重组融合多肽hEGF-AWRK6的纯化及对小鼠烫伤感染创面愈合的影响

旨在研究重组融合多肽hEGF-AWRK6(EK)对烫伤模型小鼠感染创面的治疗功效。采用大肠杆菌表达系统表达、纯化融合多肽EK,抑菌实验检测EK抑菌活性;构建小鼠II度烫伤和铜绿假单胞菌感染模型,实验组创面滴注EK(30 mg/L),以PBS、庆大霉素(30 mg/L)、烫伤膏(10 mg/L)为对照,计算烫伤后创面愈合率及菌落数;伤后10 d,取各组小鼠的伤口及周边皮肤进行HE染色及胶原蛋白的Western blotting检测,分析创面病理组织结构。实验结果纯化得到了具有抑菌活性的重组表达融合肽EK;伤后6 d始,EK组小鼠创面菌落数少于对照组,差异极显著(P0.01);EK组小鼠烫伤愈合率显著高于PBS对照组(P0.01);与对照组相比,EK组小鼠创面真皮层细胞排列规则,再上皮化较快,毛囊生长较多,Ⅰ型胶原蛋白表达显著增加。结果表明EK具有抑制小鼠烫伤创面感染、促创面愈合功效,具有开发成为治疗烧伤药物的潜力。     

肝素促进深Ⅱ度烧伤小鼠bFGF及PDGF表达的研究

目的:探讨肝素对深Ⅱ度烧伤小鼠内源性碱性成纤维生长因子(bFGF)和血小板源生长因子(PDGF)表达的影响.方法:制作小鼠深Ⅱ度烫伤模型,肝素组用3000U/mL肝素外敷伤口2min,每日2次,观察创面愈合状况,并在给药后第3天分别从肝素组(烫伤后用肝素处理)、烫伤组(烫伤后自然愈合)及对照组(未进行烫伤处理)取5只小鼠处死,提取烫伤及其周围皮肤组织的蛋白质,用Western-blotting检测bFGF和PDGF的表达状况.结果:肝素组bFGF和PDGF表达均高于烫伤组;而烫伤组的两种生长因子的表达均高于对照组.结论:烫伤后bFGF和PDGF的表达量增高,且肝素能促进深Ⅱ度烧伤内源性生长因子bFGF、PDGF的表达.     

烧伤膏对小鼠皮肤烫伤创面愈合的修复作用研究

目的:探讨烧伤膏对烫伤小鼠皮肤创面修复的可能作用机制。方法:将50只小鼠随机分为5组:正常组、模型组,烧伤膏高、中、低剂量组。除正常组和模型组外,烧伤膏实验组小鼠每天外涂烧伤膏治疗,连用15天。治疗结束后,采用Masson染色技术检测各组小鼠皮肤厚度及细胞病理形态;采用生化法检测皮肤中羟脯氨酸(Hyp)含量;采用ELISA技术检测皮肤中的TNF-α,IL-1β、Collagen I、EGF和TGF-β1的含量。结果:与正常组相比,模型组小鼠皮肤烫伤创面可见表皮细胞脱落,结构模糊,细胞变性坏死,表皮和真皮厚度明显减少,胶原纤维变薄,排列紊乱无序,呈断裂状;烧伤后创面局部组织中Hyp、TNF-α、IL-1β的含量显著升高(P0.01,P0.01,P0.01),而EGF、TGF-β1和Collagen I含量均明显减少(P0.01,P0.01,P0.01),而应用烧伤膏治疗15天后,上述各项实验指标明显得到改善。结论:烧伤膏抑制创面早期感染,减少胶原蛋白的分解和促进后期创面修复的作用可能与抑制炎性细胞因子和增加皮肤相关生长因子表达的作用机制有关。     

獾油促进深Ⅱ度烫伤小鼠创面愈合作用的研究

目的:检测獾油对小鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合的促进作用.方法:制备小鼠深Ⅱ度烫伤模型,分为烫伤对照组(A组)、植物油治疗组(B组)和獾油治疗组(C组).创面依次用生理盐水纱布、植物油纱布、獾油纱布覆盖.无菌纱布包扎固定,每日换药一次.于伤后7天、10天、15天按照Nagelschmidt法观察并记录创面愈合面积,计算创面愈合率;取创面组织,制成石蜡切片,观察病理及组织形态学变化.结果:獾油能加速烫伤创面的再上皮化,促进创面的愈合;提高烫伤组织细胞的增殖活性;促进烫伤创面表皮干细胞的增殖分化.结论:獾油对深Ⅱ度烫伤创面愈合有促进作用     

