RhoGDI2在肺鳞癌、腺癌组织和肺癌细胞系中的表达及其临床意义

目的本研究探讨RhoGDI2在肺鳞癌和腺癌组织及肺癌细胞系中的作用及其临床意义。方法采用免疫组织化学和RT-PCR方法检测112例肺癌组织标本中RhoGDI2蛋白和20例新鲜肺癌组织中RhoGDI2 mRNA的表达,结合肺癌的临床病理特点进行分析。同时应用Western blot和RT-PCR方法检测肺癌细胞系中RhoGDI2蛋白和mRNA水平的表达情况。结果肺鳞癌和腺癌组织中RhoGDI2的表达与组织分级有关,随着分化程度的降低,RhoGDI2蛋白表达降低(P0.01);与TNM分期有关,随着分期级别的升高,RhoGDI2蛋白表达降低(P0.01);与是否淋巴结转移有关,存在淋巴结转移的标本,RhoGDI2蛋白表达降低(P0.01)。RhoGDI2蛋白的表达与组织类型、患者的年龄和性别无关。在选取的肺癌细胞系A549、95D、SPC-A-1和NCI-H446中,无论mRNA水平还是蛋白水平RhoGDI2都有表达,但表达水平不尽相同,在A549、NCI-H446细胞系中表达较低,在SPC-A-1、95D细胞系中表达相对较高。结论RhoGDI2与肺癌的发生发展和转移过程有关,进一步研究RhoGDI2与其作用因子之间的相互作用,将有助于进一步揭示肺癌发生发展及转移过程。     

TRF1、TRF2和POT1基因mRNA在前列腺癌组织中的表达

目的:探究端粒重复序列结合蛋白质1(TRF1)、TRF2和端粒保护蛋白(POT1)基因mRNA在前列腺癌(PCa)组织中的表达。方法:收集46例PCa患者肿瘤中心组织(中心组织组)和35例前列腺增生(BPH)患者BPH组织(BPH组织组),提取总RNA,逆转录成cDNA,采用定量PCR测定TRF1、TRF2和POT1在中心组织组和BPH组织基因mRNA的表达,采用基因mRNA所得CT值与β-actin mRNA所得CT值之差(△CT值)表示,并进行差异性分析。结果:中心组织组TRF1的△CT值高于BPH组织组,差异有统计学意义(Z=-3.469,P=0.001);TRF2的△CT值分别为8.49(5.75,10.21)和8.16(6.28,9.75),差异无统计学意义(Z=-1.719,P=0.086);中心组织组POT1的△CT值高于BPH组织组,差异有统计学意义(t=-18.48,P=0.000)。结论:TRF1和POT1在PCa肿瘤组织中的表达升高,说明TRF1和POT1的高表达可能与PCa的发生和发展有关,但TRF2在PCa肿瘤中心组织和BPH组织中的表达没有表现出差异,有待进一步研究。     

神经元限制性沉默因子在NTera2/CloneD1细胞向神经元分化模型中表达的检测

目的:建立NTera2/CloneD1细胞向神经元分化的模型,检测神经元限制性沉默因子(NRSF)经分化培养基诱导后表达的变化。方法:收集正常培养的NTera2/CloneD1细胞及经全反式维甲酸(RA)、阿糖胞苷(AraC)、尿苷分阶段诱导共28 d的细胞,显微镜下观察诱导前后细胞的形态学变化;免疫荧光法检测NTera2/CloneD1细胞诱导前后干性标志Nestin、Sox2和成熟神经元特异性标志NF-200、β-tubulinⅢ的表达情况;应用RT-PCR和免疫荧光法对NRSF进行mRNA和蛋白水平的检测。结果:显微镜下观察到正常培养的NTera2/CloneD1细胞呈克隆样生长,经分化培养基诱导后的NTera2/CloneD1细胞表现出典型的神经元样细胞形态。免疫荧光检测表明,未诱导的NTera2/CloneD1细胞表达神经干细胞的标志Sox2、Nestin,不表达成熟神经元特异性蛋白NF-200、β-tubulinⅢ;而经RA等诱导分化的细胞则不表达Sox2、Nestin,表达NF-200、β-tubulinⅢ。RT-PCR和免疫荧光检测显示,NRSF在诱导分化后的NTera2/CloneD1细胞中的表达量显著降低。结论:建立了NTera2/CloneD1细胞向神经元分化的模型,NRSF在诱导后的NTera2/CloneD1细胞中表达量显著下调,提示NTera2/CloneD1细胞在诱导过程中可能通过下调NRSF,使受到NRSF负性调控的神经元特异性蛋白启动表达并上调,进而实现NTera2/CloneD1细胞向神经元的定向分化。     

