Rab23 在鳞癌细胞系中的表达及其对鳞癌细胞侵袭的影响*

目的:观察Rab23在鳞癌细胞系中的表达及其对鳞癌细胞侵袭的影响。方法:western blot检测Rab23在四个头颈部鳞癌细胞系中的表达,对鳞癌细胞系HSQ-89用脂质体转染小干扰RNA,对Sa3用脂质体转染Rab23质粒,分别干涉或过表达Rab23,用铺有基质胶的transwell小室检测细胞侵袭能力,细胞划痕试验检测迁移能力。结果:Rab23在四个鳞癌细胞系中均有表达,在Hacat中不表达,HSQ-89细胞经Rab23干涉后细胞侵袭能力减弱,而Sa-3细胞过表达Rab23后细胞侵袭能力增强。干涉或过表达Rab23后,鳞癌细胞的迁移能力无差异。结论:Rab23可促进鳞癌细胞侵袭。     

小鼠鳞癌细胞培养液中溶骨因子的分离纯化

以7、12,二甲基(α)苯基蒽诱导建立了小鼠鳞癌细胞株,接种至裸鼠中可致高血钙。其细胞培养液经超滤浓缩100倍后,通过DEAE层析、Ultrogel AcA54层析、麦胚凝集素琼脂糖层析及HPLC(C_(18))。初步分离纯化了溶骨因子。这一溶骨因子在体外可显著刺激小鼠颅骨片中~(45)Ca的释出,伴有PGE2的生成及腺苷酸环化酶活性的增高,其分子量约15,000道尔顿。     

天花粉对小鼠子宫肥大细胞超微结构的影响

本研究用雌性中国１号小鼠１２只,分实验组和对照组,实验组分别腹腔注射天花粉后处死,取子宫组织作超薄切片,电镜观察。在天花粉作用下,常见子宫肥大细胞脱颗粒,呈功能活化状态,并与子宫平滑肌细胞紧密相邻。提示肥大细胞可能通过脱颗粒释放组胺促进子宫平滑肌的收缩。同时,也见肥大细胞与子宫结缔组织中的成纤维细胞,淋巴细胞等密切接触,提示成纤维细胞和淋巴细胞与天花粉作用下子宫肥大细胞的数量增多有关。     

胃肠富集Kruppel样因子表达对食管鳞癌细胞的影响

胃肠富集Kruppel样因子 (GKLF)是一个新近发现的真核锌指蛋白 ,它在胃肠道表达丰富 ,其表达与细胞生长停滞有关联。为了解GKLF下调在食管鳞癌发生发展中的意义 ,观察了GKLF有义与反义表达对食管鳞癌细胞系生长特性的影响。GKLF基因反义转染抑制EC970 6细胞GKLF表达时 ,可促进细胞生长 ,说明GKLF下调可参与细胞过度增殖。GKLF基因有义和反义转染 ,均抑制EC970 6细胞的粘附功能 ,提示GKLF也参与了食管鳞癌的转移机制。以上结果说明 ,食管鳞癌中GKLF表达下调 ,促进细胞过度增殖和粘附性下降 ,提示GKLF表达下调参与了食管鳞癌恶性表型的产生。     

血卟啉单甲醚对食管癌细胞 Eca-109 的光动力学杀伤效应

目的:探讨血卟啉单甲醚(HMME)介导的光动力疗法(PDT)对人食管癌细胞杀伤效应的最佳作用参数,为HMME-PDT的临床应用提供一定的参考依据。方法:以4μg·m L-1HMME与人食管癌Eca-109细胞孵育不同时间后,利用形态学软件分析其荧光强度;进一步予不同浓度(0.5μg·m L-1~8μg·m L-1)HMME与细胞孵育1.5小时后,在特定波长下以不同能量的激光(2、4、8 J·cm-2)照射,采用CCK8法检测细胞的存活率。结果:HMME在细胞内的荧光强度于给药1.5 h后达到高峰。在一定范围内,随着HMME浓度与激光剂量的增加,细胞存活率逐渐下降,当HMME浓度增高到4μg·m L-1时,光照强度增高到4 J·cm-2,进一步提高药物浓度与激光剂量,细胞存活率并不随之降低。结论:不同的孵育浓度、不同的孵育时间及不同的光照剂量密度可以显著的影响HMME-PDT对人食管癌Eca-109细胞的体外效应。     

