海南菠萝一种叶斑病病原菌的分离与鉴定及多基因序列分析

为明确菠萝叶斑病病原菌可可毛色二孢菌在海南省各市县的亲缘关系及遗传差异,从海南省的海口、澄迈、儋州、三亚、保亭等16个市县进行病样采集和病样分离,根据科赫氏法则鉴定,获得42株病原菌.观察形态特征,并基于多基因联合序列分析其遗传多样性.结果 表明,通过形态学鉴定和ITS与TUB2基因序列联合进化树分析发现,其中来自海口、澄迈、儋州、三亚、保亭等16个市县的16株代表病原菌均鉴定为可可毛色二孢菌(Lasiodiplodia theobromae),其分生孢子平均大小为(22.06～31.07) μm× (11.77～16.48) μm;通过ITS、TUB2、EF-1α、GAPDH、CHS-1和ACT基因拼接序列聚类分析,结果分为3个类群,海南岛的中部(儋州,昌江,白沙,五指山,万宁,琼海等地)聚为一个类群,中北部(屯昌,临高)聚为一个类群,西南部(东方,乐东,三亚等地)聚为一个类群.该结果说明来源于不同产地不同菠萝品种上的可可毛色二孢菌遗传多样性丰富,在海南省16个市县菠萝叶斑病菌中可可毛色二孢菌L.theobromae为优势种.     

3种药剂对猕猴桃软腐病菌的抑菌活性及其复配效果研究

为了探究丙硫唑、咪康唑和异噻唑啉酮对猕猴桃软腐病菌菌丝生长的抑制活性,本试验采用抑制菌丝生长速率法研究了其对猕猴桃软腐病致病菌葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)、可可毛色二孢菌(Lasiodiplodia theobromae)、小新壳梭孢菌(Neofusicoccum parvum)的抑制作用,进一步研究了丙硫唑和咪康唑及异噻唑啉酮的复配制剂对以上病原菌的抑制作用.结果表明,3种药剂对菌葡萄座腔菌、可可毛色二孢菌、小新壳梭孢菌均具有较好的抑制作用,对菌葡萄座腔菌的EC₅₀值分别为20.355, 7.665, 3.759 mg/L;对可可毛色二孢菌的EC₅₀值分别为6.551, 25.915, 0.839 mg/L;对小新壳梭孢菌的EC₅₀值分别为15.484, 6.778, 0.568 mg/L.进一步复配试验发现,丙硫唑与咪康唑或异噻唑啉酮的复配制剂均能够提高对猕猴桃软腐病致病菌的防效,丙硫唑与咪康唑复配制剂抑制以上3种病原菌的最佳复配比分别为1∶1, 1∶1和1∶2;丙硫唑与异噻唑啉酮复配...     

一种袋栽黑木耳共生菌的鉴定及其共生效应初步研究

【目的】研究袋栽黑木耳某种共生菌对黑木耳生长的影响。【方法】经分离纯化,以及形态学和分子系统学分析,鉴定该真菌的分类地位;通过不同时间接种共生菌到黑木耳菌棒的方法,研究两者的共生效应;通过子实体营养成分分析,研究共生菌对黑木耳子实体营养结构的影响。【结果】经分离纯化获得菌株B-1,形态学和分子系统学分析将该菌株鉴定为毛色二孢属的可可毛色二孢(Lasiodiplodia theobromae)。通过不同时间接种黑木耳菌棒发现,此真菌与黑木耳间存在偏性共生关系。它对于黑木耳是偏利共生,还是偏害共生取决于黑木耳菌丝在菌棒中是否具有先占优势。黑木耳子实体营养成分分析显示,可可毛色二孢的存在改变了黑木耳子实体中营养结构,但黑木耳子实体形态特征无明显变化。【结论】可可毛色二孢与袋栽黑木耳存在着偏性共生关系,该现象为首次报道。     

糖尿病患者感染轮枝镰刀菌致角膜炎1例

报道糖尿病患者感染轮枝镰刀菌致真菌性角膜炎1例。患者男性,48岁,因右眼红,痛,视力下降20天就诊。患者有2型糖尿病史近10年,注射胰岛素血糖一直控制不佳。刮取角膜分泌物标本进行真菌荧光染色镜检和培养。对培养的菌株进行形态学(乳酸酚棉兰染色)和分子生物学鉴定。真菌荧光染色镜检阳性,镜下可见分支分隔的菌丝及鹿角状菌丝。真菌培养阳性,乳酸酚棉兰染色镜下可见多数棒状的小分生孢子。ITS和Beta-tubulin基因序列分析鉴定为轮枝镰刀菌。依据临床和实验室检查确定诊断右眼角膜炎(真菌性),2型糖尿病。给予患者那他霉素等滴眼液点右眼局部抗炎抗真菌对症处理,用药治疗后再次行眼科检查,患者右眼症状较治疗前明显好转。出院后继续抗真菌抗炎治疗2周,门诊随访。     

