the pathogenesis of diabetic retinopathy. Different therapeutic interventions concerning VEGF have already been proposed to prevent diabetic retinopathy. However, no study yet has reported whether ET-1 dual receptor antagonist could alter the upregulated VEGF and ICAM-1 levels in the diabetic retina. The present study investigated the effect of ET(A/B) dual receptor antagonist (SB209670; 1 mg/rat/day) on the expression of VEGF and ICAM-1 in the diabetic rat retina. Diabetes was induced by intraperitoneal injection of streptozotocin (STZ; 65 mg/kg) in Sprague-Dawley rats, whereas control rats (non-DM control) received only citrate buffer. After 1 week, the STZ-administered rats were randomly divided into two groups: one group (DM+SB209670) received ET(A/B) dual receptor antagonist for 2 weeks, and a vehicle group (DM+vehicle) was treated only with saline. After the treatment period, the retinas were removed from the eyeballs. In DM+vehicle group, the VEGF expression of the retinas was significantly increased (32.8 pg/mg) in comparison to that in the non-DM control group (26.2 pg/mg); this upregulation of VEGF was reversed in the DM+SB209670 group (28.6 pg/mg). The expression of retinal ICAM-1 was increased in the DM+vehicle group (152.2 pg/mg) compared with the non-DM control group (121.6 pg/mg). However, SB209670 treatment did not alter the expression of retinal ICAM-1 level (154.8 pg/ml) in DM rats. Thus we conclude that an ET(A/B) dual receptor antagonist could reverse the expression level of VEGF in the diabetic retina while failing to normalize the upregulated ICAM-1 expression.     

Environmental Enrichment Protects the Retina from Early Diabetic Damage in Adult Rats

Diabetic retinopathy is a leading cause of reduced visual acuity and acquired blindness. Available treatments are not completely effective. We analyzed the effect of environmental enrichment on retinal damage induced by experimental diabetes in adult Wistar rats. Diabetes was induced by an intraperitoneal injection of streptozotocin. Three days after vehicle or streptozotocin injection, animals were housed in enriched environment or remained in a standard environment. Retinal function (electroretinogram, and oscillatory potentials), retinal morphology, blood-retinal barrier integrity, synaptophysin, astrocyte and Müller cell glial fibrillary acidic protein, vascular endothelial growth factor, tumor necrosis factor-α, and brain-derived neurotrophic factor levels, as well as lipid peroxidation were assessed in retina from diabetic animals housed in standard or enriched environment. Environmental enrichment preserved scotopic electroretinogram a-wave, b-wave and oscillatory potential amplitude, avoided albumin-Evan''s blue leakage, prevented the decrease in retinal synaptophysin and astrocyte glial fibrillary acidic protein levels, the increase in Müller cell glial fibrillary acidic protein, vascular endothelial growth factor and tumor necrosis factor-α levels, as well as oxidative stress induced by diabetes. In addition, enriched environment prevented the decrease in retinal brain-derived neurotrophic factor levels induced by experimental diabetes. When environmental enrichment started 7 weeks after diabetes onset, retinal function was significantly preserved. These results indicate that enriched environment could attenuate the early diabetic damage in the retina from adult rats.     

姜黄素对糖尿病大鼠疼痛过敏的影响

目的：神经病理性痛是糖尿病最常见的并发症之一,本课题旨在探讨姜黄素对糖尿病大鼠痛觉过敏的影响及其分子机制。方法：30只雄性SD大鼠随机分为对照组、糖尿病组和姜黄素治疗纽,模型纽和姜黄素治疗组利用腹腔注射链脲佐菌素（Streptozotocin,STZ）制备大鼠糖尿病模型,定期检测大鼠血糖、饮食、体重等变化,治疗组于STZ注射2wk后定期灌服姜黄素,分别在2wk和4wk后检测各组大鼠热痛敏和机械痛敏反应,在第4wk利用ELISA分别检测各组大鼠脊髓背角TNF-α表达变化。结果：STZ注射组大鼠2周后出现血糖〉14mol／L,并且该模型具有高血糖、体重增长缓慢、多饮多食多尿的特点,符合Ⅰ型糖尿病特征,痛行为测试结果显示糖尿病大鼠出现痛觉过敏,经过给予姜黄素灌服治疗后,痛觉过敏有所减轻,ELISA分析结果表明糖尿病大鼠脊髓背角TNF-α表达升高,经过姜黄素治疗后TNF-α表达有所下降。结论：成功制备STZ-型糖尿病大鼠模型,经过姜黄素治疗可以减轻糖尿病引起的疼痛过敏,姜黄素对糖尿病疼痛的治疗作用可能是通过降低大鼠脊髓背角TNF-α表达实现的。     

