单克隆抗体MGd1 对胃癌SGC-7901 细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究不同浓度的MGd1对体外培养胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的影响。方法:采用MTT法测定不同浓度MGd1对SGC-7901生长抑制作用;流式细胞术(FCM)进行细胞凋亡分析。激光共聚焦显微镜观察MGd1抗原(MGd1-Ag)的亚细胞定位。结果:MTT结果显示不同浓度的MGd1均对SGC-7901细胞产生明显的抑制效应(P=0.02);流式细胞术分析发现MGd1可诱导SGC-7901发生凋亡并呈浓度和时间依赖性(P<0.01);共聚焦显微镜结果显示MGd1-Ag主要定位于细胞膜上。结论:以上结果证实胃癌特异性单抗MGd1可抑制SGC-7901的增殖并促进凋亡发生。它可能通过与细胞膜上抗原特异性结合,影响下游信号传导,从而发挥抑制效应。     

姜半夏乙醇提取物对人胃癌SGC7901 细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察姜半夏乙醇提取物对人胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡的影响。方法:不同浓度姜半夏乙醇提取物(终浓度为1mg/ml,0.5mg/ml,0.25mg/ml,0.125mg/ml)处理SGC7901细胞后,倒置相差显微镜下观察细胞的形态学变化;通过甲基噻唑基四唑法检测细胞增殖状况、描绘生长曲线,使用紫外分光光度法观察药物干预后细胞ATP酶活力;AnnexinV-异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)/碘化丙啶(propidium iodide,PI)双标记法流式细胞术检测姜半夏乙醇提取物对SGC7901细胞诱导凋亡的情况。结果:不同浓度姜半夏乙醇提取物均能不同程度地抑制人胃癌SGC7901细胞的增殖;在姜半夏乙醇提取物诱导细胞后细胞发生了边缘毛刺、体积缩小等形态学变化,同时可见细胞折光度和贴壁能力下降;AnnexinV-FITC/PI双标记法检测显示姜半夏乙醇提取物可诱导细胞发生凋亡;细胞总ATP酶活力在药物干预72小时后出现明显下降;并且随着药物浓度增加细胞凋亡率、细胞形态异常改变以及ATP酶活力抑制作用均呈上升趋势。结论:姜半夏乙醇提取物可抑制人胃癌SGC7901细胞的增殖,促进其凋亡,抑制细胞ATP酶活力。     

姜半夏乙醇提取物对人胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察姜半夏乙醇提取物对人胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡的影响。方法：不同浓度姜半夏乙醇提取物（终浓度为1mg／ml,0．5mg／ml,0．25mg／ml,0．125mg／ml）处理SGC7901细胞后,倒置相差显微镜下观察细胞的形态学变化;通过甲基噻唑基四唑法检测细胞增殖状况、描绘生长曲线,使用紫外分光光度法观察药物干预后细胞ATP酶活力;AnnexinV．异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate,FITC）／碘化丙啶（propidium iodide,PI）双标记法流式细胞术检测姜半夏乙醇提取物对SGC7901细胞诱导凋亡的情况。结果：不同浓度姜半夏乙醇提取物均能不同程度地抑制人胃癌SGC7901细胞的增殖;在姜半夏乙醇提取物诱导细胞后细胞发生了边缘毛刺、体积缩小等形态学变化,同时可见细胞折光度和贴壁能力下降;Annexin V-F／TC／PI双标记法检测显示姜半夏乙醇提取物可诱导细胞发生凋亡;细胞总ATP酶活力在药物干预72小时后出现明显下降;并且随着药物浓度增加细胞凋亡率、细胞形态异常改变以及ATP酶活力抑制作用均呈上升趋势。结论：姜半夏乙醇提取物可抑制人胃癌SGC7901细胞的增殖,促进其凋亡,抑制细胞ATP酶活力。     

ADAR1 shRNA对人胶质瘤U87细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究ADAR1 shRNA对人胶质瘤细胞U87细胞增殖和凋亡的影响。方法:通过构建ADAR1-shRNA的干扰质粒,经脂质体法转染胶质瘤U87细胞系,通过荧光倒置显微镜观察转染效率,选择转染效率最高的细胞系。取转染48h细胞,采用RT-PCR和Western-blot分别检测ADAR1 mRNA及蛋白的表达,流式细胞仪检测其细胞凋亡率,MTT法检测细胞增殖情况。结果:①经ADAR1-shRNA转染48h后的转染效率最高,此时U87细胞系中ADAR1 mRNA及蛋白的表达均被显著抑制,较阴性对照组及空白组均明显降低(P0.05)。②在转染ADAR1-shRNA后,细胞凋亡率为(28.14%±3.76%),明显高于阴性对照组(3.20%±1.57%)和空白组(2.80%±1.49%),细胞增殖率较阴性对照组及空白组明显下降(P0.05)。结论:通过shRNA抑制ADAR1的表达能明显促进人胶质瘤细胞U87细胞的凋亡和抑制其增殖,ADAR1基因可能成为治疗治疗胶质瘤的新靶点。     

