基质交联分子1表达下调对人胰腺癌SW1990细胞周期及细胞凋亡的影响

目的探讨基质交联分子1(STIM1)表达下调对人胰腺癌细胞株SW1990细胞周期和细胞凋亡的影响,并研究其分子作用机制。方法构建携带STIM1基因si RNA的慢病毒载体转染SW1990细胞,分为对照组、空载体组和STIM1组。采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot验证STIM1组SW1990细胞STIM1表达下调。通过MTT增殖实验和流式细胞术检测STIM1表达下调对细胞增殖、周期和细胞凋亡的影响,采用RT-PCR和Western blot法检测细胞周期和细胞凋亡相关分子表达的变化。两组间比较采用t检验。结果STIM1组SW1990细胞中STIM1表达mRNA(0.261±0.029)、蛋白(0.120±0.032)低于空载体组mRNA(1.002±0.091)、蛋白(0.996±0.053),t=20.74、26.89,P均0.01。SW1990细胞24、48、72 h的增殖水平STIM1组分别为(0.122±0.008)、(0.252±0.031)、(0.373±0.028),相比空载体组(0.223±0.035)、(0.618±0.017)、(0.924±0.140),t=6.48、16.90、23.99,P0.01,受到抑制。STIM1组中SW1990细胞G2/M期细胞比例(41.47±0.66)﹪高于空载体组(10.30±2.24)﹪,t=23.14,P0.01。STIM1组中SW1990细胞凋亡率(25.21±1.96)﹪高于空载体组(3.71±1.23)﹪,t=16.03,P0.01。半定量RT-PCR和Western blot提示,STIM1组细胞周期蛋白B1(cyclin B1)表达mRNA(0.344±0.031)、蛋白(0.776±0.042)相比空载体组mRNA(1.011±0.060)、蛋白(1.034±0.036),t=40.06、8.51,P均0.01下调;STIM1组p21表达mRNA(1.970±0.107)、蛋白(1.315±0.093)相比空载体组mRNA(1.025±0.044)、蛋白(0.998±0.036),t=17.10、9.52,P均0.01上调;STIM1组Bcl-2表达mRNA(0.156±0.025)、蛋白(0.381±0.028)相比空载体组mRNA(1.010±0.072)、蛋白(0.980±0.057),t=15.46、14.63,P均0.01下调;STIM1组survivin表达mRNA(0.188±0.022)、蛋白(0.022±0.019)相比空载体组mRNA(1.016±0.090)、蛋白(0.994±0.047)t=58.08、442.58,P均0.01下调;STMI1组procaspase-3表达蛋白(0.389±0.030)相比空载体组蛋白(1.008±0.040)下调,差异有统计学意义(t=19.22,P0.01)。结论在胰腺癌SW1990细胞中,沉默STM1可阻滞细胞于G2/M期,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,有望成为胰腺癌治疗的分子靶点。     

RNA干扰PLCε诱导人膀胱癌BIU-87细胞凋亡的实验研究

目的探讨以RNA干扰沉默人源磷脂酶Ce(phospholipase Cepsilon,PLCε)基因表达后诱导人膀胱癌细胞株BIU-87细胞凋亡的作用和机制。方法脂质体介导重组阳性质粒pGenesil-PLCε(以下简称P)和阴性质粒pGenesil-NP(以下简称NP)转染BIU-87细胞48h后,用RT-PCR和Western blot检测转染前后PLCεmRNA和蛋白表达,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率,电镜观察细胞形态改变。结果转染P质粒后可明显抑制PLCεmRNA和蛋白表达水平,抑制率分别为78.7%和76.6%;流式细胞术显示P质粒转染组细胞周期发生改变呈明显G0/G1期阻滞,并出现亚二倍体凋亡峰,细胞凋亡率增加(P0.05);电镜观察P质粒转染组细胞可见凋亡小体。结论:RNA干扰沉默PLCε基因表达可诱导膀胱癌BIU-87细胞凋亡,其作用机制与细胞周期分布的改变有关。     

