红花单细胞克隆的建立

KT,2,4-D 及 NAA 能提高红花(Cathamus tinctorius)细胞克隆平板培养的植板率。这三种激素对细胞生长的最佳搭配是2,4-D2.0mg/l,KT0.3mg/l,NAA 0.5mg/1。红花细胞悬浮继代培养代数不同,其植板率相差甚远,用悬浮培养第三代的细胞做材料最好,其植板率是第一代悬浮培养细胞做材料的8.5倍。红花细胞克隆的条件培养的植板率是普通平板培养的3.6倍。固-液双层培养的植板率是普通平板培养的4.7倍。对已建立的红花细胞克隆进行生长速率的比较表明,生长最漫的克隆的生长速率为3.08g/g/35天,生长最决的克隆的生长速率高达23.33g/g/35天。     

红豆杉单细胞克隆的建立

本文报道了红豆杉单细胞克隆的建立过程,在红豆极细胞克隆中使用悬浮培养１０－１５天的细胞培养物分离单细胞进行看护培养的效果最好。     

人参培养细胞的单细胞克隆

培养基组成成分能影响人参培养细胞单细胞克隆的植板率。Ms培养基中2,4－D和KT需要一个适合的浓度比才能有效地促进细胞克隆的形成,其最佳浓度组合是2,4－D1．5mg／L和KT O．5mg／L。适合人参细胞克隆形成的NH₄N0₃浓度是400mg／L,CaCl₂.2H₂O浓度是750mg／L。向培养基中补加适量的琥珀酸、精氨酸和维生素等都能明显提高植板率。通过优化培养基的组成成分,细胞克隆的植板率可增加到2.34倍。悬浮培养两周左右的细胞平板培养最有利克隆形成,当细胞植板密度低于4×10³个细胞／ml时,几乎没有克隆形成。     

红花细胞克隆的平板培养

在红花(Cathamus unctorrus)细胞克隆的平板培养中很多因素都能影响其植板率,如培养基的 pH 值,无机盐中的 NH_4NO_3、ZnSO_4、MnSO_4;有机酸中的柠檬酸、琥珀酸、苹果酸及延胡索酸,谷氨酰胺和精氨酸,葡萄糖,椰乳和水解乳蛋白等。向培养基中加入10mg/l 柠檬酸或3mg/l 琥珀酸能显著提高植板率。适量的人参寡糖及黑节草寡糖应用对促进红花细胞克隆生长取得很好效果。常规的高压灭菌最不利于细胞生长,在15磅/cm~2灭菌5分钟效果较好,过滤灭菌效果最好。     

粉叶小檗愈伤组织单细胞克隆

以粉叶小檗愈伤组织为材荆,用B5液体培养基进行悬浮培养建立悬浮细胞糸。经3～4次继代培养即可得到悬浮的单细胞。悬浮细胞通过细胞平板克隆(一般B5培养基平板克隆、优化培养基平板克隆和条件培养基平板克隆),经5代连续继代培养观察和薄板层析-分光光度法分析,发现用优化培养基进行平板克隆植板率最高,且克隆最易成功,并且还筛选到一株小檗碱产率高且稳定的克隆CV-57,其平均生手速率为每天14．412mg／L,为原始株系的1．91倍,平均小檗碱含量为干重的2．17％,是原始株系的2．26倍。     

建立鸡EPGCs单细胞克隆株初探

目的探索鸡EPGCs单细胞克隆建立细胞系的可能性,并对其生物学特性进行鉴定。方法采取19期和28期的鸡EPGCs,体外培养传至第4代的细胞聚合体,用胰酶消化将细胞分散成单细胞悬液,将单个细胞接种至96孔板,每个孔内接种1个细胞,生长出的细胞集落用胶原酶消化传代,细胞化学法和免疫荧光法检测多向分化细胞的表面标志物;常规染色体核型检查。结果接种的288个单细胞中有9个扩增,其中7个传至第2代,2个传至第4代,克隆形成率为3.1%。扩增出的2~4代单细胞克隆能稳定增殖不分化,具有正常二倍性染色体核型、碱性磷酸酶阳性、阶段特异性胚胎抗原(SSEA)-1等特征性细胞表面标志物呈阳性;离体情况下具有形成类胚体和类上皮样细胞的能力。结论建立鸡EPGCs单细胞克隆细胞系是可行的,其生物学特性稳定。     