大型海藻种质保存中污染的丝状真菌菌群和药敏分析

目的:通过对大型海藻种质保存中污染的丝状真菌菌群和药敏结果进行分析,为种质保存工作中预防真菌污染提供理论依据。方法:以海藻种质保存中分离的丝状真菌为研究对象,通过基因序列分析对分离的丝状真菌进行种属鉴定。并通过药敏试验选出有效抗生素。结果:分离出种质保存中污染的丝状真菌12株,主要为镰刀菌属真菌4株,占污染真菌的33.33%,枝顶孢属真菌2株,占16.67%。药敏试验结果表明,制霉菌素、两性霉素B、酮康唑、氟康唑的敏感率分别为50%、16.67%、16.67%和8.33%。伊曲康唑对分离出的12株真菌均不敏感。结论:大型海藻种质保存中污染的丝状真菌以镰刀菌属真菌为多见,制霉菌素对常见的污染真菌敏感性较高,因此可选用制霉菌素来预防大型海藻种质保存中丝状真菌的污染。     

着色真菌monophora引起皮肤着色芽生菌病1例

目的报道1例由着色真菌monophora引起的皮肤着色芽生菌病。方法取皮损皮屑标本进行真菌直接镜检和培养,同时取活检进行真菌培养和组织病理学检查。对真菌培养阳性菌株进行形态学鉴定、温度试验和放线菌酮耐受试验,PCR扩增测序。结果KOH涂片检查可见较多圆形厚壁棕色硬壳细胞。组织病理学显示为慢性肉芽肿样改变;PAS和银染色可见到圆形厚壁的硬壳细胞。真菌菌落生长缓慢,呈橄榄色到黑色。小培养可见大量棕色菌丝、分支分隔,分生孢子梗主要为喙枝孢型,分生孢子棕色,椭圆形或卵圆形,单细胞。温度试验37℃生长,38℃不生长。0．01％、0．05％和0．1％放线菌酮均能耐受。扩增真菌rDNA的ITS区得到645bp的片段,经序列分析与裴氏着色真菌monophora变种ITS区比对,100％一致。结论据真菌学形态结构特征以及DNA序列分析菌种被鉴定为着色霉monophora。     

Fonsecaea monophora致着色芽生菌病1例

报道1例由Fonsecaea monophora所致的着色芽生菌病。患者男,72岁,因右肩部斑块20余年就诊,取皮损痂皮进行真菌镜检及培养,皮损组织做病理学检查,并对分离的菌株进行形态学和分子生物学鉴定。真菌直接镜检及组织病理HE染色均可见厚壁、棕色的硬壳小体。真菌培养可见黑褐色,绒毛状菌落生长。小培养可见枝孢型和喙枝孢型产孢,分生孢子单细胞性。ITS区序列分析鉴定为Fonsecaea monophora。给予特比萘芬250mg/d口服治疗,7个月后皮损痊愈。     

我国首例Paraconiothyrium cyclothyrioides感染致眼内炎的相关研究

目的报道我国首例由Paraconiothyrium cyclothyrioides引起的真菌性眼内炎,并分析其生物学特征、感染途径及治疗方法。方法通过形态学鉴定、生长温度试验、ITS测序等方法对我院1株眼外伤患者左眼前房沉积物中培养分离到的丝状真菌进行鉴定。结果该丝状真菌在PDA平板上在25℃生长快速,可见灰橄榄色周边有白色绒毛状菌落,表面皱褶,35℃生长缓慢,可见黄豆大小白色凸起菌落;25℃及35℃培养后镜下可见大量结节状菌丝,未见分生孢子,属于不产孢株;ITS测序结果为Paraconiothyrium cyclothyrioides。结论本病例是国内首次报导的由Paraconiothyrium cyclothyrioides引起的真菌性眼内炎。     

