两种软体动物神经系统一氧化氮合酶的组织化学定位

运用一氧化氮合酶(NOS)组织化学方法研究了软体动物门双壳纲种类中国蛤蜊和腹足纲种类嫁Qi神经系统中NOS阳性细胞以及阳性纤维的分布。结果表明：在蛤蜊脑神经节腹内侧,每侧约有10-15个细胞呈强NOS阳性反应,其突起也呈强阳性反应,并经脑足神经节进入足神经节的中央纤维网中;足神经节内只有2个细胞呈弱阳性反应,其突起较短,进入足神经节中央纤维网中,但足神经节中,来自脑神经节阳性细胞和外周神经系统的纤维大多呈NOS阳性反应;脏神经节的前内侧部和后外侧部各有一个阳性细胞团,其突起分别进入后闭壳肌水管后外套膜神经和脑脏神经索。脏神经节背侧小细胞层以及联系两侧小细胞层的纤维也呈NOS阳性反应。嫁Qi中枢神经系统各神经节中没有发现NOS阳性胞体存在;脑神经节、足神经节、侧神经节以及脑—侧、脑—足、侧—脏连索中均有反应程度不同的NOS阳性纤维,这些纤维均源于外周神经。与已研究的软体动物比较,嫁Qi和前鳃亚纲其它种类一样,神经系统中NO作为信息分子可能主要存在于感觉神经。而中国蛤蜊的神经系统中一氧化氮作为信息分子则可能参与更广泛的神经调节过程。     

脑血管的一氧化氮合酶分布的组织化学研究

本研究用ＮＡＤＰＨ－ｄ组织化学方法观察了脑表面及脑实质（皮质、纹状体）血管壁的ＮＯＳ阳性细胞。结果发现,在正常脑大于５０μｍ的血管壁上可见有内皮型一氧化氮合酶（ｅＮＯＳ）阳性内皮细胞,并有神经元型一氧化氮合酶（ｎＮＯＳ）阳性细胞紧贴于管壁或发出突起布于管壁。在神经毒损伤的纹状体中,可见有诱导型一氧化氮阳性胶质细胞,终足附于脑血管壁上,而周围未受损伤的脑实质中未见有诱导型一氧化氮合酶阳性的胶质细胞     

河北环毛蚓神经系统 一氧化氮合酶的组织化学定位

用依赖还原型辅酶Ⅱ的黄酶组织化学方法,研究了环节动物门寡毛纲种类河北环毛蚓（Pheretima tschiliensis)神经系统k 一氧化氮合酶(NOS)阳性细胞及阳性纤维的分布,结果表明,河北环毛蚓神经系统中脑神经节背侧有大量细胞呈现NO强阳性反应,胞体和突起染色明显。咽下神经中偶尔能见少数染色较浅的神经元。在脑神经节腹内侧、围咽神经、 咽下神经节外侧部及腹神经链中都有一氧化氮合酶阳性纤维存在脸染色很深,实验结果表明,在环节动物中作为信息分子的一氧化氮已广泛存在于神经系统中。     

大白鼠中缝核一氧化氮合酶阳性神经元的组织化学观察

中脑和脑桥部中缝核被认为与睡眠有直接和间接关系的重要脑结构。本文用一氧化氮合酶（ＮＯＳ）组织化学结合荧光组织化学方法证实在中缝核群中,ＮＯＳ阳性神经元主要定位于这两个脑部的中缝核内,ＮＯＳ产生的ＮＯ能使脑血管扩张,参与脑血流的调节。提示这二个脑部中缝核内的ＮＯＳ阳性神经元可能作为多种因素之一,参于睡眠状态下基本脑血流的维持     

虎斑颈槽蛇脑一氧化氮合酶NADPH-d组织化学定位研究

运用NADPH—d组织化学方法,对虎斑颈槽蛇脑的一氧化氮合酶进行了定位研究。结果表明：阳性反应主要位于脑的大脑半球、视上核、室旁核、联合下器官、内侧纵束、室旁灰质、蓝斑以及网状结构等区域,比较讨论了与其他脊椎动物的异同。分析一氧化氮作为神经信号分子除了参与各类动物共有的一些机能的调节以外,不同类群或种类中还参与某些特定生理功能的调节。     

多肠目薄背涡虫生殖系统结构及一氧化氮合酶组化研究

运用常规组织学方法和NADPH-d组织化学方法,研究了薄背涡虫 Notoplana humilis 生殖系统的组织结构和一氧化氮合酶的分布.其雄性生殖系统包括精巢、储精囊、阴茎、雄性生殖孔,精巢壁由一薄层薄膜组成,每个精巢内都含有不同发育时期的雄性生殖细胞,且精子发育无明显同步性;储精囊呈螺旋状排列在雄性生殖孔附近,囊壁由单层扁平上皮组成;阴茎为粗大的球形,外壁由柱状上皮细胞和数层肌细胞组成.雌性生殖系统包括输卵管、生殖腔、雌性生殖孔和受精囊,但不形成集中的卵巢和卵黄腺.雌雄生殖孔、生殖腔、受精囊、阴茎等部位呈NADPH-d强阳性反应.     

