肾综合征出血热病毒血凝素的研究 Ⅰ.病毒血凝活性的初步研究

以不同宿主来源的肾综合征出血热病毒(HFRSV)感染乳鼠,取脑经蔗糖-丙酮法制备血凝素,对这些毒株的血凝活性和血凝抑制(下称血抑,HI)反应进行了初步研究比较。结果提示受试毒株间血凝活性高低不等,似与对乳鼠的致病毒力有一定关系,血凝素抗原与其他病毒的免疫血清无交叉反应,在血凝活性较高的几个毒株间血凝素抗原性差异不明显,并找到了一株血抑滴度较高的单克隆抗体(McAb)。     

一种诊断肾综合证出血热的新方法——血凝与血凝抑制试验

第四军医大学微生物教研室和安徽省医学科学研究所病毒室共同协作,首次用国内分离出的毒株建立了肾综合证出血热(HFRS)病毒血凝与血凝抑制试验。该法首先将国内各代表毒株和朝鲜出血热(KHF)病毒76/118株适应于乳鼠,在此基础上,参照汤一苇等报导的方法加以简化,从感染乳鼠脑中制备血凝素。对国内主要代表毒株血凝活性进行了研究。     

双歧杆菌血凝特性的研究

观察3株双歧杆菌对人O型、人B型、绵羊、兔、鸡和小鼠红细胞的凝集滴度,并对其血凝素进行了提取。结果表明,3株双歧杆菌均能凝集各种来源的红细胞,血凝滴度无明显差异;D-甘露糖不能抑制血凝。提取的脂磷壁酸(LTA)具有血凝活性。其血凝素受体为糖类。     

影响风疹病毒血凝和血凝抑制试验若干因素的研究

对大量制备高效价风疹病毒(RV)血凝素问题进行研究发现,每日更换RV感染细胞维持液可获得大量高效价血凝素。试验用Auletta液稀释血凝素、PH6.2、ca~(++)、Mg~(++)。离子浓度各0.1％时血凝滴度最高。比较两种处理血清中非特异性凝集抑制物的方法,发现高岭土法和肝素—氯化锰法结果相似。用此两种方法同时检测107份孕妇血清,结果符合率达98％。但高岭土法更为简便经济。     

流行性出血热病毒血凝和血凝抑制试验的进一步研究

本文对流行性出血热研究中传统采用的血凝和血凝抑制试验进行了较大改进。首次用吐温80-乙醚法制备滴度较高的血凝素;以鸽红细胞代替了常用的鹅血球;采用冻存的血球替代了新鲜红细胞。     

麻疹病毒血凝素基因H的点突变与血凝作用的转变

经Ｂ９５ａ细胞系纯化分离的三株麻疹病毒Ｆｕ、ＩＭＡ、ＳＭＤ的血凝试验（ＨＡＤ）为阴性,但将它们分别感染Ｖｅｒｏ细胞并传代培养后其血凝试验由阴性转变为阳性。实验证明这种血凝表型的转变与血凝素基因Ｈ的表达与吸附无关。以ＰＣＲ扩增血凝素基因Ｈ和融合基因Ｆ,并分别进行序列分析。表明三株病毒在两种培养细胞中传代后其融合基因Ｆ的序列未发现差异。但血凝素基因Ｈ的序列却有显著的点突变并伴随血凝表型的转变。其中Ｆｕ     

流行性乙型脑炎病毒的血凝试验III．苯浸血凝素性質的进一步研究

1．作者会发表流乙脑炎病毒戚染鼠塍的怒液以苯庭理溅屡蒸磺乾燥後,可以獾得较稚嫩定的血凝秦。同时还报导了新华廠的苯有高度的血凝抑制作用,不经减麈蒸驶除浮,即不能凝集血球。进一步研究强现有些廒家(新中等)出产的苯不抑制血凝,因此不经减屋蒸发,亦可獾得高效僵的血凝素感液。此獯血凝素怒液在4℃冰箱内可保持其滴度10天到1月时,其滴度由1：2560降至1：160。 2．流乙脑炎病毒血凝素用pH6．3的磷酸鹽缓重鹽水稀释时,於试验操作过程中,其滴度亦会降低,因之影响结果的准碓性。我们改用了pH8．2的磷酸噙授衙啸水稀释血凝秦及血清,加入磷酸二氧钠嗵水稀释的血球,克服了这种缺点。 3．实验又证明我们所裂成的血凝素,可以作为補體结抗元。在特異性方面,似乎此Espana氏苯浸抗元遗璎好一点;其优点在于制偏方法简单,无需真空帛氣设偏。     