针灸辅助造影剂对小鼠大脑光声对比度的增强作用

目的:利用光声层析成像技术(photoacoustic tomography,PAT)监测针灸小鼠阳陵泉穴位(GB34)、静脉注射造影剂金纳米颗粒溶液这两种方法分别施加,以及共同施加对小鼠大脑皮层脉管系统成像的影响。方法:PAT技术能够对生物组织进行高分辨率无损成像,反映生物组织的光吸收特性等功能信息。本项研究工作,利用PAT技术实验获取了正常小鼠活体脑皮层随时间变化的图像,探讨了针灸及造影剂分别作用以及共同作用下皮层脉管系统的光吸收特性的变化。结果:三组活体实验发现在针灸及造影剂各自作用下,皮层脉管系统的光吸收峰值增强比率分别为23.87%以及38.56%;而在两者共同作用情况下,其皮层脉管系统的光吸收比外源刺激前进一步增加66.75%。结论:实验结果显示,PAT技术不但能够全程监测小鼠大脑皮层脉管系统随时间变化的光吸收信息,而且能够诠释金纳米颗粒结合针灸两者共同作用产生的皮层光吸收增强的复合效应远大于任何一种单独作用产生的效应,这揭示了针灸辅助造影剂方法有助于大大提高光声脑成像对比度。     

C-myc通过调控BubR1影响食管鳞癌细胞对紫杉醇的敏感性

探讨C-Myc与有丝分裂期检查点蛋白BubR1的表达关系和对紫杉醇药物作用的可能影响.用免疫组化方法检测23例食管鳞癌组织标本中C-Myc和BubR1的表达水平,并通过免疫印迹的方法比较3株食管鳞癌细胞株ECA-109,KYSE150和KYSE180中C-Myc和BubR1的表达高低,分析相关性;将人BUB1b基因启动子上游约2000bp片段插入pSEAP2分泌型碱性磷酸酶报告质粒中构建为pSEAP2-BubR1-P2000,分别转染至3株鳞癌细胞内,检测启动子激活效果;在ECA-109细胞内过表达C-Myc后再转染pSEAP2-BubR1-P2000后,检测启动子的激活效果;免疫印迹方法检测C-Myc抑制剂10058-F4对BubR1蛋白表达的影响;通过MTT检测10058-F4干扰C-Myc后ECA-109细胞在梯度紫杉醇浓度下的生存率变化;最后通过DAPI染色观察单用C-Myc抑制剂,单用低浓度紫杉醇(100nM)或联用10058-F4和紫杉醇组的凋亡比例.结果发现在临床食管鳞癌标本和食管鳞癌细胞株中C-Myc和BubR1的表达有相关一致性;C-Myc高表达的细胞株中BubR1启动子活性的激活程度更强,并且过表达C-Myc后能进一步上调启动子活性;C-Myc特异性抑制剂10058-F4可以有效下调BubR1表达,并减低细胞在梯度紫杉醇作用下的细胞生存率.DAPI染色结果显示联用10058-F4和低浓度紫杉醇能明显增加细胞处于有丝分裂期的比率.在食管鳞癌细胞中C-Myc能上调有丝分裂期检查点蛋白BuR1的水平,并与食管癌对紫杉醇的敏感性相关,C-Myc可能通过上调BubR1表达而减低食管鳞癌对紫杉醇的反应.     