东亚三角涡虫胰蛋白酶Djtry的表达和酶活分析

通过对东亚三角涡虫胰蛋白酶Djtry氨基酸序列比对分析,发现保守的催化三联体结构中第一位的His被Lys所取代。为了探究这种突变是否会对胰蛋白酶的活性有影响,文章构建了原核表达重组质粒pET-28a-Djtry,转化到E.coli BL21中,利用IPTG诱导表达,对表达的重组蛋白进行变性、复性、纯化以及Westernblotting鉴定,获得成分均一的活性蛋白。利用牛胰蛋白酶为标准品,胰蛋白酶特异性底物BAEE,检测Djtry酶活力与比活力。SDS-PAGE电泳表明诱导表达的融合蛋白为包涵体,分子量约为26 kDa,Western blotting结果显示为目的蛋白,对复性纯化的目的蛋白进行酶活检测发现,突变型胰蛋白酶Djtry仍然保持了胰蛋白酶催化性质,但是催化活性相对较弱。     

东亚三角涡虫胰蛋白酶Djtry的表达和酶活分析

通过对东亚三角涡虫胰蛋白酶Djtry氨基酸序列比对分析, 发现保守的催化三联体结构中第一位的His被Lys所取代。为了探究这种突变是否会对胰蛋白酶的活性有影响, 文章构建了原核表达重组质粒pET-28a- Djtry, 转化到E.coli BL21中, 利用IPTG诱导表达, 对表达的重组蛋白进行变性、复性、纯化以及Western blotting鉴定, 获得成分均一的活性蛋白。利用牛胰蛋白酶为标准品, 胰蛋白酶特异性底物BAEE, 检测Djtry酶活力与比活力。SDS-PAGE电泳表明诱导表达的融合蛋白为包涵体, 分子量约为26 kDa, Western blotting结果显示为目的蛋白, 对复性纯化的目的蛋白进行酶活检测发现, 突变型胰蛋白酶Djtry仍然保持了胰蛋白酶催化性质, 但是催化活性相对较弱。     

蓖麻毒素诱导肝癌细胞生成一氧化氮合酶——免疫组织化学研究

应用免疫组织化学方法观察不同浓度蓖麻毒素作用于肝癌细胞不同时间后,对iNOS的诱导作用。结果显示,未受蓖麻毒素作用的肝癌细胞胞浆iNOS呈阴性反应;当受到蓖麻毒素诱导后,才能在胞浆内合成,不同浓度的蓖麻毒素对肝癌细胞诱导iNOS的产生没有明显差别,而蓖麻毒素诱导iNOS的表达有明显的时间依赖性,2h没有表达,4h才出现,随着时间的延长,到8h时仍然有明显的表达,由于iNOS的合成涉及基因转录,蛋白质合成等过程,故需诱导数小时后显示酶活性,但一经诱导生成,酶活性持续时间长,蓖麻毒素诱导iNOS的产生在抗癌应用中具有重要的价值。     

牛蛙视网膜诱导型一氧化氮合酶免疫组化定位

用免疫组织化学方法研究了诱导型一氧化氮酶（iNOS)在牛蛙视网膜中的表达。结果显示,在正常状态视网膜中,无长突细胞呈弱阳性反应;节细胞层、双极细胞,水平细胞和光感受器内段呈阴性反应,在暗适应状态下,神经节细胞,内核层的无长突细胞呈强阳性反应;一些双极细胞,水平细胞和光感受器内段呈弱阳性反应,提示NO主要在暗适应状态下参与视网膜的信息传递过程。     

