粗毛纤孔菌的营养及活性成分分析

【背景】 桑黄具有多糖、甾醇、三萜和总酚等活性成分,并体现出良好的抗氧化、清除自由基、增强免疫力、抗肿瘤等药用价值。粗毛纤孔菌(Inonotus hispidus)是桑黄的一种。目前,有关粗毛纤孔菌的营养成分分析的报道较少。【目的】 探究粗毛纤孔菌的营养价值及活性成分含量。【方法】 探究MS-5子实体(金黄)、MS-5子实体(黑色)和MS-9子实体(金黄)的基本营养、活性成分含量及农药重金属残留情况,与灵芝进行对比,分析差异。【结果】 三种粗毛纤孔菌子实体的蛋白含量和灰分含量均显著高于灵芝,蛋白质和灰分含量分别是灵芝的1.96-2.20倍和3.69-5.66倍;粗毛纤孔菌子实体含有的7种人体必需氨基酸均高于灵芝,并且必需氨基酸含量最高的MS-9子实体(金黄)是灵芝的2.28倍,是鸡蛋的1.62倍。三种粗毛纤孔菌子实体的多糖含量和总酚及总黄酮含量均高于灵芝,分别是灵芝的1.48-1.56、3.42-5.70和3.67-4.83倍;此外,粗毛纤孔菌子实体农药及重金属残留均低于国家标准。【结论】 粗毛纤孔菌具有优良的营养价值和富有前景的药用价值且绿色安全,为其药用开发提供科学基础。     

粗毛纤孔菌的化学成分及抗肿瘤活性成分

本文研究了粗毛纤孔菌的化学成分及抗肿瘤活性成分。对粗毛纤孔菌的甲醇提取物进行石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,采用Sephadex LH-20凝胶色谱法,反相C18柱色谱法及高效液相色谱法对不同萃取组分进行分离纯化。分离得到8个化合物,经鉴定分别为麦角甾醇、齿孔酸、4-(3,4-二羟苯基)-3-丁烯-2-酮、phellibaumin A、3,3?-亚甲基双[6-[2-(3,4-二羟苯基)乙烯基]-4-羟基-2H-吡喃-2-酮](MBP)、肌苷、原儿茶酸和原儿茶醛。其中化合物MBP为首次从自然界中分离得到,对其进行了MTT抗肿瘤筛选和细胞凋亡分析。结果表明此化合物对人肝癌细胞HepG2的细胞增殖具有抑制作用,IC50值为2.3μg/mL,并且可以诱导HepG2细胞凋亡,且呈一定的剂量依赖关系。本研究明确了MBP的提取方法,初步断定该化合物抗肿瘤活性是通过诱导细胞凋亡实现的。     

粗毛纤孔菌的生物学特性和抗氧化活性研究

以野外分离的一种药用真菌粗毛纤孔菌Inonotus hispidus为研究对象,对其生物学特性与抗氧化活性进行了研究。通过改变培养温度、初始pH、碳源及氮源4个单因素对粗毛纤孔菌进行固体培养,结果表明,最适培养温度为30℃、初始pH为9.0、碳源为蔗糖、氮源为酵母浸粉;采用L₉(3³)三因子三水平正交试验对固体培养最适碳源含量、氮源含量及初始pH组合进一步研究,得出对粗毛纤孔菌丝长速的影响排序为：氮源含量>碳源含量>初始pH,最佳组合为蔗糖30g/L、酵母浸粉1 g/L、初始pH 10.0。同时测定了粗毛纤孔菌在液体培养时的抗氧化活性,结果发现,粗毛纤孔菌液体培养的14 d内,多酚黄酮含量始终维持在较高的水平,对羟自由基、DPPH自由基、ABTS自由基的清除能力和铁离子还原能力较强,表明粗毛纤孔菌具有一定的抗氧化活性。     