抑癌基因NPRL2对肾癌786-O细胞增殖和凋亡的影响

抑癌基因NPRL2(nitrogen permease regulator-like 2)在人类许多正常组织中均有明显的表达,而在人类多种肿瘤组织中的表达明显降低。该实验通过构建重组质粒pEGFP-N1-NPRL2并转染肾癌786-O细胞株,应用倒置荧光显微镜、RT-PCR和Western blot检测NPRL2基因的表达情况;MTT法检测786-O细胞增殖的情况;流式细胞仪分析细胞周期和细胞凋亡情况。结果显示:肾癌786-O细胞株转染重组质粒pEGFP-N1-NPRL2后,通过荧光显微镜可以观察到绿色荧光;RT-PCR和Western blot检测到NPRL2基因的转录和蛋白质表达水平明显增加(P<0.05);MTT法检测发现72 h时pEGFP-N1-NPRL2组、pEGFP-N1组和空白对照组的细胞D490值分别为0.654±0.030、1.528±0.022和1.572±0.036,pEGFP-N1-NPRL2组细胞的增殖较其他两组受到明显的抑制(P<0.05);流式细胞仪检测显示pEGFP-N1-NPRL2组、pEGFP-N1组和空白对照组的凋亡率分别为18.82%±0.40%、5.65%±0.12%和5.85%±0.07%,而处于G0/G1期的细胞比例分别为69.80%±1.40%、46.24%±1.30%和47.03%±0.45%,与其他两组相比,pEGFP-N1-NPRL2组的凋亡率显著增高而且G0/G1期细胞明显增多,表现出G0/G1期阻滞。提示抑癌基因NPRL2的转染可以抑制786-O细胞的增殖,并诱导其凋亡将细胞周期阻滞于G0/G1期。     

miR-34c逆转乳腺癌耐药细胞株MCF-7/DOX耐药性的研究

miR-34在肿瘤发生发展中起着至关重要的作用,然而,mi R-34在肿瘤耐药中的作用研究不多。该研究将合成的mi R-34c成熟序列转染乳腺癌阿霉素(doxorubicin,DOX)耐药细胞MCF-7/DOX,探讨mi R-34c体外逆转MCF-7/DOX细胞耐药性作用及其可能的机制。采用Real-time RT-PCR检测mi R-34c在乳腺癌耐药细胞株MCF-7/DOX中的表达,MTS法检测miR-34c对MCF-7/DOX细胞阿霉素耐药性的影响,流式细胞术检测miR-34c对MCF-7/DOX细胞周期和凋亡的影响,Real-time RT-PCR和Western blot法检测多药耐药相关蛋白MDR、MRP以及细胞周期与凋亡相关蛋白Bcl-2、E2F3的表达。结果显示,mi R-34c在乳腺癌MCF-7/DOX耐药细胞中低表达,转染mi R-34c可明显增加耐药细胞对阿霉素的敏感性;流式分析发现,miR-34c可以促进耐药细胞G2期细胞周期阻滞和凋亡;与对照组相比较,miR-34c转染组细胞MDR、MRP蛋白表达无明显变化,而Bcl-2、E2F3 mRNA和蛋白表达均明显下调。研究表明,miR-34c直接靶向抑制Bcl-2和E2F3的表达,诱导细胞周期G2期阻滞和凋亡,进而增强MCF-7/DOX耐药细胞对阿霉素的敏感性。     

