赤芍总苷抗氧化活性及对大鼠肝星状细胞增殖的影响

目的:研究赤芍总苷体外抗氧化活性及对大鼠肝星状细胞HSC-T6细胞增殖的影响.方法:采用DPPH法测定赤芍总苷体外清除DPPH自由基及抗氧化活性,根据清除率曲线,确定EC50值;采用MTT法考察赤芍总苷对大鼠肝星状细胞HSC-T6细胞增殖的影响,确定起效剂量,并考察其量效关系.结果:赤芍总苷对DPPH自由基具有较强清除作用,其对DPPH的清除率的回归方程为y=7.4432x0.6111(r=.9967),EC50值为6.64mg/L;赤芍总苷对HSC-T6的增殖具有明显的抑制作用,给药浓度为1.152mg/mL时,其对HSC-T6细胞增殖的抑制率可达39.240%.结论:赤芍总苷具有较强的抗氧化活性,对肝星状细胞的增殖有一定抑制作用.     

褪黑素对自身免疫性肝炎大鼠肝星状细胞增殖及凋亡的影响

目的研究褪黑素（MT）对自身免疫性肝炎大鼠肝星状细胞（HSC）增殖及凋亡的影响。方法采用弗氏完全佐剂加肝细胞特异性脂蛋白法建立自身免疫性肝炎大鼠模型。分别分离纯化正常大鼠及模型大鼠肝星状细胞,实验室常规培养,观察组培养基中加褪黑素使终浓度为10μmol／L,空白对照组培养基中不加任何药物。培养48h后,观察其形态及数量的变化,并检测肝星状细胞的凋亡百分率。结果培养48h后,未加入MT的正常大鼠及模型组来源的HSC生长良好,MT组HSC分布稀疏,部分细胞皱缩,数量明显少于正常对照组及模型组;与另两组比较,MT组HSC凋亡率明显升高,差异有显著性（P〈0．05）。结论褪黑素能抑制自身免疫性肝炎大鼠肝星状细胞的增殖和分化,并能促进其凋亡。     

赤芍总苷对培养乳鼠心肌细胞损伤的保护作用

为了探讨赤芍总苷对心肌细胞损伤的保护作用,以异丙基肾上腺素加入培养的乳鼠心肌细胞造成缺血缺氧损伤模型,对比分析正常对照组、药物损伤组、辅酶Q10阳性对照组、以及不同剂量赤芍总苷保护组的细胞形态学、心肌酶谱等指标、结果显示：损伤组细胞搏动加速,存活率下降,GOT、LDH、CK等3种心肌酶活力均显著升高;而辅酶Q10组和赤芍总苷组上述指标都有不同程度的改善,其中高剂量赤芍总苷组的保护作用优于阳性对照组．证明赤芍总苷对异丙基肾上腺素造成的培养乳鼠心肌细胞损伤具有保护作用,并且呈现剂量依赖关系．     

五味子乙素对大鼠肝星状细胞增殖和胶原基因表达合成的影响

目的观察五味子乙素在大鼠肝星状细胞（HSCs）增殖,胶原表达合成方面的作用。方法经在体灌流消化大鼠肝脏分离HSCs,培养于DMEM培养基中,用^3H-TdR和^3H-pro掺入试验测定五味子乙素对HSCs的增殖和胶原合成影响,并用原位杂交方法探讨了其对HSCⅠ、Ⅲ型前胶原基因的表达作用。结果对于培养活化的HSCs,五味子乙素对HSCs摄取^3H-TdR没有明显影响,但在40μmol/L时,剂量依赖地抑制HSCs摄取^3H-proline,并在80μmol/L降低Ⅰ型前胶原基因表达（P〈0.05）。结论五味子乙素具有降低HSCs胶原基因表达合成作用。     