寄生于蒙古黄榆上的粗毛纤孔菌生物学特性及驯化栽培

为了研究不同温度、初始pH、碳源和氮源在固体培养条件下对粗毛纤孔菌菌丝生长的影响,对以上4个因素进行单因素试验,从中选出3个最优的水平进行正交试验。结果表明,粗毛纤孔菌的最适生长温度为30℃;最适初始pH为6.5;最适碳源为木糖;最适氮源为酵母浸粉。在玉米、高粱和小麦3种基质中,对原种培养基进行了筛选,实验结果表明高粱和玉米在接种后的第1天和第2天开始萌发,且可更好地促进粗毛纤孔菌菌丝的生长。对粗毛纤孔菌栽培料的3种配方进行了筛选,实验结果表明配方：木屑78%、稻壳2%、玉米粉17%、蔗糖1%、石灰1%、石膏1%、含水量60%-62%的比例为栽培种培养料可使粗毛纤孔菌菌丝在接种28d后长满菌袋,且生长旺盛,可较快地培育出子实体。     

中国几种剧毒鹅膏菌的ITS序列分析

测定了来自中国不同地区的9个剧毒鹅膏菌的核糖体内转录间隔区(ITS)核苷酸序列.以湖南鹅膏为外类群,用ITS序列构建了系统进化树.结果表明:两个不同产地的欧氏鹅膏存在一定的差异,但仍可聚为同一组;欧氏鹅膏与其它几种剧毒鹅膏的亲缘关系较远;两个根据形态特征鉴定为灰花纹鹅膏的标本可能是两个不同的种;欧氏鹅膏、致命鹅膏和黄盖鹅膏白色变种这3个产生白色子实体的种系统演化上不是同源的.     

中国锈革孔菌科两新记录种

本文报道了中国秀革孔菌科两个新记录种,路易斯安纳纤孔菌Inonotus ludovicianus和金黄木层孔菌Phellinus chryseus。这两个种分别采自于广东省的南岭自然保护区和海南省的尖峰岭自然保护区。根据所采集的材料对这两种真菌进行了详细描述。     

粗毛纤孔菌子实体化学成分

采用多种层析分离手段从粗毛纤孔菌子实体甲醇提取物中分离得到麦角甾醇、7(8),22(23)-二烯-3-酮-麦角甾烷、(22E,24R)-5α,8α-过氧麦角甾-6,22-二烯-3β-醇、4,6,8(14),22(23)-四烯-3-酮-麦角甾烷、齿孔酸、Hispidin、Hispolon、次黄嘌呤核苷、InoscavinC和原儿茶酸10个单体化合物;通过气质联机分析,黄色油状物鉴定为12个脂肪酸衍生物、2,6,10,15,19,23-六甲基菠菜烯和二十二烷。     

桦纤孔菌有性生殖相关特征及交配型位点分析

对桦纤孔菌菌株MDJCBS88的显微形态、菌丝及担孢子核相进行了观察。采用棉籽壳培养基对担孢子萌发形成的菌株进行栽培试验,筛选出不形成子实体或子实体发育不完整的菌株,将这些菌株在平板上进行了亲和试验,分析桦纤孔菌的有性生殖方式;并基于基因组序列进行交配型基因克隆验证,分析桦纤孔菌的交配型位点结构。显微观察发现,桦纤孔菌菌丝没有锁状联合结构,菌丝细胞无核到多核;子实层担孢子可含0-4个不等的细胞核,不同时期弹射的担孢子含有的细胞核数量不同。桦纤孔菌担孢子萌发率极低,能萌发的担孢子多为早期弹射的担孢子;培养基也影响担孢子的萌发率,与PDA培养基和CYM培养基相比,桦木屑培养基最适合桦纤孔菌担孢子萌发,萌发率为4.55%。从担孢子萌发的96个菌株中获得了2个不结实菌株和9个结实不产孢菌株,占11.5%,这些菌株间亲和试验出现不同的表现特征,包括形成产孢子实体,产生菌丝纽结,相互融合和相互拮抗等现象,认为桦纤孔菌的有性生殖以次级同宗结合为主,并受交配型基因控制。交配型位点克隆测序后分析发现,桦纤孔菌交配型A位点共14 034 bp,含有一个MIP基因和两组HD1和HD2基因;交配型B位点包含3个疑似信息素受体基因和1个信息素前体编码基因。     