斑疹伤寒间接血凝试验

间接血凝试验(简称血凝试验)具有很高的敏感性和特异性,近年来已成为微生物学、免疫学以及血清流行病学调查工作中应用较广泛的血清学方法之一。本文就斑疹伤寒血凝试验方法的一些技术问题,尤其是影响血凝试验的各种因素,作一综合性介绍。     

广谱肾综合征出血热病毒单克隆抗体的A35的生物学性状

具有中和及血凝抑制活性的、能和世界各地分离到的肾综合征出血热病毒(HFRSV)发生反应的、广谱的单克隆抗体(McAb),对HFRSV的诊断和分子生物学研究都有重要意义。 本文着重比较了HFRSV McAbA5、A19、A25-1、A25-7和A35的生物学性状,并观察了对感染动物的实验治疗效果。     

影响麻疹病毒血凝素滴度的某些因素的探讨

自从Peries等报告麻疹病毒具有凝集猴血球的特性之后,近来有不少作者证实了这一研究。但麻疹病毒的血凝滴度较低,作血凝抑制试验时,一般均采用理化方法将血凝素加以浓缩。我们曾对麻疹病毒的血凝性质进行研究,可以不经浓缩而获得滴度较高的血凝素。关于应用麻疹病毒血凝抑制试验检查麻疹抗体的研究,已有报告。现将影响麻疹病毒血凝素滴度的某些因素报告如下:     

犬细小病毒血凝的检测和血凝抑制试验方法的优化

目的优化血凝和血凝抑制（HA／HI）试验条件,提高HA／HI试验的稳定性和准确性。方法在不同的缓冲液、pH值、猪红细胞浓度、BSA浓度下进行HA／HI试验,选择合适的HA／HI条件。结果pH7．0、0．1％BSA、0．2mol／LPBS、1％猪红细胞可作为HA／HI试验合适的反应条件,猪血球可保存12d不影响试验结果。结论方法优化后稳定性增强、检测时间缩短、准确性提高。     

间接血凝试验检测抗乙型肝炎表面抗原的抗体

间接血凝试验是将抗原吸附在红血球上,当遇到血清中存有相应抗体时,即可发生血球凝集。间接血凝试验检测抗乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的抗体(Anti-HBs)较琼脂扩散、对流电泳和补体结合试验敏感性高,而与放射免疫试验敏感性近似,且具有优于放射免疫的简     

流行性出血热病毒血凝素抗原位点分析

用八株不同来源的流行性出血热(EHF)病毒的单克隆抗体(McAb),采用血凝抑制试验、反向间接血凝抑制试验、间接酶联免疫及阻断酶联免疫试验等,对两种方法(TE、SA)制备的血凝素抗原进行分析。根据A35、2A6McA5试验的结果,证实血凝素抗原中的核蛋白上存在有非构象依赖性的血凝结合位点;而另外5株McAb在血凝抑制活性方面,虽具有明显的株间交叉,但在反向间接血凝抑制试验、间接酶联免疫试验时则均为阴性,故认为其血凝结合位点位于病毒的膜蛋白,可能与G_2糖蛋白有关,为构象依赖性位点。有关4G6McAb,在阻断酶联免疫试验时,虽与A35、2A6一样具有较高的阻断率,但在反向间接血凝抑制试验、间接酶联免疫试验时明显有别于后二者,对其属性有待进一步确定。     

肾综合征出血热病毒糖蛋白的提纯和鉴定

以感染肾综合征出血热病毒(HFRSV)的Vero E6细胞为材料,用免疫亲和层析结合制备聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)从感染细胞中提纯了HFRSV两种糖蛋白。先用免疫亲和层析从感染细胞的粗制抗原中获得含有四种蛋白的混合液,用[~3H]-氨基葡萄糖在感染细胞中标记病毒糖蛋白,观察到[~3H]-氨基葡萄糖只结合入78K和57K的病毒蛋白。再用制备SDS-PAGE从HFRSV混合液中提纯78K和57K两种蛋白。实验证明这两种糖蛋白均具中和抗原决定簇,57K的糖蛋白尚具血凝活性,初步鉴定表明这两种糖蛋白相当于文献报道的HFRSV G_1和G_2。     

流行性乙型脑炎病毒的溶血性及不同株的溶血性、血凝性和毒力比较

作者发现流行性乙型脑炎(简称乙脑)病毒具有溶解红血细胞(简称溶血)的性能,并且这种性能可被特异性免疫血清抑制。出现明显的乙脑病毒溶血现象的条件是：在pH6．4时吸附病毒,然后在偏酸或偏碱的条件下,在37℃放置4—6小时。乙脑病毒除了能溶解鸽红血细胞外,还能溶解家兔红血细胞。冰冻融解和超声渡处理不能提高乙脑病毒的溶血能力。七株对小白鼠致死力较强的乙脑病毒都具有较高的血凝素滴度。对其中五株进行了溶血性能的测定,结果都有明显的溶血性。其中西安．．株的一个弱毒变异株的血凝性极低,并且不引起溶血现象。西安“强毒株和弱毒株的蚀斑滴度(Pfu)相似。强毒株在金地鼠肾细胞中连续传代后,其血凝性和溶血性随着病毒对小白鼠致死力(LD,a)的减弱而下降。弱毒林返回乳小白鼠脑内连续传代后,三者都回升,表明弱毒株的血凝性和溶血性确实发生了改变,并且这种改变可能与致死力的改变有关。     

