猪体细胞核移植重构胚的体外发育

以卵丘细胞为核供体细胞组成重构胚,卵裂率达到56．7％,发育至桑椹胚率达到11．7％,囊胚率为6．7％,显著高于成纤维细胞重构胚（P＜0．05）。本文还研究了卵母细胞的采集方法、激活程序和卵龄对卵丘细胞核移植重构胚体外发育的影响。以血清饥饿法将卵丘细胞诱导G0/G1期,抽吸法／解剖法采集卵母细胞,体外培养33－44h,将卵丘细胞放至去核卵母细胞的卵周隙中,重构胚以钙离子载体A23817或电脉冲结合6－DMAP激活处理,体外培养6d。研究表明,卵母细胞采集方法、激活液中细胞松驰素（CB）、激活程度并不影响重构胚的发育（以卵龄44h的卵母细胞为受体）;而以电脉冲结合6－DMAP激活处理能提高重构胚发育能力（以卵龄33h的卵母细胞为受体）（P＜0．05）。本研究显示,以电脉冲结合6－DMAP激活卵丘细胞重构胚,体外能发育至囊胚。     

影响猪体细胞核移植重构胚体外发育的若干因素

以卵丘细胞为核供体细胞组成重构胚,卵裂率达到56．7％,发育至桑椹胚达11．7％、孵化囊胚率为6．7％,显著高于成纤维细胞组成的重构胚（P＜0．05）。我们研究了卵母细胞的采集方法,激活方法和卵龄对卵丘细胞核移植重构胚体外发育的影响。以血清饥饿法将卵丘细胞诱导至G0或G1期,抽吸法／解剖法采集卵母细胞,体外培养33或44h,将卵丘细胞置于去核卵母细胞的卵周隙中,重构胚以钙离子载体A23817或电泳冲结合6－DMAP激活处理,体外培养6天,结果表明,卵 母细胞采集方法、激活液中细胞松弛素（CB）并不影响重构胚的发育（以卵龄44h的卵母细胞为受体）;而以电脉冲结合6－DMAP激活处理能提高重构胚发育能力（以卵龄33h的卵母细胞为受体）（P＜0．05）。本研究显示,以电脉冲结合6－DMAP激活卵丘细胞重构胚,能在体外发育至囊胚。     

基于树突状细胞的肿瘤疫苗研究进展

1973年,Steinman和Cohn在小鼠脾脏发现具有树枝状突起的独特形态细胞,并将之命名为树突状细胞（dendritic cell,DC）。DC作为连接先天性免疫和获得性免疫的桥梁,是机体识别和摄取病原体和肿瘤抗原的关键细胞,具有抗原提呈能力强和激活初始型T细胞的特点。     

MGBG对苜蓿愈伤组织生长、体细胞胚胎诱导及其乙烯生物合成的影响

在苜蓿（ＭｅｄｉｃａｇｏｓａｔｉｖａＬ．）愈伤组织继代之初加入不同浓度的甲基乙二醛双（脒腙）（ＭＧＢＧ）（０．５,１,２ｍｍｏｌ／Ｌ）,可不同程度地抑制愈伤组织及其后体胚诱导悬浮培养物的生长和体胚形成;若在体胚诱导阶段加入,则上述的抑制作用更为强烈。ＭＧＢＧ不但促进愈伤组织乙烯释放量、内源ＡＣＣ（１氨基环丙烷１羧酸）水平和ＡＣＣ合成酶活性,也促进体胚诱导悬浮培养物的ＡＣＣ水平及ＡＣＣ合成酶的活性,但降低体胚诱导悬浮培养物的ＭＡＣＣ（丙二酰ＡＣＣ）水平。ＭＧＢＧ对体胚诱导和培养物的生长的抑制作用与其上述的对ＡＣＣ和乙烯生成促进作用及降低ＡＣＣ转化成ＭＡＣＣ的效应有关。     

牛供体细胞的来源、血清饥饿和预激活对核移植卵体外胚胎发育的影响

牛皮肢成纤维细胞经血清饥饿或预激活处理后获得核胞体,并注入去核卵母细胞内构建重组胚。检查重组胚24h和36h卵裂率以及8d囊胚率,以评估供体细胞及其处理方法对体细胞核移植效果的影响。实验结果表明：来自3个年龄（6、18和36月龄）、2个品系（红安格斯肉牛和荷斯坦奶牛）的4头供体牛皮肤细胞重组胚的卵裂率和囊胚率均无差异。生长到完全汇合的36月龄荷斯坦牛供体细胞血清饥饿10-13d组重组胚的36h卵裂率显著低于0d（对照）、3-5d和6-9d组,囊胚率显著低于3-5d组;经5μmol/L离子霉素或7％乙醇预激活5min重组胚的卵裂率和囊胚率均与对照组无差异。     

