猪乳中一高分子量蛋白质的分离纯化和鉴定

对猪乳中一高分子量蛋白(HMWP)进行了分离纯化,并对其某些生化性质进行了鉴定。猪乳通过去脂得到脱脂乳,再去除酪蛋白得到乳清。对乳清进行硫酸铵分级盐析,猪乳中HMWP在40％饱和度硫酸铵盐析下有最大沉淀。收集40％饱和度硫酸铵盐析沉淀,经过溶解、透析得到HMWP的粗品。通过Mono Q离子交换柱,对其粗品进行两次层析提纯,得到了HMWP纯品,其纯度和得率分别为97．85％和12．31％。多种植物凝集素的Western blotting鉴定表明,HMWP是一个糖基种类较少的糖蛋白,含有Man和GlcNAc。SDS-PAGE和凝胶过滤分别测得HMWP的分子量为114．8kD和115．0kD。通过等电点测定,HMWP的pI为5．10。HMWP的氨基酸组分分析得知,其富含Asp、Glu、Gly和Cys,疏水性氨基酸较低,仅占15．59％摩尔分数。这些结果说明HMWP是一个易溶于水的、酸性的分泌性单体球蛋白。N端氨基酸序列测定结果为Ala-Leu-Val—Gln-Ser-Gty-Leu-Ash-Leu-Val,通过从网络Genbank检索没有发现其同源蛋白的序列,说明其可能是一个新蛋白。     

黑曲霉产木聚糖酶的分离纯化与鉴定研究

木聚糖酶的分离纯化是对其进行酶学研究和分子改良研究的基础。利用实验室选育的黑曲霉菌株Aspergillus niger SM24/a进行木聚糖酶发酵,粗酶液经过(NH_4)_2SO_4分级沉淀Bio-Gel P6除盐、UNO sphere Q阴离子交换和Enrich SEC70凝胶色谱层析四个步骤的分离纯化,成功获得了3种木聚糖酶蛋白定义为X-Ⅰ、X-Ⅱ和X-Ⅲ。随着纯化步骤的增加,各组分酶比活力得到显著提高,其数值分别为37.41、34.56和53.96 U/mg,纯化倍数分别为3.96、3.66和5.72。经质谱分析和蛋白氨基酸序列比对,初步认定X-Ⅰ属于糖基水解酶第十家族内切-β-1,4-木聚糖酶,X-Ⅱ和X-Ⅲ均属于糖基水解酶第十一家族木聚糖酶。     

神经激肽-1(NK-1)受体介导福尔马林诱发的大鼠脊髓c-fos表达

本文用Ｆｏｓ作为背角伤害性反应神经元活动的一个标志物,结合免疫细胞化学和神经药理学方法,观察了速激肽受体拮抗剂对福尔马林诱发的脊髓ｃ－ｆｏｓ原癌基因表达的影响。一侧大鼠后肢跖部皮下注射福尔马林,仅在同侧脊髓背角有ｃ－ｆｏｓ表达。Ｆｏｓ阳性神经元最密集分布于Ｉ层和Ⅱ层背侧的内侧部,中等量分布于Ⅳ层和Ｖ型,少量定位于Ⅱ层腹侧部、Ⅲ、Ⅵ和Ⅹ层。若预先在一侧大鼠后肢跖部皮下注射福尔马林前,鞘内给予神经激肽     

纳豆中抗氧化肽的分离纯化与活性研究

从发酵的纳豆中提取具有抗氧化活性的多肽,通过分子筛层析和反相高效液相色谱对纳豆上清液进行分离纯化,并采用电喷雾串联质谱进行结构鉴定.结果表明:纳豆发酵后的蛋白(多肽)混合物经Sephadex G-50凝胶色谱进行分离纯化后得到3个组分(F1、F2和F3),其中组分F3的抗氧化活性最强,总还原力达到(8.4±0.6)mm...     

鸡卵黄抗体IgY的分离纯化及鉴定

采用水溶稀释法结合硫酸钠二次盐析沉淀法分离纯化鸡卵黄中蛋白IgY,实验中比较了不同pH值的水溶稀释液对卵黄除脂效果的影响;并采用SDS-PAGE及western blotting对提取产物进行鉴定。结果显示,pH值5.2水溶稀释液除脂效果最好,IgY得率最高。实验优化了鸡卵黄抗体IgY分离纯化技术,得到的IgY产量高、纯度高,特异性强;此外,水溶稀释法制备IgY具有利用小体积样品获得大量蛋白及纯化效率高的优点。     