人参培养细胞单细胞克隆的条件培养

来自细胞悬浮培养物的条件培养基能显著地促进人参培养细胞的单细胞在较低细胞植板密度培养时的克隆形成。每毫升含3×10³个细胞时,条件培养的植板率是普通平板培养的4倍。细胞悬浮培养12－16天时所制备的条件培养基活性最大,在一定浓度范围内随条件培养基浓度增加。细胞克隆植板率随之增加。条件培养基具有一定的生理作用专一性。看护培养和条件培养的比较,表明前者在细胞密度较低时能更有效地促进细胞克隆的形成和生长。条件培养基在4℃条件下贮存两周仍保持活性稳定,并且能耐受高温处理。当受到强酸或强碱处理其活性失去．但在弱酸或弱碱条件下稳定。     

粉叶小檗愈伤组织单细胞克隆

以粉叶小檗愈伤组织为材料 ,用B5液体培养基进行悬浮培养建立悬浮细胞系。经 3～ 4次继代培养即可得到悬浮的单细胞。悬浮细胞通过细胞平板克隆 (一般B5培养基平板克隆 ,优化培养基平板克隆和条件培养基平板克隆 ) ,经 5代连续继代培养观察和薄板层析 -分光光度法分析 ,发现用优化培养基进行平板克隆植板率最高 ,且克隆最易成功 ,并且还筛选到一株小檗碱产率高且稳定的克隆CV 5 7,其平均生长速率为 14 .4 12mg .Fw/L .d ,为原始株系的 1.91倍 ,平均小檗碱含量为 2 .17%干重 ,是原始株系的 2 .2 6倍。     

白桦单细胞培养体系的建立

以白桦花药（单核靠边期）、种子（萌发）及再生苗的茎段诱导愈伤组织,在NT1、NT2和B5三种不同的培养基中进行悬浮培养,筛选出优良的白桦悬浮体系,而后进行单细胞分离的结果表明,白桦花药愈伤组织在B5培养基上生长迅速,分散性好,适合于细胞分离。分离得到的单细胞用不同方式培养,建立了白桦单细胞两步培养法。     

兔转基因单细胞克隆株的分离培养及其染色体倍性分析

为检测原代二倍体细胞转基因后单细胞克隆的增殖能力及其染色体倍性稳定性,用脂质体介导的转染方法将质粒DNA pEGFP-C1（带有报告基因GFP和Neo^r）导入体外培养的兔胎儿成纤维细胞中,经G418药物筛选后,分离出73个GFP阳性细胞克隆,最后存活13个（18％）,对其中9个克隆的染色体倍性进行分析,结果只有2个（22％）克隆的染色体倍性正常率在75％以上,分别为80％和75％,其余7个克隆的染色体倍性正常率均在70％以上。这表明,当使用转基因单细胞克隆株作为供核细胞产生克隆动物时,单细胞克隆的增殖代数和染色体倍性的稳定性需要进一步研究提高。     

单细胞绿藻的大量培养试验

在近廿年来,单细胞绿藻的培养和利用,曾引起广泛的兴趣,主要的是由于单细胞绿藻具有下列几个重要的特性：(1)能够充分利用太阳的光能,通过光合作用,制造大量的有机物质,作为动物的直接或间接的食料;(2)生长繁殖迅速,对自然环境的适应性很强,易于培养;(3)蛋白质的含量很高,     

利用单细胞RT-PCR体外克隆个体化乙型肝炎表面抗体重链

目的建立一种利用单细胞RT-PCR技术克隆乙型肝炎表面抗体重链的方法,为人源化、个体化的乙肝治疗性抗体研制奠定基础。方法利用单细胞分选技术从乙肝疫苗接种志愿者外周血中分选得到单个抗体分泌细胞（antibody-secreting cells,ASC）,用单细胞RT-PCR克隆其IgG重链全长到pEGFP-N1载体,转染COS-7细胞,上清液用乙肝表面抗原（hepatitis B surface antigen,HBsAg）通过Western blot进行结合力验证。结果克隆得到1 500 bp左右的重链全长,重链表达产物经验证能与乙肝表面抗原特异结合。结论克隆得到表达产物能与HBsAg特异结合的重链基因,为我们后期制备抗体轻链、连接轻重链和抗体亲和力鉴定奠定基础。     