环氧化酶-2和CD44v6蛋白在宫颈鳞癌中表达及临床意义

探讨环氧化酶-2(cyclooxy-genase-2,COX-2)和CD44v6蛋白在官颈上皮内瘤样病变(CIN)和浸润宫颈鳞癌(ICC)中的表达及其意义.应用免疫组织化学方法,检测45例ICC、25例CIN和10例正常宫颈组织(NCE)中COX-2和CD44v6蛋白的表达水平,并结合临床病理特征进行分析.结果表明,在ICC、CIN和NCE中,COX-2蛋白表达阳性率分别为82.2%(37/45)、40%(10/25)和0%(0/10),差异有显著性(P＜0.05);CD44v6蛋白表达阳性率分别为88.9%(40/45)、44%(11/25)和20%(2/10),差异有显著性(P＜0.05).COX-2和CD44v6蛋白表达与ICC的分化程度和淋巴结转移相关(P＜0.05),但与临床分期无关(P＞0.05).COX-2和CD44v6可能参与了调控ICC的发生、发展过程,其高表达预示ICC预后不良.     

HIF-1alpha和COX-2在溃疡性结肠炎患者外周血及黏膜组织中表达及意义

目的：探讨HIF-1琢和COX-2 在溃疡性结肠炎（UC）患者外周血及黏膜组织中表达及意义。方法：87 例UC患者根据临床病 情分为活动期（n=63）和缓解期（n=24）,同期选取行结肠镜检查无异常健康者40 名作为对照组,利用qRT-PCR 对外周血及黏膜 组织标本中HIF-1alpha和COX-2 表达进行检测。结果：活动期UC 患者外周血和黏膜组织中HIF-1alpha mRNA和COX-2 mRNA相对表 达量均高于缓解期患者,且均高于对照组,差异均有统计学意义（P<0.05）;活动期UC 患者中,临床病情重型患者外周血及黏膜组 织中HIF-1-alpha mRNA 和COX-2 mRNA 相对表达量高于中型及轻型患者,差异均有统计学意义（P<0.05）,内镜表现分级Ⅲ 级患者 外周血及黏膜组织中HIF-1-alpha mRNA和COX-2 mRNA相对表达量高于Ⅱ级及Ⅰ级患者,差异均有统计学意义（P<0.05）;Pearson 相关分析显示,活动期UC患者外周血及黏膜组织中HIF-1alphamRNA和COX-2 mRNA相对表达量均与Mayo 评分呈正相关（r=0. 592、0.722 和0.694、0.456,P<0.05）;Spearman 相关分析显示,活动期UC 患者外周血及黏膜组织中HIF-1-mRNA 和COX-2 mRNA 相对表达量均与临床病情呈正相关（r=0.804、0.826 和0.752、0.763,P<0.05）,且与内镜表现分级呈正相关（r=0.803、0.749和 0.858、0.793,P<0.05）。结论：HIF-1-alpha 和COX-2 在UC患者外周血及黏膜组织中呈高表达,且与患者病情严重程度有关。     

PRDX1、HMGA2、FMNL2在胃癌组织中的表达及与临床病理特征、上皮间充质转化和预后的关系研究

摘要 目的：探讨过氧化物酶1（PRDX1）、高迁移率族蛋白A2（HMGA2）、同源形成素样蛋白2（FMNL2）在胃癌组织中的表达及与临床病理特征、上皮-间充质转化（EMT）和预后的关系。方法：选取2017年1月～2018年2月我院收治的153例胃癌患者,收集术中癌组织和癌旁组织。采用免疫组化法检测PRDX1、HMGA2、FMNL2、波形蛋白（VIM）、上皮细胞钙黏蛋白（E-cad）阳性表达情况,采用实时定量PCR（qRT-PCR）法检测PRDX1、HMGA2、FMNL2、VIM、E-cad mRNA相对表达量。分析胃癌组织中PRDX1、HMGA2、FMNL2表达与临床病理特征、EMT和预后的关系。结果：与癌旁组织比较,胃癌组织中PRDX1、HMGA2、FMNL2、VIM阳性表达率和mRNA相对表达量升高,E-cad阳性表达率和mRNA相对表达量降低（P＜0.05）。胃癌组织中PRDX1、HMGA2、FMNL2阳性表达率与患者TNM分期、淋巴结转移、远处转移有关（P＜0.05）。Pearson相关性分析结果显示,胃癌组织中PRDX1、HMGA2、FMNL2 mRNA相对表达量与VIM mRNA相对表达量呈正相关（r=0.562、0.517、0.621,P均＜0.05）,与E-cad mRNA相对表达量呈负相关（r=-0.603、-0.544、-0.574,P均＜0.05）。153例胃癌患者术后3年累积生存率为68.44%（106/153）。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,PRDX1、HMGA2、FMNL2阳性组术后3年累积生存率均低于阴性组（P＜0.05）。结论：胃癌组织中PRDX1、HMGA2、FMNL2表达升高,其表达与TNM分期、淋巴结转移、远处转移、EMT以及预后有关,可作为胃癌病情和预后的辅助评估指标。     

