蛇毒中γ-谷氨酰转肽酶

γ-谷氨酰转肽酶 (简称γ-GT)广泛存在各种哺乳动物组织中,在氨基酸转运中起重要作用。我们对分属于眼镜蛇科、蝰科和海蛇科的九种毒蛇的蛇毒进行研究,发现蛇毒中存在γ-GT,但各种蛇毒的总酶活力差异很大,以眼镜王蛇和眼镜蛇毒含量较丰富。聚丙烯酰胺凝胶电泳和凝胶等电聚焦电泳分析指出,大多数蛇毒含多种形式的γ-GT,存在分子量与等电点不同的酶区带。     

三种蛇毒中三种酶的研究

我们选择分属三个不同蛇科的眼镜王蛇(Ⅰ,属眼镜蛇科)、尖吻蝮蛇(Ⅱ,属蝮亚科)和青环海蛇(Ⅲ,属海蛇科)分泌的原毒液,分别测定它们的γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT,E.C.2.3.2.2)、乳酸脱氢酶(LDH,E.C.1.1.1.27)和碱性磷酸酶(AKP,E.C.3.1.3.1)总酶活力,并应用浓度梯度聚丙烯酰胺电泳(PAGE)和等电聚焦电泳,比较上述三种酶的电泳表现。初步结果,总酶活力为,γ-GT:(Ⅰ)>(Ⅲ)>(Ⅱ)、LDH:(Ⅲ)>(Ⅰ)或(Ⅱ)、AKP:(Ⅰ)>(Ⅲ)>(Ⅱ);浓度梯度PAGE各呈不同酶谱,每种酶均有几种不同估计分子量;等电聚焦电泳显示各不相同等电点的多条酶带。此结果说明上述三种蛇毒中三种酶均存在多种形式,具多型性。     

人类食管癌γ-谷氨酰转肽酶性质的研究

 从人类食管癌组织、正常食管粘膜、以及正常肾脏组织部分提纯γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT),分析比较其生物化学及免疫化学性质,结果如下:(1)人类正常食管粘膜癌变后,γ-GT活性升高。(2)食管癌γ-GT的酶动力学性质(Km及最适pH)与正常组织相同。(3)4—20％线性梯度PAGE分析,食管癌γ-GT呈现100kD左右及380kD左右两个分子群,前者活性较高。正常食管粘膜γ-GT中,缺少100kD左右分子群,此分子群可能在癌变中有重要意义。(4)食管癌组织γ-GT,与正常组织γ-GT的抗原性相同。(5)食管癌γ-GT富含D-甘露糖、D-葡萄糖及N-乙酰-氨基葡萄糖,分子中的糖结构高度不均一,其与100kD左右分子群的关系,值得深入研究。     

青环海蛇蛇毒组份中的胰蛋白酶抑制剂

青环海蛇属海蛇科,在我国南海与东海很常见。它的毒液有很强的毒性,其中含有神经毒素及多种蛋白质(Liuet al.,1973,1974;苏拔贤,曾家荣等,1984)。 已知蝰蛇科与眼镜蛇科蛇毒中含有蛋白酶抑制剂(Sadaaki Iwanaga et al.,1975与Yasuji Hokama et al,1976)。但尚未见关于海蛇科蛇毒中有胰蛋白酶抑制剂的实验报道。我们的工作中,初步发现海蛇科的青环海蛇蛇毒及其组份表现胰蛋白酶抑制剂活性。     

大鼠肾脏γ-谷氨酰转肽酶的纯化及某些性质的初步研究

<正> γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)属于质膜结合酶,广泛分布于哺乳动物各脏器组织,以肾脏含量最高。国外已有报道从许多正常组织及肝癌组织制备出高纯度的γ-GT制品。我们参照有关方法,结合本实验室条件成功地建成了大鼠肾脏γ-GT纯化制备方法,并对该制备物的某些特性进行了初步研究,报道如下:     

壳寡聚糖对变形链球菌乳酸脱氢酶及γ谷丙转氨酶的影响

目的 研究壳寡聚糖对变形链球菌乳酸脱氢酶（LDH）及γ谷丙转氨酶（γ-GT）的影响。方法 将变形链球菌接种在含壳寡聚糖的培养基中,测定培养上清液中乳酸脱氢酶及γ谷丙转氨酶等细胞内酶的含量。结果 菌液上清中的LDH和γ-GT2种细胞内酶含量显著高于空白对照组。表明接种在含壳寡聚糖培养基中的细菌出现了明显的细胞内酶溢出,并与浓度相关。结论 壳寡聚糖对细菌的细胞壁有破坏作用,可能是壳寡聚糖具有防龋功能的原因。     

