鸡胚原肠胚期原条细胞命运决定于其所处的局部微环境

在果蝇、斑马鱼、鸡等三胚层动物胚胎早期发育的原肠胚期,原条两侧的上胚层细胞进入原条经历上皮-间充质转化(EMT),迁移进入囊胚腔,形成松散的中胚层细胞,位于原条不同部位的细胞其迁移路线和分化命运不同,如前部原条细胞贡献于体节和心脏等,而后部原条细胞则迁移至胚外形成血岛。为了研究细胞的迁移途径及分化命运是否会随着细胞所处不同部位微环境的改变而改变,利用传统的移植技术,将宿主鸡胚原条前部的一部分细胞用GFP阳性的相同时期鸡胚原条组织替换,培养一段时间后,用荧光体视显微镜追踪GFP阳性细胞的迁移途径。结果发现,从供体原条后部移植到宿主原条前部的细胞遵循原条前部细胞迁移的路线,反之亦然;原位杂交结果显示移植后的GFP阳性细胞分化为所处部位的细胞类型。上述结果表明:鸡胚原肠胚期原条细胞迁移和分化的命运决定于细胞所处的微环境或者说局部基因表达的时空性。     

关于鸡胚孵化中的预热时间

在胚胎学、组织细胞培养的某些实验以及鸡胚的生物标本制作过程中,首先需要获得特定发育时期的鸡胚材料,而往往由于种蛋来源、孵化条件、季节的不同,不易获得准确发育期的材料,尤其是以小时计算胚龄的胚胎学材料,如孵化16小时的原条期,18小时的头突起期,20小时的头褶期,24小时的4体节期,33小时的13对体节期等等。常感到取胚的时间很难掌握,取出的鸡胚发育差别甚大,具有代表性的发育期比例很小,不但造成人力、物力上的浪费,而且直接影响教学和科研的顺利进行。     

离体鸡胚原结诱导作用及同位素标记的实验分析

不少研究证明:鸡胚原结及原条前端,在离体的整胚胚盘上,具有诱导原条期胚盘形成第二胚胎和诱导外胚层形成神     

Scribble在原肠期鸡胚表达的研究

旨在研究极性脚手架蛋白Scibble(Scrib)在原肠期的表达及意义,明确Scrib在早期鸡胚发育中的作用.以含有全长人Scrib的质粒pEGFP-N2-Scrib作为模板克隆出N端一段770 bp左右的片段,从而构建一个新的质粒pSPT18-Scrib;以pSPT18-Scrib为模板进行体外转录制备cRNA探针;并采用原位杂交的方法用此探针检测鸡原肠胚各个时期Scrib的表达情况.结果显示,Scrib在鸡胚四期开始逐渐在原条顶端及两侧的外胚层表达,并随着发育过程向外胚层两侧蔓延扩散,并且在发展到十期时呈现包括神经管和体节在内的广泛的弥散性表达.Scrib的表达规律提示在胚胎发育早期Scrib对外胚层细胞迁移和分化以及而后的器官发生起到重要的作用,为进一步研究Scrib在鸡胚早期发育中的作用提供参考.     

冻干对恙虫病立克次体抗原性的影响

以含恙虫病立克次体的鸡胚卵黄囊膜材料冻干后,立克次体对小白鼠的ID,。平均下降1．93个对数,但若以鸡胚细胞培养材料进行冻干,则冻干后恙虫病立克次体的抗原性明显遭到破坏,对小白鼠的ID50 平均下降2.73个对数。冻干后的卵黄囊膜材料经4℃冰箱保存六个月至一年,对小白鼠的ID50,一般再下降一个对数左右。     