药用真菌粗毛纤孔菌的分子甄别及其发酵液抗乳腺癌活性研究

从分子水平上探究粗毛纤孔菌与桑黄孔菌属菌株的差异,同时以人乳腺癌MDA-MB-231细胞筛选粗毛纤孔菌深层发酵液抗乳腺癌活性部位,并对其成分进行初步分析。基于rDNA ITS序列分子系统发育树和拆分网络（splits network）分析研究粗毛纤孔菌与桑黄孔菌属菌株的差异;采用MTT法检测发酵液不同提取物抗乳腺癌活性;通过细胞形态观察进一步了解活性提取物对细胞生长的影响;采用LC-MS/MS对活性提取物的成分进行分析。系统发育树表明粗毛纤孔菌与桑黄孔菌属菌株存在一定的遗传差异,粗毛纤孔菌GC含量较桑黄孔菌属菌株低,同时拆分网络分析法能更好地区分粗毛纤孔菌与桑黄;粗毛纤孔菌深层发酵液正丁醇提取物对MDA-MB-231细胞生长的抑制作用最强且呈量效和时效关系（ P<0.05）,作用24h的IC₅₀值为245.44μg/mL;细胞形态观察显示正丁醇提取物浓度在250μg/mL时,对MDA-MB-231细胞的凋亡作用随着时间的延长而加强;LC-MS/MS检测到正丁醇萃取部分的物质有2个,这2个物质均首次在粗毛纤孔菌中鉴定得到。结果表明,拆分网络分析法可较好地用于粗毛纤孔菌与桑黄孔菌属菌株的分子甄别,正丁醇提取物是粗毛纤孔菌深层发酵液抗乳腺癌MDA-MB-231细胞的主要活性部位,为进一步开发利用粗毛纤孔菌药用资源提供科学依据。     

节担菌属在中国的发现

Wallemia sebi (Fr.) Arx was first reported as Sporendonema sebi Fr. in 1832. It is a cosmopolitan xerophilic and osmophilic fungus that usually occurs on sweet food (jams, fruits, sugar, cakes), salted food (salted meats, fish, peanuts), dried materials (dried hay, bread, dried fruits causing spoilage) (Samson et al. 2002, Dally 1980), and plant seeds (sunflower, rye, wheat), as well as in indoor environments (Takahashi 1997), and occurs on several continents. Terracina (1974) found that the…     

浙江无核柿炭疽病菌鉴定及附着胞形成过程中的核相变化

浙江无核柿炭疽病近年来在浙江淳安地区严重发生,根据形态学特征病原菌鉴定为胶孢炭疽菌ColletotrichumgloeosporioidesPenz.,在枝条病斑上的分生孢子盘通常不产生刚毛,分生孢子顶端顶部钝圆,基部平截,分生孢子盘中的孢子包埋在基质中,紧密结合在一起。分生孢子在自然寄主和人工培养条件下形态特征相似。6个柿树炭疽菌菌株的rDNAITS序列联配显示,其序列是相同的。用UPGMA方法分析ITS1-ITS2序列构建的炭疽菌系统发育树把6个柿树炭疽菌菌株和其它寄主上的胶孢炭疽菌或其有性型围小丛壳菌菌系分入同一个组,与根据形态学的鉴定结果一致。在附着胞形成过程中,用DAPI荧光染色观察到核相发生两次有丝分裂变化。第一次有丝分裂发生在分生孢子固着聚苯乙烯塑料培养皿3-4h后,随后,分生孢子中部形成一个隔膜,把它分成两个细胞;6~7h后,分生孢子发生第二次有丝分裂。分裂后,一个核通过芽管移入附着胞中。     

