细胞膜糖蛋白及其寡糖链分析方法的研究进展

细胞膜与细胞的各种生命活动如细胞识别粘着、运动迁移、免疫应答、物质运输、信息传导、细胞分裂、细胞分化、衰老及病变、癌变都有密切的关系。细胞表面糖蛋白是细胞膜的主要成分,而糖蛋白的性质及功能又和糖链的结构有关,因此细胞膜糖蛋白中寡糖链的结构及作用机制研究成为生物学基础理论的课题之一。主要综述了近年来细胞膜糖蛋白研究中细胞膜的类别、细胞膜的制备方法、细胞膜糖蛋白的提取与分离纯化、寡糖链的结构分析方法。     

补体与红细胞膜的结合作用

被激活的补体3(C_3),能与红细胞膜结合;C_(3b)与红细胞膜形成的复合物,又激活一系列补体(C_5-C_9),使细胞溶解。有些溶血性疾病与此种补体溶血有关。我们实验曾证明,阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)红细胞对补体溶血敏感。为了探讨PNH补体溶血反应的机理,我们曾用对唾液酸专一结合的鲎血凝集素处理PNH红细胞,表明它能降低补体溶血,并证明它与红细胞膜血型糖蛋白结合。看来鲎血凝集素可能影响红细胞膜与C_(3b)的结     

唾液酸

<正> 糖蛋白和糖脂作为细胞表面的成份,参与许多重要的生理过程。组成糖蛋白和糖脂分子的糖链的十一、二种单糖中,唾液酸有特别的重要性。唾液酸的分子结构不同于一般的戊糖或已糖,并且总是处在糖链的末端——一个十分敏感的位置上,直接参与发生在细胞膜上的许多重要反应。有关唾液酸的研究,已有大量的工作发表,并不断有综述和专著出版。     

夏氏疟原虫入侵时小鼠红细胞膜唾液酸糖蛋白的改变

夏氏疟原虫入侵时小鼠红细胞膜唾液酸糖蛋白的改变刘俊凡,卢义钦（湖南医科大学生化教研室,长沙４１Ｏ０７８〕ＲｏｎａｌｄＬ．ＮｏｇｅｌＯｌｇａＯ．Ｂｌｕｍｅｎｆｅｌｄ（爱因斯坦医学院内科血液学研究室和生化学系,美国纽约１０４６１）关键词夏氏疟原虫;红细胞...     

肝脏去唾液酸糖蛋白受体及其应用

去唾液酸糖蛋白受体 (ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒ,简称ＡＳＧＲ)是数量丰富的一种异源低聚物的内吞受体 ,主要存在于肝脏实质细胞朝向窦状隙一侧的细胞膜表面[1] ,具有对糖的特异性 ,并有特定的生物学功能 ,所以又称为肝糖凝集蛋白或肝凝集素。由于各种糖蛋白在用酶水解或用酸解除去末端唾液酸后 ,暴露出的次末端是半乳糖残基 ,所以ＡＳ ＧＲ的糖结合特异性实际上在于半乳糖基 ,故又称半乳糖特异性受体。ＡＳＧＲ的主要功能是去除去唾液酸糖蛋白和调亡细胞、清除脂蛋白 ,同时又是肝病毒的侵入位点[2 ] 。ＡＳ Ｇ…     

应用凝集素芯片检测肝癌细胞膜表面糖链变化

利用凝集素糖链特异亲和原理构建对细胞膜表面糖链进行即时检测的凝集素芯片体系,检测肝癌发生过程中细胞膜糖链的变化.从H22细胞系、正常小鼠和肝癌模型鼠肝组织中提取细胞进行荧光标记,激光扫描仪检测凝集素位点捕获的细胞,根据凝集素特异亲和性确定细胞膜表面糖表达谱,显微镜下观察捕获细胞的形态.对凝集素芯片捕获细胞的最佳条件进行探讨,用甘露糖抑制试验、流式细胞仪和不同血型红细胞验证了凝集素捕获细胞的特异性.结果显示:正常和肝癌小鼠肝细胞膜表面糖链存在较大差异,正常组只有PSA、DSL、STL、NPL凝集素位点捕获到细胞,实验组只有LTL和DBA位点没有捕获到细胞,提示小鼠肝癌组织细胞膜表面糖链显著增加,细胞膜上唾液酸、乙酰葡萄糖、乙酰半乳糖、甘露糖和半乳糖糖链表达增加,这些糖链及其相关糖蛋白可能在肝癌的发生和发展中起一定作用.该凝集素芯片有较好的稳定性和特异性,可以对细胞膜表面糖链进行动态、即时、通量的检测,为研究细胞膜表面聚糖在细胞发育和癌变等过程中的变化提供了一个技术平台.     