丹参单体IH764-3对H2O2刺激肝星状细胞增殖和胶原合成的影响及其机制

目的：IH764－3对H2O2刺激的大鼠肝星状细胞（HSCs)增殖及胶原合成的抑制作用以及对粘着斑激酶（FAK）的影响,旨在为临床防治肝纤维化提供理论依据。方法：以不同剂量IH764－3干预H2O2刺激的HSCs,通过^3H-胸腺嘧啶（^3H-TdR)、^3H－脯氨酸（^3H-pro)掺入法测定HSCs增殖及胶原合成能力,应用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）方法检测FAK mRNA。结果：不同剂量IH764－3（10μg/ml,20μg/ml,30μg/ml,40μg/ml）作用于HSCs 48h及30μg/ml IH764－3作用于HSCs不同时间（12h,24h,48h),与单纯H2O2组相比,HSCs增殖明显被抑制（P＜0．05）;胶原合成能力降低（P＜0．05）;同时FAK mRNA表达下降。结论：丹参单体IH764－3能够抑制H2O2刺激的HSCs增殖及胶原合成,下调FAK是IH764－3抑制HSCs增殖及胶原合成的分子机制之一。     

FRNK质粒转染抑制肝星状细胞增殖机制研究

目的：探讨黏着斑激酶相关非激酶（FRNK）质粒瞬时转染肝星状细胞（HSC）,对纤维连接蛋白（FN）刺激的HSC增殖的影响及其机制。方法：应用体外细胞培养技术,脂质体介导法进行FRNK质粒转染;Westernblot技术检测FRNK、黏着斑激酶（FAK）、p-raX（Tyr^397）蛋白的表达情况,鉴定转染效果;改良MTF法测定HSC增殖;流式细胞术（FCM）检测细胞周期时相。结果：FRNK质粒转染HSC48h时,FRNK蛋白表达最强（P〈0．01）;FAK蛋白转染前后无明显差异（P〉0．01）;FRNK质粒组p-FAK（Tyr^397）蛋白含量（0．40±0．14）较空质粒组（1．89±0．25）显著下降（P〈0．01）;FRNK在HSC大量表达后,于转染12h、24h、48h的HSC增殖抑制率分别为20．07％、26．16％和29．77％（P〈0．01）,呈时间依赖性关系;FRNK质粒组G0／G1期细胞数（71．4±2．81）较空质粒组（48．9±1．66）明显增加（P〈0．01）。结论：脂质体介导下FRNK质粒转染,可使外源性FRNK在HSC内大量表达,抑制FAK磷酸化,阻滞HSC周期时相于G0／G1期,抑制HSC增殖。     

栀子苷通过TGF-β1/Smad信号通路抑制肝纤维化和肝星状细胞活化

本研究旨在观察栀子苷对肝纤维化和肝星状细胞活化的影响,并探讨其可能机制。人肝星状细胞LX-2用5 ng/mL转化生长因子-β1 (transforming growth factor-β1, TGF-β1)处理,并用不同浓度(0, 1, 2.5, 5, 10, 20, 40, 60, 80, 100μmol/L)的栀子苷联合培养,MTT法进行细胞活力测定,LX-2分别经5 ng/mL TGF-β1、TGF-β1+栀子苷(20μmol/L)处理后,用qPCR和Western blot分别检测I型胶原蛋白(collagen I)、纤连蛋白(fibronectin)、α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)、p-Smad2和p-Smad3基因和蛋白的表达。BALB/c小鼠用CCl₄ (25%, 1 mL/kg)诱导肝纤维化,设立对照组、CCl₄组和CCl₄+栀子苷组(40 mg/kg),4周后检测肝功能及血清肝纤维化指标,用HE和Masson染色进行组织学观察,免疫组织化学分析组织α-SMA...     

柴胡解毒汤对人肝星状细胞LX-2增殖及凋亡的影响

目的:观察柴胡解毒汤含药血清对人肝星状细胞LX-2增殖、凋亡情况的影响,探究其抗肝纤维化作用的可能机制。方法:将Wistar大鼠分为实验组与对照组,分别以柴胡解毒汤、生理盐水灌胃5天后取血制备大鼠含药血清与正常血清。同时复苏人肝星状细胞LX-2后进行细胞培养和细胞传代。当肝星状细胞数量达到预定值时,将肝星状细胞分为对照组和药物组。观察LX-2细胞在与含药血清孵育24 h、36 h、48 h、72 h后,用CCK-8比色法测定细胞的增殖抑制率。用流式细胞术(Annexin V-FITC,PI染色法)检测细胞凋亡的概况。结果:柴胡解毒汤含药血清在给药24 h后可抑制LX-2细胞的增殖,36 h、48 h、72 h的增殖抑制率分别为0.37%、0.46%、0.44%,并可诱导LX-2细胞发生凋亡,48 h、72 h凋亡概率分别为(9.80±0.95)%、(36.40±5.09)%,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:柴胡解毒汤具有抑制LX-2细胞增殖、诱导LX-2细胞发生凋亡的能力,这可能是柴胡解毒汤抗纤维化作用的机制之一。     

