IL-2与金黄色葡萄球菌肠毒素A和B融合基因的克隆及表达

目的：IL-2与金黄色葡萄球菌肠毒素A和B融合基因的克隆及表达。方法：分别在金黄色葡萄球菌肠毒素A227Ala、B基因的两端克隆上两个酶切点Hind Ⅲ,Kpn Ⅰ。将IL-2基因突变,设计一段linker使之分别与SEA227Ala和SEB相连并克隆到PET表达载体中,在大肠杆菌DH5a（DE3）-Pass中表达。结果：表达的蛋白占总蛋白15%。结论：IL-2与金黄色葡萄球菌肠毒素A和B融合蛋白能在大肠杆菌中有效表达。     

金黄色葡萄球菌肠毒素A的基因克隆、表达及活性试验

利用PCR从金黄色葡萄球菌标准株（Staphylococcus aureus, ATCC13565）中克隆了金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)的基因,序列测定结果与报道完全一致。构建了表达载体pETSEA并获得高效表达,重组蛋白（rSEA）在37℃诱导时以包涵体形式存在,降低温度则出现可溶表达,可溶性rSEA占总rSEA的55%。可溶性rSEA经Ni²⁺亲和层析纯化,达电泳纯。通过同源模建对rSEA对SEA进行结构比较,结果表明尽管rSEA比野生型SEA多了9个氨基酸但其结构并没有明显的变化。单核细胞增殖试验进一步证明了该结论：将rSEA与SEA同外周血单个核细胞共同培养,两者均能有效地促进其增殖。将rSEA与体内激活的脾细胞共培养,则能增强脾细胞的体外抑瘤活性。     

快速检测金黄色葡萄球菌肠毒素A基因方法的建立与应用

目的建立一种快速准确定量检测金黄色葡萄球菌肠毒素A的方法。方法以femB、SEA基因分别作为金黄色葡萄球菌菌株、肠毒素A的靶序列,设计合成引物和TaqM an探针;收集腹泻患者大便标本分离的金黄色葡萄球菌68株,并定量检测其肠毒素A。结果TaqM an探针荧光聚合酶链反应检测金黄色葡萄球和肠毒素A的灵敏度均为1.0×102拷贝。68株金黄色葡萄球菌中检出产肠毒素A菌株11例(16.2%,11/68),CT值为13.5~20.6。结论TaqM an探针荧光聚合酶链反应能够准确快速检测金黄色葡萄球菌肠毒素A。     

金黄色葡萄球菌肠毒素

金黄色葡萄球菌是一种重要的病原体,它产生多种类型的毒素,从而引起各种类型的疾病。金黄色葡萄球菌肠毒素(Staphylococcal enterotoxins,SEs),是一组血清学上互不相同的热稳定肠毒素,有10个血清型。由于食入了被SEs污染的食品而主要引起肠胃炎,此外,SEs还是一种强的超抗原,它可以刺激非特异性T细胞增殖。SEs各型之间有着相似的结构和功能。     

金黄色葡萄球菌肠毒素 C2 的基因克隆、 表达及其生物学活性

利用 PCR 技术从金黄色葡萄球菌的基因组 DNA 中克隆 SEC2 全长基因, PCR 产物与 pGEM-T 载体连接,经测序证实后进行亚克隆,构建其表达载体 pET-28a-SEC2 ,在大肠杆菌 BL21(DE3) 中表达成熟重组蛋白 (rSEC2) , 纯化 rSEC2 蛋白并对其生物学活性进行研究 . 结果表明：成功克隆了 SEC2 全长基因,测序证实该基因共 717 bp ,编码 239 个氨基酸,与 GenBank 中收录的 SEC2 成熟蛋白质序列完全一致, SEC2 基因登录 GenBank(Accession number ： AY450554) ; 构建了 SEC2 的表达载体 pET-28a-SEC2 ,并在大肠杆菌 BL21(DE3) 中得到高效可溶性表达,可溶性的 rSEC2 经 Ni²⁺ 亲和层析纯化达到电泳纯,纯化的 rSEC2 蛋白经蛋白质印迹检测,并能有效刺激人外周血单个核细胞的增殖,被 rSEC2 刺激的外周血单个核细胞在体外对肿瘤细胞的生长有显著的抑制作用 .     