在烫伤条件下VEGF对大鼠皮肤eNOS基因表达的影响

目的:探讨大鼠烫伤愈合过程中VEGF对皮肤组织eNOS基因表达的影响。方法:采用了大鼠深II度烫伤模型,分别以VEGF和阿西替尼(VEGF抑制剂)干预,观察大鼠烫伤后愈合过程的组织学变化,PCR检测创面eNOS基因的表达。结果:肉眼观察VEGF组大鼠创面最早愈合,对照组大鼠愈合速度其次,阿西替尼组创面愈合最晚;HE染色结果显示伤后第2、8、21天VEGF组炎性细胞浸润程度、新生毛细血管数量均高于对照组和阿西替尼组,PCR结果显示烫伤后第2、8天VEGF组的eNOS基因的表达明显上调,且同时间点与对照组比较有统计学意义(P0.05)。结论:VEGF可诱导烫伤创面eNOS基因的表达,增加血管生成重要因子NO的生成,有利于创面愈合。     

全蝎软膏对糖尿病皮肤溃疡大鼠模型EGF、PDGF及其受体表达的影响

摘要 目的：探讨全蝎软膏对糖尿病皮肤溃疡大鼠模型EGF、PDGF及其受体表达的影响及创面愈合的机理。方法：60只大鼠随机分为对照组、模型组、湿润烧伤膏组和全蝎软膏组,每组15只。建立糖尿病皮肤溃疡大鼠模型,干预后7天及14天,观察并比较大鼠创面愈合率和血清中表皮生长因子(epidenllal giiilllh factor, EGF)、血小板衍生生长因子(platelet -derived growth factor, PDGF)及其受体水平。结果：全蝎软膏组、湿润烧伤膏组与模型组7 d、14 d同时间点比较创面愈合率,差异有统计学意义(P＜0.05或 P＜0.01);全蝎软膏组、湿润烧伤膏组7 d、14 d同时间点比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。免疫组化结果显示,EGF的表达水平,全蝎软膏组、湿润烧伤膏组与模型组比较,7 d差异有统计学意义(P＜0.05);14 d差异无统计学意义(P＞0.05)。EGFR 的表达水平,全蝎软膏组与湿润烧伤膏组、模型组、空白组7 d、14 d同时间点比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。PDGFB的表达水平,全蝎软膏组、湿润烧伤膏组与模型组7 d、14 d同时间点比较,差异有统计学意义(P＜0.05)。PDGFRB的表达水平,7 d全蝎软膏组与湿润烧伤膏组、模型组、空白组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);14 d全蝎软膏组、湿润烧伤膏组与模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)。结论：全蝎软膏可影响糖尿病皮肤溃疡大鼠模型EGF、PDGF及其受体的表达,促进糖尿病创面愈合。     

全蝎软膏对大鼠糖尿病皮肤溃疡创面愈合的效果评价

目的:探讨全蝎软膏治疗糖尿病皮肤创面愈合的作用及其机制。方法:采用SPF级SD大鼠构建糖尿病皮肤溃疡模型,将其随机平均分为对照组、模型组、全蝎软膏组和湿润烧伤膏组。造模后,分别在创面处涂抹全蝎软膏或湿润烧伤膏处理,空白组和模型组用PBS处理,观察和比较各组创面的愈合情况,并收集用药后3 d、7 d、10 d和14 d的创面肉芽组织进行HE染色,通过ELISA及荧光定量PCR检测肉芽组织内碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管性假血友病因子(v WF)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)与Smad 4基因的表达。结果:成功构建大鼠糖尿病皮肤溃疡模型,成模率为96.15%。创伤后第3 d、7 d、10 d和14 d,各治疗组创面愈合率均显著高于模型组(P0.05),给药14 d时,全蝎软膏组创面愈合率已接近对照组水平。HE染色结果显示与模型组相比,全蝎软膏组中肉芽组织生长较快、毛细血管数量增多且组织纤维化程度较低。ELISA和荧光定量PCR检测结果显示与模型组和湿润烧伤膏组相比,全蝎软膏组肉芽组织内bFGF、v WF含量上调更显著(P0.05),而TNF-α含量与Smad 4 m RNA显著降低(P0.05)。结论:全蝎软膏可促进糖尿病皮肤溃疡创面肉芽组织的生长,可能与其抑制炎症反应并改善血管功能有关。     

