菠萝叶片PEP羧激酶活性及草酰乙酸与腺苷酸库的昼夜变化

自然条件下生长的菠萝植株,其叶片的ＰＥＰ羧激酶的脱羧与可逆羧化活性于中午１２时达最大值。脱羧／羧化比值在上午明显高于下午和晚上。脱羧反应底物ＯＡＡ含量于夜间增高,至次日早晨６时最高,随后下降。白天的ＯＡＡ／Ｍａｌ值高于夜间。参与Ｍａｌ及ＯＡＡ形成转化的ＰＥＰＣ和ＭＤＨ活性的昼夜变化与ＰＥＰ羧激酶（ＰＥＰＣＫ）活性的图式相似。ＰＥＰ羧激酶脱羧反应的另一底物ＡＴＰ在夜间０～６时内处于低水平,白天９～１５时内则显著增高。     

漆酶测定过程中缓冲体系的影响研究

采用L9（3^4）正交设计,研究了缓冲体系的三项指标——缓冲液成分、pH值和缓冲液浓度对白腐菌胞外漆酶活力测定的影响。结果表明：α=0．01时,缓冲体系的三项指标对白腐菌漆酶测定均有极显著影响;正交实验中获得的最高酶活测定值（14400-14976U,pH4．0,0．4mol／LNa2HPO4-柠檬酸缓7中液中）,是最低测定值（176-592U,pH4．8,0．8mol／LNa2HPO4-柠檬酸缓冲液中）的25～80倍。并考虑因素间交互作用,将分析所得最佳的缓冲体系“pH4．0,0．4mol／L邻苯二甲酸氢钾-NaOH缓冲液”,与正交实验中表现最佳的“pH4．0,0．4mol／LNa2HPO4-柠檬酸缓冲液”进行重复实验比较,灵芝菌株胞外漆酶测定的最适缓冲体系为“pH4．0,0、4mol／LNa2HPO4-柠檬酸缓冲液”。这为研究白腐菌漆酶酶活提供了较好的测定体系。     

磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶介导的草酰乙酸回补途径对谷氨酸棒杆菌V1氨基酸代谢的影响

【目的】谷氨酸棒杆菌是工业生产氨基酸的主要菌株,以缬氨酸高产菌株谷氨酸棒杆菌V1为研究对象,探讨磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)介导的草酰乙酸回补途径对菌株生理特性以及主要氨基酸代谢流量的影响。【方法】通过基因工程手段,在谷氨酸棒杆菌V1中过表达pepc(编码PEPC)和pck(编码PCK),比较重组菌与出发菌关键酶活性、发酵特性以及主要氨基酸积累量变化。【结果】构建两株重组菌V1-pepc(强化草酰乙酸回补途径)和V1-pck(弱化草酰乙酸回补途径),重组菌生长均较出发菌延缓,总生物量、葡萄糖和硫酸铵消耗基本不变;过表达pck,PCK活性提高22.8%,丙氨酸、缬氨酸、谷氨酸、精氨酸积累量分别提高了11.8%、17.2%、27.8%和19.5%;过表达pepc,PEPC活性提高27.5%,同时PC活性降低12.9%,天冬氨酸族和谷氨酸族氨基酸的整体流量变化不大,丙氨酸族氨基酸的整体流量降低了14.7%。【结论】丙氨酸族氨基酸受此回补途径影响较大,天冬氨酸族氨基酸受此影响较小。     

不同因素对金针菇原生质体制备和再生的影响

比较了不同浓度裂解酶及组合、渗透压稳定剂、酶解时间等因素对金针菇原生质体得率的影响以及不同渗透压稳定剂、培养基、接种方法等因素对金针菇原生质体再生的影响。试验结果表明:固体培养10d的金针菇菌丝,以0.5mol/L KCl作渗透压稳定剂,加入1%纤维素酶和1%溶菌酶在25℃下酶解1.5h,分离原生质体效果最佳,原生质体产量可达27.8×105个/ml以上;以0.5mol/L KCl作渗透压稳定剂,在25℃条件下,金针菇原生质体采用直接涂布法接种在RCM培养基上培养,再生率最高为0.5%。     

