鳜鱼病毒病原的检出及组织病理分析

经对患暴发性传染病的鳜组织及病变组织超微切片的电镜观察,在细胞质,核及间隙中都有病毒颗粒,对该病毒进行了分离提纯,这是一种直径约为２８０ｎｍ球形病毒,将粗提病毒液接种到培养细胞中,会引起细胞病变;病毒通过人工感染健康鳜,会引起鳜发病和死亡,对患病獗进行解剖和组织病理观察,表明病鳜的５种器官都发生了病变,研究结果表明分离的鳜病毒（ＳｉｎｉｐｅｒｃａｃｈｕａｔｓｉＶｉｒｕｓ,ＳＣＶ）是引起鳜流４行的病     

两种鳜病毒的共感染现象及引起感染细胞的超微变化

借助细胞培养和电镜技术,揭示了鳜球形病毒(Siniperca chuatsi spherical virus,SCSV)与鳜弹状病毒(Siniperca chuatsi rhabdovirus,SCRV)在草鱼鳍细胞(Grass carp fins,GCF)中共感染的现象。在筛选到敏感鱼类细胞系和建立了 鳜病毒体外增殖系统的基础上,取息典型病毒感染出血症的鳜组织,制备组织悬液,接种到GCF细胞中传代培养, 在攻毒后间隔不同时间收集细胞,对攻毒细胞的超薄切片进行电镜观察。揭示两种形态的鳜病毒可在同一个GCF 细胞中增殖,并描述和分析了病毒复制引起感染细胞的超微病变。本研究结果有助于阐明鱼类重要病毒病害的发 生过程及致病机理。     

静水压诱导翘嘴鳜雌核发育的研究

为通过建立雌核发育纯系以实现快速优化种质资源, 文章以翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)为研究对象, 探索出了一套静水压诱导雌核发育的方法: 将装有翘嘴鳜精子的培养皿置于摇床缓慢摇动, 在两只15 w的紫外灯管(培养皿与紫外灯管的垂直距离约17 cm)下照射18min, 然后与雌鱼卵子受精5min, 63 MPa静水压处理2min, 最后常规孵化。HRM分型技术检测其雌核发育群体的雌性率为100%。该方法简单快捷, 诱导孵化率(受精后72h的存活率)为7.56%, 比已有的冷休克诱导翘嘴鳜雌核发育的方法约提高3个百分点。研究结果可用于翘嘴鳜雌核发育品系的快速扩群, 也可用于翘嘴鳜抗逆相关品系的种质资源创制。     

尼罗尖吻鲈和鳜鱼染色体组型分析及比较

采用PHA、秋水仙碱腹腔或背部肌肉注射,活体培养法,以前肾为材料,低渗-空气干燥法制片,进行染色体观察,运用Micromeasure version 3.3染色体分析软件和Photoshop 7.0软件首次分析了尼罗尖吻鲈的染色体数目和核型,并同鳜鱼染色体数目和核型进行了分析比较,对今后拟采取的杂交尝试提供理论基础。结果显示：尼罗尖吻鲈染色体众数为2n=48,核型公式为2m+4sm+12st+30t,染色体臂数（NF）为54;鳜鱼染色体众数为2n=48,核型公式为6sm+12st+30t,染色体臂数（NF）亦为54;两种鱼染色体短臂上均无随体,单臂染色体较多。分析表明尼罗尖吻鲈与鳜鱼杂交成功的可能性较大。     

鳜塘浮游生物DNA序列多样性、水质和疾病的关系

应用RAPD技术研究了鳜塘水生生态系统中浮游生物群落α-多样性,分析了浮游生物群落DNA序列丰富度与水质和疾病发生之间的关系,探讨了池塘养殖密度和短周期、小密度、高投饵量养殖方式对浮游生物群落DNA序列丰富度及水质的影响.结果表明：1)鳜塘浮游生物群落DNA序列丰富度与水质综合指数呈显著负相关关系(P<0.01); 2)池塘高密度养殖会造成浮游生物丰富度降低和水质综合指数升高;3)短周期、小密度、高投饵量的养殖模式对环境的损伤较大;4)浮游生物群落DNA指纹01矩阵和水质理化因子样品聚类分析表明,发病塘在水质理化因子和浮游生物群落上具有相似性,为鳜疾病预报模型的建立奠定了基础.     