冬瓜粗提物对小鼠紫外线晒伤皮肤的修复作用

为探讨冬瓜(Benincasa hispida)粗提物对小鼠紫外线晒伤皮肤的修复作用,建立小鼠紫外线晒伤模型。观察冬瓜粗提物对晒伤小鼠内源性血管内皮生长因子(VEGF)及碱性成纤维细胞生长因子(FGF-2)表达的影响。冬瓜提取物组(浓度均为31 mg/m L),药物组(利多卡因氯已定气雾剂),正常对照组和阴性组(生理盐水),每天2次涂药并观察创面,分别在0、1、3、7、14 d处死小鼠,取皮肤组织,做病理切片,取晒伤组织提取蛋白并检测VEGF、FGF-2的表达状况。3~7 d时,阳性对照组和实验组的VEGF和FGF-2的表达明显高于阴性对照组和正常组,且阳性组与实验组VEGF和FGF-2表达水平有显著差异。病理切片显示实验组炎性细胞和血管数量明显多于阴性对照组,且两组间差异明显。即冬瓜粗提物能提高皮肤组织的生长因子VEGF和FGF-2的表达,促进晒伤皮肤的愈合。     

烧伤后残余创面外用rhEGF和rhGM-CSF的疗效对比

目的:比较局部应用重组人表皮生长因子(rh EGF)与重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rh GM-CSF)对烧伤后残余创面愈合的影响。方法:选择2013年2月~2015年12月在我院进行诊治的烧伤后残余创面患者80例,采用自体对照的研究方法,每例患者选取2处烧伤后残余创面,随机分为EGF组和GM-CSF组,EGF组采用rh EGF凝胶治疗,GM-CSF组采用rh GM-CSF凝胶治疗。观察用药后的创面愈合时间和愈合率,选择8例患者分别在治疗前和治疗后切取创面边缘组织标本,病理学观察用药后创面组织中成纤维细胞数及毛细血管数。结果:与EGF组相比,GM-CSF组用药治疗7、14 d后创面愈合率明显升高(P0.05);EGF组的创面愈合时间为(16.23±4.15)d,明显长于GM-CSF组的(12.39±2.16)d(P0.05);用药治疗7、14 d后,两组的成纤维细胞数和毛细血管数均明显高于治疗前(P0.05);EGF组的成纤维细胞数和毛细血管数均明显低于GM-CSF组(P0.05)。结论:rhGM-CSF比rhEGF更能促进烧伤后残余创面愈合,缩短创面愈合时间,可能与其更能促进成纤维细胞的增殖或迁移,加快毛细血管的生成有关。     

联合应用NGF 和胰岛素对糖尿病大鼠烫伤创面表皮干细胞的影响

目的:通过局部联合应用神经生长因子和胰岛素对糖尿病大鼠深II度烫伤创面表皮干细胞标记物β1整合素和角蛋白19(K19)表达的影响,探讨神经生长因子和胰岛素联合应用于糖尿病烫伤创面治疗后对创面愈合的影响。方法:雄性wistar大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病模型60只,1月后在大鼠背部造成深II度烫伤。将大鼠随机分为糖尿病对照组(B)、胰岛素治疗组(C)、神经生长因子治疗组(D)、神经生长因子联合胰岛素治疗组(E),每组15只。另取15只正常雄性wistar大鼠作为正常对照组(A)。观察伤后3、7、11、15、21 d各组创面愈合情况,检测创面β1整合素和角蛋白19(K19)的表达并计算创面愈合率。结果:E组创面愈合率自第7天起较A、B、C、D组增加,为[(25.33±2.32)%,(P<0.05)];A、C、D组创面愈合率较B组增加分别为[(22.51±1.78)%,(16.68±1.95)%,(18.29±1.70)%,(P<0.05)]。E组整合素β1和角蛋白19(K19)表达自伤后第7至21天各时相点显著增加,(P<0.05)。结论:糖尿病大鼠深II度烫伤创面局部联合应用神经生长因子和胰岛素可促进表皮干细胞的增殖与分化从而加速创面的愈合。     