葡萄球菌肠毒素A全长基因的克隆和序列测定

分析和克隆超抗原（SAg）葡萄球菌肠毒素A（SEA）全长基因,为进行SAg基因应用于肿瘤导向治疗和基因治疗的研究奠定基础。设计并合成一对针对SEA全长基因的特异性引物,用PCR反应从产SEA的标准葡萄球菌菌株的基因组中扩增出SEA全长基因。PCR产物与克隆载体pGEM-T连接后进行基因序列测定。成功地从标准葡萄球菌菌株的基因组中扩增出一条约770bp的条带。基因序列测定表明,与巳发表的SEA全长基国序列完全一致。     

金黄色葡萄球菌肠毒素C的原核表达、纯化及活性鉴定

目的：在大肠杆菌中表达金黄色葡萄球菌肠毒素C（SEC）,并对其活性进行检测。方法：以金黄色葡萄球菌基因组为模板扩增SEC基因,经测序正确后插入原核表达载体pBV220中,转化大肠杆菌DH5α后温度热诱导重组SEC表达;表达产物经阳离子柱纯化后,用ELISA鉴定其抗原性;通过观测表达产物对鼠脾淋巴细胞的刺激增殖情况,检测其超抗原活性。结果：构建了SEC-pBV220原核表达载体,在大肠杆菌中可快速、高效表达SEC蛋白,表达产物具有超抗原活性。结论：实现了SEC的原核表达。     

PCR检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素基因

目的：检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素基因谱携带情况,探讨与食物中毒发病相关的金黄色葡萄球菌基因类型。方法：取食品中检出的金黄色葡萄球菌进行分离培养鉴定,通过PCR技术检测样本18种不同型的肠毒素基因的携带情况,并进行统计学分析。结果：食品中检出的金黄色葡萄球菌肠毒素基因有较高的阳性检出率,主要检出sea、seb、sei、seg、sel、sem、sen等基因,其中sea基因检出率最高,达到77.27%;sei、seg、sem、sen基因具有相关性,检出率为9.09%;seb、sel基因的检出率为4.55%。结论：在食品中主要检出金黄色葡萄球菌肠毒素sea、sei、seg、sem、sen、seb、sel等基因,其中,sei、seg、sem、sen基因的相关性还有待进一步深入研究。     

PCR技术检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素B基因

目的:金黄色葡萄球菌B型肠毒素是污染食品引起食物中毒的主要原因之一,针对进出口食品卫生监测的需要,研究一种简便、快速、准确的实验方法.方法:利用聚合酶链反应技术(PCR)采用特异的模板探针引物进行杂交,最后通过电泳技术与阳性对照进行比对,来判断阴阳性结果.结果:本方法检出率高,每克样品中有4个金黄色葡萄球菌即可检出,24小时即可报告结果.结论:PCR方法检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素B基因快速、准确,检测周期短,既可提高检出率,又可节省检测时间.     

金黄色葡萄球菌肠毒素研究进展

金黄色葡萄球菌肠毒素是由金黄色葡萄球菌分泌的一类胞外毒素,其中传统型为SEA-SEE,具有催吐活性。目前也发现了一些催吐活性未知的新类型肠毒素,命名为SEls。所有肠毒素的分子量都在22-28KDa之间,由单一肽链组成,其稳定性好,可耐大多数蛋白水解酶。金黄色葡萄球菌肠毒素具有较强的超抗原特性,可促使T淋巴细胞大量增殖,同时表现出对组织相容性复合物Ⅱ类分子(MHCⅡ)等位基因的不同偏爱性。超抗原的产生和调控依赖agr系统,同时也受其它因素的调控,如一些氨基酸。因此在免疫治疗中具有着重要作用。本文从性质、组成、结构、功能、检测方法等方面对金黄色葡萄球菌肠毒素进行简要介绍,为肠毒素的研究提供依据。     

葡萄球菌A型肠毒素的高效表达和分离纯化

根据已知葡萄球菌A型肠毒素 (SEA)的基因序列 ,用PCR从产毒标准株S .aureusFRI 10 0中扩增得到约70 0的SEA基因片段 ,并将该片段克隆至表达载体 pBV2 2 0中 ,实现了高效表达。表达产物以可溶性形式存在 ,表达的毒素用CM SephroseFF离子交换层析进行纯化 ,获得了高纯度的重组SEA ,SDS PAGE显示单一条带。ELISA试验证明所获重组SEA具有与天然SEA相似的免疫学性质。     

金黄色葡萄球菌肠毒素B基因的克隆和在大肠杆菌中高效表达

利用PCR方法从金黄色葡萄球菌TSTw基因组DNA中扩增出约700bp的DNA片段,将之克隆到pGEM7Zf(+)载体上并转化大肠杆菌 DH5α菌株。重组质粒的测序结果表明克隆到了seb基因,它含有717bp（不包括N端81bp的信号肽编码区）,其核苷酸序列与文献报道完全一致。将其连接于表达载体7ZTS上,转化到大肠杆菌JM109（DE3）内。表达的SEB占总蛋白33.5%。      