酶谱法测定肝星状细胞合成的基质金属蛋白酶活性

目的：建立检测肝星状细胞（HSC）合成的基质金属蛋白酶（MMPs）活性的方法。方法：用含SDS－明胶的聚丙烯酰胺凝胶电泳为基础的酶谱法,检测体外培养的HSC所合成的MMPs活性。结果：酶谱法能灵敏地检测到HSC细胞内和分泌到培养基中的MMP－2和MMP－9,培养基中MMP－2活性高子MMP－9,并观察到药物作用以后酶活性的改变。结论：酶谱法是研究HSC调节肝纤维化过程中细胞外基质（ECM）代谢的有效手段。     

力学因素对肝星状细胞转移分化的影响

肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)存在于小叶内组织间隙(Disse间隙)内,肝纤维化过程中,肝星状细胞转移分化为纤维化的、具有增殖能力及收缩性的肌成纤维细胞(myofibro-blasts,MFB)。力学微环境的改变在肝星状细胞转移分化中有着非常重要的作用,其中基底的力学性质特别是基底硬度及力学加载对其的影响是研究的热点。该文就HSCs的转移分化、基质硬度和力学加载对其影响、可能的力学影响机制进行全面的综述。     

阿达木单抗注射液联合白芍总苷治疗甲氨蝶呤不耐受型类风湿关节炎的临床疗效

目的:探讨阿达木单抗注射液联合白芍总苷治疗甲氨蝶呤不耐受风湿关节炎患者的临床疗效。方法:收集我院治疗的86例甲氨蝶呤不耐受的类风湿关节炎患者,随机分为实验组和对照组,每组43例。对照组患者给予阿达木单抗注射液治疗,实验组患者在对照组基础上给予白芍总苷胶囊治疗。观察并比较两组患者的晨僵时间、血沉(ESR)、类风湿因子(FR)以及临床疗效进行检测并比较。结果:与治疗前相比,治疗后两组患者的晨僵时间、血沉(ESR)、类风湿因子(FR)水平均下降(P0.05);与对照组相比,实验组患者的晨僵时间、血沉(ESR)、类风湿因子(FR)水平较低(P0.05),临床治疗有效率较高(P0.05)。结论:阿达木单抗注射液联合白芍总苷能够降低甲氨蝶呤不耐受的类风湿关节炎患者的ESR、FR水平,改善患者的临床症状,临床疗效较好。     

白芍总苷在正常大鼠体内的组织分布研究

探讨白芍总苷在正常大鼠体内的组织分布特点,为预测其药理作用及不良反应提供依据.正常大鼠按2.82 g/kg灌胃给予TGP药液后1、3、6h取心、肝、脾、肺、肾、胃、小肠、大肠等组织,各组织匀浆后,将匀浆液制成冻干粉,HPLC法测定冻干粉中芍药苷和芍药内酯苷浓度,计算各组织中两者浓度.结果显示1h各组织中均能测到芍药苷和芍药内酯苷,3h除胃和小肠外,其他各组织中两者浓度均达到最大值,小肠、胃、大肠及肾、脾、肝中浓度较高,6h小肠、大肠、胃中浓度较高,其他各组织中浓度较低.说明灌胃TGP后组织分布迅速且广泛,胃、小肠、大肠及肾、脾、肝是主要分布器官,容易在胃肠蓄积,其他组织中蓄积较少,为进一步研究白芍总苷的药理作用及作用机理提供了指导,同时为白芍归经理论提供了一定的现代科学依据.     