MGBG对苜蓿愈作组织生长,体细胞胚胎诱导及其乙烯生物合成的影响

在苜蓿（ＭｅｄｉｃａｇｏｓａｔｉｖａＬ．）愈伤组织继代之初加入不同浓度的甲基乙二醛－双（脒腙）（ＭＧＢＧ）（０．５,１,２ｍｍｏｌ／Ｌ）可不同程度地抑制愈伤组织及其后体胚胎诱导悬浮培养物的生长和体胚形成,若在体胚诱导阶段加入,同上述的抑制作用更为强烈,ＭＧＢＧ不但促进愈伤组织乙烯释放量,内源ＡＣＣ（１－氨基环丙烷－１羧酸）水平和ＡＣＣ合成酶活性,也促进体胚诱导悬浮培养物的ＡＣＣ水平及ＡＣＣ合成酶的     

水稻纯合胚致死突变研究

以ＥＭＳ的处理并结合组织培养技术成功地获得胚致死突变的纯合再生植株。该植株生长发育正常,除种子无发芽能力外,纯合突变体的一切性状均与亲本品种表现一致。观察到胚败育的各种表现：（１）仅具有一个球形胚。（２）完全没有胚器的分化。（３）仅具胚根的分化而无胚芽的分化。（４）胚芽分化不完全。（５）胚芽与胚根之间没有输导组织相连接或者输导组织发育不完全等等。（纯合突变体×正常品种）杂种当代的种子（Ｆ１）发芽正常,而由Ｆ１及Ｒ１植株上所产生的种子（Ｆ２及Ｒ２）约有３／４具发芽能力,而１／４无发芽能力。统计分析的结果表明胚致死突变受隐性单基因控制。据我们所知,获得胚致死突变纯合体的成熟植株,本研究乃是首例报告,至少在水稻上是如此。在以利用无融合生殖之固定杂种优势的“一系法”杂交水稻生产的设想中,胚致死突变可作为胚乳的提供者而加以利用。     

化学联合激活可明显提高小鼠孤雌胚胎发育率

为探讨一种高效的小鼠卵母细胞孤雌激活的方案,进一步提高孤雌囊胚发育率。用不同浓度的氯化锶及不同作用时间的乙醇,并分别联合6-DMAP对不同卵龄小鼠卵母细胞进行活化,统计小鼠卵母细胞卵裂率和体外发育状况。结果显示,15～16h、18～19h和20～21h卵龄组卵母细胞经6mmol/LSrCl2联合6-DMAP处理后,三组的激活率随卵龄增长而升高,其中20～21h卵龄组显著高于15～16h、18～19h组(P<0.05),激活胚胎的发育率以18～19h时最高;6mmol/L和10mmol/L的SrCl2联合6-DMAP均能有效地激活小鼠卵母细胞,激活率分别为76.4%和83.6%,桑葚胚率分别为50.0%和56.3%;70ml/L乙醇联合6-DMAP以处理7min组获得了较好的激活率和囊胚发育率,分别为77.1%和42.4%,囊胚率均显著高于4min和10min处理组(P<0.05)。6-DMAP与SrCl2或乙醇联合应用可以有效抑制第二极体的排出,提高激活胚的二倍体比率;孤雌囊胚的平均细胞数显著低于正常受精囊胚(P<0.05)。不同激活方案对孤雌活化胚的核型和发育能力的作用差异较大,小鼠卵母细胞孤雌激活率与卵龄...     

多胚水稻（Oryzasativa）品系SB－1的胚囊特性及异常生殖行为

多胚水稻（Ｏｒｙｚａｓａｔｉｖａ）品系ＳＢ－１的胚囊特性及异常生殖行为刘永胜,孙敬三,王伏雄（中国科学院植物研究所,北京１０００４４）周开达（四川农业大学,雅安６２５０１４）被子植物中多胚是一普遍现象。真多胚的起源一般包括合子原胚裂生、助细胞成胚和珠...     