Characterization and ontogenetic expression analysis of the myosin light chains from the fast white muscle of mandarin fish Siniperca chuatsi

Three full-length complementary DNA (cDNA) clones were isolated encoding the skeletal myosin light chain 1 (MLC1; 1237 bp), myosin light chain 2 (MLC2; 1206 bp) and myosin light chain 3 (MLC3; 1079 bp) from the fast white muscle cDNA library of mandarin fish Siniperca chuatsi. The sequence analysis indicated that MLC1 and MLC3 were not produced from differentially spliced messenger RNAs (mRNA) as reported in birds and rodents but were encoded by different genes. The MLC2 encodes 170 amino acids, which include four EF-hand (helix-loop-helix) structures. The primary structures of the Ca(2+)-binding domain were well conserved among the MLC2s of seven other fish species. The ontogenetic expression analysis by real-time PCR showed that the three light-chain mRNAs were first detected in the gastrula stage, and their expression increased from the tail bud stage to the larval stage. All three MLC mRNAs showed longitudinal expression variation in the fast white muscle of S. chuatsi, especially MLC1 which was highly expressed at the posterior area. Taken together, the study provides a better understanding about the MLC gene structure and their expression pattern in muscle development of S. chuatsi.     

鳜碱性肌球蛋白轻链基因cDNA的克隆及其发育表达分析

肌球蛋白轻链是构成鱼类肌纤维主要组成部分,在鱼类肌肉生长和收缩过程中具有重要作用。鳜鱼具有生长快、肉质细嫩、味道鲜美、营养成分高等优良的性状。研究通过构建鳜肌肉组织cDNA文库分离到两个碱性肌球蛋白轻链基因,即MLC1和MLC3基因。序列分析显示MLC1和MLC3基因cDNA序列全长分别为1237bp和1070bp,分别编码192和150个氨基酸,除去MLC1N端多出的42个氨基酸残基,MLC1与MLC3氨基酸序列同源性为80.3%。通过PROSITEtools软件预测显示两种轻链都具有两个保守的EF-手相结构,其中第二个EF-hand结构除前三个氨基酸外同源性达100%。鱼类MLC3轻链N端没有高等脊椎动物MLC3特有标志序列。采用实时荧光定量PCR方法对鳜鱼MLC1和MLC3发育性表达分析表明,在原肠期开始有低量表达,与原肠期、尾芽期和肌肉效应期相比,心搏期和仔鱼期MLC1和MLC3表达量显著升高。研究结果首次提供了鳜肌肉组织肌球蛋白主要结构基因的分子生物学信息以及它们在鳜肌肉组织发生和功能的相关性。       

长江中下游三个湖泊中鳜消化道寄生蠕虫群落的组成与多样性

鱼类在食物网中的营养位置对其消化道寄生蠕虫的群落结构有重要作用。本研究调查了梁子湖、洞庭湖、鄱阳湖中鳜(Siniperca chuatsi)消化道寄生蠕虫群落的组成和多样性。在3个湖泊中共发现11种寄生蠕虫, 优势种均为范尼道佛吸虫(Dollfustrema vaneyi), 频率分布中感染有12种寄生虫的样本占65%, 单个样本中最大物种数为6。3个湖泊中平均物种丰富度为1.532.13, Brillouin多样性指数为0.120.33, 其中鄱阳湖中的多样性最高。梁子湖和洞庭湖之间的Jaccard相似度和百分比相似指数最高。通过比较食物网中不同营养位置鱼类的消化道寄生蠕虫群落结构, 发现鳜的消化道寄生虫群落的物种丰富度与多样性水平都高于植食性和杂食性鱼类。研究还讨论了宿主食物组成对消化道寄生蠕虫群落结构的影响。       

丹江口水库凶猛鱼集团生长特性组型的聚类分析

选择体重-体长关系W=aLb中的回归系数a和回归指数b;阶段生长参数的年增长、相对增长率、体长生长比速、生长常数、生长指标和体重的年增重、相对增重率、体重生长比速、年增积量;一般生长型的渐近体长、渐近体重、生长系数、起点年龄、拐点年龄、拐点体重、拐点瞬时增重率等18个反映鱼类生长特性的指标,运用系统聚类方法,将丹江口水库5种主要凶猛鱼组成的集团,从生长特性的差异上划分为大、中、小3个组型,并对划分结果的具体应用和鱼类集团划分的依据等问题进行了讨论。       