用甘蔗渣生产单细胞蛋白的初步试验

本文报道利用微生物混合培养技术,以甘蔗渣为唯一碳源、生产单细胞蛋白的初步研究。将２株纤维单胞菌、３株霉菌、１株酵母进行分别培养和不同组合的培养,结果发现,混合培养较单株培养好。培养基在未经灭菌的情况下,以（ＮＨ４）２ＳＯ４为氮源,ｐＨ６．０,于３２℃振荡培养１０８ｈ,发酵产物的粗蛋白含量是甘蔗渣原材料的１２倍以上。     

单细胞尺度下的微生物学研究:意义与方法

最近研究表明,即便是处于同一种群中的微生物细胞,在基因转录和翻译、蛋白活性、以及代谢物丰度等多个水平都可能存在显著差异,说明微生物细胞间存在着多个层次上的异质性;同时,传统微生物学研究方法需要将所研究的微生物对象在实验室实现再次培养,然后对纯培养的微生物种群进行研究,这样往往造成实验室的研究结果无法真实地反映微生物细胞在自然界中的原始状态,急需发展新的原位研究手段;此外,自然界中的微生物目前只有极少部分可以在实验室中进行培养,仍有大量微生物无法通过传统方法进行发掘和研究。单细胞尺度微生物学为解决这些微生物学研究中的重要挑战提供了一种新的策略和技术思路,有望帮助我们更为直观、深入地了解每个细胞内部的状态,以及其在自然界的生理生态功能。本文对单细胞尺度微生物学研究的意义以及当前单细胞尺度微生物学的研究方法,特别是新兴的微生物单细胞组学方法进行了介绍。     

高含量薯芋皂素植株的细胞克隆

盾叶薯芋(Dioscorea zingibernisis Wright)细胞克隆系的建立采用平板培养法。试验了18种不同的培养外界环境因素对植板率的影响:如培养基pH值,在培养基中添加谷氨酰胺、丝氨酸、柠檬酸、葡萄糖和偶合低聚糖等。其中,以添加偶合低聚糖的植板率最高。获得31个克隆细胞系。经大量培养,测定细胞生长,筛选出18个优良克隆系。以代号为Rc81的克隆系在接种量为0.7g/L(折合干重,下同),培养28d可获得15.1g/L。     

高羊茅胚性悬浮细胞系的快速建立及其单细胞培养

本研究采用高羊茅(Millennium和Hundog Ⅴ)成熟种子为材料,以MS为基本培养基,通过添加2.5 mg/L CuSO4·5H2O,或提高NH4NO3浓度至2.5 g/L等措施均能明显提高愈伤组织的质量,经过3～5个月的筛选获得疏松干燥、颗粒状、生长旺盛、适合悬浮培养的Ⅱ型胚性愈伤组织.悬浮培养初期需用MSⅠ液体培养基进行一个月的启动培养,之后转用MSⅡ继代保持,约2个月左右即建立起来自高羊茅2个品种的3个悬浮细胞系.生长特性测定结果表明,悬浮培养的初始接种量以1.0～3.0 ml/40 ml为宜,生长周期内其pH值不断波动变化,最适范围在5.0～5.7之间.5～8 d为悬浮系的对数生长期,此时细胞分裂旺盛,增殖较快,是分离单细胞的最佳时期.单细胞培养方式以悬浮培养效果最好.     

单细胞技术在干细胞研究中的应用

干细胞是具有自我更新和分化潜能的异质性细胞群体。基于细胞群体水平的干细胞研究不能满足深入认识干细胞生物学本质及实际应用的需要。近年来,单细胞相关技术不断发展和成熟,并正在干细胞基础研究及其相关领域中获得迅速应用。该文以造血干细胞为主要例举,就实验研究中常用的单细胞分离、单细胞克隆分析、单细胞移植、单细胞实时定量PCR及单细胞测序等技术原理及其应用进行综述。