慢病毒载体导入种蛋内鸡胚技术研究

种蛋内鸡胚含有潜在的胚胎干细胞(BCs)或原生殖细胞(PGCs),是目前主要的转基因鸡研究方法。采用绿色荧光蛋白(GFP)基因的pLenti6/v5-DEST-GFP慢病毒表达载体,白来航鸡与伊萨鸡种蛋,结合种蛋赤道面开窗专利技术,对含这两种细胞胚的转基因技术进行了比较研究:转染白来航鸡囊胚,孵化13天时,GFP基因的PCR检出率为64.7%,孵化率极低;转染孵化72h伊萨鸡胚血液循环中PGCs,实验蛋孵化率为35.0%,在出壳后死亡的3只小鸡肝脏中,GFP基因的PCR检出率为100%,存活的4只鸡中有3只在12月龄的血液样品中,经PCR扩增出了GFP基因;转染孵化72～79h白来航鸡胚PGCs,7批次实验的平均孵化率为21.1%,能在赤道面窗口注射胚的种蛋比率,以73～77h胚龄的最高,为75.0%～92.9%,注射病毒组出壳雏鸡血液DNA中,GFP基因PCR检出率为44.4%。两种方法比较,PGCs方法在实验蛋孵化率、胚定位在赤道面窗口率等方面有较强优势。因此为种蛋内胚细胞的转基因鸡技术研究提供了系统、可操作性强的方法。     

鸡卵黄DNA的存在、提取和特性分析

利用免疫细胞化学技术证实了鸡蛋卵黄球中DNA的存在 .利用Ficoll 40 0密度梯度离心纯化卵黄球并提取了DNA .限制性内切酶分析表明所得卵黄DNA是序列不均一的DNA分子群 .MspⅠ和HpaⅡ分析显示该DNA的甲基化程度极低 .Southern杂交表明卵黄DNA含有基因组DNA的一小部分序列 .并认为卵黄DNA是一种独特的有可能在鸡胚早期发育中发挥功能的DNA .     

用细胞与鸡胚二步法培养眼-泌尿生殖道衣原体的研究

将眼－泌尿生殖道衣原体在ＭｃＣｏｙ细胞中扩大培养至５０％以上细胞形成包涵体以后,用细胞培养物接种７日龄鸡胚卵黄囊,使其在鸡胚卵黄囊中生长。用此二步法联合制备衣原体抗原,克服了单独用细胞法和卵黄囊法的不足,可在短时间里获得较多的抗原。     

ELISA法检测鸡胚中抗生素残留量的研究及其应用

用ELISA法测定氨苄青霉素、氯霉素在流感疫苗生产用海兰白鸡鸡胚中的残留。实验通过比较空白组0d龄全鸡胚和给药组0d龄全鸡胚中氨苄青霉素、氯霉素的残留量,说明了饮水给药的方法能够建立抗生素残留的动物模型。通过比较10d龄鸡胚尿囊液、卵黄中氨苄青霉素、氯霉素的残留量,说明尿囊液中的残留量明显高于卵黄。通过绘制残留曲线,可以看出氨苄青霉素、氯霉素在海兰白鸡体内蓄积迅速,却消除缓慢。通过实验初步摸索出了氨苄青霉素和氯霉素在鸡胚中的分布、代谢及残留规律,获得了部分生产用鸡胚尿囊液的抗生素残留量数据,为进一步控制流感疫苗生产用鸡胚质量提供技术保障。     

恙虫病立克次体补体结合抗原的研究

本文介绍应用兔睾丸单层细胞制备恙虫病立克次体补体结合抗原的方法,并初步探讨了影响鸡胚卵黄囊膜抗原效价的一些因紊。鸡胚卵黄囊膜抗原产量大、效价高、特异性较好。但有些恙虫病立克次体株在鸡胚中不易繁殖。而在组织培养中很易繁殖,第一代即能获得大量立克次体,有利于同时制备多株恙虫病立克次体抗原。本文同时介绍了制备豚鼠及家兔免疫血清的简便方法。     

鸡胚卵黄球能否演变为胚胎细胞?