翘嘴鳜miR-222的表达特征

为了解翘嘴鳜miR-222的时空表达规律, 研究利用实时荧光定量PCR的方法检测miR-222在翘嘴鳜不同组织、胚胎发育及胚后发育中的相对表达丰度。研究结果显示, miR-222在肌肉相关的组织中表达较高, 特别是在成年翘嘴鳜的白肌中表达最高; 胚胎发育阶段结果显示, miR-222在胚胎发育的2细胞期就有表达, 而表达量在心动期达到最高。不同组织及不同发育阶段的差异性表达结果表明, miR-222很可能参与调控鳜鱼肌肉的生长发育。为研究合成代谢过程中miR-222在肌肉生长调控中的表达规律, 通过对翘嘴鳜幼鱼在饥饿一周后饱食一餐的实验处理下, 利用实时荧光定量的方法测定miR-222在骨骼肌中的相对表达变化。结果显示, miR-222的表达量在恢复喂食后的1h显著上升(P0.05), 表明miR-222很可能是调节鱼类骨骼肌生长过程中, 参与快速应答信号系统的一类miRNA。研究为miR-222在鱼类发育中的调控作用提供一些理论依据。       

Phylogenetic studies of three sinipercid fishes (Perciformes: Sinipercidae) based on complete mitochondrial DNA sequences

The sinipercids are a group of 12 species of freshwater percoid fish endemic to East Asia and their phylogenetic placements have perplexed generations of taxonomists. We cloned and sequenced the complete mitochondrial DNA (mtDNA) of three sinipercid fishes (Siniperca chuatsi, S. kneri, and S. scherzeri) to characterize and compare their mitochondrial genomes. The mitochondrial genomes of S. chuatsi, S. kneri, and S. scherzeri were 16,496, 17,002, and 16,585?bp in length, respectively. The organization of the three mitochondrial genomes is similar to those reported from other fish mitochondrial genomes, which contains 37 genes (13 protein-coding genes, 2 ribosomal RNAs, and 22 transfer RNAs) and a major non-coding control region. Among the 13 protein-coding genes of all the three sinipercid fishes, three reading-frame overlaps were found on the same strand. There is an 81-bp tandem repeat cluster at the end of CSB-3 in the S. scherzeri control region. The complete mitochondrial genomes of the three sinipercids should be useful for the evolutionary studies of sinipercids and other vertebrate species.     

鳜鱼基因表达转录分析中的内参选择比较

目前基因表达的转录分析多采用单一或多个看家基因作为内参来校正目的基因的表达量。该实验以鳜鱼6个不同组织和5个不同胚胎发育阶段为研究对象,应用实时荧光定量PCR技术,观察了GAPDH、β-actin和18S rRNA三个看家基因mRNA水平的表达情况。geNorm统计分析表明,胚胎发育阶段β-actin表达最为稳定;不同的组织样品间,GAPDH表达最为稳定;而18S rRNA 的表达在不同的发育阶段不稳定。当利用多基因作为内参时,使用两个最稳定表达的看家基因即可对目的基因的表达进行准确校正。该结果证实了基因表达转录分析中内参基因选择的必要性,同时为鳜鱼等鱼类基因表达分析时内参基因的选择提供有价值的参考     

草鱼GH单克隆抗体对9种硬骨鱼的免疫细胞化学定位

研究结果表明：１）鳜和鲇的胰岛中有大量的ＧＨ免疫活性内分泌细胞存在;８种有胃硬骨鱼的消化道中均未见到阳性特异性反应。２）草鱼的中腺,前腺垂体中均发现有ＧＨ和Ｓｏｍ两种免疫活性肉发泌细胞存在。     

鲍氏不动杆菌——鳜鱼暴发性死亡的新病原

１９９５年广东某地人工养殖的鳜鱼暴发传染病,大量病鱼急性死亡,引致严重经济损失,本试验从已接种嗜水气单胞菌和柱状噬纤维菌疫苗的病于脏器中分离到一种细菌,经腹腔注射和腮部接种人工感染健康鳜鱼及罗非鱼,均复制出与自然发病相似的病例,主要特点为肝脏严重变性,从上述人工感染的病鱼体内再次分离与自然发病相似的病例,主要特点为肝脏严重变性,从上述人工感染的病鱼体内再次分离到与自然发病相同的细菌。该菌为革兰氏阴     

