PTEN—第一个具磷酸酯酶活性的抑癌蛋白

本文综述了ＰＴＥＮ／ＭＭＡＣ１／ＴＥＰ１,第一个具磷酸酯酶活性的抑癌基因的最新研究进展。阐述了其ＤＮＡ和蛋白结构特征,ＰＴＥＮ生理性底物的发现过程,ＰＴＥＮ的抑癌机理及在肿瘤中的异常表达情况。     

抑癌基因PTEN在食管癌中的表达

目的　研究抑癌基因PTEN在食管癌组织的表达 ,探讨PTEN与食管癌发生发展之间的关系。方法　应用免疫组织化学SABC法对食管癌及癌旁食管粘膜PTEN的表达进行检测。结果　PTEN在食管鳞癌 (4 8 2 2 % )中的表达率明显低于癌旁正常食管粘膜组织 (90 6 3% ) ,有显著性差异 (P <0 0 1)。而且从食管鳞癌Ⅰ至Ⅲ级PTEN表达率逐渐降低 ,鳞癌Ⅰ至Ⅲ级PTEN的表达率分别是 :78 5 7%、 6 0 0 %、 2 7 2 7% ,有显著性差异 (P <0 0 1)。结论　从癌旁正常食管鳞状上皮组织 ,到Ⅰ～Ⅲ级食管鳞癌组织的PTEN表达依次降低 ,表明PTEN在食管癌的发生以及进展过程中有表达缺失。     

抑癌基因PTEN在鼻咽癌细胞株中表达的研究

目的:检测人鼻咽癌细胞株中PTEN表达情况,探讨鼻咽癌细胞中PTEN表达与细胞分化程度的关系。方法:进行细胞株的培养,采用流式细胞仪和共聚焦显微镜检测方法对细胞中PTEN的表达进行定位定量检测。结果:两种细胞株均有PTEN的表达,表达强度和分布与分化程度有关,分化越好,表达越高,流式细胞仪检测PTEN在细胞株中表达强弱顺序为CNE1>CNE2,阳性表达细胞数CNE1>CNE2差异有统计学意义(P<0.01);激光共聚焦扫描显微镜检测PTEN主要表达在细胞核和细胞浆,分布与分化程度有关,细胞核表达强度CNE1相似文献   

抑癌基因PTEN及其在肿瘤中的突变失活

正常细胞和肿瘤细胞的蛋白质磷酸化及去磷酸化研究一直引人注目。研究表明,细胞内蛋白质酪氨酸磷酸化水平受蛋白质酪氨酸激酶和蛋白质酪氨酸磷酸酶动态调控。多种癌基因的表达产物具有蛋白质酪氨酸激酶活性并参与肿瘤形成进程,提示蛋白质磷酸酪氨酸磷酸酶可能抑制肿瘤形...     

抑癌蛋白PTEN及PDZ蛋白对其的调节

pten基因是迄今为止发现的第1个具有双特异性磷酸酶活性的抑癌基因,该基因的编码产物PTEN蛋白,是具有蛋白与脂质磷酸酯酶活性的双特异性磷酸酯酶,作为1种重要的信号分子参与细胞增殖、分化、黏附、迁移、凋亡以及基因转录的调控. 最近,关于PTEN在信号转导中的作用以及细胞内PTEN的调节机制研究较多,尤其是PDZ蛋白对PTEN的调节作用. PTEN蛋白包括1个氨基端（N端）磷酸酯酶区域,1个与脂质结合的C2区域和1个含有PDZ结合序列的羧基端（C端）区域. PDZ结构域通过识别目标蛋白羧基端PDZ结合序列与目标蛋白相互作用,调控多种重要的细胞生理过程和信号传导途径.本文就抑癌基因pten编码产物PTEN蛋白的结构、PTEN的生物学功能和PDZ蛋白对PTEN调节的研究进展进行综述.     