血清学诊断中结核杆菌磷酸烯醇型丙酮酸羧激酶的应用

[目的]在原核系统中表达结核杆菌磷酸烯醇型丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvate car-boxykinase PEPCK),并研究该蛋白在诊断结核病人血清抗体中的应用价值.[方法]应用基因重组技术表达重组蛋白结核杆菌磷酸烯醇型丙酮酸羧激酶,经亲和层析法纯化表达产物.用表达的重组蛋白免疫小鼠,研究其免疫学特性.间接酶联免疫吸附试验(Enzyme link immunosorbent assay,ELISA)检测结核病人血清中特异性IgG抗体,并与结核杆菌抗体胶体金法诊断试剂盒检测结果对比.[结果]试验表明转化入大肠杆菌中的重组质粒能够表达并纯化出相对分子量为72 kDa的重组蛋白;Western blot证实重组蛋白能够与小鼠抗BCG血清发生特异性反应;重组蛋白免疫小鼠后,小鼠血清中的抗体滴度可达1∶1280以上;重组蛋白用作ELISA包被抗原检测病人血清阳性率为17.3%(30/173),其中排菌病人的阳性率为32.5%(13/42),不排菌病人的阳性率为12.9%.该方法结果与结核杆菌抗体胶体金法诊断试剂盒的检测结果相比,敏感性为51.0%,特异性为96.7%.[结论]结核杆菌PEPCK具有较好的免疫原性和抗原性,有可能作为结核病血清学诊断的一组抗原之一.     

影响纳豆激酶酶促反应速度因素的研究

利用分光光度法对由纳豆菌发酵产生的纳豆激酶 (NK)进行了动力学性质的研究。以双倒数作图法 (L -B作图法 )求取Km。采用单因素试验法和正交试验法研究了底物浓度、酶浓度、温度、pH值对酶促反应速度的影响。结果表明该纳豆激酶的Km值为 3.4 98× 1 0 -6g·mL-1 ,当水解时间为 1 0min时 ,最适底物浓度为 1 6mg·mL-1 ,最适温度为 6 0℃ ,最适 pH为 8.0。     

维生素C溶液稳定性影响因素的考察

通过实验了解维生素C溶液的有关化学性质,掌握影响药物氧化速度的因素,了解提高易氧化药物稳定性的基本方法及处方设计要点。     

ELISA测定中TMB显色体系的优化及其稳定性研究

通过对间接酶联免疫测定中显色体系的各影响因素的研究,确定了酶联免疫测定的最优显色体系为二甲基亚砜(DMSO)配制四甲基联苯胺(TMB)浓度为0.3 mg/mL的溶液为A液,pH5.5,0.2 mol/L磷酸氢二钠与0.1 mol/L柠檬酸缓冲液配制过氧化脲素浓度为0.74 mg/mL的溶液为B液,两者按一定比例混合后使用。试验结果表明,此显色体系在25-40℃内进行都可得到较为准确的结果,且A、B液混合后在室温下放置4 h仍可使用。A液及B液分别在4℃放置60 d后混合使用仍不影响测定结果。     

郁金香衰老过程中几种保护酶活性的变化

两个郁金香品种在开花后随着可溶性蛋白含下降,细胞内超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和过氧化物酶３种保护酶活性也随之下降,同时发生过氧化产物丙二醛的迅速累积;     

浅析基因工程中工具酶的几个问题

就限制酶与DNA连接酶在实际应用中常出现的问题加以分析,主要是分子内自身环化产生的原因及解决的方法,通过这种背景材料的分析可以培养学生提高思维能力。     

水体中亚硝酸盐积累的生物过程及影响因素研究进展

亚硝酸盐是氮循环过程的中间产物,其积累超过一定量则会抑制微生物的生长与代谢,也会给人与水生生物带来健康风险。而在高氮污水生物脱氮工艺中,持续维持亚硝酸盐的积累能实现短程硝化过程,降低生物脱氮的能耗进而降低运营成本。本文综述了在水环境中亚硝酸盐积累的生物过程与积累原因,并对影响亚硝酸盐积累的因素进行了总结,旨在为提高污水处理过程中氮的去除效率,降低运营成本,减少排放污水及自然水体中亚硝态氮含量提供参考。     

蒜粉中蒜氨酸酶的分离纯化及性质测定

蒜粉以Na/K磷酸缓冲液抽提、25%～40%(NH4)2SO4分级沉淀后,用Sephadex G-200柱分离得到纯化200倍的电泳纯蒜氨酸酶.测定其性质的结果表明,此酶在25℃下对半胱氨酸亚砜的Km为0.87 mmol·L-1,Vmax为0.46μmol·min-1,最适反应温度为40℃,热稳定性的温度范围在45℃以下,最适pH为6.6.     