血型糖蛋白C是恶性疟原虫配体PfEBP-2(baebl)的红细胞膜受体

恶性疟原虫(Plasmodium falciparum,Pf)红细胞结合蛋白-2(Pferythrocyte binding protein-2,PfEBP-2)是Duffy结合样红细胞结合蛋白(Duffy-binding-like erythrocyte-binding protein,DBL-EBP)家族的一个成员,长期以来Pf入侵人红细胞时该配体所需的受体迄未被确认。2003年Lobo等采用酶处理的红细胞与缺失不同膜表面蛋白的罕见变种红细胞,显示PfEBP-2不与缺失血型糖蛋白C(GPC)的红细胞结合,并且它与缺失外显子2或外显子3的GPC变种进行的结合亦互有差异,因此证明GPC是PfEBP-2(或称baebl,EBA-140)的红细胞膜受体。他们进一步检出GPC分子上的结合域局限在其外显子2的第14￣22位氨基酸残基范围。PfEBP-2与受体的相互作用需要唾液酸,而不涉及血型糖蛋白A(glycophorin A,GPA)或血型糖蛋白B(GPB),它代表了Pf入侵红细胞的一条新途径。Mayer等继续探索了BAEBL(VSTK)变种与GPC结合的特异性,揭示在该Pf配体变种的第II区,围绕Thr-121的两个Arg残基对保证BAEBL(VSTK)同唾液酸结合的特异反应十分关键。并认为,BAEBL的单个点突变将有助Pf识别各种红细胞表面糖蛋白或糖脂分子上的寡糖,从而显著拓宽了其入侵的范围。     

毛细管电泳飞摩尔水平分析糖蛋白中唾液酸

利用毛细管电泳分析唾液酸2-氨基吖啶酮(AMAC)衍生物方法, 可在飞摩尔水平分析糖蛋白中唾液酸. 重组人促红细胞生成素(rhu-EPO)、人尿胰蛋白酶抑制剂(hu-UTI)中唾液酸分析结果与文献值符合较好; 而牛α₁-酸性糖蛋白(α₁-AGP)分析结果与早期文献值相比, 存在一定差异, 并发现该糖蛋白中除含有5-N-乙酰氨基唾液酸(Neu5Ac)外, 还含数量与Neu5Ac相当的5-N-乙醇酰氨基唾液酸(Neu5Gc).     

唾液酸对精子的作用

唾液酸(又名神经氨酸)是一类带负电的酸性九碳单糖家族的总称。唾液酸具有多样化的分子结构,广泛分布于生物体内,通常与蛋白质和脂结合形成糖蛋白和糖脂,构成细胞膜及糖萼。唾液酸介导了生物体内许多生理功能,与人类健康和疾病息息相关,唾液酸的糖生物学已成为近年来的研究热点。在雄性生殖系统中,唾液酸在精子保护、附睾精子成熟和精卵识别等过程中都有重要作用,该文将对有关研究进展作一综述。     

人红细胞膜血型糖蛋白的研究进展

血型糖蛋白(GP)是红细胞膜中主要含唾液酸的跨膜蛋白,有A、B、C和D四种.GPA是MN血型糖蛋白,GPB表达Ss、U血型,GPC、GPD则是Gerbich抗原,四种血型糖蛋白的结构有不同程度的同源性,尤以同类间的同源性程度最高,GPA在防止红细胞之间、红细胞与血管内皮细胞之间的相互作用有重要功能,并在配体诱导下影响红细胞膜的物理性质.GPC是维持红细胞正常形状、正常物理性质的重要因子.GPA和GPC的功能还分别与带3蛋白、带4.1蛋白有关.     