Ο.Б.勒柏辛斯卡娅认为跌入于胚下腔中的卵黄球能够演变为胚胎的内胚层细胞和进入于内外二胚层之间的卵黄球能够演变为血岛的这一假说近年来在细胞学和胚胎学界引起了激烈的争论. 我们从1954年春天开始研究这个问题,工作可分三方面:(1)分别观察鸡胚正常发生过程中的内胚层和血岛的形成过程和卵黄球的变化——包括鸡胚和鸭胚从未孵到孵育20天各期的胚胎和卵黄囊切片,采用各种主要的细胞学上的染色方法和卵黄球的活体染色观察.(2)卵黄球的离体和活体培养——培养材料包括未孵及孵育各期的胚盘下卵黄球.离体培养     

胸腺对法氏囊滤泡及脾脏B淋巴细胞区发育的影响

Siskind 等(1979)发现胸腺或胸腺细胞对B细胞接触抗原前的发育有影响;未成熟B细胞对胸腺依赖性抗原反应而产生异质性抗体的能力受胸腺的控制。Bhogal 等(1984)进一步指出,鸡法氏囊 B细胞的发育存在一个胸腺依赖的阶段,胸腺对法氏囊的发育可能存在体液性影响。本文通过手术去除胸腺、注射胸腺提取液等实验,观察法氏囊和脾脏淋巴细胞的显微和亚显微结构的变化,探讨胸腺对法氏囊滤泡及脾脏 B细胞区发育的影响。 材料和方法:实验用初生雏鸡是从山东省农科院购买的莱杭雏鸡,常规饲养。实验每组 10只雏鸡,分以下几组进行:1.手术切除胸腺组,取刚孵出的雏鸡,手术去除胸腺;2.手术切除胸腺并注射同龄鸡     

“观察鸡卵的结构和鸡胚的发育”的实验教学

对"观察鸡卵的结构和鸡胚的发育"实验在实验材料的选择、实验装置的改进等方面进行优化。通过实验观察鸡胚的完整发育过程,有助于理解鸡卵的结构和鸡胚的发育,帮助学生构建动物个体发育的概念。     

瓦氏黄颡鱼的胚后发育观察

2002年5~6月,在四川省泸州市、合江县分数批收集到长江野生瓦氏黄颡鱼(Pelteobagrusvachelli)亲本,通过人工催产、人工授精获得受精卵,对其胚后发育过程进行了观察。瓦氏黄颡鱼的胚后发育过程可以分为卵黄囊仔鱼、晚期仔鱼和幼鱼3个阶段。初孵仔鱼淡黄色,肌节40对,平均全长5.2mm。水温20~22℃时,孵出后第3d口张开;第7d开始摄食;第9d卵黄吸尽,此时鱼苗平均全长12mm,卵黄囊仔鱼阶段结束。晚期仔鱼阶段的仔鱼,胸鳍、尾鳍、臀鳍、背鳍、腹鳍先后发育,至鳍褶消失时晚期仔鱼阶段结束。经过30d的生长和发育,进入幼鱼阶段;此时平均全长达37mm,其形态特征和生态习性均与成鱼相似。     

鸡胚胎期蛋白营养吸收的研究

禽类的胚胎发育,主要在蛋内完成,其受精蛋是一个独立的自给自足的胚胎发育单位。胚胎发育的营养来源,除气体外均由蛋内供给。关于鸡胚胎期,鸡胚营养吸收的途径问题,派登(Patten)曾作过概略性的阐述,认为主要靠循环方式完成的。循环有3:即卵黄囊循环、尿囊     

鸡胚发育后期心电图的无损测定及心率变化

目的：测量鸣胚发育后期心电图,测定鸡胚发育后期心率及其变化.方法：利用壳膜外电极测量鸡胚心电图,根据RR间期计算鸡胚心率。结果：引出了具有较为清晰Q波、R波（振幅在8—20μV波动）、S波的鸡胚心电图。鸡胚的QRs间期在发育后期无明显变化,心率在D14～D20早期的心率变化较小,在D20后期和D21显著增加（P〈0．01）。结论：建立了壳膜外记录鸡胚心电图的方法,鸡胚在啄壳期心率显著增加.     

