机械刺激对匍匐茎型植物蛇莓(Duchesnea indica)克隆可塑性的影响（英文）

机械刺激(mechanical stimuli, MS)在自然界的分布较为普遍,然而关于机械刺激对匍匐茎型克隆植物影响的研究相对较少。为此,实验对匍匐茎型克隆植物蛇莓(Duchesneaindica)进行了对照(无机械刺激)、克隆片段顶部刺激、半克隆片段刺激和整克隆片段刺激共四个水平的机械刺激处理,通过研究蛇莓克隆生长的响应,探讨机械刺激对其作用机理。结果表明:与对照相比,机械刺激导致蛇莓产生较多的分株、较多的匍匐茎、短而细的叶柄及较多的根生物量分配。同时,不同作用位点的机械刺激对各生理生长指标的效应差异并不显著。另外,通过对各生长指标表型可塑性指数的分析发现,分株数具有较高的可塑性指数。上述实验结果表明,蛇莓可以较好地适应机械刺激干扰的生境,其分株数可以作为其响应程度的较好的指示指标。     

位点特异整合微环DNA的体内制备

目的:应用诱导表达的LR克隆酶系统,建立一种在细菌体内获得基于链霉菌噬菌体ФC31整合酶系统的位点特异整合型微环DNA的方法,为实现无细菌骨架等冗余序列的转基因奠定基础。方法:构建包含阿拉伯糖启动子的LR克隆酶系统和ФC31整合酶系统的亲本质粒,在L-阿拉伯糖的诱导下重组产生表达ФC31整合酶的微质粒和包含有目的基因和attB位点等元件的微环DNA。以限制性内切核酸酶酶切电泳定性其重组效率,qPCR定量分析微环、微质粒及亲本质粒的比例,定量计算重组效率。观察随着诱导时间的推进微环/微质粒值的变化。结果:细菌体内LR克隆酶系统可有效催化亲本质粒的重组,重组率达85%以上。相比商品化LR克隆酶体外反应具有更高的稳定性而且更经济。结论:获得了一种高效、稳定的细菌体内产生位点特异性整合型微环DNA的亲本质粒。     

人前列腺环素受体的克隆

京都大学药学部教授市川厚等、医学部教授成宫周等小组克隆了人前列腺环素(PGI2)受体的cDNA。PGI2具有血小板凝集抑制作用和血管平滑肌扩张等作用,可有效她预防和治疗脑血栓和心肌梗塞。但是,因其在血液中的半衰期短,分解快,所以要开发其衍生物。虽然合成了很多衍生物,但是,因其多数也与其它受体结合,副作用大,因此能产品化的衍生物有限。期望利用这次克隆的人PGI2受体开发出能很强地特异性作用于人PGI2受体的医药品。于9月7～10自在大阪召开的日本生化     

未经刺激的静止CD4+T细胞与克隆CD4+T细胞在抗原特异的及主要组织相容性抗原限制的无能诱导中的差异及其意义

在体外克隆T细胞中,T细胞无能可在多种条件下诱导产生,但T细胞在体内条件下的无能诱导仍有很多疑问和争议。由于正常动物体内对单一抗原特异应答的T细胞频率太低,从体内新提取未经刺激的T细胞进行无能诱导研究一直存在技术上的困难。本文利用HNT—TCR转基因小鼠高度单一的针对HA多肽抗原的CD4^ T细胞群体,以T细胞增殖反应作为检测方法,比较研究了克隆CD4^ T细胞和新提取未经刺激的CD4^ T细胞对无能诱导的反应。结果表明,经化学交联剂l—ethyl-3-3(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide(ECDI)处理的抗原提呈细胞(APC)与流感病毒血细胞凝集素(HA)多肽诱导在克隆CD4^ T细胞中产生了无能,这种无能是依赖于特异抗原和主要组织相容性抗原(MHC)的;而在同样条件下,新提取未经刺激的CD4^ T细胞则不能被诱导产生无能。结果提示,体内T细胞与克隆T细胞存在功能上的不同,体内T细胞的无能诱导可能需要不同的条件。这对体内T细胞免疫耐受产生的机制研究和临床应用都有重要意义。     

雄激素与大鼠前列腺细胞基因的表达

本文讨论了雄激素与大鼠前列腺细胞基因表达的关系。利用cDNA克隆和杂交等技术,已发现前列腺中有近十种依赖雄激素的蛋白质,本文较详细讨论了雄激素时甾体激素结合蛋白(PBP)及20K蛋白质基因表达的影响。激素受体复合物在核内主要结合在染色质上,这种结合导致染色质结构活化和专一性的基因表达。雄激素还可通过引起Poly(A)聚合酶活性增加等变化影响转录后加工。最后讨论了靶组织染色质结构特点及染色质上受体复合物结合位点的分布。     