金黄色葡萄球菌肠毒素A、B、C、D、E重组载体的构建及表达

金黄色葡萄球菌肠毒素（Staphylococcal enterotoxins,SEs）是一组结构毒力相似、血清型不同的可溶性小分子蛋白质,平均分子质量为26~30 kD,是引起细菌性食物中毒及肠胃炎的主要因素之一。为了制备金黄色葡萄球菌肠毒素的纯品,首先合成了SEA、SEB、SEC、SED和SEE的基因序列,然后构建了5种肠毒素的原核表达载体,分别转入BL21（DE3）细胞中进行诱导表达。通过SDS-PAGE和Western blot验证,5种肠毒素蛋白均被成功表达,并且在较低的诱导温度（16 ℃）获得一定量的可溶性蛋白。成功制备了5种金黄色葡萄球菌肠毒素的可溶性蛋白,为今后更好地解决因SEs引起的食品安全问题奠定了基础。     

Staphylococcal accessory gene regulator (sar) as a signature gene to detect enterotoxigenic staphylococci

AIMS: To evaluate the use of a staphylococcal accessory gene regulator (sar) as a means of detecting enterotoxigenic staphylococci. METHODS AND RESULTS: SarA gene-specific primers were designed and applied in PCR, which resulted in the detection of 49 sar-positive isolates from a total of 67 natural food isolates of staphylococci. Colony hybridization using PCR-generated Digoxigenin (DIG)-labelled sarA probe tested in spiked samples of khoa (a traditional heat-concentrated milk product) comprising a mixed microflora ensured the specificity of the probe. Validation experiments with the commercial samples of khoa also demonstrated the specificity of the probe. PCR characterization for enterotoxins A-D revealed the presence of at least one of the toxin-encoding genes in all the sarA-positive isolates tested. CONCLUSION: The study indicated that sarA gene could be an ideal marker gene either in colony hybridization or in PCR, for an effective detection of potentially enterotoxigenic strains of staphylococci in a food system. SIGNIFICANCE AND IMPACT OF THE STUDY: As an alternative to targeting the individual toxin genes, a regulatory gene responsible for controlling the synthesis of various virulence factors may be a suitable target gene for screening potentially toxigenic staphylococci in food system using nucleic acid-based methods.     

金黄色葡萄球菌肠毒素A基因的克隆

利用PCR方法从金葡菌基因组DNA中扩增出约 80 0bp的DNA片段 ,将之克隆到pUC19 T载体上并转化E .coliDH5α菌株。重组质粒的测序结果表明 ,克隆到了sea基因 ,它含有 774bp的阅读框架 (包括N端 72bp的信号肽编码区 ) ,其核苷酸序列与文献报道完全一致。     

抗B型葡萄球菌肠毒素单克隆抗体的研制及其鉴定

本文用纯化B型葡萄球菌肠毒素(SEB)免疫Balb/c小鼠的脾细胞与SP2/O骨髓瘤细胞融合,经筛选及克隆化共获6株能稳定分泌抗SEB的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株。通过将以混合佐剂(降植烷 FIA的混合物)和杂交瘤细胞同时注射制备McAb腹水的方法与常规法相比较,不仅量多(多1.56～1.84倍),而且活性好(高1个数量级)。初步鉴定表明:6株McAb均属IgGl亚类;其培养上清和腹水的ELISA滴度分别为10~(-3)～10~(-4)和10~(-5)～10~(-8)。它们与SEA均不起反应,其中3株(Sl.B4和E7)与SECl有轻微交叉反应;都能被10μg/m的SEB完全阻断等。说明其免疫学活性及特异性均较良好。     

金黄色葡萄球菌核酸酶A基因在大肠杆菌中的高效表达

这篇文章报道了金黄色葡萄球菌核酸酶A的克隆和在温控启动子P_RP_L调控下在E．Coli中的高效表达。SDS—PAGE分析表明,核酸酶A的含量可占E．Coli细胞总蛋白含量的60%。经有效的增溶和复性处理后,重组酶具有与天然酶相同的活力;N-末端氨基酸分析的结果指出,fMet在转译后被加工去除;对重组SNaseA在构象上的同一性也通过Phenyl—Su—perose疏水柱层析进行了分析。     

金黄色葡萄球菌肠毒素A对H22小鼠移植瘤的抑制作用

旨在探讨金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)在KM鼠体内的抑瘤效果.建立H22荷瘤小鼠模型,将20只小鼠随机分为对照组(生理盐水)、低剂量组(15 μg/ml)、中剂量组(25 μg/ml)和高剂量组(50 μg/ml),观察肿瘤生长趋势,计算抑瘤率,通过ELISA检测IL-2的含量.结果显示,给药组肿瘤生长趋势均较对照组缓慢;对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组的抑瘤率分别为0,28.9%,34.0%,51.0%(P<0.05);血清中IL-2含量分别为58.9 pg/ml、83.6 pg/ml、91.8 pg/ml、118.1 pg/ml.金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)可抑制H22肿瘤的生长,并上调IL-2的分泌.