威灵仙多糖对舌鳞癌细胞生长抑制作用的研究

目的:探讨威灵仙多糖对人舌鳞癌细胞Tca-8113的体外生长抑制作用。方法:提取分离纯化威灵仙多糖,用噻唑蓝(MTT)法测定在不同浓度威灵仙多糖作用下人舌鳞癌细胞Tca-8113的活力,观察药物对癌细胞的生长抑制作用。结果:威灵仙多糖对Tca-8113的生长具有明显的抑制作用,随着威灵仙多糖浓度的增大或作用时间延长,抑制作用逐渐增强,呈一定的剂量和时间依赖关系。结论:在体外实验中,威灵仙多糖对人舌鳞癌细胞Tca-8113具有明显的杀伤和抑制作用,可进一步研究其作为抗肿瘤药物应用于临床的潜力。     

多尺度的光声显微镜用于癌细胞及实体瘤成像

多尺度显微成像系统(M-PAM)被发展,并被用于成像从癌细胞到实体肿瘤的多尺度生物结构.该装置由二维运动平台,扫描振镜,物镜,聚焦超声换能器组成,其横向分辨率达到3 μm.结果显示该系统可以对体外培养黑色素瘤细胞与体内的黑色素瘤进行无标记成像.基于具有靶向性的探针,M-PAM系统可以对体外培养的U87-MG肿瘤细胞以及体内U87-MG实体肿瘤进行成像.综上所述,M-PAM系统将是研究肿瘤的有力工具.     

光声结合用于生物组织成像的研究进展

光声结合为生物组织层析成像提供了一种新的有效的手段。这种新方式克服了传统成像技术的一些不足,能获得更多的信息。本文总结了该领域三个主要研究方向的工作,同时分析了目前存在的问题。     

茶多酚抑制肺鳞癌细胞裸鼠移植瘤的实验研究

目的:探索茶多酚对肺鳞癌细胞的抑制效应及相关机制.方法:以肺鳞癌PC10为研究对象,进行裸鼠成瘤实验.观察茶多酚对裸鼠成瘤的影响.应用免疫组织化学方法检测细胞凋亡相关Bc12和Caspas3和增殖相关蛋白PCNA的表达,应用TUNNEL法检测细胞凋亡.结果:茶多酚可抑制裸鼠移植瘤的生长.茶多酚可促进促凋亡蛋白caspase3表达并抑制抑凋亡蛋白Bc12表达,并抑制增殖细胞核抗原的表达.TUNNEL实验结果提示茶多酚可促进PC10细胞凋亡.结论:茶多酚可抑制肺鳞癌移植瘤生长,与促进癌细胞凋亡和抑制细胞增殖有关.     

Preclinical Validation of Talaporfin Sodium-Mediated Photodynamic Therapy for Esophageal Squamous Cell Carcinoma

Photodynamic therapy (PDT) kills cancer cells via a photochemical reaction mediated by an oncotropic photosensitizer. Herein, we performed an experimental preclinical study to validate the anti-tumour effect of talaporfin sodium-mediated PDT (t-PDT) for esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) cells. We used human ESCC cells derived from various differentiation grades or resistant to 5-fluorouracil (5-FU). The cytotoxic effect of t-PDT was determined by evaluating cell viability, apoptosis and generation of reactive oxygen species (ROS) and DNA double-strand breaks. Furthermore, the anti-tumour effect of t-PDT was assessed using an anchorage-independent cell-growth assay and xenograft transplantation models. t-PDT induced potent cytotoxicity in ESCC cells independent of their differentiation grade or 5-FU resistance. Moreover, t-PDT induced robust apoptosis, as indicated by cell shrinkage, perinuclear vacuolization, nuclear fragmentation and induction of annexin V-positive cells. This apoptotic response was accompanied by concurrent activation of ROS, and induction of DNA double-strand breakage. Importantly, t-PDT suppressed efficiently anchorage-independent cell growth as well as ESCC-xenografted tumor formation. In aggregate, t-PDT showed anti-tumor potential for ESCC cells with various histological grades or chemoresistance, providing a novel translational rationale of t-PDT for the treatment of ESCC.     