颈棱蛇蛇毒金属蛋白酶基因扩增及系统进化分析

[目的]扩增颈棱蛇蛇毒金属蛋白酶基因,并对其进行系统进化分析。[方法]通过PCR方法扩增颈棱蛇蛇毒金属蛋白酶基因,使用Lasergene Meg Align 8.1.3软件对多个蛇种的蛇毒金属蛋白酶序列进行比对,使用MEGA 6.06对颈棱蛇和其它蛇种的蛇毒金属蛋白酶氨基酸序列进行进化分析。[结果]颈棱蛇蛇毒金属蛋白酶编码区长1 854 bp,编码617个氨基酸残基。该酶的核酸序列与绿栖林蛇、银环蛇、舟山眼镜蛇、圆斑蝰蛇和尖吻蝮蛇的序列相似度分别为82.1%、79.2%、79.1%、75.2%和75.7%,氨基酸序列相似度分别为68.9%、63.3%、63.1%、60.3%和60.1%。进化分析显示,颈棱蛇和同属于游蛇科水游蛇亚科的波加丹游蛇亲缘关系最近,其次为游蛇科美洲钝头蛇亚科的绿栖林蛇,与眼镜蛇科和蝰科这两个科亲缘关系最远,与非洲蛇科的小鳞穴蝰亲缘关系介于游蛇科和眼镜蛇科之间。[结论]蛇毒金属蛋白酶可以作为蛇种进化分析的一种重要参考基因。     

中华眼镜蛇蛇毒因子(CVF)对补体系统的作用及与人补作C_3和其他蛇毒抗原性关系

中华眼镜蛇蛇毒经DEAE-Sepharose CL-6B。HPLC等多次柱层析分离出有抗补体及溶血活性的眼镜蛇蛇毒因子(Cobra venom factor,CVF),纯化后的CVF在聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱上呈单一区带,分子量为225000—230000,等电点为6.20。用二硫苏糖醇还原经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳得三类亚基,其分子量总和为237,000。 体外抗补体及溶血试验表明,CVF的作用是通过补体旁路途经使总补体活力下降。双向免疫电泳鉴定,发现CVF与人血清作用后,其中补体成分C_3分子的抗原性发生改变,则表明CVF的作用是通过激活补体成分C_3而发挥的。给豚鼠腹腔注射CVF(0.15ug/g体重)后,其血清总补体水平下降到正常值的3％以下,7天后回升,13天后恢复到正常水平。 单相免疫电泳表明,CVF与人补体C_3抗血清间无任何交叉免疫反应,但人血清与CVF抗血清间有微弱的免疫沉淀反应。另外,CVF的氨基酸组成与人补体C_3也较为相似。鉴定还表明眼镜蛇科中四种蛇毒与CVF抗血清有强烈的免疫沉淀反应,蝰蛇毒及海蛇毒也有免疫沉淀反应,但只有眼镜蛇毒具有抗补体活性。     

中华眼镜蛇咬伤局部坏死的治疗概况

<正>中华眼镜蛇(Naja naja atra,Chinese cobra)俗称吹风蛇或饭铲头,从属眼镜蛇科,是我国的十大毒蛇之一,主要分布在我国长江以南各省区[1]。中华眼镜蛇咬伤病情急,变化快,是急诊常见的危重病症之一。由于其毒性成分复杂,故临床上表现多样,主要表现为皮肤软组织局部肿胀、坏死以及多器官功能障碍综合征(MODS)[2],预后不良者需要植皮或截肢,严重者可危及生命。如何有效的防治中华眼镜蛇咬     

蛇与人的见闻

泰国有很多蛇类,大多数是无害的,但也有相当多种毒蛇。眼镜蛇、马来亚蝰蛇、金环蛇、普通蝰蛇以及许多目前研究很少的有毒海蛇,都可以在这个王国里找到。众多的蛇使居住在泰国的人们屡屡遭殃,仅首都曼谷的 Chulalongkorn 大学附属医院(简称“Chula”医院),每     