浅析影响食品中大肠菌群测定结果的几点因素

大肠菌群是评价食品卫生情况及受污染程度的最常用指标之一。大肠菌群的检测已是食品安全检测中必不可少的一个项目。本文主要对影响食品中大肠菌群测定结果的几点因素进行分析,以保证食品中大肠菌群检测结果的准确性和可靠性。     

人胱硫醚β-合酶及其截短型片段的表达、纯化和活性测定

将人胱硫醚β-合酶(CBS)基因克隆至质粒pGEX-4T-1中,获得的重组质粒pGEX-4T-1-CBS转入大肠杆菌E.coli Rosetta (DE3)菌株,构建了高效表达CBS的重组菌E.coli Rosetta (pGEX4T-1-CBS)。重组菌在0.1mmol/L的IPTG于30℃诱导16h,可溶性CBS表达量达到28mg/L培养基。将重组菌破碎后上清液经GSTrap Fast Flow亲和层析一步纯化得到CBS融合蛋白,在凝血酶柱上切割缓冲液中加入3%甘油和0.1%CHAPS可以有效抑制酶切后CBS聚沉,酶活性回收率为54.8%,蛋白质产率为15.2mg/L培养基,纯度达到95%,单位酶活为143U/mg,终浓度为1mmol/L的S-腺苷甲硫氨酸(AdoMet)可使CBS单位酶活提高5.1倍,达到735U/mg。同时构建了表达CBS_1-413(删除了CBS羧基端调控域138个氨基酸残基)的重组菌E.coli Rosetta (pETDuet-1-CBS_1-413),经过一步HisTrap Fast Flow亲和层析,酶活性回收率为74.3%,蛋白质产率为12.8mg/L培养基,纯度达到95%,单位酶活为965U/mg; 还表达和纯化了胱硫醚β-裂解酶(CBL),并在此基础上建立了一种新的CBL偶联的CBS酶活性测定方法。     

甘蔗幼叶原生质体分离过程中呼吸的变化及其影响因素

甘蔗幼叶呼吸途径以ＥＭＰ－ＴＣＡＣ为主,ＰＰＰ活力不强;游离原生质体ＥＭＰ活力与幼叶组织相近,但ＴＣＡＣ活力略有下降,ＰＰＰ活力明显提高,约为幼叶组织的两倍。甘蔗幼叶原生质体在用酶法分离过程中,其组织呼吸速率开始时呈现短暂跃升后即迅速下降。导致呼吸下降的主因是细胞壁降解产物中的某些物质,它们通过钝化呼吸途径中某些关键酶的活性而降低了呼吸活力。     

关于光合作用中几个基本概念的讨论

贺继临和侯福林两位老师在 2 0 0 0年第 4期和2 0 0 1年第 5期《植物生理学通讯》上 ,先后发表了题为《光合作用教学中几个表达方式的讨论》[1 ] 和《植物细胞线粒体呼吸膜和叶绿体光合膜的结构和功能比较》[2 ] 两篇教学讨论 (以下称文 1、文 2 )。他们在文 1中称“目前 ,植物生理学教材[3 ,4] 的光合作用部分中 ,有几处表达方式常使教师和学生学习发生困难” ,文 2中又称不将光合作用和呼吸作用“有机结合起来加以比较 ,以致学生学习时经常产生困惑”。我读了这两篇文章倒真的是有点困惑。现对他们在文 1和文 2中提及的问题谈几点看法。1…     

青萍的氮素营养及成花过程中几种酶活性的变化

青萍的生长在NO_3~--N中最佳,NH_4~+-N中次之,尿素中最差,氨基氮中生长缓慢,除γ-氨基丁酸外,其余均明显逊于NO_3~--N。培养前期蔗糖促进青萍生长与开花,后期加速青萍的衰老。短日处理的NR活性低于长日照和暗间断处理;诱导刚结束时PAL活性也是短日照大于暗间断,但开花时相反;短日诱导结束时蛋白质含量是短日照处理低于长日照,开花前期和开花期则相反。     

Eutrema Wasabi中异硫氰酸酯提取、含量测定及其影响因素

为弄清EutremaWasabi中各部分的异硫氰酸酯的含量,分别对Wasabi种子、叶、须根、根茎打浆水解后,采用高温蒸馏法和常温乙醚萃取,分别提取不同部位中的异硫氰酸酯,并用六氢吡啶法对各部分所提取的异硫氰酸酯进行测定,研究结果表明,在反应时间为45min、水解pH4.2的最佳条件下,Wasabi的根茎中异硫氰酸酯的含量最高,为0.841%;须根中为次之,为0.575%;叶中最少为0.309%。种子仅在反应65min的时候,异硫氰酸酯的含量最高为0.309%。当提取异硫氰酸酯时pH<4或pH>7且六氢吡啶与异硫氰酸酯反应时间低于35min,高于75min时所测定的异硫氰酸酯含量均低于作者实验结果。这为进一步开发利用Wasabi植物提供了理论依据。