大鼠细小病毒H-1株培养方法的建立

目的建立用大鼠胶质瘤细胞系（Rat glial cell line C6）替代大鼠原代胚细胞（primary rat embryocells,RE）培养大鼠细小病毒（Toolan virus,H-1）的方法。方法 将0.8 mL H-1病毒接种C6细胞（75T培养瓶,细胞接种量为2×105/mL,培养过夜）,待细胞病变CPE达＋＋～＋＋＋时,用免疫荧光（FITC）鉴定所培养病毒的抗原,用血球凝集试验（HA）测定培养物上清效价,用DNA测序鉴定所培养的病毒,用96孔板培养法测定H-1病毒的TCID50。结果H-1在接种到C6细胞的第3～4天,细胞发生明显的病变,CPE可达＋＋＋＋,FITC鉴定呈H-1抗原阳性,病毒的培养上清中HA效价为1∶320。测序结果表明：该病毒序列与NCBI中H-1序列同源性达99%,确定为H-1病毒。收获的H-1的TCID50为103.2/0.1 mL。结论用大鼠胶质瘤细胞系（C6）可以替代大鼠原代胚细胞（RE）进行大鼠细小病毒的培养。     

酶促和非酶促抗氧化系统在玉米胚脱水耐性获得中的作用

以发育中的玉米胚为材料,研究了玉米胚脱水耐性的发育变化及其与抗氧化系统之间的关系。结果表明,授粉后18d的胚获得萌发能力,但不耐脱水;授粉后36d的胚开始获得耐脱水能力,并随着发育逐渐增加。随着发育,胚的超氧化物歧化酶（SOD）、抗坏血酸过氧化物酶（APX）、谷胱甘肽还原酶（GR）和脱氢抗坏血酸还原酶（DHAR）的活性逐渐降低,过氧化氢酶（CAT）活性逐渐增加。授粉后16～22d的玉米胚中检测不到抗坏血酸,24d后胚中抗坏血酸的含量显著增加;还原性谷胱甘肽含量在整个发育过程中逐渐增加。脱水胚的SOD、APX和DHAR的活性比对照（未脱水）胚低,而GR和CAT活性在发育早期比对照胚低,在发育中、后期高于对照胚。脱水胚的抗坏血酸和还原性谷胱甘肽含量明显低于对照胚。胚中丙二醛的含量随着发育逐渐下降,脱水胚的丙二醛含量显著高于对照。这些结果说明CAT活性和谷胱甘肽含量的增加以及脂质过氧化产物丙二醛含量的下降与玉米胚脱水耐性的获得密切相关。     

培养基中能量底物对猪胚胎发育的影响

旨在探讨丙酮酸和乳酸对猪(Susscrofa)胚胎早期发育的影响,将NCSU-23培养基中的5.56mmol/L葡萄糖替换为0.2mmol/L丙酮酸、5.7mmol/L乳酸,并将此培养基命名为mNCSU-23。根据实验设计,孤雌胚及核移植胚转移到mNCSU-23或NCSU-23中培养。激活第2天统计孤雌胚及核移植胚中的5～8细胞胚胎数。激活第6天统计孤雌胚及核移植胚囊胚形成率及囊胚细胞数。实验结果表明,mNCSU/NCSU处理组的5～8细胞胚胎数及囊胚数显著高于对照组(P0.05);单纯使用mNCSU培养猪胚胎时,囊胚率最低,发育结果最差(P0.05)。本研究证实,在体外培养前两天,用乳酸和丙酮酸代替培养基中的葡萄糖对胚胎发育有利。     

“锦丰”梨花药培养获得小植株

l植物名称梨O抓训初攻众积肥如“）。2材料类别花药。3培养条件（）诱导胚状体培养基为1／2MS＋IAA0．Zing／L（单位下同）＋BAI～2;（2）分化培养基为MS＋GA。of＋IBA0．2＋BAI;（3）诱导生根培养基为1／2MS＋IAA1．5。培养温度25～30C,光照度2000IX左右,光照时间为10h／d左右。4生长与分化情况4．五胚状体的诱导梨花药接种在培养基（1）上后,经过120d左右的培养,有的花药可在其裂口处产生乳白色的胚状体,似苹果花药胚状体,有双子叶型,有的呈畸型子叶型,有的花药可同时产生2个以上的胚状体。4．2植株分化将胚状体转…     

从玉米胚中大量制备植物钙调素

从每公斤萌发２４ｈ的玉米胚丙酮粉中可提纯得６３ｍｇ的钙调素（ＣａＭ）,这是目前从每公斤植物材料中所提纯得ＣａＭ的最高记录。对其理化性质的研究表明,玉米胚ＣａＭ 有较高的生物学活性,能较好地激活磷酸二酯酶,其紫色吸收光谱,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳行为及氨基酸组成与其它的植物ＣａＭ相似。上述结果表明玉米胚是１个提取植物ＣａＭ相似。上述结果表明玉米胚是１个提取植物ＣａＭ的适宜材料。     

猪体细胞核移植重构胚的体外发育(英文)