siRNA沉默SIRT1基因对宫颈癌细胞HeLa增殖和凋亡的影响

化学合成靶向SIRT1基因的小干扰RNA,脂质体法转染人宫颈癌细胞株HeLa,观察小干扰RNA沉默SIRT1基因对HeLa增殖及细胞凋亡的影响。在优化siRNA SIRT1转染条件的基础上,应用RT-PCR和Western blot分别检测各组SIRT1 mRNA、SIRT1蛋白及凋亡相关蛋白的表达;CCK-8法检测细胞增殖抑制率;Hoechst荧光染色法和流式细胞仪检测细胞凋亡。结果表明,siRNA SIRT1转染细胞组SIRT1 mRNA水平和蛋白表达量明显低于对照组;siRNA SIRT1转染组细胞增殖受抑制,细胞凋亡率明显增加;凋亡相关蛋白P53、P21表达上调,Survivin表达下调。上述结果表明:siRNA SIRT1诱导的HeLa细胞凋亡与P53、P21、Survivin通路关系密切,但siRNA SIRT1诱导HeLa细胞凋亡的详尽机制有待进一步研究。     

槲皮素对结肠癌细胞生长的影响

通过MTT试验观察槲皮素对结肠癌细胞系RKO生长的影响;通过流式细胞仪技术观察槲皮素对细胞周期和细胞凋亡的影响;采用RT-PCR和western印迹技术,确定槲皮素对p21、p27和p53表达的影响.MTT法显示槲皮素加药组生长抑制作用明显,且具有剂量依赖性;流式细胞仪分析结果显示,经5μmol/L槲皮素作用后细胞周期明显阻滞在G0/G1期;5、10、20μmol/L3个剂量组的细胞凋亡率分别为23.4%、24.2%、47.9%,而对照组为13.2%;p21和p27的mRNA及蛋白质表达水平上调,促凋亡蛋白p53表达水平上调.因此,槲皮素对RKO生长有明显的抑制作用,槲皮素可能通过上调p21和p27表达使RKO细胞周期阻滞于G0/G1期,可能通过上调促凋亡蛋白p53表达诱导RKO细胞发生凋亡.     

ADAR1 shRNA对人胶质瘤U87细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究ADAR1 shRNA对人胶质瘤细胞U87细胞增殖和凋亡的影响。方法:通过构建ADAR1-shRNA的干扰质粒,经脂质体法转染胶质瘤U87细胞系,通过荧光倒置显微镜观察转染效率,选择转染效率最高的细胞系。取转染48h细胞,采用RT-PCR和Western-blot分别检测ADAR1 mRNA及蛋白的表达,流式细胞仪检测其细胞凋亡率,MTT法检测细胞增殖情况。结果:①经ADAR1-shRNA转染48h后的转染效率最高,此时U87细胞系中ADAR1 mRNA及蛋白的表达均被显著抑制,较阴性对照组及空白组均明显降低(P0.05)。②在转染ADAR1-shRNA后,细胞凋亡率为(28.14%±3.76%),明显高于阴性对照组(3.20%±1.57%)和空白组(2.80%±1.49%),细胞增殖率较阴性对照组及空白组明显下降(P0.05)。结论:通过shRNA抑制ADAR1的表达能明显促进人胶质瘤细胞U87细胞的凋亡和抑制其增殖,ADAR1基因可能成为治疗治疗胶质瘤的新靶点。     

CHFR,PARP-1基因对B细胞淋巴瘤Raji细胞增殖和凋亡的影响（英文）

目的:探讨CHFR与聚(ADP-核糖)聚合酶1(PARP-1)基因对B细胞淋巴瘤Raji细胞增殖和凋亡的影响。方法:用5-Aza-d C处理Raji细胞,后通过qRT-PCR检测CHFR的mRNA表达水平,western blot评估CHFR、PARP-1的蛋白表达。经CHFR慢病毒转染Raji细胞后,用qRT-PCR和western blot评估RAJI细胞中的CHFR、PARP-1变化。通过CCK-8法测定细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期的变化。结果:与对照组相比,经5-Aza-d C处理Raji组的CHFR mRNA表达显著上调(P0.01),PARP-1mRNA水平和蛋白表达水平明显降低(P0.05)。与对照组相比,Sh RNA组CHFR的mRNA表达显着下调(均P0.01),PARP-1mRNA和蛋白表达水平升高(P0.05)。CCK结果显示CHFR Sh RNA组细胞活力明显低于对照组(P0.05)。流式细胞术结果显示CHFR沉默后细胞凋亡率降低(P0.05)。结论:CHFR可能通过PARP-1调控B淋巴细胞的增殖和凋亡。     