仙人掌提取物对浅Ⅱ度烫伤小鼠VEGF及FGF-2表达的影响

为探讨野生仙人掌和食用仙人掌提取物对浅Ⅱ度烫伤小鼠内源性血管内皮生长因子(VEGF)及碱性成纤维细胞生长因子(FGF-2)表达的影响,建立小鼠浅Ⅱ度烫伤模型。野生、食用仙人掌提取物组(浓度均为12.5 mg/mL),药物组(京万红),烫伤组(生理盐水),每天2次涂药并观察创面,分别在3 d和7 d各组取5只小鼠处死,取烫伤组织提取蛋白并检测VEGF、FGF-2的表达状况。仙人掌组中VEGF及FGF-2的表达量均高于烫伤组,且两种仙人掌组VEGF及FGF-2的表达量有差异。即仙人掌提取物能提高VEGF及FGF-2的表达量并能促进创面的修复。     

止痛如神汤定向透药联合湿润烧伤膏改善肛瘘术后创面愈合的疗效及对细胞生长因子和疼痛应激的影响

目的：探讨止痛如神汤定向透药联合湿润烧伤膏改善肛瘘术后创面愈合的疗效及对细胞生长因子和疼痛应激的影响。方法：采用随机数字表法将2020年5月～2022年6月期间在湖南中医药大学第一附属医院接受治疗的116例肛瘘患者分为对照组（58例,接受湿润烧伤膏治疗）和研究组（58例,对照组的基础上结合止痛如神汤定向透药）。治疗30天后,对比两组疗效、临床指标[创面愈合率、疼痛视觉模拟（VAS）评分、创面渗液评分、创面水肿评分、肉芽生长评分、创面愈合时间]、细胞生长因子[血管内皮生长因子（VEGF）、血清表皮生长因子（EGF）、成纤维细胞生长因子（bFGF）]和疼痛应激指标[β-内啡肽（β-EP）、P物质（SP）]变化情况。结果：研究组的临床总有效率、创面愈合率高于对照组,VAS评分、创面渗液评分、创面水肿评分、肉芽生长评分小于对照组,创面愈合时间短于对照组（P<0.05）。治疗后,研究组血清EGF、VEGF、bFGF水平高于对照组（P<0.05）。治疗后,研究组血清β-EP、SP水平低于对照组（P<0.05）。结论：止痛如神汤定向透药联合湿润烧伤膏可促进肛瘘术后创面愈合,可能与调...     

蝇蛆油促进大鼠皮肤机械损伤愈合作用及机制研究

目的:本文拟研究蝇蛆油对皮肤机械损伤的治疗作用及作用机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、蝇蛆油组和重组牛碱性成纤维细胞生长因子(rb-bFGF)凝胶组,制作大鼠皮肤机械性损伤模型,在不同时间点采集样本,检测创面愈合率、创面愈合时间、血管内皮生长因子(VEGF)含量、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平,并检测组织中胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ、血小板衍生因子(PDGF)和细胞角蛋白19(CK19)表达情况。结果:模型组大鼠创面愈合时间为29.5±2.6 d,而蝇蛆油创面愈合时间为22.4±2.8 d,存在显著差异(P0.01)。VEDF含量在模型组和给药组均随着创面愈合时间增加,给药组在第1 d即显著高于模型组(P0.01),并在第21 d达到最大值(2051.5±148.2 ng/L)。模型组大鼠创面组织中MDA含量为6.47±0.92 nmo L/mg,SOD含量为7.52±3.21 U/mg,而蝇蛆油给药组大鼠创面组织中MDA含量为3.42±0.83 nmo L/mg,SOD含量为21.32±2.94 U/mg,存在显著差异(P0.01)。进一步研究发现,与模型组比较,蝇蛆油给药组大鼠创面组织中胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ、PDGF和CK19含量均显著升高(P0.01)。结论:蝇蛆油能够促进机械性损伤皮肤创面愈合,其作用机制可能是通过促进血管生成,抗氧化损伤,促进胶原生成,诱导干细胞形成,从而促进创面愈合。     