鳜肌酸激酶M-CK cDNA的克隆与组织表达分析

利用RT–PCR和cDNA末端快速扩增法（RACE）克隆了鳜（Siniperca chuatsi）肌酸激酶（creatine kinase,CK）cDNA序列,并分析了该基因的结构特征和系统关系。鳜CK cDNA序列全长1586 bp,包括5′端非翻译区92 bp,3′端非翻译区348 bp和开放阅读框（ORF）1 146 bp,共编码381个氨基酸。鳜CK具有脊椎动物CK共有的保守结构域和肌型肌酸激酶（M-CK）同工酶的特异识别位点;氨基酸序列与M-CK型的相似度最高,而与脑型肌酸激酶（B-CK）和线粒体型肌酸激酶（Mi-CKs）的相似度较低;在CK系统关系树中鳜CK与M-CK群聚类。这些均表明,鳜CK属脊椎动物M-CK型。RT-PCR分析表明,鳜M-CK在成体不同组织中的表达量不同,其中,在皮肤、卵巢、肾脏、胃、肌肉和心脏中表达较强;而在眼和脑、肝胰脏中表达较弱。     

学习记忆通路抑制剂T-5224和KN-62对翘嘴鳜c-fos及味觉受体t1r1表达的影响

为探究翘嘴鳜 (Siniperca chuatsi) 中原癌基因c-Fos (proto-oncogene c-Fos)对摄食相关的味觉受体t1r1(taste receptor type 1 member 1, t1r1)的调控作用, 研究采用学习记忆通路相关抑制剂T-5224、KN-62处理鳜脑细胞, 通过不同浓度抑制剂处理发现T-5224对c-fos的起负调控作用而KN-62对c-fos起正调控作用, 同时筛选出适合的处理时间及浓度。30 μmol/L T-5224处理24h, 鳜脑中c-fos及t1r1的mRNA表达显著降低(P<0.05), 而200 nmol/L KN-62处理2h, 鳜脑中c-fos及t1r1的mRNA表达却极显著升高(P<0.05)。此外, 研究还分析了抑制剂处理翘嘴鳜脑细胞后, t1r1基因DNA甲基化变化。然而在两种抑制剂处理后, 鳜脑中t1r1的甲基化水平无显著变化(P>0.05)。以上结果说明, 翘嘴鳜脑细胞味觉受体t1r1转录水平变化, 可能是通过学习记忆因子c-fos基因调控, 而c-fos可能通过其他途径调控t1r1的转录, 但不是DNA甲基化。同时为翘嘴鳜驯化后摄食偏好变化提供理论依据。     

Long-term cryopreservation of sperm from Mandarin fish Siniperca chuatsi

In order to develop cryopreservation techniques for long-term preserving the sperm of Mandarin fish Siniperca chuatsi, we examined the effects of various extender and cryopreservation on post-thaw motility. We found the optimal freezing procedures for the Mandarin fish sperm is diluting the semen in D-15 extender, chilling it to 4 degrees C, adding ME2SO to a final concentration of 10% (v/v), then transferring the semen in cryotubes, holding the cryotubes for 10 min at 6 cm (about -180 degrees C) above the surface of liquid nitrogen, for 5 min on the surface of liquid nitrogen, and finally plunged into liquid nitrogen. After thawed at 37 degrees C for 60s, the sperm had the highest post-thaw motility (96.00+/-1.73%). The optimal fertilization procedures for the frozen sperm is mixing the eggs with sperm, then adding 1 ml of swimming medium (SM=45 mM NaCl+5 mM KCl+20mM Tris-HCl, pH 8.0) immediately. At the sperm/egg ratio of 100,000:1, the fertilization rate and the hatching rate of the frozen sperm cryopreserved for 1 week or 1 year in liquid nitrogen (66.01+/-5.14% and 54.76+/-4.40% & 62.97+/-14.28% and 52.58+/-11.17%) were similar to that of fresh sperm (69.42+/-8.11% and 59.82+/-5.27%) (p>0.05). This is the first report that the Mandarin fish (S. chuatsi) sperm can successfully fertilized eggs after long-term cryopreservation.     

假单胞菌对鳜鱼血液指标的影响

用假单胞菌接种健康鳜鱼引起发病,然后对发病鳜鱼进行红细胞、白细胞、血栓细胞计数;血涂片染色鉴别淋巴细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞并分类计数;测定血红蛋白值及红细胞渗透脆性值并与对照组相应指标进行比较。结果表明:假单胞菌可引起鳜鱼的红细胞总数、小淋巴细胞和血红蛋白值下降,且与对照组相比,前两者存在极显著差异(p<0.01),后者存在显著差异(p<0.05);而白细胞总数显著增加(p<0.05);嗜中性粒细胞、单核细胞极显著增加(p<0.01);血栓细胞、大淋巴细胞和红细胞渗透脆性值变化不大。