EPA有降低RLP的作用

东京慈惠会医科大学青户医院内科助教授多田纪夫等确认廿碳五烯酸(EPA)具有降低RLP的作用。在6月9～10日召开的第26届日本动脉硬化学会总会上发表了研究结果。 RLP是一种在乳糜微粒代谢过程中产生的脂蛋白。它导致易患冠状动脉的糜状动脉硬化和Ⅲ型高血脂症,动脉硬化性疾患的糖尿病和肾疾患等的危险因子。是其经过分析后提出的新观点。日本抗体研究所从     

重组M-CSF能预防动脉硬化

东京大学第三内科讲师山田信博等在给模型动物投用M-CST的历时三个月实验中证明重组巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)能防止动脉硬化.已知M-CSF能降低血中胆固醇.原来担心在动脉硬化处会蓄积活化巨噬细胞吞食的胆固醇,使病情恶化.但这次实验否定了上述情况,因此有可能作为动脉硬化的治疗药开发M-CSF.在东大第三内科前教授高久史麿的讲义中编写了详细内容. M-CSF刺激巨噬细胞,吞食血中胆固醇,同时作为HDL(高比重脂蛋白)也排出胆固     

叶黄素循环酶

依赖叶黄素循环的热耗散是一种主要防御光破坏的机制。参与叶黄素循环的酶是紫黄质脱环氧化酶和玉米黄质环氧化酶 ,紫黄质脱环氧化酶已分离纯化 ,其 c DNA已被克隆 ,其活性主要受跨类囊体膜的 p H梯度和抗坏血酸浓度的调节 ;玉米黄质环氧化酶还没有被分离出来 ,但其 c DNA也已被克隆 ;其活性主要与NADPH的浓度、O2 及光等有关。     

PSF不同功能片段融合蛋白的构建及其在细胞内的分布

目的将人类PSF基因的不同功能片段定向连入pEGFP—C2质粒,使PSF蛋白的各功能片段与绿色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达,观察其在HeLa细胞中的表达及定位。方法以重组质粒pEGFP—C2-PSF为模板,PCR法扩增出目的基因,将扩增片段双酶切后连接到质粒pEGFP—C2上,构建重组质粒pEGFP—C2-PSF（I—V）。将构建成功的pEGFP—C2-PSF（I—V）质粒脂质体法转染HeLa细胞,Western印迹检测融合蛋白的表达,并在荧光显微镜下观察融合蛋白的定位与分布。结果成功构建质粒pEGFP—C2-PSF（I～V）,并在HeLa细胞中实现表达;Western印迹检测到融合蛋白GFP—PSF（I～V）;在激光共聚焦显微镜下观察到绿色的融合蛋白表达和定位。结论人类PSF基因的不同功能片段的重组质粒pEG—FP—C2-PSF（I～V）构建成功,可用于标记PSF蛋白的不同功能片段,为进一步研究PSF在信号转导中的作用机制以及其生物学功能奠定基础。     

辣椒素及其受体

可以感受痛觉刺激的初级感觉神经元的周围末梢被称为伤害性感受器。这些小直径神经元的末梢可将化学、机械和热刺激信号转化为动作电位,并将这些信息上传到中枢,最后使机体产生痛觉或不舒服的感受。但到目前为止,人们对这些可探测到伤害性刺激的分子所知甚少。1997年成功克隆的辣椒素受体亚型1（vanilloid receptor subtype1,VR1)是近年来科学家们研究的“热点分子”,它是表达于伤害性感受器上的非选择性阳离子通道,已有诸多证据表明其可探测和整合诱发痛觉的化学和热刺激信号,基因敲除小鼠的研究分析也有力证明了该离子通道参与了疼痛及组织损伤后痛觉过敏的产生,而且是热诱发疼痛发生过程的关键分子。     

抗前列腺特异抗原的单链抗体的克隆和表达

本文克隆了抗前列腺特异抗原(PSA)单抗526的轻、重链可变区基因,构建了在大肠杆菌中表达单链抗体的具有强启动子PR和PL的温度诱导型表达载体,表达了抗前列腺特异抗原的单链抗体。表达产物经ELISA测定证明具有特异结合PSA的能力。     

水飞蓟宾抑制肝癌细胞HepG2增殖和迁移能力

目的探讨水飞蓟宾对肝癌细胞生长、增殖和迁移能力的影响。方法用含不同浓度水飞蓟宾的培养基孵育HepG2细胞后,采用倒置显微镜观察细胞形态,应用MTT法、Ed U掺入实验和细胞克隆形成实验法检测细胞增殖能力,应用细胞划痕试验分析水飞蓟宾对HepG2迁移能力的影响。结果用不同浓度水飞蓟宾刺激HepG2细胞后,倒置显微镜镜检显示:水飞蓟宾刺激使细胞数目减少,胞体皱缩变小,高浓度刺激时出现较多的死亡细胞。MTT分析、Ed U增殖实验和克隆形成实验显示:水飞蓟宾刺激使细胞增殖能力显著降低,细胞的克隆形成数显著减少。细胞划痕试验结果显示:水飞蓟宾对HepG2细胞的迁移爬行能力也产生明显抑制作用。结论水飞蓟宾能抑制HepG2细胞的增殖和迁移能力,这可能是其发挥抗肿瘤作用的机制之一。     