乳抗氧化肽的分离纯化与结构鉴定

本文检测了不同分子量范围的WPI(乳清分离蛋白)酶解物的抗氧化活性,结果表明各个组分显示出不同的抗氧化活性,其中分子量小于5 kDa的组分最强。采用凝胶过滤色谱对分子量小于5 kDa的WPI酶解物进行分离,抗氧化活性强的组分继续采用RP-HPLC进行纯化。通过MALDI-TOF-MS与氨基酸组成分析鉴定该活性肽为His-Ile-Arg。     

叶绿体小分子RNA的分离纯化和鉴定

本文采用低速匀浆、过筛的方法从植物叶中分离得到了完整、纯净的叶绿体。将叶绿体与提取缓冲液、苯酚混合匀浆抽提叶绿体 RNA。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳与文献已发表的已知酵母5S RNA、菠菜叶绿体4.5S RNA 及小麦5S RNA、4.5S RNA 的电泳迁移距离进行比较,发现芹菜叶绿体中小分子 RNA(沉降系数为5S 左右的 RNA)中除含有5S RNA 和4S RNA 外,还含有两种4.5S RNA。而水杉和银杏叶绿体小分子 RNA 中只含有5S RNA 和4S RNA。     

猪软骨链蛋白的提取及鉴定

目的:提取和鉴定猪肋骨软骨链蛋白(p-CLP),测定p-CLP与透明质酸的亲和力,为软骨链蛋白在肿瘤显影中提供实验依据.方法:亲和层析法从仔猪肋软骨提取软骨链蛋白(p-CLP),SDS-PAGE凝胶电泳、氨基酸分析法分析p-CLP,放射性体外结合分析测定p-CLP与透明质酸(HA)的亲和力.结果:p-CLP的抽提蛋白得率为2.2%,p-CLP氨基酸分析示谷氨酸含量最高(2.26mg/20mg),放射性体外结合实验示p-CLP与HA的结合活性KA为(6.30±1.73)×109M-1.结论:亲和层析法提取p-CLP得率高,p-CLP与HA有较高的结合力,能够为P-CLP在肿瘤、眼科疾病、骨骼疾病的防治中提供实验依据.     

一组新的沙蚕蛋白酶同工酶的分离纯化与鉴定

分离纯化一组新的沙蚕蛋白酶同工酶,并对其性质进行鉴定.用硫酸铵盐析、凝胶过滤层析和疏水层析技术从沙蚕中分离得到了沙蚕蛋白酶,经聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）、高效液相色谱（HPLC）、等电聚焦电泳（IEF）和质谱分析（MS）鉴定,发现沙蚕蛋白酶由3个组分组成,均有纤溶活性,其等电点为3.5～4.5,分子量分别为29 248.75、29 007.66、28 954.17,肽指纹图谱分析发现,它们均为未知的新蛋白质,其中2个组分结构相似,具有较高的同源性,与另1个有不同.用抗原抗体反应鉴定其免疫原性,发现3个组分中有2个组分具有相同的免疫原性,另1个组分与2者不同.但3者具有相同的抗原决定簇,证明沙蚕蛋白酶由2个同工酶组成.以4种专一性的抑制剂对其进行抑制,检测酶的活性确定其酶学性质,发现其反应的适宜温度为40℃～50℃、适宜pH值为8～9.沙蚕蛋白酶属于丝氨酸蛋白酶.     

用超滤法从猪血中分离纯化猪血红蛋白

为了给人工红细胞的研究提供较高纯度和浓度的血红蛋白,采用超滤膜分离的方法,通过研究分析,在一定超滤条件,从新鲜猪血中分离纯化得到猪血红蛋白。并应用SDS-PAGE凝胶电泳、紫外-可见分光光度计对纯化后的血红蛋白进行了鉴定分析。经分析,优化的超滤条件为:操作压力0.05Mpa、料液温度12℃;在此条件下分离纯化的猪血红蛋白,纯度达到了99%以上,浓度较纯化前提高了近20倍。     

植物钙调素的纯化和鉴定

钙调素(Calmodulin,CaM)是一种酸性、小分子量的单肽链调节蛋白。它是Cheung1967年首先在牛脑中发现的。Anderson和Cormier于1978年证实豌豆中也存在CaM。现在已知CaM广泛存在于真核生物中,也可能存在于原核生物中。CaM在多种植物生     