比较NRP-1反义寡核苷酸与VEGFR-2反义寡核苷酸对人胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究比较神经纤毛蛋白1(NRP-1)反义寡核苷酸(ASODN)与血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)反义寡核苷酸(ASODN)对人胃癌SGC7901细胞增殖活性及凋亡水平的影响。 方法:分别及同时将不同浓度经硫代磷酸化修饰的NRP-1 ASODN 和 VEGFR-2 ASODN 转染入人胃癌SGC7901细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测NRP-1基因和VEGFR-2 基因mRNA的转录水平;MTT比色法测量细胞的增殖活性;流式细胞仪测量细胞的凋亡水平。 结果:转染NRP-1 ASODN和VEGFR-2 ASODN后,人胃癌SGC7901细胞NRP-1基因和VEGFR-2 基因mRNA的转录水平均出现降低;NRP-1 ASODN和VEGFR-2 ASODN对SGC7901细胞有明显抑制增殖和促进凋亡的作用,且随着ASODN浓度升高而增强;分别转染时其作用无显著差别,联合转染时其作用明显增强。结论:NRP-1 ASODN和VEGFR-2 ASODN可抑制人胃癌SGC7901细胞 NRP-1基因和VEGFR-2 基因mRNA的转录水平及细胞增殖活性,促进细胞凋亡;与分别转染相比,两者联合转染作用明显增强。     

桦木酸对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响*

目的: 以人胃癌SGC-7901细胞为研究对象,探究桦木酸对其凋亡的影响。方法: 将人胃癌SGC-7901细胞分为4组,每组设置3个复孔,对照组未加入桦木酸,而三组实验组分别加入浓度为10 mg/L、20 mg/L及30 mg/L的桦木酸,将各组细胞放入5%的CO₂培养箱中培养48 h,激光共聚焦显微镜观察细胞形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位变化;qRT-PCR和Western blot分别检测SGC-7901细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax和Caspase-3在mRNA和蛋白水平的表达。结果: 与对照组相比,终浓度为10 mg/L、20 mg/L、30 mg/L的桦木酸处理组,细胞发生皱缩、细胞核裂解并出现凋亡小体;细胞早期凋亡与晚期凋亡率显著增加(P＜0.05 or P＜0.01),线粒体膜电位明显降低(P＜0.05 or P＜0.01);细胞凋亡相关基因Bax和Caspase-3的mRNA与蛋白表达水平均显著上升(P＜0.01),而Bcl-2的mRNA与蛋白表达水平显著降低(P＜0.01)。结论: 在一定浓度范围内,桦木酸通过调节凋亡相关基因Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡。     

球形幽门螺杆菌对SGC-7901细胞增殖的影响

目的:了解球形幽门螺杆菌对体外培养细胞增殖的影响.方法:采用抗生素诱导幽门螺杆菌标准菌株NCTC11637球变,将弯曲形和球形菌的菌悬液(1×108个/ml)作5倍梯度稀释,而后分别加入胃癌上皮细胞SGC-7901,共孵育3 d后,用MTT法检测SGC-7901细胞增殖的情况.结果:高浓度的弯曲形和球形幽门螺杆菌(＞8×107个/ml)可明显抑制细胞的增殖(P＜0.05);低浓度的球形幽门螺杆菌(＜1.28×105个/ml)可明显促进细胞的增殖(P＜0.05).结论:球形幽门螺杆菌在体外可影响SGC-7901细胞的增殖.     

HSV-1感染对人星形胶质瘤细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的:研究单纯疱疹病毒1型(Herpes simplexvires,HSV-1)感染对人星形胶质瘤细胞U251增殖、凋亡和细胞周期的影响.方法:以感染复数(MOI)为5的HSV-1感染体外培养的U251细胞,在感染后24 h、48 h、72 h和96 h用倒置显微镜观察U251细胞的形态改变:用MTT法、流式细胞术观察HSV-1感染对U251细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响.结果:①U251细胞在感染24h后开始出现细胞融合,48 h后开始出现典型的细胞病变效应(Cytopathic effect,CPE),72h后超过80%的细胞出现CPE,.96h后细胞大部分死亡.②MTT法显示HSV-1感染U251细胞24 h、48 h、72 h及96 h的U251细胞OD值均低于对照组(P<0.05).③HSV-1感染U251细胞12h后凋亡率与对照组无显著差异(P0.05),感染24h和36h后凋亡率比相应对照组有显著差别(p<0.05).④HSV感染12h、24h和36h后均可引起U251细胞S期细胞增多和G0/G1期细胞减少,24 h后G2/M期细胞比例开始增加.结论:HSV.1能感染体外培养的U251细胞,抑制其增殖,促进其凋亡并影响其细胞周期.     