高良姜素对人食管鳞癌KYSE-510细胞的抑制作用

探讨在体外高良姜素对人食管鳞癌KYSE-510细胞的抑制作用以及可能的作用机制.MTT结果表明,高良姜素对人食管鳞癌KYSE-510细胞具有很强的生长抑制作用.光学显微镜、激光共聚焦显微镜以及流式细胞仪的分析结果表明,高良姜素可诱导KYSE-510细胞分化.荧光定量RT-PCR和Western印迹分析结果表明,高良姜素诱导P21^waf1、抑制细胞周期蛋白B1和细胞周期蛋白D1的表达,推测上述基因可能是高良姜素实现细胞分化诱导作用的靶基因.     

Near Infrared Imaging of EGFR of Oral Squamous Cell Carcinoma in Mice Administered Arsenic Trioxide

Background

The effectiveness of near-infrared imaging (NIR) interrogation of epidermal growth factor receptor (EGFR) expression as a sensitive biomarker of oral squamous cell carcinoma (OSCC) response to arsenic trioxide therapy was studied in mice.

Material and Methods

A431 OSCC in vitro were exposed to 0 µM, 0.5 µM, 2.5 µM, or 5 µM of As₂O₃ for 0 h, 24 h, 48 h and 72 h. Confocal microscopy and flow cytometry confirmed EGFR expression and demonstrated a sensitivity dose-related signal decline with As₂O₃ treatment. Next, mice with pharynx-implanted A431 cells received As₂O₃ i.p. every 48 h at 0.0, 0.5, 2.5, or 5 mg/kg/day (n = 6/group) from day 0 to 10. An intravenous NIR probe, EGF-Cy5.5, was injected at baseline and on days 4, 8, and 12 for dynamic NIR imaging. Tumor volume and body weights were measured three times weekly.

Results

In vitro, A431 EGFR expression was well appreciated in the controls and decreased (p<0.05) with increasing As₂O₃ dose and treatment duration. In vivo EGFR NIR tumor signal intensity decreased (p<0.05) in As₂O₃ treated groups versus controls from days 4 to 12, consistent with increasing dosage. Tumor volume diminished in a dose-related manner while body weight was unaffected. Immunohistochemical staining of excised tumors confirmed that EGFR expression was reduced by As₂O₃ treatment in a dose responsive pattern.

Conclusion

This study demonstrates for the first time that OSCC can be interrogated in vivo by NIR molecular imaging of the EGFR and that this biomarker is effective for the longitudinal assessment of OSCC response to As₂O₃ treatment.     

食管鳞癌的蛋白质组学

大部分食管鳞癌（esophageal squamous cell carcinoma, ESCC）确诊时已发展至中晚期,临床治疗效果差,是导致我国华北地区ESCC死亡率居高不下的主要原因之一.因此,亟需筛查ESCC特异性、敏感性的生物标志物,以期用于ESCC早期诊断、个体化分子靶向治疗和预后评价. 与相对稳定、携带遗传信息的基因组不同,蛋白质组具有时空变化特性,由此构成生命活动复杂性的物质基础.在病理情况下,蛋白质组能够精确反映患病组织器官的功能状态,因此为疾病的监测提供了窗口.本文总结了ESCC蛋白质组研究现状及差异表达的蛋白质谱,并探讨了ESCC候选分子标志物的潜在临床应用价值.     

