苯丙氨酸脱氨酶cDNA在大肠杆菌中的克隆与表达及酶法合成L—苯丙 …

利用基因重组技术,在大肠杆菌中克隆并表达苯丙氨酸脱氨酸（ＰＡＬ）（ＥＣ４．３．１．５）,并应用此酶转化肉桂酸生成Ｌ－苯丙氨酸。方法是将欧芹苯丙氨酸脱氨酶ｃＤＮＡ亚克隆到组成型表达载体ｐＭＧ３６ｅ启动子Ｐ３２下游,以菌落ＰＣＲ法鉴定插一段的大小和方向都正确的克隆,进而以ＨＰＬＣ检测肉桂酸浓度的方法鉴别重组质粒有催化肉桂酸生成Ｌ－苯丙氨酸的酶活力。结果获得能表达ＰＡＬ酶活性的阳性克隆,在ＰＨ１０,含１     

高山红景天细胞悬浮培养中红景天甙生物合成代谢的调控：Ⅰ …

探索了高山红景天细胞培养中红景天甙生物合成的途径,认为甙元酪醇是红由莽草酸途径的。在此基础上研究了酪醇,Ｌ－酪氨酸与Ｌ－苯丙氨酸三种前体加入对就天甙生物合成的调控作用。结果表明,酪醇,酪氨酸等前体易被酚氧化成褐色,用与前体浓度为１：１的ＶＣ来防止褐化效果显著;     

β—环糊精对苯丙氨酸解氨酶反应影响的研究

在含有较高浓度底物反式肉桂酸（ｔｒａｎｓ－ｃｉｎｎａｍｉｃ ａｃｉｄ,ＣＡ）和氨反应介质中,研究了β－环糊精（β－ＣＤ）对红醇母苯丙氨酸解氨酶（Ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ ａｍｍｏｎｉａ－ｌｙａｓｅ,ＰＡＬ,ＥＣ４．３．１．５）催化反应的影响。加入适量β－ＣＤ可以克服高浓度ＣＡ对ＰＡＬ活性的抑制作用,显著增加产物Ｌ－苯丙氨酸（Ｌ－ｐｈｅ）的产量,β－ＣＤ最适用量随ＣＡ浓度升高而增加,其摩尔数量约为     

毕赤酵母底盘芳香族氨基酸合成途径改造生产肉桂酸及对香豆酸*

目的:改造毕赤酵母使其异源合成类黄酮生物合成途径的重要中间体肉桂酸、对香豆酸,并优化前体芳香族氨基酸生物合成途径以提高毕赤酵母的生产能力。方法:在毕赤酵母GS115中利用乙醇诱导型人工转录系统表达Rhodotorula glutinis来源的苯丙氨酸解氨酶,并在该重组菌株中分别过表达胞内芳香族氨基酸生物合成途径中的关键酶或其突变体以进行优化。结果:异源表达苯丙氨酸解氨酶可使毕赤酵母将自身产生的L-苯丙氨酸、L-酪氨酸转化为肉桂酸(38.8 mg/L)、对香豆酸(34.2 mg/L),而通过过表达相关酶进行优化,最终肉桂酸和对香豆酸的产量分别达到124.1 mg/L和302.0 mg/L。结论:利用新的异源宿主毕赤酵母成功合成了肉桂酸、对香豆酸,并对胞内的芳香族氨基酸生物合成途径进行了优化,表明毕赤酵母具有生产黄酮类化合物的应用潜力,也为其他芳香族氨基酸衍生物或植物化合物在毕赤酵母中的异源合成奠定了基础。     

DL-苯丙氨酸酶法拆分

ＤＬ－苯丙氨酸的拆分是以Ｎ－乙酰－ＤＬ－苯丙氨酸铵为起始原料,经猪肾酰化酶不对称水解作用,再经离子交换色谱分离,减压浓缩得到Ｌ－苯丙氨酸和Ｎ－乙酰－Ｄ－苯丙氨酸结晶。     