BCG对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的从细胞增殖和凋亡两方面观察BCG对乳腺癌细胞MDA—MB-231的抑制作用。方法用MTT法检测BCG作用后MDA—MB-231细胞的增殖能力,采用TUNEL法检测凋亡。结果BCG能明显降低MDA-MB-231细胞的增殖代谢活性而抑制其增殖。TUNEL法染色显示BCG可显著增加凋亡细胞。结论BCG不仅能显著抑制MDA—MB-231细胞增殖,还能有效诱导其凋亡。     

抗胃癌细胞系单克隆抗体PD4的初步研究

以胃癌细胞系MGC803免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞NS-1融合。经选择培养、筛选及克隆化,获得恒定地分泌抗胃癌细胞系单克隆抗体(MoAb)的杂交瘤细胞系PD4。MoAb PD4与3/4胃癌细胞系有强结合反应,与4/4肺癌细胞系有弱结合反应,但与淋巴细胞、ABO红细胞、骨髓细胞、二倍体成纤维细胞及经检测的其他肿瘤细胞均无反应。PD4抗原主要表达于靶细胞的膜上,不耐热,为分子量40kD的蛋白性抗原。该抗原与HLA抗原系统,血型抗原系统无关,亦不同于其他作者所报告的其他胃癌相关抗原。     

金雀异黄素合成品诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡的体外研究

目的:探讨金雀异黄素合成品诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡的作用机制。方法:采用2.5mg·L~(-1)、5.0mg·L~(-1)、10.0mg·L~(-1)和20.0mg·L~(-1)的金雀异黄素处理人胃癌细胞SGC-7901后,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,电镜下观察细胞形态变化,RT-PCR法检测凋亡相关基因表达。结果:10.0mg·L~(-1),20.0mg·L~(-1)金雀异黄素能诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡,凋亡率与剂量正相关(相关系数r=0.9830),10.0mg·L~(-1)金雀异黄素诱导胃癌细胞SGC-7901发生凋亡的形态学改变,2.5mg·L~(-1)、5.0mg·L~(-1)、10.0mg·L~(-1)和20.0mg·L~(-1)金雀异黄素使Bcl-2mRNA表达下调,Fas mRNA表达上调。结论:金雀异黄素能诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡,降低Bcl-2 mRNA表达,增加Fas mRNA表达为其诱发SGC-7901细胞凋亡的机制之一。     

原花青素诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡及其机制的研究

为探讨原花青素对人胃癌SGC-7901细胞增殖及凋亡的影响及其可能的作用机制,以体外培养的SGC-7901细胞为研究对象,经一定浓度的原花青素作用后,用MTT法及流式细胞仪检测细胞增殖抑制及凋亡情况,Real-time PCR技术及免疫组化法检测Bcl-2、Bax mRNA和相关蛋白表达的含量。结果表明,不同浓度的原花青素不仅能有效抑制SGC-7901细胞增殖,还可诱导细胞凋亡,且抑制增殖及促进凋亡作用呈浓度和时间依耐性;Real-time PCR及免疫组化试验中显示,随着原花青素浓度的增加,Bcl-2mRNA及相应蛋白表达逐渐减少,Bax mRNA和相关蛋白表达逐渐增加。因此,原花青素对人胃癌SGC-7901细胞具有明显的抑制作用,其作用机制可能与上调Bcl-2蛋白和下调Bax蛋白水平有关。     

OAS1蛋白单克隆抗体的制备及其表征

目的:用OAS1蛋白免疫小鼠,获得OAS1特异性单克隆抗体,为OAS1的含量测定提供基础。方法:通过全基因合成的方法获得目的基因序列,转化大肠杆菌BL21细胞诱导His-OAS1及OAS1蛋白表达,纯化后用作抗原免疫小鼠,取脾融合,筛选稳定分泌抗体的阳性细胞株,制备并纯化单抗,通过SDS-PAGE,ELISA,Western blot等方法进行检测。结果:体外高效表达OAS1蛋白,并成功制备特异性单克隆抗体,效价在5×10^-11mol/L以上,亲和常数为3.37×10⁸ L·mol^-1。结论:获得高亲和力OAS1单克隆抗体,为其含量的检测奠定了基础。     