白芍总苷对心肌缺血再灌注大鼠内质网应激因子CHOP、GRP78、GRP94的表达及凋亡的影响

目的:研究白芍总苷(TGP)对心肌缺血再灌注(I/R)大鼠内质网应激因子CCAAT/增强子结合蛋白的同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、葡萄糖调节蛋白94(GRP94)表达及凋亡的影响。方法:选择健康清洁级SD大鼠75只,根据随机数字表法分成5组,每组15只,分别记为假手术组、I/R组、50 mg/kg TGP组、100 mg/kg TGP组以及200 mg/kg TGP组。检测并对比各组大鼠CHOP、GRP78、GRP94水平,对比分析各组大鼠心肌I/R指标、梗死面积率以及心肌细胞的凋亡率。结果:I/R组和TGP各组的CHOP、GRP78及GRP94水平均明显高于假手术组,且TGP各组较I/R组明显更低(均P0.05)。100 mg/kg和200 mg/kg TGP组的CHOP、GRP78及GRP94水平均明显低于50 mg/kg TGP组,且200 mg/kg TGP组较100 mg/kg TGP组明显更低(均P0.05)。I/R组和TGP各组缺血30 min的T波改变、再灌注120 min的T波改变及LVEDP水平均明显高于假手术组,LVSP、+dp/dtmax及-dp/dtmax水平均明显低于假手术组(均P0.05)。与I/R组相比,TGP组缺血30 min的T波改变、再灌注120 min的T波改变及LVEDP水平呈剂量依赖型下降,而LVSP、+dp/dtmax及-dp/dtmax水平呈剂量依赖型上升(均P0.05)。I/R组和TGP各组的梗死面积率和心肌细胞的凋亡率均明显高于假手术组(均P0.05)。与I/R组相比,TGP组的梗死面积率和心肌细胞的凋亡率水平呈剂量依赖型下降(均P0.05)。结论:应用TGP能够明显降低MIRI大鼠内质网应激因子CHOP、GRP78、GRP94的表达,调节心肌缺血和再灌注相关标志物或临床参数的水平,显著减少心肌缺血和再灌注所致的心肌梗死面积率及细胞凋亡率。     

红景天苷对LPS诱导的HSC-T6细胞增殖作用及机制研究

目的：观察红景天苷（Salidroside,Sal）对大鼠肝星状细胞（hepaticstellatecell,HSC）一T6增殖的影响,并探讨一氧化氮（NO）在此过程中的作用。方法：选择脂多糖（LPS）活化HSC—T6,采用不同浓度的Sal,作用于经LPS活化的大鼠HSC-T6,24小时后进行如下实验：噻唑兰（MTT）比色法检测HSC—T6增殖;NO荧光探针（DAF-FMDA）检测细胞内NO浓度;Westem-blot检测INOS蛋白水平。结果：在LPS作用于HSC．T6细胞24小时后,与对照组相比,细胞增殖增加（P〈0．01）,在Sal作用下,HSC-T6细胞增殖与LPS组相比受到抑制（P〈0．01）,并呈浓度依赖性;在Sal处理HSC．T6细胞24小时后,细胞内NO水平有所上升,并呈浓度依赖性增加（P〈O．01）;Sal预处理后的HSC—T6细胞,iNOS蛋白表达有所升高（P〈0．01）。结论：Sal对HSC—T6细胞的增殖具有浓度依赖性的抑制作用,NO可能是抑制增殖的因素之一。     

Effects of total glucosides of paeony on immune regulatory toll-like receptors TLR2 and 4 in the kidney from diabetic rats

TLRs are a family of receptors that play a critical role in the pathogenesis of diabetic nephropathy. TGP have been shown to have anti-inflammatory and immuno-regulatory activities. However, the relation between TGP and TLRs on diabetic nephropathy remains unknown. In this study, we examined effects of TGP on immune regulatory TLR2 and 4 in the kidney from streptozotocin-induced diabetic rats. TGP decreased the levels of 24 h urinary albumin excretion rate significantly in diabetic rats. Western blot analysis showed that TGP significantly inhibited the expression of TLR2 and 4, MyD88, p-IRAK1, NF-κB p65, p-IRF3, TNF-α and IL-1β. Quantitative real-time PCR analysis showed that the significantly increased levels of TLR2 and 4, and MyD88mRNA in the kidneys of diabetic rats were significantly suppressed by TGP treatment. Macrophages infiltration were also markedly increased in the kidneys of the diabetic rats, but were significantly inhibited by TGP in a dose-dependent manner. These results suggest that TGP has protective effects on several pharmacological targets in the progress of diabetic nephropathy by selectively blocking TLRs activation in vivo.     