中华眼镜蛇蛇毒因子(CVF)对补体系统的作用及与人补体C[3]和其他蛇毒抗原性关系

中华眼镜蛇蛇毒经DEAE-Sepharose CL-6B、HPLC等多次柱层析分离出有抗补体及溶血活性的眼镜蛇蛇毒因子（Cobra venon factor,CVF)，纯化后的CVF在聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱上呈单一区带，分子量为225000—230000，等电点为6.20。用二硫苏糖醇还原经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳得三类亚基，其分子量总和为237000。体外抗补体及溶血试验表明，CVF的作用是通过补体旁路途经使总补体活力下降。双向免疫电沪鉴定，发现CVF与人血清作用后，其中补体成分C[3]分子的抗原性发生改变，则表明CVF的作用是通过激活补体成分C[3]而发挥的。给豚鼠腹腔注射CVF（0.15 μg/g体重）后，其血清总补本水平下降到正常值的3%以下，7天后回升，13天后恢复到正常水平。单相免疫电泳表明，CVF与人补体C[3]抗血清间无任何交叉免疫反应，但人血清与CVF抗血清间有微弱的免疫沉淀反应。另外，CVF的氨基酸组成与人补体C[3]也较为相似。鉴定还表明眼镜蛇科中四种蛇毒与CVF抗血清有强烈的免疫沉淀反应，蝰蛇毒及海蛇毒也有免疫沉淀反应，但只有眼镜蛇毒具有抗补体活性。     

《动物学研究》增刊简介

《动物学研究》第2卷第4期增刊(1981) 本期增刊为“蛇毒研究与蛇伤治疗”。主要内容是:福建产圆斑蝰蛇(Vipera russclli siamensis)蛇毒磷酯酶A的分离纯化及部分性质;毒性磷酯酶A_2的氨基酸组成和N-末端部分氨基酸顺序测定;浙江蝮蛇毒碱性磷脂酶A的分离纯化及性质;我国10种蛇毒磷脂酶A活力比较;广东金环蛇细胞毒素Ⅷ的化学组成和部分一级结构;眼镜蛇膜毒素对菠菜叶绿体光合膜的影响;中华眼镜蛇毒膜毒素对鼠肝线粒体的作用;眼镜王蛇毒中L-氨基酸氧化酶的分离纯     

人类红细胞膜γ-谷氨酰转移酶活性探讨

肝、肾、血清等组织中的γ-谷氨酰转移酶(γ-GT,EC2.3.2.2)已有广泛深入的研究,而红细胞中γ-GT的研究很少,红细胞膜γ-GT活性更鲜为人知。本文用γ-谷氨酰-α-萘胺为基质探讨人类红细胞膜是否有γ-GT活性,以及在某些生理情况和病理情况是否会有差异。     

抗中华眼镜蛇毒鸡卵黄抗体的制备及其效价测定

目的探索免疫鸡制备高效价抗眼镜蛇毒抗体的新方法。方法用中华眼镜蛇原毒作抗原免疫22周龄的莱航母鸡,水溶法粗提抗体,DEAE Sepharos FF柱纯化,切向流超滤膜脱盐及浓缩,免疫电泳及双向免疫扩散法进行鉴定及效价测定,采用BCATMProte in Assay K it测定蛋白含量。结果鸡卵黄经水溶法的粗提物与中华眼镜蛇毒即有较明显沉淀反应,其效价随着纯度的提高而增强。将马源性抗血清的蛋白质含量调至与浓缩的IgY相同(2mg/m l),经双向免疫扩散及免疫电泳鉴定,该抗体不但对中华眼镜蛇毒有特异性结合,与孟加拉眼镜蛇毒亦有较强的交叉免疫活性,其效价较马抗眼镜蛇毒血清高4倍以上。结论用中华眼镜蛇原毒制备的IgY抗体,其效价较马抗血清有显著提高,并与孟加拉眼镜蛇毒有高度交叉免疫。本实验为抗眼镜蛇IgY的应用及其它抗蛇毒IgY的制备奠定了基础。     

肾脏 γ 谷氨酰转肽酶的纯化、生化性质及免疫组织化学研究

用Triton X100提取、菠萝蛋白酶处理、硫酸铵沉淀、DEAE Cellulose 52离子交换柱层析及Sephadex G150凝胶柱层析,从人正常肾脏、大鼠肾脏成功地制备了γ谷氨酰转肽酶(γ-GT),其纯化倍数为713.5,比活性264U/mg蛋白,达到了匀质化纯度。用此酶作抗原免疫家兔得到了高效价兔抗人、兔抗鼠γ-GT抗血清,再纯化制成相应的γ-GTIgG,检查其纯度和特异性均给出满意的结果。在此基础上又建立了免疫化学、免疫组织化学的研究方法,并用于实验性肝癌的研究中。     