淡紫拟青霉所致皮肤及皮下感染:临床和实验研究

目的 报道国内首见淡紫拟青霉所致皮肤及皮下感染患者1例。方法 取患者皮损标本多次直接镜检,真菌培养,根据真菌培养的菌落特点和镜下形态、扫描电镜及DNA序列测定鉴定致病菌种,并对分离的致病菌进行体外药敏试验。结果 患者为6个月患儿,出生12d时面部出现粟粒大暗红丘疹,脓疱,并缓慢扩大。刮取脓疱直接镜检见无色细长分支菌丝。多次培养见灰紫色羊毛状菌落生长,光镜及电镜下可见无色细长分支、分隔菌丝、直立的分生孢子梗、顶端单轮生帚状支及大量柱状或分散柱状排列椭圆形、近球形小分生孢子。根据其菌落颜色及瓶梗形态等形态学特征鉴定为淡紫拟青霉,其rRNA基因DNA测序分析证实其表型分类。动物实验证实该菌的致病性,组织相中胶质性损害为其主要病理特征。体外药敏试验提示其对特比萘芬、酮康唑较敏感,对伊曲康唑、氟康唑敏感陛较差。结论 该病例被确定为淡紫拟青霉所致的皮肤及皮下感染,为国内首例。     

添加毛叶苕子对红壤旱地土壤真菌群落的影响

【目的】长期高强度的连作及大量化肥施用导致红壤旱地退化和土传植物病原菌累积。真菌是农业生态系统中与土壤健康密切相关的微生物。本文通过研究土壤真菌群落的变化,探究施用毛叶苕子对红壤旱地农业生态系统的影响。【方法】采用定量聚合酶链式反应和高通量测序技术,研究红壤旱地真菌群落对单施矿质肥(mineral nitrogen,phosphorus and potassium fertilization,NPK)与矿质肥配施毛叶苕子(mineral nitrogen,phosphorus and potassium fertilization with hairy vetch,NPKG) 2种施肥措施的响应。【结果】与对照NPK相比,NPKG显著提高土壤肥力、花生产量和土壤真菌丰度,降低土壤p H和土壤真菌多样性。不同处理显著改变土壤真菌群落组成。与对照NPK相比,NPKG处理土壤腐生营养型真菌相对丰度显著提高37.42%,花生尾孢菌(Cercospora arachidicola)和可可毛色二孢菌(Lasiodiplodia theobromae) 2种花生病原菌相对丰度分别降低89.11%和8...     

Fonsecaea monophora所致着色芽生菌病1例及其相关实验研究

目的 报道1例由Fonsecaea monophora所致的着色芽生菌病.方法 患者女,60岁,主因左手背皮损1 a余就诊,取皮损痂屑进行真菌直接镜检和培养,取皮损组织进行组织病理学检查和真菌培养.对培养获得菌株进行形态学和分子生物学鉴定,并进行药物敏感性检测.结果 真菌直接镜检阳性,可见较多圆形、厚壁、棕色的硬壳细胞.组织病理学显示为慢性肉芽肿样改变;HE和PAS染色均可见到圆形、厚壁、棕色的硬壳细胞.真菌培养阳性,菌落生长缓慢,呈橄榄色到黑色.小培养及扫描电镜检查可见枝孢型和喙枝孢型产孢,分生孢子单细胞性,呈椭圆形或卵圆形.ITS区序列分析鉴定为Fonsecaea monophora.药敏试验显示伊曲康唑对F.monophora的最低抑菌浓度（minimal inhibitory concentration,MIC）为1.0 μg/mL,特比萘芬的MIC为0.015 6μg/mL.给予患者口服特比萘芬250 mg/d治疗,皮损缓慢好转;6周后加服伊曲康唑200 mg/d治疗,14周后皮损消退呈瘢痕化修复.结论 依据临床及实验室检查确诊该病例为Fonsecaeamonophora所致着色芽生菌病,伊曲康唑联合特比萘芬治疗本病例显示较好疗效.     

3759例角膜炎患者真菌检测与耐药性分析

目的了解角膜感染真菌的分布与药敏情况,为临床诊治提供参考。方法回顾性分析2014年1月至2017年12月在本院就诊的角膜炎患者3759例。进行真菌培养及药敏实验,并汇总分析真菌分布与耐药性。结果 3759例真菌培养出阳性828例,总体阳性率为22%,患者以中老年男性为主,致病真菌以镰刀菌、链格孢霉及曲霉菌为主,其中镰刀菌最多,占比41%(340/828),且有增多趋势;其次为链格孢霉,占比30%(247/828)。真菌培养阳性率具有季节趋势,即在每年的第四季度真菌培养阳性率明显高于其他季度。抗真菌药伏立康唑、两性霉素B、伊曲康唑、酮康唑及氟康唑的耐药率分别为1.2%、1.6%、17.6%、32%及96.1%。结论本院眼角膜真菌感染以镰刀菌、链格孢霉为主且有增多趋势,时间分布呈季节性变化。氟康唑及酮康唑的耐药率较高,临床应根据真菌检验结果合理选择抗真菌药物及治疗方式。     