碱性成纤维细胞生长因子对激光烧伤大兔皮肤愈合的影响分析

摘要 目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子对激光烧伤大兔皮肤愈合的影响分析。方法：通过热辐射仪激光灼烧对大兔耳朵进行烧伤处理,根据实验需求,将其随机分为三组：对照组,bFGF组,bFGF + DAPT组。通过ImageJ软件测量伤口面积和疤痕组织的厚度,并定期计算残余伤口面积率和疤痕指数。通过组织学分析大兔伤口愈合的新血管生成量。通过蛋白印迹分析Notch1、Jagged1和Hes1的蛋白表达。通过免疫荧光分析愈合后的皮肤中α-SMA,Col I和Col III的相对蛋白水平。结果：bFGF组较对照组的疤痕指数降低（P<0.05）,bFGF+DAPT组较bFGF组疤痕指数升高（P<0.05）。bFGF组较对照组的愈合面积增加（P<0.05）,bFGF + DAPT组较bFGF组愈合面积降低（P<0.05）。与对照组相比,bFGF组的愈合时间明显缩短,较低的残余伤口面积和较低的疤痕指数（P<0.05）,而bFGF + DAPT组表现出明显的愈合延迟和较高的疤痕指数（P<0.05）。bFGF组较对照组的新血管生成量增加（P<0.05）,bFGF + DAPT组较bFGF组心血管生成量减少（P<0.05）。bFGF组较对照组的肉芽组织平均厚度增加,表皮间隙的闭合百分比升高（P<0.05）,bFGF + DAPT组较bFGF组肉芽组织平均厚度增加、表皮间隙的闭合百分比减少（P<0.05）。H＆E染色进行组织学分析发现,与对照组和bFGF + DAPT组相比,bFGF组出现明显的再上皮化和新血管形成,愈合效率较高（P<0.05）。bFGF组较对照组Notch1、Jagged1和Hes1的蛋白表达升高（P<0.05）,bFGF + DAPT组较bFGF组Notch1、Jagged1和Hes1的蛋白表达降低（P<0.05）。bFGF组较对照组?琢-SMA,Col I和Col III的蛋白表达降低（P<0.05）,bFGF + DAPT组较bFGF组表达升高（P<0.05）。结论：bFGF可以通过促进ESC的增殖并通过激活Notch1 / Jagged1途径抑制其向肌成纤维细胞（Myofibroblasts,MFB）的分化加快伤口愈合,减少疤痕形成。     

烧烫伤创面感染的小鼠模型构建

目的探讨一种简单、稳定的烧烫伤创面感染的小鼠模型构建方法,以便进行相关烧烫伤创面修复研究。方法取30只BALB/c小鼠,采用自制木质烫伤板,沸水浴法烫取直径8 mm的圆形创面,烫伤时间分别为5 s、10 s、15 s。伤后48 h,取创面组织进行HE染色观察,筛选最佳创面烫伤时间。另取72只小鼠制成深Ⅱ度烫伤创面,采用擦刮法分别接种20μL菌浓度为1×106、l×107、1×108CFU/mL金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC 25923的菌液。接种细菌后72 h,取创面组织HE染色观察创面炎症反应情况,并测定3、7、14 d的皮肤菌负荷,筛选最佳的细菌接种浓度。最后,按最佳条件建模后,观察创面的完全愈合时间以及创面愈中、愈后的组织学变化,以确定此创面感染模型是否建立成功。结果组织学结果表明,10 s为深Ⅱ度创面的理想致伤时间,最佳接种菌浓度为l×108CFU/mL,此时期,14 d内菌负荷均高于l×105CFU/g。该模型的创面愈合时间(21±0.95 d)较正常创面愈合时间(15.92±0.34 d)明显延长(P<0.01),炎性反应明显,愈后不佳。结论烧烫伤创面感染的小鼠模型构建成功,可作为感染创面防治研究的实验动物模型。     