聚唾液酸与唾液酸的研究进展

唾液酸是一族神经氨酸(Neuraminic acid)的衍生物。聚唾液酸(Polysialic acid)是唾液酸(Sialic acid)单体以α-2,8或α-2,9键连接的直链同聚物,是一些哺乳动物细胞中糖蛋白的组成部分和少数几种细菌的胞外多糖组分。综述了唾液酸和聚唾液酸的结构、性质、生物学功能、生物合成和生产应用。     

细胞因子基因转导对人乳腺癌细胞MHC抗原及细胞膜糖蛋白表达的影响

为探讨细胞因子基因(人IL-2、IL-6)转导对于肿瘤细胞膜MHC抗原及细胞膜糖蛋白表达调控的影响,本文利用脂质体介导的方法,将含人IL-6、IL-2基因的逆转录病毒载体分别导入人乳腺癌细胞系MCF-7细胞中,采用间接免疫荧光染色流式细胞仪测定法,对基因转导的瘤细胞细胞膜糖蛋白及MHC抗原表达进行测定。结果表明经两种基因修饰的MCF-7细胞MHCⅠ型抗原表达均获得增强,此外,基因转导细胞可程度不同地表现出细胞膜多种糖蛋白表达的变化。提示肿瘤细胞膜抗原及糖蛋白表达的改变可能是细胞因子基因转导影响肿瘤细胞免疫原性的重要结构基础。     

植物凝集素串联法富集纯化血清多个亚糖蛋白质组

蛋白质糖基化修饰是哺乳动物中最为常见的一种翻译后修饰,蛋白质的寡糖侧链具有重要的生物学意义,如蛋白质分子间及细胞间相互作用、识别、肿瘤侵袭与转移等.本实验应用寡甘露糖型亲合层析柱、唾液酸型层析柱和O-连接糖蛋白亲合层析柱从血清中序列性提取寡甘露糖型、唾液酸型的N-连接糖蛋白及O-连接的糖蛋白,一维和二维电泳图谱显示血清...     

3′-甲基奶油黄诱癌过程中大鼠肝凝集素活性的变化

 <正> 近年来,人们甚为重视细胞表面成分在肿瘤形成过程中的变化。许多文章报道肿瘤细胞膜的组成、结构、功能与正常者有明显的差别。 哺乳动物的肝凝集素(HL)也是一种细胞膜成分。它专一性地与末端为β-半乳糖苷的糖蛋白及糖脂结合。在体内它介导许多去唾液酸糖蛋白的内香,然后在肝细胞内降解。肝凝集素也可能参与肝细胞间的粘着,并与肿瘤肝转移的形成相关。     

小鼠S_(180)瘤细胞免疫性的初步研究

本文选用灵敏度高,特异性强的酶标免疫吸附测定法(ELISA)及A.D.C.C.测试法(Antibody Dependent Cell mediated Cytotoxicity Assay)检测到以S_(180)瘤细胞免疫的小鼠血清中有抗S_(180)瘤细胞的特异抗体。并初步探讨了S_(180)肿瘤细胞膜上的唾液酸与抗原抗体相互作用的关系。实验表明S_(180)肿瘤细胞经唾液酸酶作用,水解去除瘤细胞表面的唾液酸后,对其与特异抗体的结合反应无明显影响。这提示S_(180)瘤细胞膜表面的糖蛋白上的唾液酸未必直接参与抗原抗体的特异性结合。以上结果为进一步研究患瘤小鼠各阶段的免疫情况及寻求最佳免疫时机,为治疗肿瘤奠定了基础。     

膜上糖蛋白与细胞识别

细胞膜上的糖蛋白在生命活动中起着重要的作用,特别与细胞识别关系密切。细胞识别是指细胞对同种和异种细胞的认识,以及对自己和异己物质的识别。在细胞膜上有许多识别位点,包括膜受体和膜抗原,细胞之间的识別主要通过这些识别位点的作用实现的,现在知道膜上的识别位点大多是糖蛋白。糖蛋白在细胞识别中的重要作用体现在以下几个方面: 细胞粘合与受精作用、细胞分化、酵母菌的有性生殖、粘菌凝聚、海绵细胞的再团聚等等有关。其粘合机制依赖于膜上的糖蛋白。现已从细胞表面分离出促进     