草鱼肠道对L-亮氨酸和L-苯丙氨酸的吸收

利用离体灌注法研究草鱼肠道对Ｌ－亮氨酸和Ｌ－苯丙氨酸的吸收规律。结果表明,草鱼肠道对两种氨基酸的吸收是一种逆浓度、需要转运载体的主动吸收方式。通过动力学特征分析表明,草鱼肠道对Ｌ－亮氨酸的吸收率强于Ｌ－苯丙氨酸,而肠道对Ｌ－苯丙氨酸的跨壁运输能力强于Ｌ－这氨酸。由氨酸酸浓度对吸收率的影响建立的动力学参数为Ｌｅｕ：Ｊｍａｘ＝０．７３２μｍｏｌ／ｇ．ｍｉｎ,ｋｔ＝５１．６０ｍｍｏｌ／Ｌ;Ｐｈｅ：Ｊｍａ     

四种前体对胀果甘草细胞悬浮培养生产甘草黄酮的调控效果评价

在胀果甘草细胞悬浮体系中加入苯丙氨酸、酪氨酸、肉桂酸和乙酸钠来研究前体对甘草细胞生产甘草黄酮的影响。结果显示,4种前体在合适的浓度下对细胞的生长没有明显的抑制作用,而且均能促进细胞内甘草黄酮的生物合成,但高浓度的肉桂酸对细胞的生长有一定的抑制作用。苯丙氨酸的最佳添加浓度为20 mg/L,酪氨酸、肉桂酸、乙酸钠的最佳添加浓度都是5 mg/L。此时,均可使培养体系的甘草黄酮产量高达100 mg/L以上,其中酪氨酸的添加使得产量高达对照的1.43倍。苯丙氨酸、肉桂酸和乙酸钠3种前体的添加时间均以第10天为宜,酪氨酸添加时间以第5天为最佳。而且,在添加苯丙氨酸和乙酸钠后的第3天收获细胞,此时细胞的生物量和甘草黄酮产量最大。此外,苯丙氨酸、乙酸钠的添加可以增加黄酮合成的关键酶之一——苯丙氨酸裂解酶的活性。酪氨酸对苯丙氨酸裂解酶影响不大,而肉桂酸的添加却导致其活性显著降低。     

粘红酵母产L—苯丙氨酸解氨酶的条件和酶法合成茶丙氨酸的研究

研究了粘红酵母中Ｌ－苯丙氨酸解氨酶的产酶条件及用此酶把反式肉桂酸转化成苯丙氨酸的条件。结果表明,在下列培养基及培养条件下ＰＡＬ的活力较高,酵母膏１０．０蛋白胨１０．０,ＮａＣ１５．０,ＫＨ２ＰＯ４０．５,苯内氨酸０．５,（ｎｈ４）２ＳＯ４１．０,葡萄糖５．０,ｐＨ６．０－６．５,培养温度为３０℃。转化过程中,（ＮＨ＾＋４）对初速度的影响符合米氏方程,其Ｋｍ和Ｖｍａｘ分别为１６．８５ｍｏｌ／Ｌ和５．     

前体促进紫杉醇生物合成的研究

通过正交试验研究了紫杉醇生物合成途径中一些可能的前体对紫杉醇生物合成的促进作用,结果表明,对紫杉醇合成有明显促进作用的前体是苯丙氨酸（１０ｍｇ／Ｌ）、乙酸铵（５ｍｇ／Ｌ）。酪氨酸也有一定的作用。     

前体对水母雪莲悬浮培养细胞黄酮合成的影响

在水母雪莲（Saussurea medusa Maxim)细胞悬浮体系中加入苯丙氨酸、肉桂酸和乙酸钠3种前体。结果显示,3种前体均能促进细胞内黄酮的生物合成,但它们对细胞的生长也有一定的抑制作用。实验表明,3种前体的添加时间均以第6天为宜。苯丙氨酸的最佳添加浓度为0.05mmol/L,肉桂酸、乙酸钠的最佳添加浓度都是0.1mmol/L。3种前体中,难溶于水的肉桂酸对黄酮合成的促进作用最强,它可使培养物的黄酮产量高达1801mg/L,是对照1．98倍。苯丙氨酸、乙酸钠两种前体协同添加,比它们单独加入更能促进细胞的黄酮合成。     