rh-GH在促进大鼠创面愈合中的作用研究

目的:通过在大鼠背部创面周围局部注射rh-GH(重组人生长激素,Recombinant Human Growth Hormone)来调控创面局部GH(生长激素,Growth Factor)水平,观察GH在创面愈合中的作用,并对其可能机制进行进一步研究。方法:在SD大鼠背部制作创面,创周定期注射不同浓度rh-GH,观察并分析创面愈合速度差异;选取rh-GH的最适浓度进行创周注射并定期取材,以Western-Blot检测创周组织中GH蛋白水平,并以RT-PCR检测创周组织中EGF(表皮生长因子,Epidermal Growth Factor)、FGF(成纤维细胞生长因子,Fibroblast Growth Factor)、VEGF(血管内皮细胞生长因子,Vascular Endothelial Growth Factor)的表达变化。结果:三个注射不同剂量rh-Gh的实验组大鼠创面平均愈合时间由快至慢依次为16.5±1.5天、17.1±2.9天、18.5±1.5天,与注射生理盐水的对照组平均愈合时间21.7±2.3天相比均明显增快,差异有统计学意义(P0.05)。创缘组织中GH的Western-Blot结果显示对照组GH水平在创面形成初期升高,但伤后4天开始GH表达水平即逐渐下降,而rh-GH注射组的GH水平在创面形成后逐渐升高,并维持GH在高表达水平。检测创周组织中EGF、FGF、VEGF的RNA转录水平,PCR结果显示实验组各生长因子的基因转录水平在伤后2天起即明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:1.创伤初期创面周围组织中GH表达水平呈现一过性升高然后逐渐下降的过程;2.创面周围注射rh-GH可以提高组织中GH水平,并减少创面愈合时间;3.GH可以提高皮肤组织中EGF、FGF、VEGF水平,间接促进创面上皮化,加快创面愈合。     

富血小板血浆与贫血小板血浆治疗中华眼镜蛇细胞毒素致小鼠皮肤溃疡的效果比较

目的 比较富血小板血浆(PRP)与贫血小板血浆(PPP)治疗中华眼镜蛇细胞毒素致小鼠皮肤溃疡的效果。方法 将中华眼镜蛇细胞毒素造模成功的30只中小鼠随机分为对照组(n=10)、PRP组(n=10)、PPP组(n=10),造模后第9天各组分别给予单纯生理盐水、PRP、PPP治疗,比较3组小鼠皮肤溃疡面积、溃疡创面愈合率、创面面积差绝对值与HE染色的病理改变。结果 低速组的PRP、PPP符合工作浓度标准。PRP凝胶、PPP凝胶治疗小鼠溃疡愈合时间可缩短3 d。PRP组与PPP组创面愈合率及3 d内面积差绝对值均大于对照组(均P<0.05)。镜下见PRP凝胶、PPP凝胶可减少炎症细胞浸润,促进小鼠上皮细胞再上皮化等病理改变。结论 PRP凝胶、PPP凝胶均可促进中华眼镜蛇伤溃疡皮肤修复,缩短愈合时间。     

象皮生肌膏对肛瘘术后创面修复及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

摘要 目的：探究象皮生肌膏对肛瘘切除术后大鼠创面的治疗作用及其与PI3K/Akt/mTOR信号通路的相关性。方法：将SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、象皮生肌膏组、湿润烧伤膏组,共4组,每组10只。4组均采用0号钢丝制造肛瘘模型,造模成功后,除假手术组外,均在麻醉下行肛瘘切除术,创面保持开放,使之形成"开放、渗血、渗液、有脓性分泌物"的感染性肛瘘术后创面,假手术组保留瘘管,不予换药,模型组予以生理盐水冲洗、络合碘消毒后不予换药,治疗组分别予以相应药物进行创面换药,共10天。10天后采用常规面积检测法比较模型组、象皮生肌膏组、湿润烧伤膏组大鼠肛瘘术后创面的创面愈合率及创面肉芽组织覆盖率;HE染色观察各组大鼠肛周组织病理情况;ELISA检测各组大鼠血清中bFGF、EGF、VEGF的表达水平,WB检测比较各组大鼠肛周肉芽组织中PI3K、Akt、mTOR、p70 S6K、p-PI3K（S473）、p-AKT（S473）、p-mTOR（Ser2448）、p-p70 S6K的蛋白表达水平。结果：与模型组比较,治疗第3、7、10天象皮生肌膏组和湿润烧伤膏组的创面愈合率及创面肉芽组织填充率显著升高（P＜0.01）。病理切片显示,假手术组炎性细胞浸润较少,其余各组均可见不同程度的炎性细胞浸润,且创面区可见不同程度炎性修复型肉芽组织增生、胶原纤维新生及血管扩张;其中模型组病理切片显示大量炎性细胞浸润,血管扩张明显,并有明显的血管出血;象皮生肌膏组病理切片显示炎性细胞较少,成纤维细胞成熟且分布整齐,真皮层内胶原纤维丰富且排列整齐,可见血管新生,无明显血管扩张及出血;湿润烧伤膏组病理切片显示少量炎性细胞浸润及血管扩张,真皮层内可见成纤维细胞生成。ELISA检测结果显示,与假手术组比较,模型组血清中bFGF、EGF、VEGF的含量显著降低（P＜0.01）;与模型组比较,象皮生肌膏组血清中bFGF、EGF、VEGF的含量显著升高（P＜0.01）,湿润烧伤膏组大鼠血清中EGF、VEGF的含量显著升高（P＜0.01）。WB检测结果显示,与假手术组比较,模型组肛周组织中p-PI3K、p-Akt 、p-mTOR、p-p70 S6K蛋白表达显著降低（P<0.01）;与模型组比较,象皮生肌膏组肛周组织中p-PI3K、p-Akt 、p-mTOR、p-p70 S6K蛋白表达显著升高（P<0.05）。结论：象皮生肌膏能有效促进肛瘘术后创面修复,减轻肛瘘术后创面炎症反应,促进创面肉芽生长,其促愈机制可能与PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达有关,其通过上调PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白激活PI3K/Akt/mTOR信号通路,进而加快创面修复进程。     