抑癌基因PTEN转基因小鼠的构建及表型初步分析

目的:构建抑癌基因PTEN(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten)的转基因小鼠模型并对其表型进行初步分析。方法:细菌人工染色体(BAC)载体系统构建打靶载体创建PTEN转基因小鼠模型;利用对鼠尾DNA进行PCR检测的方法对出生的F0代小鼠进行基因型鉴定,将阳性F_0代小鼠与野生型小鼠交配繁殖筛选稳定遗传的转基因系。分离并培养小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryo fibroblast,MEF),利用Western blotting检测比较转基因阳性小鼠与同窝野生型小鼠MEF细胞中PTEN的蛋白表达水平,并通过克隆形成实验对比PTEN转基因小鼠与野生型小鼠MEF细胞的增殖能力;取成年小鼠主要组织器官提取蛋白,Western blotting检测PTEN转基因小鼠主要组织的PTEN蛋白表达情况;从小鼠出生后第三周开始统计、分析并制作小鼠的体重生长曲线;此外,还对比了PTEN转基因小鼠与野生型小鼠肺、肝、脾脏的细胞大小与腹腔内的脂肪含量。结论:PTEN转基因小鼠能够存活并稳定遗传;Western blotting结果表明,不论在胚胎期还是成年期,PTEN转基因小鼠体内的PTEN蛋白水平均高于同窝的野生型小鼠,转基因小鼠的PTEN表达水平接近野生型水平的3倍;对PTEN转基因小鼠的整体表型进行初步分析,发现Pten基因在体内过表达后,小鼠的体型显著变小,而细胞大小不变;腹腔内的脂肪含量显著减少。结论:成功构建了PTEN转基因小鼠模型,并获得了生理条件下PTEN过表达的原代细胞系,为研究抑癌基因PTEN的体内生理功能提供了重要的动物模型。     

人肝细胞癌中抑癌基因PTEN/MMAC1/TEP1的突变分析

PTEN／MMAC1／TEP1(PTEN)是新近分离到的抑癌基因,在多种肿瘤中存在突变。我们检测了34例人肝细胞癌中PTEN基因第5外显子和第8外显子的突变。采用聚合酶链方法以内含子引物扩增第5和第8外显子,继之以单链构象多态性和测序技术分析PTEN基因突变。有4例肝细胞癌SSCP显示异常条带并经测序证实存在突变。2例发生于第4内含子,突变位点相同;另两例发生于第8外显子,其中1例碱基颠换导致PTEN蛋白产物304位半胱氨酸突变为甘氨酸。     

鼻咽癌、胃癌中抑癌基因ING1的突变检测

为探讨抑癌基因ING1是否在鼻咽癌和胃癌中存在基因突变,以确定该基因在鼻咽癌、胃癌发病过程中所起的作用,本研究运用PCR－SSCP法分别对鼻咽癌和胃癌组织ING1点突变情况进行检测;对30例鼻咽癌组织和26例胃癌组织的ING1外显子1b扩增的PCR产物进行SSCP分析,结果未发现所扩增的片段有泳运速率的改变,以上结果可以初步排除ING1在鼻咽癌和胃癌中以基因突变方式失活的可能。     

人肝细胞癌中抑癌基因PTEN／MMAC1／TEP1的突变分析

PTEN/MMAC1/TEP1 is a tumor suppressor gene. Its mutation has been found in several different types of human cancers. 34 primary human hepatocellular carcinomas have been examined for mutations in exon 5 and exon 8 of the PTEN gene. Exon 5 and exon 8 were amplified by polymerase chain reaction (PCR) with intronic primers and subjected to single strand conformation polymorphism (SSCP) analysis. SSCPs were found in 4 of the 34 hepatocellular carcinomas analyzed. Direct sequencing of the PCR products identified single base-pair substitutions in the four tumor DNA samples, two in intron 4 and two in exon 8. One of the base-pair substitution in exon 8 is a missense mutation, which changed codon 304 of PTEN protein from Cys to Gly. These data suggest that PTEN may be involved in the carcinogenesis and development of hepatocellular carcinoma.     

抑癌基因P16在肺癌中的研究进展

抑癌基因P16与细胞周期调控密切相关,其主要作用是参与细胞周期过程,它通过细胞周期与其它癌基因及肿瘤抑制基因相互作用成为正常细胞增殖的调控因子。P16基因主要通过基因缺失、点突变及甲基化而失活,已证实该基因的失活与多种肿瘤的形成与转移密切相关。通过各种分子生物学技术检测出它在肿瘤中的表达,将有助于判断肿瘤的恶性程度、浸润深度及预后,为制定合理的治疗方案提供依据。P16是已知的抑癌基因中唯一通过直接抑制细胞周期而抑制细胞生长的基因,在肿瘤治疗方面有很大的应用前景。P16基因突变在人类恶性肿瘤中普遍存在,因此,有关p16基因的研究已经成为当前分子生物学和分子遗传学研究的重要课题。本文就p16基因的分子生物学特性及它与肺癌的关系作一综述。     

抑癌基因和肿瘤转移

目前肿瘤治疗最棘手的问题,莫过于肿瘤细胞对传统治疗药物的抗性和肿瘤转移,所以,进一步研究肿瘤细胞的抗药性和转移的分子基础,已成为提高肿瘤治疗和预后的热点问题。本文就肿瘤转移过程中抑癌基因变化的研究进展作一介绍。肿瘤转移是个有多种基因参与的过程。在此过...     

