肾综合征出血热病毒血凝素的研究 Ⅰ.病毒血凝活性的初步研究

以不同宿主来源的肾综合征出血热病毒(HFRSV)感染乳鼠,取脑经蔗糖-丙酮法制备血凝素,对这些毒株的血凝活性和血凝抑制(下称血抑,HI)反应进行了初步研究比较。结果提示受试毒株间血凝活性高低不等,似与对乳鼠的致病毒力有一定关系,血凝素抗原与其他病毒的免疫血清无交叉反应,在血凝活性较高的几个毒株间血凝素抗原性差异不明显,并找到了一株血抑滴度较高的单克隆抗体(McAb)。     

反向间接血凝抑制试验检测肾综合征出血热病毒总抗体

本研究用RPHI、IFA-IgG检测拟诊HFRS患者82例156份血清,其中66例检测出特异性抗体,非HFRS患者血清256份未出现假阳性反应。RPHI与IFA-IgG检测恢复期血清比急性期血清效价呈4倍以上升高者分别为83.6％及73.8％,5病日内血清阳性检出率为53.3％及41.9％,6～10病日为95.8％及79.2％。两种试验的一致率为88.5％,阳性检出率比较x~2=9.39,P<0.01,RPHI非常显著高于IFA-IgG。     

流行性出血热病毒血凝和血凝抑制试验的进一步研究

本文对流行性出血热研究中传统采用的血凝和血凝抑制试验进行了较大改进。首次用吐温80-乙醚法制备滴度较高的血凝素;以鸽红细胞代替了常用的鹅血球;采用冻存的血球替代了新鲜红细胞。     

影响风疹病毒血凝和血凝抑制试验若干因素的研究

对大量制备高效价风疹病毒(RV)血凝素问题进行研究发现,每日更换RV感染细胞维持液可获得大量高效价血凝素。试验用Auletta液稀释血凝素、PH6.2、ca~(++)、Mg~(++)。离子浓度各0.1％时血凝滴度最高。比较两种处理血清中非特异性凝集抑制物的方法,发现高岭土法和肝素—氯化锰法结果相似。用此两种方法同时检测107份孕妇血清,结果符合率达98％。但高岭土法更为简便经济。     

一种诊断肾综合证出血热的新方法——血凝与血凝抑制试验

第四军医大学微生物教研室和安徽省医学科学研究所病毒室共同协作,首次用国内分离出的毒株建立了肾综合证出血热(HFRS)病毒血凝与血凝抑制试验。该法首先将国内各代表毒株和朝鲜出血热(KHF)病毒76/118株适应于乳鼠,在此基础上,参照汤一苇等报导的方法加以简化,从感染乳鼠脑中制备血凝素。对国内主要代表毒株血凝活性进行了研究。     

流行性出血热病毒单克隆抗体的反向被动血凝和被动血凝抑制试验在诊断中的初步应用

本文用流行性出血热病毒单克隆抗体致敏羊血球,做反向被动血凝和被动血凝抑制试验。检查出血热病毒抗原和抗体,不仅敏感,性能稳定,而且操作简便、快速。     

猴源细小病毒血凝和血凝抑制试验的优化与应用

目的优化猴源细小病毒的血凝和血凝抑制（HA/HI）试验条件,以优化的方法对160份2010年～2011年间采集于中国北京地区圈养猴群的血清样品进行猴源细小病毒抗体调查。方法 在不同的缓冲液、缓冲液pH值、猪红细胞浓度、兔血清浓度、阿氏液比例和温度下进行猴源细小病毒的HA/HI试验,选择合适的HA/HI条件。通过优化的HA/HI方法对160份猴血清进行猴源细小病毒抗体检测。结果pH 7.0、0.02 mol/L PBS、0.75%猪红细胞、0.5%兔血清和4℃可作为猴源细小病毒HA/HI试验合适的反应条件,猪血球以1∶1阿氏液抗凝,可保存5～7 d不影响实验结果。猴血清的猴源细小病毒抗体阳性率为58.1%。结论方法优化后稳定性增强、检测时间缩短、准确性提高。细小病毒在我国北京地区圈养猴群中感染比较普遍。     