人脐带间充质干细胞上清凝胶加速小鼠皮肤创面愈合

目的:探讨人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)上清凝胶对小鼠皮肤创面修复的作用,为临床皮肤创伤提供新的修复方法奠定基础。方法:从新生儿脐带分离出hUC-MSCs并培养,经流式细胞仪检测细胞表面标志物、成骨成脂细胞分化实验以及RT-PCR检测干性相关基因的表达证明其干细胞特性;收集上清液,进行粗提纯及总蛋白浓度检测,制成凝胶剂,用于小鼠背部损伤模型中创面的治疗;于第2、3、6、8、15 d取样,伤口及正常皮肤组织样品分别用于制备组织病理切片及愈合组织相关因子表达的Q-PCR检测。结果:从新生儿脐带分离出的hUC-MSCs其形态、表面标志物符合干细胞特性,具有成骨和成脂诱导分化潜能。实验小鼠皮肤创伤后3 d开始可见各组创面逐渐缩小,伤后15 d创面基本愈合;第5、7 d高剂量组创面愈合率大于对照组,其差异有统计学意义(P0.05)。病理切片结果显示高剂量组伤口愈合程度最高,低剂量组次之,两者都优于对照组。愈合组织相关因子检测表明,伤后第2 d,高剂量上清处理的小鼠伤口组织TGF-β1和Col1a1基因表达增加,明显多于对照组(P0.05),伤后第3 d,实验组VEGF的表达量均高于对照组(P0.05);高剂量组从第3 d开始,IL-1β这一炎症因子表达水平显著低于空白对照组(P0.05)。结论:hUC-MSCs上清凝胶能够提高小鼠皮肤创面愈合的速度。     

外源性VEGF促进大鼠Ⅱ度烫伤创面中晚期愈合

目的探究Ⅱ度烫伤时外源性血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对皮肤愈合及其对表皮干细胞(epidermal stem cells,ESCs)迁移、分化的影响方法健康Wistar大鼠随机分为VEGF组、空白对照组、阿西替尼(Axitinib,VEGF抑制剂)组。采用水浴烫伤法制备Ⅱ度烫伤模型,分别以0.2μg/ml VEGF、PBS溶液和10μg/ml阿西替尼处理各组创面,各组均治疗7d,从烫伤至创面愈合分别在第2d、8d、14d及21d测量创面愈合情况,并取创面组织作组织学检测,运用免疫组化技术检测ECSs的分布及数量。结果①创面愈合率:烫伤后21d VEGF组>对照组>阿西替尼组;②愈合速度:烫伤后1-7d空白对照组>阿西替尼组>VEGF组,其后VEGF组愈合速度逐渐加快,第14d开始愈合速度表现为VEGF组>空白对照组>阿西替尼组;③组织学变化:烫伤后8-21d,VEGF组表皮细胞增殖明显,表皮修复和毛囊再生迅速,均早于空白对照组及阿西替尼组。④ECSs阳性细胞率变化:烫伤后第8-14dVEGF组ECSs阳性细胞率明显高于空白对照组和阿西替尼。结论Ⅱ度烫伤时,外源性VEGF在愈合中晚期加快愈合速度使愈合时间明显缩短,并且促进毛囊汗腺的再生使修复后的创面在外观、功能与正常皮肤相近,有助于提高全层皮肤创面的愈合质量。