L-苯丙氨酸与血管平滑肌细胞增殖

本文用氚标胸腺嘧啶核苷掺入ＤＮＡ合成法测定自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）与正常对照鼠的培养主动脉血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖,观察Ｌ－苯丙氨酸对细胞增殖、细胞生长及原癌基因ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｍｙｃ表达的影响。结果显示：（１）Ｌ－苯丙氨酸剂量依赖性地抑制血清、碱性成纤维细胞生长因子及凝血酶诱导的ＤＮＡ合成;（２）Ｌ－苯丙氨酸剂量依赖性地抑制细胞对血清的增殖反应;（３）Ｌ－苯丙氨酸抑制血清诱导的ｃ－ｆｏｓ     

L-苯丙氨酸生产方法及新菌株

<正> L-苯丙氨酸(以下缩写成苯丙氨酸)是合成天门冬苯丙氨酸甲苯酯的重要前体物。天门冬苯丙氨酸是近年来最受人们重视的一种二肽甜味剂。这样就关系到了苯丙氨酸生产工艺问题。在这一工艺程序中最重要的是如何经微生物反应由肉桂酸与氨苯供体生产苯丙氨酸。     

红花石蒜苯丙氨酸解氨酶催化合成N-甲基-L-苯丙氨酸（英文）

【背景】N-甲基-L-苯丙氨酸是一种N-烷基化芳香氨基酸,是重要的手性合成单元/中间体/组成成分,在医药、农业、食品等领域有重要应用价值的代谢产物中广泛存在。N-烷基化芳香氨基酸的合成与制备仍具有巨大的挑战。【目的】在研究加兰他敏的生物合成过程中,我们从产加兰他敏的红花石蒜中克隆并表征苯丙氨酸解氨酶LrPAL3。LrPAL3催化区域及对映选择性的氢胺化反应得到L-苯丙氨酸。通过生物信息学分析,推测LrPAL3可能催化反式-肉桂酸的一步N-甲基胺化反应得到N-甲基-L-苯丙氨酸。【方法】将反式-肉桂酸与甲胺,以及表达LrPAL3的大肠杆菌全细胞一起孵育。HPLC-DAD及HRESIMS分析表明,上述反应产物为N-甲基-苯丙氨酸。为确定该产物的立体构型,将上述催化反应放大,通过分离纯化得到该酶催化反应产物。【结果】该化合物的氢谱数据及比旋光数据与N-甲基-L-苯丙氨酸标准品的数据一致。由此说明,LrPAL3能够催化反式-肉桂酸和甲胺发生N-烷基胺化反应,区域和立体专一性地生成N-甲基-L-苯丙氨酸。【结论】本研究为手性N-烷基氨基酸的不对称合成提供了一种全新的绿色、高效生物催化剂。通过对LrPAL3的蛋白质定向进化及代谢工程,将会进一步扩展LrPAL3的催化反应范围,以多种N-烷基胺类及取代的苯基丙烯酸为底物,实现手性N-烷基-芳基氨基酸的高效区域及立体选择性生物合成。     

产碱菌（Alcaligenes sp.）119转化苯丙酮酸形成L—苯丙氨酸的研究

从土壤中分离到一株产碱菌１１９,能将苯丙酮酸一步转化成Ｌ－苯丙氨酸。酶反应的最适ｐＨ为８．５,该酶在ｐＨ８－９之间稳定,最适反应温度为３７－４５℃,金属离子Ｆｅ＾２＋,Ｍｎ＾２ｎ等对酶有不同程度的抑制作用。该菌株培养在由葡萄糖,蛋白胨、牛肉膏等组成的培养基中,可获得最高转化率。Ｌ－天冬氨酸为酶反应的最佳氨基供体。当苯丙酮酸浓度为０．２ｍｏｌ／Ｌ时,细胞在３７℃下反应１６小时,可产Ｌ－苯丙氨酸３０．     