日本三角涡虫hsp70 cDNA克隆及原核表达

热休克蛋白70 是热休克蛋白家族中的重要成员, 它在保护生物体免受各种胁迫中发挥重要作用。由于其惊人的再生能力, 淡水涡虫作为研究再生和发育的模式动物受到研究者关注。但是, 有关涡虫抗逆性的分子机制却少有报道。研究采用 RACE (Rapid amplification of cDNA end) 技术首次从日本三角涡虫中克隆出hsp70 (Djhsp70)全长cDNA 序列。Djhsp70 cDNA 全长2066 bp, 含有1947 bp 的开放阅读框, 编码648 个氨基酸, 分子量71.18 kD, GenBank 登录号EU380241。DjHSP70 的氨基酸含有真核生物HSP70 家族蛋白的三个标签序列(9–16 位的IDLGTTYS、199—206 位的 DLGGGTFD、334–339 位的IVLVGG)和末端高度保守序列EEVD。经BLAST 检索分析, Djhsp70 的核苷酸序列和推定的氨基酸序列与目前已知HSP70 家族成员高度同源。有趣的是, HSP70 亲缘关系分析表明: 涡虫更靠近脊椎动物, 而与无脊椎动物果蝇和线虫相距较远。为了制备抗体研究DjHSP70 的组织学定位, 实验还成功构建了DjHSP70 表达载体, 在IPTG 诱导下表达出约76 kD 的融合蛋白。Djhsp70 cDNA 的克隆与表达载体的构建为下一步工作奠定了基础。       

大鼠下丘脑内一氧化氮合酶阳性神经元的分布

用ＮＡＤＰＨ－ｄ组织化学方法观察了大白鼠下丘脑内一氧化氮合酶（ＮＤＳ）阳性神经元的分布及形态特征。结果显示：在视上核、室旁核的大细胞部、环状核、穹窿周核、下丘脑外侧区、下丘脑腹内侧核、下丘脑背内侧核、乳头体区大部分核团均可见一氧化氮合酶阳性神经元聚集成团。在视前内侧区、视前外侧区、下丘脑前区、下丘脑背侧区、下丘脑后区、室周核、室旁核小细胞部及穹窿内可见散在的一氧化氮合酶阳性神经元。室周核内可见呈阳性反应的接触脑脊液神经元的胞体及突起。一氧化氮合酶阳性神经元大多可见突起,有的突起上可见１～２级分支,并可见膨体。下丘脑大部分区域内可见阳性神经纤维。弓状核内可见许多弧形纤维连于第三脑室室管膜和正中隆起。     

扬子鳄中脑视叶NOS、AChE阳性神经元的分布

目的观察扬子鳄中脑视叶一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)和乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)阳性神经元的形态和分布,为扬子鳄脑的比较解剖学积累资料,为其机能研究提供形态学依据。方法采用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸黄递酶(NADPH-d)法和亚铁氰化酮法观察扬子鳄中脑视叶NOS和AChE阳性神经元的分布和特征,并作统计学处理。结果扬子鳄中脑视叶有NOS和AChE阳性神经元分布,为大、中、小型细胞,以中、小型细胞为主,胞体呈椭圆形、三角形、圆形和梭形。结论扬子鳄中脑视叶有NOS和AChE阳性神经元分布。     

急性给锂小鼠大脑皮层NOS活性与蛋白表达的时程变化

目的探讨急性给锂小鼠大脑皮层一氧化氮合酶(NOS)活性与蛋白表达的时程变化及其意义.方法选用昆明小鼠40只,分为对照组和腹腔注射1.5mmol/Kg氯化锂(LiCl)即刻、0.5h、1h、3h、6h、12h、24h组,每组5只.采用NADPH-d黄递酶组织化学和ABC免疫组化法,观察急性给锂后不同时程小鼠大脑皮层NOS和nNOS阳性神经元数目的变化.结果急性给锂即刻小鼠大脑皮层NOS和nNOS阳性神经元数目明显增加(P＜0.01),1h后达到高峰(P＜0.01),6h和12h恢复到正常水平(P＞0.05),24hNOS阳性神经元又明显增高(P＜0.01),nNOS阳性神经元处于正常水平(P＞0.05).结论本实验提示急性给锂对小鼠大脑皮层NOS和nNOS阳性神经元数目有一定影响,这种变化可能是锂影响脑发育及锂的神经毒性的机理之一.     