广东省柑橘炭疽病病原菌的形态与分子鉴定

炭疽病是柑橘的主要真菌性病害之一。2007年春,广东省德庆县名优柑橘品种贡柑炭疽病暴发流行。为了明确该县及广东省其他地区柑橘炭疽病菌的种类,为防治提供依据,对采集自广东省6个地区柑橘属10个栽培品种上的炭疽病样本进行病原菌分离,共获得柑橘炭疽病菌单孢菌株75株,对其中10株代表性的菌株进行了种类鉴定。通过培养性状和形态学特征观测、核糖体DNA(rDNA)内转录间区(ITS)序列分析、ITS区特异性引物PCR检测和系统发育关系比较等方面的研究,结果表明:10个柑橘炭疽病菌菌株均为盘长孢状刺盘孢Colletotrichum gloeosporioides,未发现国际上其他国家报道的严重危害柑橘花器和幼果部位的柑橘花后落果病病原菌——尖刺盘孢C.acutatum。     

西藏冬虫夏草无性型的分子生物学研究

从西藏采集的冬虫夏草子实体中分离出 3个菌株C3、C4、C5,通过培养特征的研究以及采用分子生物学方法 ,以rDNAITS区为分子指标 ,与冬虫夏草 [Cordycepssinensis(Berk .)Sacc.) ]的有性世代及中国被毛孢 (HirsutellasinensisLiu ,Guo,Yu&Zeng)进行比较分析 ,发现C4的培养特征与C3、C5 完全不同 ,其序列与冬虫夏草的相似率为 93 %,与中国被毛孢的相似率为 94%,而C3、C5 与冬虫夏草的相似率很低 (分别为 5 5 %和 6 9%) ,从而证明C4是西藏冬虫夏草的无性型 ,为中国被毛孢。     

应用5.8S rDNA及ITS区序列分析链格孢种级分类*

对9个链格孢小孢子种和3个大孢子种共20个链格孢菌株的5.8S rDNA及其两侧的ITS1区和ITS2区进行了序列分析。聚类分析结果表明形态差异大的种可以明确加以区分,而供试的9个小孢子种之间差异很小,不能根据对所选区段的序列分析加以区分。传统分类上的滨菊链格孢不属于Alternaria, 其分类地位需进一步研究。     

山茱萸不同栽培品种的 rDNA ITS 序列分析

为测定山茱萸（Cornus officinalis Sieb.et.Zucc.）核糖体DNA的ITS序列,对山茱萸不同栽培品种进行了ITS序列分析。通过实验筛选出一对引物,进行PCR扩增,对扩增产物提取纯化,双脱氧链终止法DNA测序。然后,利用DNAssist Version 2.0软件加手工校正确定ITS1-5.8S-ITS2序列,并进行ITS序列分析。获得了山茱萸的ITS1-5.8S-ITS2完全序列,ITS1为253bp,5.8S为156bp,ITS2为273bp,总共682bp。7种果型的山茱萸其5.8S基因序列显示高度的一致性,圆柱形果型、长梨形果型、椭圆形果型和纺锤形果型的ITS区序列完全一致,短圆柱形果型在ITS1区3′端及ITS2区5′端各有1个变异位点;短梨形果型在ITS1区5′端有3个变异位点;长圆柱形果型在ITS1区有5个变异位点。结果表明,ITS序列在山茱萸种内比较保守,有的栽培品种之间有较小的差异,此研究为中药山茱萸分子鉴定提供了科学依据。     

The taxonomic relationships within the genus Excoecaria L. (Euphorbiaceae) based on leaf morphology and rDNA sequence data