肾综合征出血热病毒糖蛋白的提纯和鉴定

以感染肾综合征出血热病毒(HFRSV)的Vero E6细胞为材料,用免疫亲和层析结合制备聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)从感染细胞中提纯了HFRSV两种糖蛋白。先用免疫亲和层析从感染细胞的粗制抗原中获得含有四种蛋白的混合液,用[~3H]-氨基葡萄糖在感染细胞中标记病毒糖蛋白,观察到[~3H]-氨基葡萄糖只结合入78K和57K的病毒蛋白。再用制备SDS-PAGE从HFRSV混合液中提纯78K和57K两种蛋白。实验证明这两种糖蛋白均具中和抗原决定簇,57K的糖蛋白尚具血凝活性,初步鉴定表明这两种糖蛋白相当于文献报道的HFRSV G_1和G_2。     

用反向被动血凝及血凝抑制方法检测流行性出血热病毒抗原和抗体

本文建立了检测流行性出血热病毒(EHFV)液体抗原及抗体的反向被动血凝(RPHA)和血凝抑制(RPHI)方法,RPHA检测EHFV抗原的敏感性与ELISA相近;RPHI检测EHFV抗体与IFA的符合率为97.3％,敏感性略低。     

犬细小病毒血凝的检测和血凝抑制试验方法的优化

目的优化血凝和血凝抑制（HA／HI）试验条件,提高HA／HI试验的稳定性和准确性。方法在不同的缓冲液、pH值、猪红细胞浓度、BSA浓度下进行HA／HI试验,选择合适的HA／HI条件。结果pH7．0、0．1％BSA、0．2mol／LPBS、1％猪红细胞可作为HA／HI试验合适的反应条件,猪血球可保存12d不影响试验结果。结论方法优化后稳定性增强、检测时间缩短、准确性提高。     

斑点杂交检测肾综合征出血热病毒核酸的研究

本研究用非放射性标记物—地高辛碱性磷酸酶标记肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）ｃＤＮＡ制备探针,检测恙螨、鼠肺中ＨＦＲＳＶＲＮＡ的ＲＴＰＣＲ扩增产物中目的片段。结果表明：ＨＦＲＳＶ抗原阳性鼠体螨５０只组、１０只组,游离螨５０只组、１０只组,ＨＦＲＳＶ抗原阳性鼠肺１０００ｍｇ、５００ｍｇ,抗原阴性鼠肺１０００ｍｇ检测结果为阳性,呈现明显紫褐色斑点,而ＲＴＰＣＲ检测时未能扩增出ＨＦＲＳＶ抗原阴性鼠肺１０００ｍｇ和游离螨１０只组中的目的条带。实验结果说明,斑点杂交检测方法比ＲＴＰＣＲ敏感。     

基因芯片技术检测肾综合征出血热病毒核酸的研究

To establish a rapid, sensitive and specific diagnostic assay for Hantavirus with microarray techniques, specific primers and probes were designed according to the conservative and specific DNA sequence of 76-118 strain and R22 strain. The probes were spotted on glass slides to form microarrays.The Cy3-1abled single stranded DNA fragments prepared by dissymmetical PCR were hybridized with the probes on the glass slides. The microarrays were scanned and analyzed with a scanner. The results showed that the DNA microarray could detect the different typed DNA of HTN and SEO with adequate specificity and sensitivity. The developed DNA microarray and techniques might be a very useful method for diagnosis and prevention, and could be widely applied in specific pathogens detection ofinfectious diseases such as hemorrhagic fever with renal syndrome.     

基因芯片技术检测肾综合征出血热病毒核酸的研究

肾综合征出血热 (Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome,HFRS)是由布尼亚病毒科汉坦病毒属 (Hantavirus,HV)中的病毒引起的急性传染病,该病的病死率较高,早期诊断和治疗尤为重要.     