鹰嘴豆种子胰蛋白酶抑制剂的分离纯化与鉴定

为了寻找具有药物作用的天然胰蛋白酶抑制物,采用硫酸铵分级沉淀、离子交换层析(DEAE-纤维素52)及Sephadex G-100凝胶层析等方法, 从鹰嘴豆种子中分离出一种鹰嘴豆胰蛋白酶抑制剂（CPTI）. 研究表明：CPTI对胰蛋白酶有较强的抑制作用,抑制率达80%,而对胰凝乳蛋白酶抑制作用较弱,抑制率为32%, 对胃蛋白酶、木瓜蛋白酶及枯草杆菌蛋白酶均无抑制作用; 用SDS-PAGE测得CPTI近似分子质量为25.7 kD; CPTI具有较高的热稳定性,在100 ℃下加热60 min,对胰蛋白酶活性仍保持78%抑制率; Lineveaer-Burk作图得知该抑制剂属竞争性抑制类型. 动力学测定显示,来自鹰嘴豆中的CPTI对胰蛋白酶的抑制作用常数(Ki)为3.99×10^-7 mol/L.     

脊神经节感觉神经特异蛋白的分离纯化和鉴定

为进一步研究感觉神经特异蛋白２９ＫＤ的结构和功能,我们以兔脊神经节及背根纤维为材料,通过制备匀浆,离子交换层析ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ,高压液相凝胶过滤层析分离纯化了感觉神经特异蛋白２９ＫＤ,薄层扫描鉴定纯度为８０％以上,用蛋白质印迹法鉴定了该蛋白,并进行了该蛋白的稳定性观察。为该蛋白作为鉴定感觉神经元及其纤维的标志物,和研究感觉神经元的再生与功能打下了基础     

铜绿假单胞菌外毒素A的生产,分离纯化和鉴定

通过对培养基组成、种子活化、接种量和培养条件进行优化,使铜绿假单胞菌外毒素Ａ（ＰＥ）产量达到每毫升５－１０μｇ和１９２小鼠ＬＤ５０,不低于国外报道水平。经二步纯化,ＰＥ蛋白回收率为３３．３３％（ＰＥ）和１６．６７％（ＬＤ５０）,提纯系数为４３８．５（ＰＥ）或２１８．５（ＬＤ５０）,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ呈现一条带,相对分子质量为６６０００,琼脂糖扩散鉴定与兔抗ＰＥ产生一条沉淀线,小鼠半数致死量为０．１５     

家蚕丙氨酸转氨酶的纯化与鉴定

应用细胞匀浆,硫酸铵分段盐析,DEAE-纤维素柱层析和羟基磷灰石柱层析等方法,从家蚕后部丝腺中成功地分离制备了高纯度的丙氨酸转氨酶,经聚丙烯酰胺凝胶电泳分析鉴定,本法制备的丙氨酸转氨酶已达到均一的纯度。     

猪原始生殖细胞的分离、培养与鉴定

Embryonic germ cells (EG cells) are pluripotential undifferentiated stem cells isolated from cultured primordial germ cells (PGCs). Like ES cells, EG cells are of importance for gene targeting, therapeutical cloning and organ trans-plantation. The aim of this study was to isolate and characterize EG cells from porcine PGCs. The genital ridges from 24- 26 days old porcine embryos were treated in 0.02% EDTA for 20 min and pricked with a needle to release PGCs. The isolated PGCs were cultured on a SNL feeder layer in an EG cell medium. The EG cell medium consisted of Dulbecco‘‘s modified Eagle‘‘ s medium (DMEM) supplemented with 20 % Buffalo rat lever (BRL) cell-conditioned medium, 15 % fe-tal bovine serum, 1 mmol L-glutamine, 0.1 mol nonessential amino acids, 10 μmol β-mercaptoethanol and antibiotics.The freshly isolated PGCs were positive for alkaline phosphatase activity and Periodic acid-Schiff‘‘ s staining. Under this culture regime, PGCs could be maintained in an undifferentiated state and used for further cultures. One strain of the cul-tured PGCs was cultured 8 times, and alkaline phosphatase activity was detected in the colony formed from this strain.These cultured PGCs could spontaneously differentiate into fibroblast-like cells. These data suggested that we had success-fully isolated EG-like cells from oorcine PGCs.     

Brevibacillus brevis HOB1所产脂肽的分离纯化和鉴定

用常压反相色谱对从短短芽孢杆菌HOB1发酵液中提取到的脂肽类生物表面活性剂进行了分离纯化, 并用HPLC制备了其中的一个化合物。经电喷雾质谱分析得到该化合物的相对分子量为1035.7 D, GC/MS的分析结果显示其脂肪酸部分为C15 β-羟基脂肪酸, 由PITC柱前衍生法测得该化合物的氨基酸组成比例为: Asp:Glu:Val:Leu = 1:1:1:4。结果显示该脂肽的结构与表面活性素(C15 surfactin)类似。实验表明, 除芽孢杆菌属外, surfactin系列脂肽还能为短芽孢杆菌属所产生。