鱼类染色体的白细胞-PHA活体内处理制片及其组型观察

目前,鱼类染色体标本制备的方法主要是由Yamamoto等建立的肾细胞-PHA体外短期培养法和Ojima等提出的外周血淋巴细胞离体培养法,以及活体注射PHA直接用肾组织的细胞制片等。用短期细胞培养研究鱼类染色体有较突出的优点,它能保持染色体的自然状态,染色体的形态特征较易于显示出来,中     

鱖鱼(Siniperca chuatsi)染色体组型的研究

鳜鱼又名季花鱼,具有肉嫩、味美、富含蛋白质、刺少等优点,我国人民将它列为上品,日本誉之为中华的名鲜。 在国外曾报道过(鱼旨)科鱼类和鲈形目中其他鱼类的染色体组型,而鳜鱼的染色体组型迄今未见报道。本文以淋巴细胞培养的方法,进行了鳜鱼(Siniperca chuatsi)的染色体组型的研究,现将结果报告如下。     

鱼类染色体的白细胞一PHA活体内处理制片及其组型观察

目前,鱼类染色体标本制备的方法主要是 由Yamamot。等建立的肾细胞-PHA体外短期 培养法和Ojim：等提出的外周血淋巴细胞离体 培养法［[1,7,81,以及活体注射PHA直接用肾组 织的细胞制片等L3,41。用短期细胞培养研究鱼类 染色体有较突出的优点,它能保持染色体的自 然状态,染色体的形态特征较易于显示出来,中 期分裂相多,染色体分散均匀、清晰。但细胞培 养法需要有特定的条件,在设备差或野外工作 条件下不易做到,而且程序繁琐、费时较长（一 般需要3至10夭）L1], 在应用上受到一定的限 制。直接用常规空气干燥法制片,获得的中期分 裂相少,制片效果亦不理想L41。我们参照Baker 在蛇类的工作【s1并稍加改良,采用PHA活体内 注射取外周血,不需进行细胞体外培养和无菌 操作制备鱼类染色体标本。由于使用这种方法 可避免杀死动物,因此也可以连续检查同一个 体的染色体组型。我们所获得的初步结果,为研 究某些需要保持其继续存活的对象,如稀有的 杂交后代和通过细胞工程获得的少量实验对象 的染色体提供了一个新途径。同时,直接用从 活体繁殖的细胞制片,可以排除体外培养时可 能出现的有害效应,在环境监测中可望作为一 种监测手段用于水质污染与鱼类染色体损伤相 互关系的研究。     

一种制备鱼类染色体的新方法

自1966年Ojima建立鱼类染色体空气干燥法以来,鱼类染色体研究技术有了很大进展.目前有肾细胞培养法、上皮细胞培养法和外周血培养法等。细胞培养需要在有一定条件的实验室进行(如无菌操作),因而简便快速的制备鱼类染色体方法便不断产生,有PHA+秋水仙碱注射法、秋水仙碱体外注射法和CoCl+秋水仙碱体外注射等方法.本文介绍一种适合于在野外条件下进行的小型鱼类和鱼苗染色体制片方法。     

一种改良的鱼类染色体富集制片方法

运用淋巴细胞分离液处理黄鳝肾细胞悬浮液后,成功地分离了其中红细胞和淋巴细胞,以富集的淋巴细胞进行染色体制片,可避免有核红细胞的影响,获得高分裂指数的黄鳝染色体标本,该方法简便,结果稳定,亦适用于其他鱼类,两栖类和鸟类的染色体制片。     

人微量全血培养与染色体标本制作技术研究

采用微量全血培养技术,培养人体外周血小淋巴细胞,使G0期白细胞重新进入细胞周期、增殖成功率高、技术方法完善。把体外增殖的小淋巴细胞裂解,对细胞核染色体进行染色和固定,制得人染色体标本,用于进行染色体组型分析．取得了令人满意的效果。     

人的外周血淋巴细胞培养及染色体制作技术

从肘静脉采血于含有肝素的一次性注射器中,采用RPMI1640全培养基进行体外淋巴细胞培养。通过对采血后细胞培养时间、秋水仙素浓度及加入时间、低渗时间及培养温度等条件的模索．建立了较成熟的淋巴细胞体外培养方法及染色体制作技术。     