小鼠肝癌与肝正常细胞系ST3Gal和ST6Gal家族mRNA表达差异研究

探讨肝癌细胞系Hepa1-6与肝正常细胞系BNL CL.2唾液酸糖基转移酶ST3Gal和ST6Gal家族mRNA表达的差异以及与细胞膜唾液酸含量的关系,采用RT-PCR方法检测ST3Gal唾液酸转移酶家族6个成员以及ST6Gal唾液酸转移酶家族2个成员mRNA表达差异,用凝集素芯片检测细胞膜表面唾液酸表达情况,结果显示:与正常细胞系BNL CL.2相比,hepa1-6细胞内唾液酸转移酶ST3GalⅠ、ST3GalⅣ、ST3GalⅥ呈现高表达,ST3GalⅤ低表达,ST3GalⅡ、ST3GalⅢ表达无显著性差异,两细胞系内均为检测出ST6GalⅠ表达,ST6GalⅡ表达无显著差异;hepa1-6细胞膜α2-3和α2-6连接唾液酸含量均显著增加;提示ST3GalⅠ、ST3GalⅣ、ST3GalⅤ、ST3GalⅥ可能与肝癌发生过程相关,ST3GalⅠ、ST3GalⅣ、ST3GalⅥ可能与肝癌细胞膜α2-3唾液酸含量增加相关,ST6Gal家族对细胞膜α2-6连接唾液酸含量增加无贡献.     

我国青年人红细胞膜血型糖蛋白变异的筛查

采用免疫印迹技术首次调查我国人群红细胞膜血型糖蛋白(Glycophorins; GP)的变种。受检者114人,年龄17—25岁,男80名,女34名。以对GP分子不同区域具特异性的4种抗血清为探针,调查发现3个类型的10例变种,总检出率达8.8％。其中汉族的检出率为5.7％,黎族为25％,其余民族中未检出变种。4例Ⅰ型先证者红细胞膜GP的免疫印迹图谱与st~a表型相似,其中1例经血清学检查确证。1例Ⅱ型缺失δGP。其余5例Ⅲ型变种尚未见有文献报道。7例GP变种红细胞膜的唾液酸含量明显高于正常人。     

用Bialsche试剂直接测定红细胞膜上唾液酸量

唾液酸是红细胞膜上的重要组分。我们改进了红细胞膜上唾液酸含量测定方法不需预先水解膜样品而用Bidlsche试剂直接测定唾液酸含量。本法具有准确、操作简便、快速等优点,尤适用于测定去血红蛋白的红细胞膜上唾液酸量。本文应用直接法分析比较了不同“年龄”红细胞膜上唾液酸含量,发现年老红细胞的唾液酸量明显下降,与年青红细胞相比下降33%。     

型糖尿病患者红细胞膜中性糖、氨基糖及唾液酸含量的改变

 为阐明Ⅱ型糖尿病（ Ｎ Ｉ Ｄ Ｄ Ｍ ）患者红细胞膜的化学组成在非酶糖基化（ Ｎ Ｅ Ｇ）影响下发生的变化,采用毛细管气相色谱法和分光光度法测定了 ２０ 名正常人和 １９ 例Ⅱ型糖尿病患者红细胞膜的 ４ 种结合中性糖与 ２ 种氨基糖和唾液酸含量以及 ４ 种寡糖链上的末端中性糖和唾液酸含量．结果表明, Ｎ Ｉ Ｄ Ｄ Ｍ 患者红细胞膜几种结合单糖（ Ｇｌｃ, Ｆｕｃ, Ｇｌｃ Ａ, Ｇａｌ Ａ）与游离单糖（ Ｇｌｃ, Ｇａｌ, Ｍａｎ, Ｆｕｃ）含量以及唾液酸含量均较正常对照组明显降低（ Ｐ＜ ００１ 或 ００５）．据此推测,由于患者红细胞膜蛋白的重度糖基化导致某些膜结构蛋白的氧化损伤,细胞膜糖类含量的减少,可能是重度糖基化的继发后果．