FOXL2、SOX14及BPESC1 mRNA在小睑裂综合征患者眼睑组织中表达水平的研究

目的 研究小睑裂综合征（blephamphimosis—ptosis—epicanthusinversus syndrome,BPES）患者与正常人相比眼睑组织中FOX12、SOX14及BPESC13个基因mRNA的相对表达水平,探讨这3个基因与BPES的相关性,以及可能存在的发病机制。方法TRIzol法抽提眼睑组织总RNA,反转录为cDNA,应用实时荧光定量PCR技术分别检测15例BPES患者（A组）及15例正常人眼睑组织（B组）中FOXL2、SOX14和BPESClmRNA的表达水平,用两配对样本wilcoxon符号秩检验法和2-AAC,法分析两组数据及其差异。结果FOXL2、SOX14和BPESCI3个基因tuRNA的表达水平在A、B两组间的差异均具有统计学意义,P值均〈0．05。A、B两组间,FOXL2基因的△Ct之差（△△ct）,负秩与证秩的平均秩分别为6．00和8．50,SOX14基[天1的△△Ct负秩与正秩的平均秩分别为4．20和9．33,BPESC1基因的△△ct负秩与正秩的平均秩分别为8．23和6．50,可认为A组FOXL2基因和SOXl4基因的△ct值大于B组,BPESCI基因的△ct值小于B组,即A组的FOXL2基因和SOX14基因的表达水平低于B组,BPESCI基因表达水平高于B组。结论FOXL2、BPESC1及SOX14均与BPES具有一定相关性,FOXL2和SOX14的低表达以及BPESC1的高表达可能与BPES的发病相关。     

鞘氨醇激酶1和1-磷酸鞘氨醇受体2在癫痫大鼠海马组织中表达的变化*

目的:检测鞘氨醇激酶1 (SphK1)和1-磷酸鞘氨醇受体2 (S1PR2) 在癫痫大鼠海马中的表达,探讨SphK1和S1PR2在癫痫中的作用机制。方法:成年雄性SD大鼠108只,随机分为对照(Control)组(n=48)和癫痫(PILO)组(n=60)。癫痫组腹腔注射氯化锂(127 mg/kg),18～20 h后注射匹罗卡品,首剂量为30 mg/kg,发作＜IV级的大鼠重复注射匹罗卡品(10 mg/kg);对照组给予等剂量的生理盐水代替匹罗卡品。根据造模后观察时间和行为学改变,随机分为3个大组,6个亚组:急性期组(E6 h、E1 d、E3 d)、潜伏期组(E7 d)和慢性期组(E30 d、E56 d),每个亚组中对照大鼠和癫痫大鼠各8只。每组取4只大鼠麻醉取海马,另4只取大脑组织。运用Western blot检测SphK1、S1PR2在大鼠海马组织中的表达变化,免疫荧光检测星形胶质细胞活化增生情况及SphK1、S1PR2在星形胶质细胞中的定位表达。结果:与Control组比较,SphK1在造模后急性期(E3 d)、潜伏期(E7 d)和慢性期(E30 d、E56 d)海马中的表达均明显升高(P＜0.05或P＜0.01);S1PR2在急性期(E3 d)、潜伏期(E7 d)和慢性期(E30 d、E56 d)海马组织中的表达均明显下降(P＜0.05或P＜0.01);癫痫大鼠(E7 d)海马星形胶质细胞活化、增生明显(P＜0.05),SphK1和S1PR2在E7d的表达到位为海马星形胶质细胞中。结论:SphK1和S1PR2可能通过调控海马星形胶质细胞活化增生和影响神经元兴奋性参与了癫痫的发病。     

PTK2B与Aβ、Tau和LRP-1在APP/PS1小鼠海马组织和血液中的表达随月龄变化的分析*

目的: 探讨阿尔茨海默病(AD)转基因动物模型脑组织中ptk2b基因及其表达产物PTK2B蛋白随着月龄的变化规律,及其与血液和脑组织中Aβ_1-42、Tau蛋白磷酸化和LRP-1含量的关系。方法: 设5月龄、10月龄、15月龄的APP/PS1转基因小鼠3个实验组,和同月龄的C57BL/6J小鼠3个对照组,共计6组,每组各8只。用Morris水迷宫检测各组小鼠的认知行为学能力,免疫组织化学、Western blot或ELISA检测小鼠海马组织或血液中PTK2B、Aβ_1-42、p-Tau /Tau和LRP-1的表达,qRT-PCR检测海马ptk2b mRNA的表达。结果: 各实验组结果显示,APP/PS1转基因小鼠随着月龄的增长海马组织中PTK2B、ptk2b mRNA和Aβ_1-42、p-Tau/Tau的表达均呈现逐渐增加,而血液中的Aβ_1-42则逐渐降低;海马组织中LRP-1表达也逐渐下调,同时,小鼠的认知行为学功能则表现为时间依赖性降低(P均＜0.05)。各对照组之间比较,除海马组织中LRP-1随着年龄增加而降低(P＜0.05)以外其余指标均没有明显差异(P＞0.05)。结论: APP/PS1转基因小鼠海马组织中PTK2B、Aβ_1-42、p-Tau/Tau的表达上调和LRP-1下调,与其认知功能降低均呈现时间依赖性变化。