乙酰哈巴苷通过Wnt信号通路诱导结肠癌HCT116细胞凋亡

本文探讨乙酰哈巴苷诱导结肠癌HCT116细胞凋亡机制。采用流式细胞术检测乙酰哈巴苷对HCT116细胞周期及凋亡的影响,发现细胞周期被阻滞在G1期,0.75 mmol/L乙酰哈巴苷处理48 h后,细胞凋亡明显增加。转录组测序显示乙酰哈巴苷引起HCT116细胞1 921个mRNA上调和2 208个mRNA下调,可显著影响Wnt信号通路。RT-qPCR和Western blot验证实验表明,乙酰哈巴苷处理后,HCT116细胞中β-catenin、CyclinD1、Survivin、Bcl-2和c-Myc蛋白显著降低(P<0.05),凋亡相关蛋白Bax和cleaved-caspase3表达增加(P<0.05)。上述结果表明,乙酰哈巴苷主要通过Wnt信号通路抑制结肠癌细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

长链非编码RNA对HepG2 肝癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨长链非编码RNA RP13-514E23.1在肝癌细胞系中的表达,并观察上调该基因后其下游基因MAPK10的变化及对肝癌细胞Hep G2增殖、凋亡的影响。方法:通过荧光定量PCR(q RT-PCR)检测RP13-514E23.1在正常肝细胞与肝癌细胞系中的表达差异,进一步构建质粒转染肝癌Hep G2细胞上调RP13-514E23.1的表达,以Mock组(只加转染试剂)和NC组(转染空载体pc DNA3.1-NC)作为对照评估转染效率及对MAPK10表达的影响。用CCK-8实验和流式细胞术检测转染前后Hep G2细胞的增殖、凋亡的变化。结果:Lnc RNA RP13-514E23.1在大部分肝癌细胞系(Hep G2,SMMC,Huh7,Hep3B)中的表达明显低于正常肝细胞(0.58±0.05 vs 1.00,P0.05);转染pc DNA-RP13-514E23.1后,q RT-PCR检测Hep G2细胞的RP13-514E23.1和MAPK10m RNA表达量显著升高(分别为29.90±1.40、2.42±0.25,P0.05),western blot检测MAPK10蛋白表达量较对照组也升高(2.10±0.16,P0.05);CCK-8结果显示Hep G2细胞在各个时间段增殖均受到抑制(P0.01),Mock组、NC组和实验组的凋亡率分别为(5.53±1.17)%、(6.40±2.84)%和(46.87±3.45)%(P0.01)。结论:Lnc RNA RP13-514E23.1在肝癌细胞系中表达异常降低,上调其表达后MAPK10的表达升高,且Hep G2细胞增殖受到抑制、凋亡增加。     

六种藓类植物茎的比较解剖学研究

通过对6种藓类植物,即褶叶青藓(Brachythecium salebrosum(Web.et Mohr.)B.S.G.)、湿地匐灯藓(Plagiomnium acutum(Lindb.)Kop.)、侧枝匐灯藓(Plagiomnium maximoviczii(Lindb.)Kop.)、大凤尾藓(Fissidensnobilis Griff.)、大羽藓(Thuidium cymbifolium(Doz.et Molk.)B.S.G.)和大灰藓(Hypnum plumaeforme Wils.)嫩茎和老茎的石蜡切片和显微观察发现,同一藓类植株的嫩茎和老茎,茎结构稳定,不同种藓类植物茎横切面具有不同特征.植物体茎横切面形状、表层细胞的层数、细胞大小和细胞壁厚薄、皮层细胞大小和形状、中轴的有无以及比例等特征可以作为藓类植物的分科分类依据之一.     