桔青霉引起透明丝孢霉病1例及文献总结CSCD

报告1例由桔青霉(Penicillium citrinum)引起的透明丝孢霉病并对相关文献进行回顾分析。患者,女,55岁,因左前臂斑块、结节4个月余就诊。对患者皮损表面的皮屑进行真菌荧光镜检,镜下可见少许菌丝;手术取活检组织,同时病理检查、细菌培养及真菌培养,真菌培养阳性,组织病理结果提示感染性肉芽肿,经PAS染色可见组织内菌丝及孢子;提取源自活检组织的真菌DNA和源自蜡块组织的DNA,对ITS区扩增并通过测序比对鉴定为桔青霉,与形态学鉴定相符。微量液基稀释法测得伊曲康唑对此桔青霉的最低抑菌浓度为0.5μg/mL。诊断为桔青霉所致透明丝孢霉病,予伊曲康唑200 mg/d口服治疗1个月后明显改善。     

暗孢节菱孢菌引起面部感染1例及相关研究

目的报道暗孢节菱孢菌(Arthrinium phaeospermum)引起的面部皮肤感染1例并进行相关真菌学研究。方法患者女,29岁,两颊对称性浸润性红斑数年。皮损直接镜检、真菌培养,经形态观察、分生鉴定菌种、并进行体外药敏试验及利用豚鼠致病性实验重现组织病理特征。结果直接镜检未见明显菌丝,体外培养后为单一菌落,经棉兰染色、小培养、扫描电镜、分子生物学均鉴定为暗孢节菱孢菌(Arthrinium phaeospermum),均可见典型特征。体外药敏试验提示,该菌对卡泊芬净、米卡芬净、泊沙康唑、雷夫康唑、伏立康唑、特比萘芬敏感,对伊曲康唑、氟康唑耐药。豚鼠致病性实验中,对照组和免疫抑制组豚鼠皮下注射处大体可见脓肿,体表涂抹处大体表现红斑、丘疹、脱屑,免疫抑制组症状持续较久。皮下注射处较体表涂抹处有明显的组织病理学改变,可见多核巨细胞包裹菌丝或孢子,伴组织细胞、中性粒细胞、淋巴细胞浸润。结论该患者为罕见的暗孢节菱孢菌(Arthrinium phaeospermum)引起的皮肤真菌感染。免疫功能对该菌感染所致疾病的临床过程可能有影响。     

一种寄生茶小绿叶蝉蜡蚧菌的鉴定及产孢条件优化

【目的】对寄生茶小绿叶蝉的丝状真菌进行鉴定和分生孢子培养研究。【方法】采用形态特征比较和转录间隔区(ITS)序列构建系统树进行分析,分生孢子培养通过单因素筛选和正交试验进行产孢条件优化。【结果】根据形态特征比较和系统发育分析表明,该真菌为渐狭蜡蚧菌Lecanicillium attenuatum ZareW.Gams。最优产孢条件(质量体积比)为:蛋白胨2%,麦芽糖1%,蚕蛹粉1%,氯化钾0.05%,磷酸氢二钾0.1%,七水硫酸镁0.05%,琼脂1.5%,蒸馏水1 000 m L,25°C。【结论】通过形态特征比较和分子序列分析表明,罹病茶小绿叶蝉上的真菌为已知种——渐狭蜡蚧菌,并对该菌株进行了产孢条件的优化。研究结果为该菌株应用到茶小绿叶蝉的生物防治研究提供基础资料。     

少见尖端赛多孢子菌致脑组织感染1例及系列研究

目的报道尖端赛多孢子菌脑脓肿感染1例,并探讨真菌的鉴定及其对抗真菌药物体外药敏试验。方法取患者颅内引流物标本进行真菌培养和形态学鉴定,对分离菌做基因测序和抗真菌药物体外药敏试验。结果根据菌株的形态学特点和基因测序结果鉴定为尖端赛多孢子菌,药敏试验显示对两性青霉素B、氟康唑耐药,对伏立康唑敏感。结论尖端赛多孢子菌导致的真菌感染较少见,其鉴定主要依靠形态学特征和基因分析。伏立康唑对该菌株有较好的治疗作用。     