The tropical Indo-Pacific genus Excoecaria L. (Euphorbiaceae) has several closely related species in Australia whose taxonomic relationships are unclear. The most widely reported species in Australia is the mangrove species Excoecaria agallocha L. (type species), whose taxonomic and geographic limits are difficult to define from its closely related species or sub-species. Two additional taxa have also been described but not clearly differentiated from the type species: Excoecaria dallachyana Baillon and Excoecaria ovalis Endl. This project aimed to determine the taxonomic relationships of the Australian Excoecaria species using both leaf morphological data and DNA sequence data from the internal transcribed spacer (ITS) region of ribosomal genes. The nucleotide differences in the examined ITS1 region show that E. agallocha from eastern Australia and E. ovalis from Western Australia respectively, are genetically uniform within species but differ from each other consistently, thus supporting species status. The leaf morphological data also support this view: single factor analysis of variance consistently separated E. ovalis from E. agallocha on the basis of leaf width, leaf length and length of petiole. In contrast, E. ovalis from the Gulf of Carpentaria differs only slightly from E. ovalis in Western Australia, but no evidence was found to suggest any leaf morphological differentiation within this species. The analysis also suggests that E. dallachyana is not closely related to either mangrove species E. agallocha or E. ovalis, despite superficial morphological similarities.     

Asterostroma species (Basidiomycota) from mangrove forests in Japan

A new homobasidiomycete, Asterostroma macrosporum, was found in mangrove forests of Iriomote Island, Japan. This species is morphologically characterized by having resupinate basidiomata, a monomitic (asterodimitic) hyphal system, simple septate generative hyphae, dextrinoid asterosetae, four sterigmate basidia and globose, tuberculate and amyloid basidiospores measuring 8.5–11 × 7.5–9 μm. It is similar to A. muscicola, but basidiospores in the latter are smaller (7–8 × 5.5–7 μm). Furthermore, phylogenetic analysis using internal transcribed spacer (ITS) region revealed that A. macrosporum is distinctly separated from A. muscicola. In Japan, A. muscicola is widely distributed in warm-temperate to subtropical regions, growing on a variety of broadleaved trees including mangroves, while A. macrosporum has been found only on mangroves.     

A synopsis of the genusScleromitrula (=Verpatinia) (Ascomycotina: Helotiales: Sclerotiniaceae)

The systematics ofScleromitrula andVerpatinia of the family Sclerotiniaceae is reevaluated on the basis of morphological, cultural and molecular criteria.Scleromitrula shiraiana, Verpatinia species andCiborinia candolleana share gross morphological, microanatomical and cultural features which clearly distinguish them from the closely relatedCiborinia andRutstroemia species. Phylogenetic analyses of sequences from the internal transcribed spacer region (ITS1, ITS2, and the 5.8S gene) of nuclear ribosomal DNA demonstrate that the stipitate-capitate specimens ofScleromitrula andVerpatinia species plus the stipitate-cupulateCiborinia candolleana constitute a monophyletic clade separate from a clade including the type species ofCiborinia. Scleromitrula is emended to includeS. shiraiana, the new speciesS. rubicola, C. candolleana, and specimens formerly assigned toVerpatinia. A key to the accepted species ofScleromitrula is provided.     

白木香内生真菌的分离及分子鉴定

对采自广东省信宜市的白木香进行了内生真菌分离培养,共获得50个菌株,通过rDNA中内转录间隔区(ITS)序列鉴定其为20个种,其中确定至种名的有7属8种,仅确定至属名的有8种,不能确定种属的有4种,其中A20菌株(Fimetariella rabenhorstii)为国内首次报道。刺盘孢菌(Colletotrichum)共分离到17株,占分离总数的34%,为白木香优势种群;镰刀菌(Fusarium)共分离到11株,是结香部位的优势种群。白木香内生真菌分布部位的专一性不明显,茎中分离的数量及种类最多,叶中最少;5年龄内生真菌的多样性较好,10月龄的多样性较低。