几种动物染色体超微结构的研究

应用表面舒展技术、原位培养表面舒展技术和临界点干燥以及空气干燥等方法制备染色体标本,用FESEM和SEM观察了CHO、IB-RS-2哺乳动物细胞以及黄鳝肾细胞和鲫鱼血淋巴细胞的染色体。看到了染色体处于不同舒展状态的染色质纤维。在染色质纤维未完全展开排列紧密时,染色体臂的染色质纤维,缠绕排列有序,垂直于染色体纵轴,螺旋盘绕形成疏密程度不同的横纹。在纤维较为松散和完全松敌的状态下,可以看见直径约为300(?)的染色质纤维从有序到不完全有序到无序,弯扭、螺旋、缠绕,有些似“辐射环”状结构。在着丝点处可清楚地看到有二条纤维平行分别通连二染色单体臂,未见有染色体膜。初步比较了鱼类和哺乳类的染色质纤维,二者基本一致,但鱼类染色质纤维排列较哺乳动物的松散,类似“辐射环”状的结构较为明显。     

草鱼和团头鲂染色体G带带型的研究

本文报道了经改进的胰酶一步法和放线菌素D(AMD-BSG)法所显示的鱼类染色体G带。采用草鱼(Ctenopharyngodon idellus)和团头鲂(Megalobrama amblycephala)的血淋巴细胞和肾细胞进行短期培养。血淋巴细胞的空气干燥制片,用胰酶一步法处理,显示出细致清晰的染色体G带。培养的肾细胞在收集前1-1.5h,1.5—2h,2.5—3h,用最终浓度为2μg/ml的AMD(actiomycin D)处理,其气干制片在HCI和Ba(OH)_2中处理,经2×SSC温育,Giemsa染色,获得了良好的染色体G带。在前中期或早中期的一个细胞单倍体组的染色体显带能达200多条带纹,结果较稳定,反差明显,图象清晰。根据实验结果初步绘制了草鱼和团头鲂的G带模式图。     

鱼类细胞遗传学的研究Ⅱ.鱼类淋巴细胞的培养及其染色体组型分析

本文报道鱼类外周血淋巴细胞的培养及共染色体组型分析。试验结果表明,所建立的方法适用于鲤鱼、鲫鱼、草鱼、团头鲂及其他鱼类。同时,应用本方法分析了鲤鱼(cyprinus carpio)和鲫鱼(Carassius auratus)的染色体组型,并进行了比较。鲤鱼的二倍体染色体数目为2n=100,由A(中部着丝点)、B(亚中部着丝点)和C(亚端部和端部着丝点)三组染色体组成,各组分别具有6对、20对和24对染色体。鲫鱼的二倍体染色体数目也是2n=100,同样分成三组。鲤鱼和鲫鱼二者不但在染色体数目上完全相同,在染色体组型方面也十分相似,很难找出明显的形态差异。无论是鲤鱼还是鲫鱼,雌雄个体之间,并未发现与性别决定有关的异型染色体存在。此外,作者曾发现一种染色体数为150±的鲫鱼,经有关专家鉴定,这种鲫鱼尚无法根据迄今的分类基准与通常所见之鲫鱼相区别。     

喜马拉雅旱獭核型研究

作者采用外周血淋巴细胞培养方法,研究喜马拉雅旱獭的核型。染色体数目,2n=38。常染色体中有24个中着丝粒和亚中着丝粒染色体;12个端或亚端着丝粒染色体。X为亚中着丝粒染色体,Y为端着丝粒染色体。     

人类染色体标本制备的改进——适合学生实验的染色体微量快速制备法

人类外周血淋巴细胞染色体标本的制备是细胞生物学和遗传学教学中重要的实验项目。传统的实验方法较为繁琐,费时较多,以至于无法开展大规模的学生实验。我们在教学实践中,摸索出了一种较为简便的方法。通过改进培养方法和制片过程采用微量快速制备,不仅培养了学生自己动手和独立思考的能力,而且又节省人力、物力和时间。１　实验材料和药品本实验所需要培养瓶采用２５０ｍｌ输液瓶,经常规清洗消毒后使用。其它材料和药品同常规人外周血淋巴细胞培养与染色体制备实验。２　实验方法２．１　人外周血淋巴细胞的培养　由于学生实验时人数…     

内江猪染色体G带及其定量分析

采用外周血淋巴细胞培养技术和胰酶法对内江猪染色体进行了G显带,并运用扫描显微分光光度法对染色体G带进行了系统的定量分析,获得了染色体核型及G带带纹的精确数据。包括每条单倍染色体的着丝粒指数、长度、面积、积分光密度;每条G带深染带纹的宽度、面积、积分光密度、带峰值等,并绘出了带吸收光密度柱形图和消光三维图。     