真菌类遗传学分析的知识结构教学

本文以认知结构理论为指导,讨论了真菌类遗传分析与高等动植物遗传分析的内在联系,认为利用这种内在联系进行教学可收到好的效果并说明了作者的具体教学过程。 Abstract:In the paper, the relationship between genetic analysis of Fungi and genetic analysis of high animal and plant was discussed.A good results were obtained when we adopted this method in the teaching.     

医疗机构合理用药评价模型的构建研究

目的 针对医疗机构的合理用药水平进行评价研究。方法 根据医疗机构合理用药的具体要求,构建医疗机构合理用药评价指标体系,采用基于模糊群决策的方法和多指标评价分析法构建医疗机构合理用药评价模型。结果 构建了基于模糊群决策的医疗机构合理用药评价模型,并通过实例分析证明了评价模型的可行性。结论 建立的基于模糊群决策的医疗机构合理用药评价模型能够对医疗机构的合理用药水平进行科学评价,为提高医疗机构合理用药水平奠定基础。     

Cause of Senescence of Nine Sorts of Flowers

The levels of endogenous phytohormones and respiratory rate in nine sorts of flowers such as Cymbidium faberi Rolfe, Nopalxochia ackermannii Kunth and others were investigated both at full bloom and senescence and meanwhile the effect of exogenous phytohormones on prolonging the blossoms and promoting ethylene production were tested. There is a high content of endogenous ethylene in all the long-lived flowere, about 3–16 folds higer than the short-lived ones. There is a high level of ABA at full blooming flowers of short-lived flowers, in which there is no or only some cytokinins in it, but the ratio of CTK (6BA+zeatin)/ABA is smaller(l.7). The endogenous ABA reached a much higher level at senescence in all nine sorts of flowers, so it is reasonable to consider that it is ABA which plays an important role of regulation in controlling flower's senescence. There is a much higher level of GA3 and zeatin in the long-lived flowers which is not demonstrated in the shortlived ones. The respiratory rate is one of the factors controtling the longevity of flowers, but it does not play a decided role. Application of 6BA and zeatin prolongs distinctly orchid’s longevity, however exogenous IAA through the promotive action on ethylene production, evidently extends the longevity of the flowers of the Nopalxochia ackermannii Kunth.     

棉铃虫钙粘蛋白N端多肽多克隆抗体制备及对Bt抗性的初步检测

用重组表达的棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)中肠钙粘蛋白N端多肽片段制备兔多克隆抗体,并利用其对Bt抗性进行鉴定。通过RT-PCR方法对棉铃虫中肠钙粘蛋白N端多肽的基因片段Cad285进行PCR扩增,将其克隆到pET-30a原核表达载体中,在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达,得到35ku的重组融和蛋白,融合表达的包涵体经过变性、Ni-NTA柱亲和纯化、复性等方法处理包涵体,获得可溶性纯化蛋白,用纯化后蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体,ELISA检测其效价高于1∶16000;利用最终获得的多克隆抗体对室内纯合Bt抗/感品系的棉铃虫中肠钙粘蛋白进行Western blot分析,结果显示敏感和抗性品系之间有明显差异,表明其能够应用对Bt抗性进行初步检测。     

龙胆科药用植物化学成分的研究现状

龙胆科植物在我国的分布范围很广,且多数为药用植物,其多数种属的药用植物,至今其化学成分尚未被系统研究。综述了目前龙胆科药用植物的化学成分的研究现状及一般提取方法,对近年来发现的环烯醚萜及裂环烯醚萜类化合物进行了总结,为本科药用植物的更深入研究提供了参考。     

青蒿素生物合成机理研究现状

本文总结了目前有关青蒿素生物合成机理方面的研究,主要包括青蒿素生物合成中生理因子的影响,青蒿素生物合成中间体及前体,青蒿素生物合成细胞定位等。指出了存在的一些问题及今后的研究发展前景。