鸡胚标本的制作

取某时期的鸡胚,破开气室一端的蛋壳,检查胚胎发育是否正常后,把符合要求的鸡胚浸没在一定浓度的福尔马林溶液中,使壳内半流动状态的物质(如卵黄等)加速凝固;几天后,除     

胚胎发育早期接种人血清白蛋白诱导鸡的免疫耐受

外源基因的引入及表达常会引发宿主动物强烈的免疫应答,导致蛋白产量的下降或引起炎症反应。本研究试图通过在胚胎发育早期接种异源抗原诱导动物产生免疫耐受来解决这些问题。为了诱导鸡产生免疫耐受,将人血清白蛋白（Human serum albumin,HSA）通过胚胎血管微注射的方式接种到发育65—67h的鸡胚血管中,接种剂量为50μg;通过卵黄注射的方式接种到发育3—7d的鸡胚卵黄中,接种剂量为100μg。孵出的小鸡在3周龄时按照常规免疫方法再次接种同种抗原,收集不同时期的血清样本,用酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测血清中抗-HSA抗体水平。结果表明,两种接种方式均能诱导小鸡产生免疫耐受：在65-67h的胚胎中通过血管微注射法接种抗原诱导小鸡产生免疫耐受的比率为64．52％;通过卵黄注射接种抗原诱导小鸡产生免疫耐受的最佳接种时间为发育的第6d,第5、7d接种对后期血清中抗-HSA抗体形成也有一定抑制作用,但是维持耐受的时间较短,第3、4d接种抗原对诱导小鸡免疫耐受的效果不明显[动物学报51（5）：845—851,2005]。     

被子植物的多胚现象

在一般情况下,被子植物的胚株只产生一个胚囊,每个胚囊也只有一个卵细胞,所以受精后只能发育成一个胚,称之为合子胚。但有的植物种子往往有两个或更多个胚的存在,这一现象称为多胚现象。多胚由合子胚和附加胚组成,但多胚中的许多胚是不能发育的,其原因是:①胚乳发育不全,缺乏营养。②有的胚没有完成受精作用或完成受精后很快消失即没有合子胚的存在。一、多胚的由来 1裂生多胚起源于合子、原胚或胚柄等。①合子的第一次分裂不是横分裂而是不规则地分裂成一团胚性细胞、再演变为原胚。②合子斜分裂形成多胚。③一个单胚裂开演变成     

鸡胚与胎鼠的成纤维细胞条件培养液促进成肌细胞增殖和融合的比较

用培养过鸡胚(来亨鸡)或胎鼠(ICR小鼠)肌组织的成纤维细胞的条件培养液,定量地研究它们对胎鼠或鸡胚的成肌细胞的增殖和融合的影响。所得结果如下:(1) 胎鼠的成纤维细胞条件培养液促进胎鼠或鸡胚成肌细胞增殖,分别为对照组的2.65倍,(P<0.001)或2.35倍,(P<0.01);(2) 鸡胚的成纤维细胞条件培养液促进鸡胚或胎鼠的成肌细胞增殖,分别为对照组的2.66倍,(P<0.01)或2.17倍,(P<0.01);(3) 胎鼠的成纤维细胞条件培养液增加胎鼠或鸡胚的成肌细胞的融合率,分别为对照组的1.9倍或2.6倍;鸡胚的成纤维细胞条件培养液只增加鸡胚成肌细胞的融合率,为对照组的2.1倍,但对胎鼠成肌细胞的融合无明显的影响。 实验结果提示:成纤维细胞条件培养液促进成肌细胞的增殖,两种动物间无明显的差异,但在融合上却有一定的种属特异性。