鱼类染色体BSG-G显带法

鱼类染色体多重带技术的应用,对鱼类遗传变异、分类进化、基因定位、基因表达与调控等问题的深入研究,显得日益重要。然而,鱼类染色体的多重带显带一直是个尚未过关的技术难题。近年来,许多学者尤其是国内学者在这个领域中进行了很多探索,并已取得一定进展。鉴于鱼类染色体短小,中期染色体螺旋     

黄鳝染色体高分辨G带的制备方法

ASimpleMethodforPreparingHigh-resolutionG-bandsonMeioticPachytcneChromosomeofMonopterusalbusFanLianchun;YuQixingCuiJianxun(DepartmentofBiology,WuhanUniversity430072)(NowAddress：InstituteofHydrobiology,Academiasinica,Wuhan43372)鱼类染色体多重带技术的应用,对于鱼类遗传变异、分类进化、基因定位、基因表达与调控等问题的深入研究,显得日益重要．但鉴于鱼类染色体数目较多,有丝分裂中期染色体螺旋化程度高,染色体短小,碱基分化程度较低等特点,至今鱼类染色体的多重带显带一直是个尚未解决的技术难题…     

鱼类多样性的遗传基础

鱼类的多样性正伴随着地球的生物多样性危机而日益受到关注。对鱼类多样性的阐释也成为研究中的热点之一。“机会垂青于有所准备的基因组”。目前的研究表明,基因组的可塑性（ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ）成为物种分化、形态演化以及适应环境改变等的遗传基础。本文侧重于染色体水平,即鱼类染色体数目变化极大、染色体倍型多态、鱼类性别决定系统的多态和超数染色体（Ｂ染色体）的存在提示鱼类基因组的可塑性很强;同时鱼类在基因组中存     

一种改良的鱼类染色体富集制片方法

运用淋巴细胞分离液处理黄鳝肾脏细胞悬浮液后,成功地分离了其中红细胞和淋巴细胞。以富集的淋巴细胞进行染色体制片,可避免有核红细胞的影响,获得高分裂指数的黄鳝染色体标本。该方法简便、结果稳定,亦适用于其他鱼类、两栖类和鸟类的染色体制片。 Abstract：After treated by the lymphocyte separation medium, the erythrocytes and lymphocytes were separated successfully in the kidney cells suspension of rice field eel. Using the enriched lymphocytes to prepare chromosome, we get the high split-index chromosome preparations without the interference of the erythrocytes. This technique is simple and convenient to prepare the chromosome of other fishes or other animals for FISH.     

利用染色体G显带技术鉴定人永生细胞实验条件初探

目的:探索利用染色体G显带技术鉴定人永生淋巴细胞的最佳实验条件。方法:在常规染色体制片技术的方法和手段的基础上,分别观察不同PHA浓度和培养时间对永生淋巴细胞分裂增殖的影响;然后,选择不同浓度秋水仙素处理细胞,观察染色体分散程度和中期分裂相的形态。结果:在永生淋巴细胞培养48h,PHA终浓度为0.1mg/mL,秋水仙素终浓度为0.04μg/mL,且其作用时间为1.5~2h的条件下,所获得的细胞染色体标本分裂相较多、染色体较长、分散较好、利于带型分析。结论:利用染色体G显带技术鉴定人永生淋巴细胞提供了技术保证,降低了实验成本,并且缩短了实验时间。     

黄鳝染色体组中组成型异染色质的分布

自从Caspersson等建立人类染色体喹吖因分带技术以来,相继发展了各种吉姆萨染色分带技术。这些分带技术是精确分析动物染色体的有效手段,在很大程度上促进了动物细胞遗传学的研究。鱼类是低等脊椎动物,研究鱼类的染色体与分带,不仅在鱼类染色体核型、核型的演化与亲缘关系的分析,而且对于脊椎动物染色体的细胞化学、组织结构与进化的研究都有重要的意义。但是由于鱼类染色体比哺乳类的细小,数目较多,染色体分带困难较大,至今分带的工作不多,在国内尤其少见。     

细胞系培养法制备云纹石斑鱼染色体

在已经报道的鱼类染色体制备方法中,采用细胞系培养法制备的染色体标本效果要明显好于PHA-头肾注射法。本实验室已经成功建立石斑鱼细胞系,并且成功传代培养超过20代。使用细胞培养法制备染色体省时省力,不必每次对活鱼进行剖杀。研究结果将为以后的分子遗传研究工作打下良好基础。