早孕因子单克隆抗体对黑色素瘤细胞A-375增殖、凋亡的影响

目的:研究早孕因子单克隆抗体(EPF-McAb)对黑色素瘤细胞A-375增殖、凋亡的影响。方法:体外培养黑色素瘤细胞A-375,通过CCK-8实验检测EPF-McAb对A-375细胞增殖的影响;通过流式细胞术检测EPF-McAb对A-375细胞凋亡的影响;Western Blot检测EPF-McAb对A-375细胞EPF蛋白表达的影响。结果:CCK-8结果显示EPF-McAb可以抑制黑色素瘤细胞A-375的增殖,且随着作用时间延长和药物浓度的增加,对A-375细胞增殖的抑制作用也增强;流式细胞术实验结果显示EPF-McAb可以促进黑色素瘤细胞A-375的凋亡,且调亡率随着药物浓度的增加而升高,0.2、0.4、0.8 mg/m L的EPF单抗作用于A-375细胞24 h后,细胞调亡率分别为:14.68%(P0.01)、19.81%(P0.01)、23.97%(P0.01);Western Blot实验结果显示EPF-McAb可以降低黑色素瘤细胞A-375 EPF蛋白的表达。结论:早孕因子单克隆抗体可以抑制黑色素瘤细胞A-375的增殖,并促进其凋亡。     

Scinderin基因沉默对人胃癌细胞SGC-7901增殖、转移的影响

Scinderin是一种依赖Ca2＋的肌动蛋白丝（F-actin）切割蛋白,在细胞分泌过程中发挥着重要作用。目前,针对scinderin在人类疾病尤其是肿瘤中的生物学功能研究报道的并不多。该实验通过构建scinderin—shRNA慢病毒载体并感染人胃癌细胞株SGC-7901,于荧光显微镜下观测感染效率,利用RT-qPCR和Western blot实验证实scinderin的沉默效果。运用实时细胞分析4K（RTCA）检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞周期变化,Transwell小室检测细胞的迁移能力。结果显示,将构建好的病毒载体成功转入了胃癌细胞SGC-7901。感染scinderin—shRNA病毒载体后,scinderin的mRNA和蛋白质表达水平均受到不同程度的抑制（P〈0．01）,细胞的增殖和迁移能力均显著降低（P〈0．05）,细胞周期阻滞在G2／M期。该研究表明,胃癌细胞SGC-7901中scinderin低表达能有效抑制细胞的增殖和转移能力,这也为scinderin在胃癌演化过程中的机制研究奠定了实验基础。     

抗IFITM1 单克隆抗体的制备及检测

目的：制备抗干扰素诱导的跨膜蛋白-1(interferon-induced transmembrane protein 1, IFITM1)的单克隆抗体,为检测IFITM1 及进一步研究其在结肠肿瘤发生过程中的作用提供实验基础。方法：以结肠癌患者的癌组织为材料,提取总RNA,以RT-PCR扩 增得到IFITM1 cDNA 序列,经ECoRⅠ和HindⅢ双酶切后,克隆入pGEX-4T-3 进行原核表达并纯化得IFITM1-GST;以该融合蛋 白免疫BALB/c 小鼠,淋巴细胞杂交瘤法制备单克隆抗体;采用ELISA、Western-blot及免疫组织化学法以制备的抗体检测结肠癌 患者结肠癌组织中的IFITM1。结果：成功构建了IFITM1 原核表达载体,获得了IFITM1-GST 重组蛋白;制备得到了1 株抗 IFITM1 单克隆抗体,腹水ELISA 效价为1:30000,抗体亚类为IgG1,可用于ELISA、Western-blot及免疫组织化学法检测结肠癌患 者结肠癌组织中的IFITM1。结论：获得了1 株可用于ELISA、Western-blot及免疫组织化学法的抗IFITM1 单克隆抗体2F-1,为进 一步研究IFITM1在结肠肿瘤发生过程中的作用提供了实验基础。     

抗IFITM1单克隆抗体的制备及检测

目的：制备抗干扰素诱导的跨膜蛋白-1（interferon-induced transmembrane protein 1,IFITM1）的单克隆抗体,为检测IFITM1及进一步研究其在结肠肿瘤发生过程中的作用提供实验基础。方法：以结肠癌患者的癌组织为材料,提取总RNA,以RT—PCR扩增得到IFITM1 cDNA序列,经EcoR 和HindⅢ双酶切后,克隆入pGEX-4T-3进行原核表达并纯化得IFITM1-GST;以该融合蛋白免疫BALB／c小鼠,淋巴细胞杂交瘤法制备单克隆抗体;采用ELISA、Western-blot及免疫组织化学法以制备的抗体检测结肠癌患者结肠癌组织中的IFITM1。结果：成功构建了1FITM1核表达载体,获得了IFITM1-GST重组蛋白;制备得到了1株抗IFITM1单克隆抗体,腹水ELISA效价为1：30000,抗体亚类为IgG1,可用于ELISA、Western-blot及免疫组织化学法检测结肠癌患者结肠癌组织中的IFITM1。结论：获得了1株可用于ELISA、Westem-blot及免疫组织化学法的抗IFITM1单克隆抗体2F—1,为进一步研究IFITM1在结肠肿瘤发生过程中的作用提供了实验基础。