具有GCSF活性的噬菌体展示肽

从NFS 6 0细胞中克隆了小鼠粒细胞集落刺激因子 (granulocytecolony stimulatingfactor,G CSF)受体的细胞因子受体同源区 (cytokinereceptorhomologous ,CRH)结构域 ,采用GST融合表达策略 ,实现了CRH结构域的表达 .以纯化的GST CRH融合蛋白为靶 ,从噬菌体随机环七肽库中筛选CRH结构域的结合肽 ,找到两组具有核心序列的噬菌体展示肽 .其中C2和C13噬菌体展示肽能刺激NFS 6 0细胞增殖 ,说明C2和C13噬菌体展示肽具有G CSF活性     

植物ABA-H2O2介导的气孔关闭

本文综述了脱落酸作为根源信号物质经由木质部被传递到叶片,经重新分配再与脱落酸受体结合,然后刺激气孔开放因子,调节烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶等关键酶活性产生过氧化氢,过氧化氢可使胞质碱化并刺激钙离子通道使钙离子内流,活化阴离子通道使阴离子外流,最终导致气孔关闭的一系列过程。该过程涉及到的因子包括：脱落酸受体、气孔开放因子、磷脂酰环己六醇、分裂原激活蛋白激酶、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶、Ca^（2＋）、pH、一氧化氮等。     

血管紧张素Ⅱ诱导心肌成纤维细胞表达上调基因的分离和鉴定

为了对成年大鼠心肌成纤维细胞（cardiac fibroblasts,CF）受血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ,AngⅡ）刺激后上调基因表达谱进行筛选及分析,以受AngⅡ刺激CF为实验方,未刺激CF为驱动方,进行抑制消减杂交（suppression subtractive hybridization,SSH）,建立消减cDNA文库。经斑点杂交筛选文库后将表达变化显著的部分阳性克隆测序及同源性分析,共获得19个上调表达的基因,分别与细胞外基质、细胞周期、胞内信号转导、细胞骨架及细胞代谢等功能相关,并克隆到7个新的基因表达序列标签（expressed sequence tags,EST）。我们的数据证实了SSH可以有效地克隆成年大鼠CF受AngⅡ刺激后上调表达基因,对这些基因的研究将有助于阐明心肌重塑的分子机制。     

G-CSF启动子结合蛋白的克隆

大阪生命科学研究所第一研究部部长长田重一等克隆结合于粒细胞集落刺激因子(G-CSF)的启动子区段上的转录调节因子获得成功.在1990年11月在京都召开的日本分子生物学会上发表这一结果. 长田等克隆的蛋白是结合到G-CSF3个启动子GPE 1、GPE2、GPE3中,并通过内毒素(LPS)直接参与对G-CSF的诱导.它是作G-CSF的阻遏物起作用的. 长田等以GPE 1区段作为探针,用DNA及蛋白印迹法筛选小鼠巨噬细胞株的cDNA表     

问题解答

问题解答间：什么叫克隆？答：克隆（ｃｌｏｎｅ）是指通过无性生殖而产生的遗传上均一的生物群,即具有完全相同的遗传组成的一群细胞或者生物的个体。克隆在希腊语中是＂小树枝叶＂的意思,用以指无性增殖物。现在则指个体、细胞、基因等不同水平上的无性增殖物。（１）...     

人前列腺生长因子的分离纯化及生物活性鉴定

从人良性增生前列腺组织中经硫酸铵沉淀和肝素－琼脂糖凝胶层析纯化出人前列腺生长因子（ｈＰＧＦ）,纯化倍数约１０００倍,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和等电聚焦电泳示分子量约为１７ｋＤ、等电点同标准ｈＦＧＦ。利用分离培养的人前列腺间质或纤维细胞进行活性鉴定,发现以１．３￣１．７ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ洗脱部分为ｈＰＧＦ,活性最高,对间质成纤维细胞有显著刺激增殖作用。     

克隆动物研究进展

本文介绍了上世界上中国条用细胞核移植技术克隆动物的研究历史。综述了细胞核移植的程序、方法和影响因素,包括受体卵母细胞的去核、供体细胞核的制备、核移植、激活、受体细胞与供体细胞的融合、重组胚的体内和体外培养以及胚胎移植产生克隆动物。对克隆动物研究和应用前景进行了讨论。近期的研究结果表明,多代克隆可产生在量遗传性相同的动物,不久的将来克隆技术在商业上的应用将成为现实。     

人前列腺生长因子的分离纯化及生物活性鉴定

从人良性增生前列腺组织中经硫酸铵沉淀和肝素－琼脂糖凝胶层析纯化出人前列腺生长因子（ｈＰＧＦ）,纯化倍数约１０００倍,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和等电聚焦电泳示分子量约为１７ｋＤ、等电点同标准ｂＦＧＦ,利用分离培养的人前列腺间质成纤维细胞进行活性鉴定,发现以１．３～１．７ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ洗脱部分为ｈＰＧＦ,活性最高,对间质成纤维细胞有显著刺激增殖作用。