甲3型流行性感冒病毒血凝素的pH特征

本文报告,pH9.6碳酸缓冲液对甲3型流感病毒的血凝滴度有明显降低作用,对甲1型和乙型仅有轻微影响,对甲2型的影响则介于两者之间。用不同pH的碳酸缓冲液、磷酸缓冲液及盐水等,测定甲3型流感病毒的血凝滴度,结果表明高pH对其有明显影响。分别具有甲3、甲2或甲1血凝素的重组株,在pH9.6碳酸缓冲液中,其血凝素的稳定性也和上述结果一样,即具有甲3血凝素的重组株,其血凝素对pH9.6碳酸缓冲液最敏感;甲1重组株的血凝素较稳定:而具有甲2血凝素的重组株则介于两者之间。利用此pH特征测定新分离的经血凝抑制试验鉴定为甲3型和乙型流感病毒,得到同样结果,因此有可能利用此pH特征对新分离的甲3型流感病毒进行初步鉴定。     

应用病毒感染细胞酶联免疫吸附试验检测肾综合征出血热病毒抗原和抗体

应用病毒感染细胞酶联免疫吸附试验(VIC-ELISA)检测肾综合征出血热病毒(HFRSV)感染性滴度比双抗体间接ELISA和间接免疫荧光法(IFA)分别敏感10倍和100倍。VIC-ELISA检测兔抗HFRSV抗体的滴度比双抗体间接夹心ELISA和IFA分别敏感1.6倍和8倍。VIC-ELISA能敏感、快速、有效地检测HFRSV抗原和抗体。     

H5N1禽流感病毒HA基因在昆虫细胞中的表达及生物活性鉴定

经RT-PCR扩增了H5N1亚型禽流感病毒血凝素基因(HA)片断,限制性内切酶酶切后将其克隆到pFastBacHTA杆状病毒转座载体,经酶切鉴定及测序,筛选出阳性重组转座载体pFastBac-H5。将pFastBacH5转化含有杆状病毒穿梭载体（bacmid）的DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑筛选和PCR鉴定获得重组杆状病毒穿梭载体rBacmid-H5。rBacmid-H5在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,SDS－PAGE蛋白电泳、Western blot、血凝试验和血凝抑制试验分析表明：分子量约63Kd重组血凝素蛋白（rH5）在sf9昆虫细胞中实现了高效表达。rH5具有血凝活性,而且其血凝活性能够被H5N1禽流感病毒高免血清所抑制;rH5免疫鸡诱导产生针对H5N1禽流感病毒亚型特异的血凝抑制抗体,说明表达的重组蛋白具有与天然蛋白相似的生物活性。     

猴源细小病毒血凝和血凝抑制试验的优化与应用

目的优化猴源细小病毒的血凝和血凝抑制（HA/HI）试验条件,以优化的方法对160份2010年～2011年间采集于中国北京地区圈养猴群的血清样品进行猴源细小病毒抗体调查。方法 在不同的缓冲液、缓冲液pH值、猪红细胞浓度、兔血清浓度、阿氏液比例和温度下进行猴源细小病毒的HA/HI试验,选择合适的HA/HI条件。通过优化的HA/HI方法对160份猴血清进行猴源细小病毒抗体检测。结果pH 7.0、0.02 mol/L PBS、0.75%猪红细胞、0.5%兔血清和4℃可作为猴源细小病毒HA/HI试验合适的反应条件,猪血球以1∶1阿氏液抗凝,可保存5～7 d不影响实验结果。猴血清的猴源细小病毒抗体阳性率为58.1%。结论方法优化后稳定性增强、检测时间缩短、准确性提高。细小病毒在我国北京地区圈养猴群中感染比较普遍。     

用反向被动血凝及血凝抑制方法检测流行性出血热病毒抗原和抗体

本文建立了检测流行性出血热病毒(EHFV)液体抗原及抗体的反向被动血凝(RPHA)和血凝抑制(RPHI)方法,RPHA检测EHFV抗原的敏感性与ELISA相近;RPHI检测EHFV抗体与IFA的符合率为97.3％,敏感性略低。