Effect of exposure to 50 Hz magnetic field with or without insulin on blood–brain barrier permeability in streptozotocin‐induced diabetic rats

We investigated the effect of long‐term exposure to modulation magnetic field (MF), insulin, and their combination on blood–brain barrier (BBB) permeability in a diabetic rat model. Fifty‐three rats were randomly assigned to one of six groups: sham, exposed to no MF; MF, exposed to MF; diabetes mellitus (DM), DM induced with streptozotocin (STZ); DM plus MF (DMMF); DM plus insulin therapy (DMI); and DM plus insulin therapy plus MF (DMIMF). All the rats underwent Evans blue (EB) measurement to evaluate the BBB 30 days after the beginning of experiments. The rats in MF, DMMF, and DMIMF groups were exposed to MF (B = 5 mT) for 165 min every day for 30 days. Mean arterial blood pressure (MABP), body mass, and serum glucose level of the study rats were recorded. The extravasation of brain EB of the MF, DM, DMMF, DMI, and DMIMF groups was higher than that of the sham group and the extravasation of right hemisphere of the DMIMF group was highest (P < 0.05). The post‐procedure body mass of the sham and MF groups were significantly higher than those of the DM and DMMF groups (P < 0.05). In the DM, DMMF, DMI, and DMIMF groups, the baseline glucose was significantly lower than the post‐procedure glucose (P < 0.05). DM and MF increase BBB permeability; in combination, they cause more increase in BBB permeability, and insulin decreases their effect on BBB. Improved glucose metabolism may prevent body mass loss and the hypoglycemic effect of MF. DM increases MABP but MF causes no additional effect. Bioelectromagnetics 31:262–269, 2010. © 2009 Wiley‐Liss, Inc.     

中医病证相符的糖尿病慢性皮肤溃疡大鼠造模方法初探

目的观察不同造模方法致糖尿病大鼠慢性皮肤溃疡创面形态及愈合时间的影响。方法 50只SD大鼠随机分为5组:皮肤缺损组(QS组:剪皮),糖尿病组(DM组:STZ+剪皮),糖尿病加金黄色葡萄球菌组(DMJJ组:STZ+剪皮+金葡菌),糖尿病加激素组(DMJS组:STZ+剪皮+激素注射),糖尿病加激素加异物组(DMYW组:STZ+剪皮+激素注射+异物埋置)。糖尿病模型稳定后每周测量血糖1次,每日称量体重、观察疮面情况、测量创面面积。12 d后处死,石蜡包埋肉芽组织观察其组织病理形态。结果 DMJJ组前5d愈合速度快于其余组(P0.01);DMYW组的愈合时间延长,DMYW组愈合率显著偏低,与其余组比较有统计学意义(P0.01)。造模12 d其余组愈合率无统计学差异,DMYW组愈合率显著低于其余组(P0.01)。结论注射激素大鼠表现出中医"阴证"证型特点,糖尿病加激素注射加异物埋置复合因素造模法能使大鼠创面表现出与临床相似的"阴证"证型特点。     

海洋矿物质对急性力竭诱发的肌肉耗氧量的影响

高强度运动造成肌肉损伤进而提高肌肉的耗氧量,而矿物质是细胞能量代谢的重要的物质。本研究为了探讨摄入海洋性矿物质对肌肉组织耗氧量的影响,选取了10名大学生采用交叉试验设计分别在单次高强度运动前后,测量体重来判定运动员的脱水量,并在高强度运动挑战后按照脱水量的1.5倍给予饮料摄入。饮料分成海洋性矿物质饮料及安慰剂两种,并在安静期与摄入海洋性矿物质饮料后2 h后使用近红外光谱仪检测肌肉组织氧含量及耗氧量。研究显示,高强度运动会降低肌肉组织的血液量((93.82±5.06)μmol/L>(80.35±3.71)μmol/L)及提高耗氧量((0.53±0.12) mL·min-1·100 g^-1<(0.79±0.12) mL·min^-1·100 g^-1),摄入海洋性矿物可以降低高强度运动后2 h肌肉组织的耗氧量((0.79±0.12) m L·min^-1·100 g^-1>(0.44±0.09) m L·min^-1·100 g^-1)。因此运动员在高强度运动挑战后,摄入海洋性矿物质饮料可抑制高强度运动所造成的肌肉耗氧量增加的现象。