人类抑癌基因beclin 1在胃癌和直结肠癌中表达下调的研究

人类抑癌基因beclin 1通过自噬作用调节细胞生长,但在胃癌和直结肠癌中其表达水平和调控机制仍不清楚．通过检测胃癌和直结肠肿瘤组织中beclin 1基因的表达水平,及DNA异常甲基化和杂合子缺失对其表达的影响,发现与癌旁组织相比,35％的胃癌标本和30％的直结肠癌标本中beclin 1基因表达显著下调．同时发现,beclin 1基因5’端存在一高密度CpG岛,在胃癌和直结肠癌中beclin 1的启动子区域和第二个内含子区域存在甲基化,而杂合子缺失仅在胃癌中发生．这些发现表明beclin 1基因的异常甲基化和杂合子缺失对其在胃癌和直结肠癌中的表达起调控作用．     

新的肿瘤抑制基因-ARLTS1

小分子GTP蛋白涉及肿瘤发生中多条信号通路的改变。类核糖基化因子肿瘤抑制基因1（ADP-ribosylation factor-like tumor suppressorgene1,ARLTS1）,是小分子GTP蛋白Ras超家族中ARF家族的成员之一。该基因是低显性基因,可因启动子超甲基化而失调。有两种ARLTSl的多态性与肿瘤的家族风险相关。ARLTS1表达下调与部分肿瘤发生有重要关系,而恢复其表达则会诱导caspase依赖的细胞凋亡发生,并减少肿瘤的体内生长。通过基因微阵列实验发现,转导ARLTS1基因诱导细胞凋亡过程中众多涉及细胞存活、增殖和发育的信号通路。     

A Functional Dissection of PTEN N-Terminus: Implications in PTEN Subcellular Targeting and Tumor Suppressor Activity

Spatial regulation of the tumor suppressor PTEN is exerted through alternative plasma membrane, cytoplasmic, and nuclear subcellular locations. The N-terminal region of PTEN is important for the control of PTEN subcellular localization and function. It contains both an active nuclear localization signal (NLS) and an overlapping PIP2-binding motif (PBM) involved in plasma membrane targeting. We report a comprehensive mutational and functional analysis of the PTEN N-terminus, including a panel of tumor-related mutations at this region. Nuclear/cytoplasmic partitioning in mammalian cells and PIP3 phosphatase assays in reconstituted S. cerevisiae defined categories of PTEN N-terminal mutations with distinct PIP3 phosphatase and nuclear accumulation properties. Noticeably, most tumor-related mutations that lost PIP3 phosphatase activity also displayed impaired nuclear localization. Cell proliferation and soft-agar colony formation analysis in mammalian cells of mutations with distinctive nuclear accumulation and catalytic activity patterns suggested a contribution of both properties to PTEN tumor suppressor activity. Our functional dissection of the PTEN N-terminus provides the basis for a systematic analysis of tumor-related and experimentally engineered PTEN mutations.     

人抑癌基因PTEN的原核表达载体的构建及融合表达

为研究抑癌因子PTEN蛋白的抑癌机理,掏建了PTEN cDNA的原核表达载体并进行融合表达。将含有PTEN cDNA的质粒pMD-PTEN经EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切,回收PTEN基因片段与经相同酶切的高效原核表达载体pET-44a连接,经序列测定,证实融合型表达载体pET-Nus-PTEN构建成功。转化表达宿主BL21(DE3)后,IPTG诱导表达。经12％SDS-PAGE凝胶电泳,获得118kD的特异蛋白条带。目的蛋白占细菌总蛋白的17％。结果表明：PTEN基因和Nus基因融合表达成功,获得可溶性Nus-PTEN蛋白。该研究为PTEN蛋白的抑癌机理和基因工程药物的研究打下了基础,这是国内PTEN蛋白在原核细胞中成功表达的首次报道。