以卵丘细胞为核供体细胞组成重构胚 ,卵裂率达到 5 6.7% ,发育至桑椹胚率达到1 1 .7% ,囊胚率为 6.7% ,显著高于成纤维细胞重构胚 (P <0 .0 5 )。本文还研究了卵母细胞的采集方法、激活程序和卵龄对卵丘细胞核移植重构胚体外发育的影响。以血清饥饿法将卵丘细胞诱导至G0 G1 期 ,抽吸法 解剖法采集卵母细胞 ,体外培养 3 3～ 44h ,将卵丘细胞放至去核卵母细胞的卵周隙中 ,重构胚以钙离子载体A2 3 81 7或电脉冲结合 6 DMAP激活处理 ,体外培养 6d。研究表明 ,卵母细胞采集方法、激活液中细胞松弛素 (CB)、激活程序并不影响重构胚的发育 (以卵龄 44h的卵母细胞为受体 ) ;而以电脉冲结合 6 DMAP激活处理能提高重构胚发育能力 (以卵龄 3 3h的卵母细胞为受体 ) (P <0 .0 5 )。本研究显示 ,以电脉冲结合 6 DMAP激活卵丘细胞重构胚 ,体外能发育至囊胚     

枇杷种子的脱水敏感性与膜脂过氧化作用

枇杷种子不耐贮藏,属于脱水敏感的种子。在干燥脱水过程中,子叶和胚轴的超氧物歧化酶（ＳＯＤ） 和过氧化物酶（ＰＯＤ） 活性不断下降,而丙二醛（ ＭＤＡ） 含量及种子浸泡液的电导率不断增加,种子活力逐渐降低。外源０ ．０５ ～０ ．２５ ｍｍｏｌ／Ｌ 的抗坏血酸（ＡＳＡ） ,０ ．０５ ～５ ．０ ｍｍｏｌ／Ｌ 的还原性谷胱甘肽（ＧＳＨ）和０ ．０５ ～０ ．５ ｍｍｏｌ／Ｌ 的Ｃａ２ ＋ 处理能有效地增强种胚防御过氧化的能力,缓解氧自由基对种胚的伤害,提高脱水劣变的种子活力。     

低温层积与外源GA3对肉苁蓉种子萌发及其内源GA和ABA含量的影响

研究低温层积对肉苁蓉种子胚率、内源赤霉素（GA）和脱落酸（ABA）含量以及外源赤霉素（GA3）对低温层积不同时间种子萌发率影响的结果表明：低温层积可以提高种子的胚率及其GA的含量,降低其ABA含量;层积120～150d的肉苁蓉种子经外源GA3处理后,其萌发率可以达到70%以上;层积120d是外源GA3促进种子萌发的临界点。     

影响木薯次生胚状体发生及植株再生因素的研究

研究了在外植体的不同发育阶段中,碳源以及不同的生长激素配比对木薯次生胚状体诱导及植株再生的影响。结果表明：以固体成熟培养基上生长１５ｄ的胚状体子叶为外植体,次生胚状体的产量最高,达２９．３个成熟胚状体／１个外植体。在次生胚状体的诱导阶段,以麦芽糖（４０ｇ／Ｌ）代替蔗糖作碳源,能同时提高次生胚状体的产量（３２．５个胚次体／１个外植体）及植株再生频率（７４．３％）。２,４－Ｄ与ＰＰ３３３;（０．１ｍｇ／Ｌ）配合能提高植株再生频率到７７．６％。２,４－Ｄ与ＢＡＰ（２ｍｇ／Ｌ）或激动素（２．０ｍｇ／Ｌ）配合则大大降低了胚状体诱导及植株再生频率。     

FRET技术检测植物类caspase-3蛋白酶活性的质粒构建及其瞬时表达

植物细胞程序性死亡（programmed cell death,PCD）是一种由细胞内部程序控制的、主动的细胞死亡过程。在植物发育、逆境胁迫及超敏反应中,PCD都起着重要的作用。为检测植物PCD过程中类似动物细胞凋亡蛋白酶caspase-3的活性,构建了一个能够在活体植物细胞中实时检测类caspase-3蛋白酶激活的质粒PI—ECFP—EYFP。该质粒在植物细胞中可以表达出两端为青色荧光蛋白（ECFP）和黄色荧光蛋白（EYFP）的融合蛋白。这两个荧光蛋白通过含有caspase-3蛋白酶作用靶点DEVD的短肽相连,从而可以根据荧光共振能量转移现象检测类caspase-3凋亡蛋白酶的激活,以为实时检测植物PCD过程中关键蛋白酶的激活及其调控奠定基础。     

趋化因子RANTES在人和小鼠附睾内的表达及功能初探

受激活调节正常T细胞表达和分泌因子（regulated upon activation normal T cell expressed and secreted,RANTES）是趋化因子超家族CC亚族成员,最近的研究发现,RANTES存在于正常成人精液中,但其组织细胞来源尚不清楚。为了系统地研究RANTES在男性生殖系统的表达及意义,我们利用反转录PCR、