大鼠尾壳核头部一氧化氮合酶阳性神经元区域性分布和脑缺血后变化

用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸黄递酶法，观察了大鼠尾壳核头部背内侧区，背外侧区，腹内侧区和腹外侧区一氧化氮合酶阳性神经元的分布和形态特征。并在夹闭双侧颈总动脉２小时后，观察这些区域一氧化氮合酶阳性神经元的变化。     

豚鼠小肠神经节丛的NADPH—黄递酶组织化学观察

目前已知,ＮＡＤＰＨ－－黄递酶组化法可选择性地显示－－氧化氮合成酶（ＮＯｓｙｎｔｈａｓｅ,ＮＯＳ）神经元。因此,我们以ＮＡＤＰＨ－黄递酶组化法,观察了豚鼠小肠肌间神经丛和粘膜下神经丛的神经网格以及ＮＯＳ神经元。结果表明,三段小肠肌间神经丛的神经网眼大小和形态有明显差异,与对应的粘膜下神经丛相比,差异更显著。在肌间神经丛中,ＮＡＤＰＨ－黄递酶阳性神经元胞体大小不等;其长突起伸入节间束,而短突起较多,并可见短突起彼此连接．构成节内偶见的局部神经元回路。从小肠上段到下段,ＮＯＳ神经元数量呈下降趋势。在粘膜下神经丛,我们也观察到少数ＮＯＳ神经元。     

不同生殖状态雌性大鼠下丘脑视上核和室旁核内一氧化氮合酶神经元的变化

为了探讨下丘脑视上核 (SON)和室旁核 (PVN)内的一氧化氮 (NO)水平与生殖活动的关系 ,本实验应用 NADPH-黄递酶组织化学和 NOS免疫组织化学 ,研究了妊娠期、哺乳期和正常雌性大鼠 SON和 PVN内 NO合酶 (NOS)神经元的变化规律。结果发现 ,妊娠期大鼠的 NOS神经元数目、胞体截面积和免疫反应产物的灰度值在 PVN分别为 49.8± 3.9、15 2 .4± 14.1μm2 和 15 3.4± 8.9;在 SON分别为 2 9.2± 3.7、 16 3.5± 13.8μm2 和 140 .5± 7.2。 SON和 PVN的前两项指标均显著高于正常大鼠 (P<0 .0 1) ,而灰度值显著低于正常大鼠 (P<0 .0 1)。哺乳期大鼠 PVN的 NOS神经元数目和胞体截面积分别高于正常大鼠 2 8%和 9% ,而灰度值低于正常大鼠 7% ;在 SON,则分别高 75 %、 11%和低 9% ,以上三项指标均有显著性差异 (P<0 .0 1)。哺乳期大鼠 SON的 NOS神经元数目亦显著高于妊娠期大鼠 (P<0 .0 1)。这些结果提示 ,雌性大鼠在妊娠期和哺乳期 ,其 SON和 PVN内的 NOS活性上调     

胎儿视皮质皮质下层含─氧化氮合酶神经元的发育

本文用出生前１７周至３６周胎儿标本１０个,死后４小时内作常规灌注固定,取脑后作视皮质冰冻切片（３０ｕｍ）,用一氧化氮合酶（ＮＯＳ）组织化学法孵育切片２～４小时,在视皮质皮质下层（ＳＰ）可见ＮＯＳ强阳性神经元。这些神经元胞体大小不一、形态各异、突起显示呈高尔基染色外观,部分神经纤维含有膨体和生长锥。２０周以后,从ＳＰ层有ＮＯＳ阳性神经纤维伸入皮质板或白质。随着胎龄增长,ＮＯＳ阳性神经元密度增加,胞体切面积增大,神经元由幼稚趋向成熟。本研究还观察到胎儿ＳＰ内ＮＯＳ阳性神经元可从形态上明显地划分为两个阶段,并推测ＮＯＳ合成的一氧化氮（ＮＯ）在突触建立和修饰、突触间信息传递、传入纤维对靶器官的识别和脑组织局部血流调节等过程中起着重要作用。     

大鼠胃肌间神经丛中NOS阳性神经元的组织化学研究

采用ＮＡＤＰＨ┐黄递酶（ＮＤＰ）组织化学技术在整装铺片上对大鼠胃肌间神经丛中一氧化氮合酶（ＮＯＳ）阳性神经元进行定量和定位研究。结果显示：大鼠胃肌间神经丛中ＮＯＳ阳性神经元密度（个／ｍｍ２）分别为：６２．１±３７．７（幽门部）、４３．４±３１．７（胃体）、３１．６±２７．８（胃底）。胃底部神经节内神经元数量较少,神经元胞体较大,染色较深;幽门部神经节内神经元数量较多,胞体大小不等,染色深浅不一;胃体部的则介于两者之间,呈过渡态。结果表明：胃各部肌间神经丛中ＮＯＳ阳性神经元的差异可能与胃的生理功能密切相关