血清应答因子在食管鳞癌细胞侵袭转移中的作用

目的:研究血清应答因子(serum response factor,SRF)在人食管鳞癌细胞体外侵袭转移中的意义。方法:选用EC9706-H、EC9706-L和EC109-H、EC109-L两对高低转移细胞系,采用细胞划痕实验验证食管鳞癌高低转移细胞系体外侵袭转移能力的差异;Western blot检测SRF在两对食管鳞癌高低转移细胞系中的差异表达;在EC9706-H、EC109-H细胞中加入CCG(SRF抑制剂)抑制SRF的表达后,检测其侵袭转移能力的变化。结果:细胞划痕实验验证了两对食管鳞癌高低转移细胞系侵袭转移能力的差异;Western blot结果提示SRF在EC9706-H、EC109-H细胞中的表达水平显著高于EC9706-L、EC109-L细胞;在EC9706-H、EC109-H细胞中加入CCG抑制SRF的表达后,其侵袭转移能力明显减退。结论:SRF在高转移性食管鳞癌细胞系中呈现高表达,在低转移性食管鳞癌细胞系中呈现低表达,抑制高转移性食管鳞癌细胞系中SRF的表达后,其侵袭转移能力下降,提示SRF和食管鳞癌的侵袭转移能力呈正相关。     

食管鳞癌组织中的神经纤维分布

目的:探讨食管鳞癌组织中神经纤维的分布情况.方法:应用免疫组化ABC法,探查手术切除的食管鳞癌组织里S100及GAP-43阳性神经纤维的分布情况,并分析其与患者临床病理参数的关系.结果:相对于正常组织,食管鳞癌组织中存在相当数量的S100及GAP-43阳性神经纤维(束)不规则地分布于肿瘤细胞之间,且S100阳性纤维密度大于GAP-43阳性纤维密度;统计分析显示肿瘤组织中纤维密度与患者的肿瘤大小、淋巴结转移相关.结论:食管鳞癌组织中确实存在神经纤维分布,并对肿瘤发展起一定作用.     

食管鳞癌组织中的神经纤维分布

目的：探讨食管鳞癌组织中神经纤维的分布情况。方法：应用免疫组化ABC法,探查手术切除的食管鳞癌组织里S100及GAP-43阳性神经纤维的分布情况,并分析其与患者临床病理参数的关系。结果：相对于正常组织,食管鳞癌组织中存在相当数量的S100及GAP-43阳性神经纤维（束）不规则地分布于肿瘤细胞之间,且S100阳性纤维密度大于GAP-43阳性纤维密度;统计分析显示肿瘤组织中纤维密度与患者的肿瘤大小、淋巴结转移相关。结论：食管鳞癌组织中确实存在神经纤维分布,并对肿瘤发展起一定作用。     

Antitumor Effect of TRAIL on Oral Squamous Cell Carcinoma using Magnetic Nanoparticle-Mediated Gene Expression

We developed a new magnetic nanovector to improve the efficiency and targeting of transgene therapy for oral squamous cell carcinoma (OSCC). Positively charged polymer PEI-modified Fe₃O₄ magnetic nanoparticles were tested as gene transfer vectors in the presence of a magnetic field. The Fe₃O₄ nanoparticles were prepared by a co-precipitation method and had good dispersibility in water. These nanoparticles modified by PEI were combined with negatively charged pACTERT-EGFP via electrostatic interaction. The transfection efficiency of the magnetic nano-gene vector with the magnetic field was determined by a fluorescence-inverted microscope and flow cytometry. The results showed significant improvement compared with the control group (p < 0.05). The magnetic complexes also exhibited up to 6-times higher transfection efficiency compared with commonly used PEI or lipofectin. On the basis of these results, the antitumor effect with suicide gene therapy using pACTERT-TRAIL in vitro and vivo was evaluated. In vitro apoptosis was determined with the Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit. The results suggested that PEI-modified Fe₃O₄ nanoparticles could mediate the killing of Tca83 cells. Furthermore, treatment with pACTERT-TRAIL delivered by magnetic nanoparticles showed a significant cytostatic effect through the induction of apoptosis in a xenograft model. This indicates that magnetic nano-gene vectors could improve the transgene efficiency for Tca83 cells and could exhibit antitumor functions with the plasmid pACTERT-TRAIL. This may be a new way to treat OSCC.