中国的毒蛇和抗蛇毒血清

我国产有近五十种毒蛇中,具有剧毒且对人畜危害较大者,约有十几种,即银环蛇,眼镜蛇,金环蛇,眼镜王蛇,蝰蛇,蝮蛇,尖吻蝮,竹叶青,烙铁头蛇及常见的几种海蛇。我国抗蛇毒血清的研制,一直未得到应有的重视,及至1970年始有抗蛇毒血清供临床使用。目前计有四种产品,即精制抗蝮蛇毒血清,精制抗尖吻蝮蛇毒血清,精制抗银环蛇毒血清和精制抗眼镜蛇毒血清。现正陆续研制抗蝰蛇毒血清,抗金环蛇毒血清等,为治疗我国毒蛇咬伤中毒患者提供可靠的特效药。     

大鼠尿中酶类参考值检测

目的调查正常大鼠尿液样本中酶类参考值范围。方法采集95只正常SD大鼠的4 h尿液,用生化仪检测尿液中的N-乙酰基-β-D氨基葡萄糖酶（NAG）、碱性磷酸酶（ALP）、谷氨酰氨基转移酶（γ-GT）和乳酸脱氢酶（LDH）的值,参考范围以95%百分位上界表示。结果参考值范围为,雌性：NAG〈5.3 U/L,ALP〈110.8 U/L,γ-GT〈753.0 U/L,LDH〈32.6 U/L;雄性：NAG〈27.3 U/L,ALP〈329.0 U/L,γ-GT〈769.8 U/L,LDH〈40.0 U/L。以/g Cre为单位的参考值范围,雌性：NAG〈28.9 U/g,ALP〈723.5 U/g,γ-GT〈1763.2 U/g,LDH〈113.1 U/g;雄性：NAG〈84.3 U/g,ALP〈680.2 U/g,γ-GT〈2522.3 U/g,LDH〈121.8 U/g。结论尿中酶类参考值范围为药物肾毒性评价提供了背景数据。     

蛇伤引起急性肾功能衰竭20例报告

本文报告蛇伤引起急性肾衰20例,蝰蛇、五步蛇、眼镜蛇、竹叶青蛇咬伤均可发生急性肾衰,而以蝰蛇引起者最多17/20。经综合治疗,治愈17例、病情恶化自动出院1例、死亡2例,死于严重中毒、尿毒症、DIC、脑出血、脑疝或循环衰竭。本文并对蛇伤引起急性肾衰的临床特点及其综合治疗进行探讨。     

蛇的天敌——獴

蛇为毒虫,但它也有自然天敌。不少动物能打败它,甚至把它消灭。如,满身长刺的小刺狸可以巧妙地吃掉蝰蛇。獴更是毒蛇的劲敌。 獴和眼镜蛇的搏斗场面,十分精彩激烈。笔者在山区,曾有眼福饱赏了战斗场面。别看这个貌似黄鼠狼的小兽獴,凶残的眼镜蛇也不是它的对手。开始,獴不停地在眼镜蛇周围跳来跳去,故意激怒眼镜蛇。这么一来,只见那眼镜蛇忍无可忍,一怒之下,把脖子气得粗粗的,还噗噗地喷着气,分叉的舌头也迅速地吞吐着,向獴猛扑过去。可是獴很灵活地一闪,就躲过了蛇的攻击。随后,獴仍在眼镜蛇周围跳跃挑逗着,眼镜蛇无计可施,只好转动颈部盯着獴,伺机反扑。几十个回合后,眼镜蛇疲倦极了,竖着的身体渐     

棉酚对大鼠肾脏γ-谷氨酰转肽酶动力学的影响

本文应用动力学分析观察了棉酚对大鼠肾脏γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)的抑制作用。实验结果证实了棉酚在体外是大鼠肾脏γ-GT的抑制剂,而且抑制常数远小于r-GT的天然抑制剂——马尿酸。在不同浓度的棉酚作用下,改变双底物浓度,测定其活力并应用Lineweaver-Burk双倒数作图法,测得棉酚在两种底物情况下,对γ-GT的抑制作用均呈非竞争性抑制。