菹草提取物总黄酮、总酚酸和抗氧化活性含量研究

研究菹草提取物的有效成分,测定其总黄酮含量及总酚酸含量,并确定它的乙酸乙酯和石油醚部位的抗氧化活性成分。采用紫外可见分光光度法,以芦丁和没食子酸作为控制材料,测定菹草的石油醚部位及乙酸乙酯部位中总黄酮和总酚酸含量;采用清除DPPH自由基能力测定法、测定总还原能力铁氰化钾法和水杨酸捕捉羟基自由基法来对菹草各组分提取物的抗氧化能力进行研究。菹草中有一定量的黄酮类化合物和酚酸类化合物存在,不同溶剂提取的部位所含有的总黄酮和总酚酸含量是有差异的,石油醚部位的总黄酮含量要高于乙酸乙酯部位的总黄酮含量,并且总酚酸的含量亦是如此;石油醚部位和乙酸乙酯部位的提取物具有清除DPPH、羟基自由基和还原Fe^3+的能力,各部位清除DPPH、羟基自由基的能力和还原Fe^3+的能力随着样品浓度的增大而增大,且乙酸乙酯部位的测定结果均低于石油醚部位。     

磷离子对BM-hMSCs增殖及成骨分化的影响

目的:探讨磷离子对人骨髓来源的间充质干细胞(Human bone marrow mesenchymal stem cells,BM-h MSCs)增殖及成骨分化的影响。方法:从Scien Cell实验室购买的BM-hMSCs分别在无血清生长培养基(对照组)和添加4mmol(4P组)、8mmol(8P组)磷离子的无血清生长培养基中培养21天,通过CCK8比色法评估细胞的增殖情况;RT-PCR检测成骨分化标记性基因胶原蛋白Ⅰ、骨钙素、碱性磷酸酶的表达水平;茜素红染色检测BM-hMSCs成骨分化产生的矿化结节。结果:在培养4、7、14天时,4P和8P组中BM-hMSCs的增殖都明显高于对照组,且8P组中BM-h MSCs的增殖高于4P组;培养21天时,4P和8P组中BM-hMSCs的增殖明显低于对照组。与对照组相比,在培养7天时,4P和8P组OC的表达下调,而14、21天时,OC的表达上调。4P和8P组中ALP的表达水平与对照组无明显差异。7天时,4P、8P组ColⅠ的表达水平均明显高与对照组;14天时,8P组ColⅠ的表达水平与对照组表达无明显差异;21天时,4P、8P组中ColⅠ的表达水平都均与对照组表达无明显差异。培养21天时,4P、8P组矿化结节的形成明显增加。结论:磷离子在早期可以促进BM-hMSCs的增殖,晚期诱导其成骨分化。     

碱性成纤维细胞生长因子对生长板软骨细胞增殖与分化的影响

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对生长板软骨细胞增殖和分化的作用。方法:分离并在低血清条件下培养兔生长板软骨细胞。采用改良MTT法检测细胞增殖倍数;羟脯氨酸法测定软骨细胞胶原产量;酶动力学方法测定碱性磷酸酶(ALP)活性。结果:bFGF浓度在5-100ng／ml范围内可以促进软骨细胞增殖,并以25ng／ml刺激时效果最为显著。当bFGF浓度高于25ng／ml时,抑制软骨细胞的胶原合成;当高于1ng／ml时,抑制碱性磷酸酶活性。结论:bFGF刺激生长板软骨细胞增殖,并在较高浓度时抑制生长板软骨细胞的分化。     

Glucosidase Activity in Acanthamoeba (Mayorella) palestinensis. The Effect of Glucose and Natural Glucosides on α- and β-Glucosidases

SYNOPSIS. Acanthamoeba ( Mayorella ) palestinensis produces high basal levels of α- and β -glucosidases, the latter being much more active than the former. Glucose, an essential growth substance, has a dual effect on the glucosidase activity. Growth concentrations (1%) of glucose inhibit, while low levels elevate the activity of both enzymes. Natural α-glucosides support growth in the same manner as glucose and raise the activity of both enzymes to the same extent. β -glucosides, on the other hand, are weak growth substrates, but stronger inducers, especially for β -glucosidase activity. The role of the glucosidases in the over-all metabolism of the ameba is discussed.