枝状枝孢引起皮肤暗色丝孢霉病1例

目的报道1例枝状枝孢引起的皮肤暗色丝孢霉病。方法采用10％KOH镜检、真菌培养、小培养、温度试验、明胶液化试验、体外药敏试验、组织病理检查。结果皮损脓液10％KOH镜检见有棕黄色分隔菌丝;沙堡弱培养基（SDA）培养出局限性、绒状、橄榄绿色菌落;马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）小培养,孢梗多侧生于菌丝上,不分枝,产孢后不延伸、不膨大,淡褐色,具孢痕,枝孢呈长三角形,分生孢子顶生或侧生于其上,形成分枝的孢子链;最适应生长温度为25—27℃;能液化明胶。因此,本菌株符合枝状枝孢特征。而皮损组织病理显示真皮内弥漫性炎性细胞浸润以及肉芽肿病理相,伴有真菌菌丝孢子侵犯,诊断为皮肤暗色丝孢霉病。体外药敏试验结果显示本菌株对伊曲康唑敏感,给予患者口服0．4g／d,8周后皮损基本消退,目前仍在服药及随访。结论本病例的致病菌为枝状枝孢,选用伊曲康唑治疗有效。     

国内首例皮瘤丝孢酵母真菌血症分离株的表型及rDNA序列鉴定

目的通过对1例“脂膜炎”患者外周血分离株的表型及分子生物学鉴定,报道国内首例皮瘤丝孢酵母菌血症。方法采集患者的血及鼻咽结节组织标本通过真菌培养获得分离株,经沙氏培养基、马铃薯培养基、科玛嘉念珠菌显色培养后形态学观察及API 20C AUX系统鉴定,最后经PCR扩增rDNA基因测序证实。采用CLSI制定的M27-A2微量稀释法对病原菌株进行7种药物的体外药敏试验。结果分离株通过表型和分子生物学鉴定为“皮瘤丝孢酵母”。药敏结果显示菌株对两性霉素B耐药,氟康唑、伏立康唑、伊曲康唑、5-氟胞嘧啶敏感。卡泊芬净的抑菌浓度较低,而米卡芬净的抑菌浓度相对较高。患者因多种并发症死亡。结论皮瘤丝孢酵母引起的真菌血症为我国首例报道。API 20C AUX酵母鉴定系统可作为鉴定皮瘤丝孢酵母快速而简便的方法。通过分子生物学DNA序列检测分析能鉴定皮瘤丝孢酵母。     

土曲霉致双外耳道曲霉病

目的报道1例发生在双外耳道的曲霉病。方法取双耳耵聍行真菌直接镜检,将耵聍接种到沙堡培养基培养,并对培养出的病原菌进行形态学鉴定和rDNA序列分析。结果耵聍真菌直接镜检阳性,耵聍在沙堡培养基25℃培养长出沙褐色菌落,28℃小培养后光镜及扫描电镜下见分生孢子头呈柱状,顶囊半球形,直径约10μm,小梗双层,两层小梗的长度无明显差别,平行紧密生长在顶囊的上2/3处。分生孢子呈球形,小而光滑。分生孢子梗壁光滑、透明。提取真菌总DNA用PCR方法扩增rDNA序列,测序后登录Gene Bank进行比对,该菌与土曲霉菌株ATCC1012 rDNA序列一致性达100%,鉴定为土曲霉。患者外用4%氟康唑注射液直接滴耳,2次/d,治疗1个月后痊愈。结论确诊1例双外耳道土曲霉病,局部应用氟康唑注射液治疗外耳道曲霉病有效。     

西瓜炭疽病菌圆刺盘孢分生孢子产生条件的研究

为研究圆刺盘孢Colletotrichum orbiculare的分生孢子产生条件,通过改变培养基的成分、理化性状及培养条件等方法,进行了诱导产孢试验,并对所产生的分生孢子量进行测定。结果表明,C.orbiculare在西瓜茎叶煎汁培养基上25℃恒温黑暗培养30d可产生大量分生孢子,产孢量高达7.15×109个/m L。在显微镜下观察发现,病菌在西瓜茎叶煎汁培养基上和在西瓜茎秆病斑上产生的分生孢子在形态上存在差异,前者产生的分生孢子稍短和略宽,两端钝圆;而后者产生的分生孢子相对长而细,两端较尖。试验证明寄主西瓜茎叶成分对病菌分生孢子的产生具有明显促进作用。