肾综合征出血热(HFRS)病毒和新疆出血热(XHF)病毒形态比较

用超薄切片电镜技术比较了包括KHF在内的7株HFRS病毒,并与分类地位已明确的XHF病毒作了形态学比较,结果说明HFRS病毒具有多样形态、多部位成熟、多方式释放等形态学持点,可能是布尼科病毒新属成员。     

应用免疫粘附血凝技术检测流行性出血热病毒抗原和抗体的试验研究

本文对免疫粘附血凝(IAHA)技术进行了改进并用于检测流行性出血热病毒搞原和血清效价。比较了不同毒株在Vero-E_6细胞内抗原滴度,表明A_9株的滴度最高达1:64,以IAHA法对出血热病人9份血清,3份恢复期血清和家兔免疫血清6份进行了效价测定。并同时用免疫荧光(IFA)法进行比较,结果抗体阳性率二种方法一致,但前者的抗体滴度和增长倍数较后者高2-64倍,以上结果表明IAHA法可代替IFA法用于出血热病人或感染动物的抗体检测。     

肾综合征出血热病毒隐性感染的动态观察

本文报道ＨＦＲＳ病毒隐性感染的连续三年动态观察,健康人群ＨＦＲＳ病毒抗原检测以未梢血片,用ＤＡＦ法检测,结果表明,贵州ＨＦＲＳ高发疫区阳性率为４．２３％,动态观察连续三年结果与此基本一致。抗原检还发现同室居住有多人呈阳性。健康人群ＨＦＲＳ抗体检测以ＩＦＡ法,结果贵州ＨＦＲＳ高发疫区人群阳性率为６．６％,动态观察连续三年中阳性率逐年有上升趋势,但这种上升与发病率大幅度下降呈不平行关系。抗体检测提示,隐性感染人群抗体滴度不高,对疫区低滴度抗体阳性可疑病人的诊断应结合多方综合考虑,以免误诊。     

肾综合征出血热病毒T-E抗原的制备及其特性研究

本试验建立了用Tween 80和乙醚处理HFRSV感染鼠脑、肺制备特异性抗原的方法,该抗原具有安全、稳定、特异性好、制备简单的特点,可能是HFRSV抗原的共同组分。     

东北三省6株肾综合征出血热病毒生物学性状的研究

肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS)是我国重点防治的急性传染病,对于流行于不同地区的汉坦病毒(hanatavirus)进行分离和系统地鉴定,可以为HFRS的防治提供科学依据,特别是对流行株血清型及基因型的确定,是研制疫苗和确定防治重点及对策的重要前提,也为研究我国汉坦病毒的遗传和进化特征奠定了基础。研究对6株流行于东北三省的汉坦病毒进行了全面鉴定,其中H8205、H8207株为人源性汉坦病毒,其余均为鼠源性汉坦病毒。研究表明,6株病毒具有病毒型别明确,抗原性较为广谱,免疫原性好,在Vero细胞上适应能力强及病毒滴度高,以及来源及传代历史清楚等特点,适合作为双价HFRS纯化灭活疫苗候选毒株,并且可建立起完善和合格的生产用毒种库,为我国生产以Vero细胞为基质的双价肾综合征出血热纯化灭活疫苗奠定了坚实的基础。     

应用病毒感染细胞酶联免疫吸附试验检测肾综合征出血热病毒抗原和抗体

应用病毒感染细胞酶联免疫吸附试验(VIC-ELISA)检测肾综合征出血热病毒(HFRSV)感染性滴度比双抗体间接ELISA和间接免疫荧光法(IFA)分别敏感10倍和100倍。VIC-ELISA检测兔抗HFRSV抗体的滴度比双抗体间接夹心ELISA和IFA分别敏感1.6倍和8倍。VIC-ELISA能敏感、快速、有效地检测HFRSV抗原和抗体。