L—色氨酸的生产及其代谢控制育种

本综述了利用微生物生产Ｌ－色氨酸的各种方法和Ｌ－色氨酸的生物合成途径及其代谢调控机制,并介绍了利用重组ＤＮＡ技术选育Ｌ－色氨酸高产菌的研究现状。     

深红酵母转化反式肉桂酸生成L-苯丙氨酸的研究

研究了深红酵母Ａｓ２．２７９产生Ｌ－苯丙氨酸解氨酸（ＰＡＬ）的条件、转化反式 桂酸（ｔＣａ）生成Ｌ－苯丙氨酸（Ｌ－Ｐｈｅ）的条件以及几种因素对ＰＡＬ稳定性的影响,结果表明,最佳转化条件为：１．０％ｔ－Ｃａ,８ｍｏｌ／Ｌ氨,ｐＨ１０．０,３０℃。在转化液中加入还原剂和充入Ｎ２有利于提高酶的稳定性,在此条件下可一次转化６４％的ｔ－Ｃａ,保留６０％的酶活。生成Ｌ－Ｐｈｅ浓度为５．８ｇ／Ｌ。     

外源基因pheA、aroG和tyrB在苯丙氨酸合成途径中的共表达

利用基因工程技术提高了短杆菌的苯丙氨酸合成途径中关键酶活性,大幅度地增加了生物合成苯丙氨酸的产时。首先采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）从大肠杆菌的氟代苯丙氨酸抗性变异菌株基因组中扩增到与苯丙氨酸合成相关的ａｒｏＧ,ｐｈｅＡ和ｔｙｒＢ３个基因。ａｒｏＧ编码３－脱氧－２－阿拉伯庚酮糖－７－磷酸合成酶（ＤＳ）,ｐｈｅＡ编码双功能酶蛋白－分枝酸变位酶（ＣＭ）和预苯酸脱水酶（ＰＤ）,ｔｙｒＢ编码转氨酶（ＡＴ）。设     

苯丙氨酸脱氨酶cDNA在大肠杆菌中的克隆与表达及酶法合成L-苯丙氨酸

利用基因重组技术 ,在大肠杆菌中克隆并表达苯丙氨酸脱氨酶 (PAL) (EC4 .3 .1 .5) ,并应用此酶转化肉桂酸生成L 苯丙氨酸。方法是将欧芹苯丙氨酸脱氨酶cDNA亚克隆到组成型表达载体pMG3 6e启动子P3 2下游 ,以菌落PCR法鉴定插入片段的大小和方向都正确的克隆 ,进而以HPLC检测肉桂酸浓度的方法鉴别重组质粒有催化肉桂酸生成L 苯丙氨酸的酶活力。结果获得能表达PAL酶活性的阳性克隆 ,在pH1 0 ,含 1 .0 %肉桂酸、8.0mol/L氨的转化液中 ,3 0℃反应 2 0h ,肉桂酸重量转化率可达 60 %。该基因工程菌有希望用于工业化生产L 苯丙氨酸。     

双酶电极法测定L-苯丙氨酸的研究

本文以Ｃｌａｒｋ氧电极为基础,把水杨酸羟化酶和苯丙氨酸脱氨酶同时固定在氧电极的表面,制成了双酶生物传感器。在磷酸缓冲液中,水杨酸浓度为０．５ｍｍｏｌ／Ｌ,烟酰胺腺嘌呤二核甘酸（ＮＡＤ＾＋）的浓度为１．０ｍｍｏｌ／Ｌ,其响应电流的变化对应反池中Ｌ－苯丙氨酸的浓度在０－０．１５ｍｍｏｌ／Ｌ之内有良好的线性范围。     

前体化合物与诱导子对紫杉醇和紫杉烷类化合物合成的调控作用

添加Ｄ,Ｌ－β－苯丙氨酸和苯丙氨酸没有显著促进紫杉醇的合成,乙酸和苯甲酸对紫杉醇的合成有抑制作用,Ｃ１３位侧链合成的前体含量并不是合成紫杉醇的限制性因素。１￣３ｍｇ／Ｌ的α－亚麻酸没有促进紫杉醇和紫杉烷类化合物的合成。茉莉酮酸显著地促进了紫杉醇的合成,５ｍｇ／Ｌ茉莉酮酸处理的紫杉醇含量达到１３４μｇ／ｇＤＷ,是对照的９倍。