基因工程乙肝疫苗研究进展

乙肝病毒(hepatitisBvirus,HBV)为嗜肝病毒,全世界有超过3亿人受到乙肝病毒的感染。综述近年来乙肝疫苗的最新研究进展,并对乙肝疫苗的发展历程,应用中出现的问题,克服不应答及低应答的策略,乙肝疫苗的发展方向以及目前最新的DNA疫苗进行了阐述 。     

深圳康泰生物制品有限公司简介

深圳康泰生物制品有限公司是国家原材料投资公司、深圳广信生物工程公司和香港广信实业公司合资兴办的股份制企业。它承接深圳广信生物工程公司血源乙肝疫苗的生产和基因乙肝疫苗的引进项目,是开发生物技术产品,实     

乙型肝炎病毒与乙肝疫苗的基因工程

乙型肝炎病毒(HBV)能引起人患乙型肝炎。乙型肝炎(简称乙肝)是一种流行很广的传染病,而且传染性也比较强,大约4×10~(-5)ml含乙型肝炎病毒的血液能够足使人发生感染。输血或注射是重要的传染途径;外科和牙科手术、针刺、使用公用剃刀,牙刷等物品,皮肤微小损伤沾染少量含乙型肝炎病毒,均可成为传染源,吸血昆虫也可能传播乙肝。据统计,全世界乙肝携带者约有2亿人。乙肝病毒除了能引起人患乙肝外,部分还可能诱发肝癌。乙型肝炎病毒的结构与乙肝病毒相关的颗粒有三种不同的形态: 1.大球形颗粒:是一种具有双层外壳的病毒样颗粒,直径约42nm(纳米,1nm=10~(-9)m),外壳厚度7nm,含有乙肝表面抗原(HBsAg),最能代表HBsAg抗原性的是由亚基PⅠ和PⅡ所构成的二聚体。PⅠ是一个分子量     

两种配方的氢氧化铝吸附基因工程乙肝疫苗的效果比较

氢氧化铝［Ａｌ（ＯＨ）３］作为ＷＨＯ 推荐的一种佐剂,已广泛应用于生物制品的各种菌疫苗制剂中。本文对两种不同配方的氢氧化铝吸附基因工程乙肝表面抗原后疫苗的效果进行比较,结果显示：三氯化铝加氢氧化钠配方制备的Ａｌ（ＯＨ）３ 配制工艺简捷,易控制工艺参数及佐剂质量,对疫苗效力的增强作用优于三氯化铝加氨水的配方。     

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860675分泌素的生产〔专,德」/Konig,W.…了//European Patent. Appl. EP0136472 .Pub .10。 04.85. APPI 。 DE3328793.filed 10.08 .83〔译自CBA-1985,(6),1752〕只翻译了题目。(陈玉梅)8606了6一个经修改的抗生素抗性基因〔专,英〕/Ingolia,T .D.…了European PatentAPPI.EP 0135291。Pub.27.03.85.Appl .US 516222,filed 22.07.83〔译自CBA,1985,(6),1753〕     

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870001完整基因及其摘出和克隆的方法[专,英」/McCute han,T.F.…/EuropeanPatent Appl.Ep 0170146.Pub.05.02. 86.Appl.US 636261,filed 31.07.54〔译自CBA,1956,(4),1115] 本发明揭示功能齐全完整基因以及获得     

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通过熔解待测DNA,将24个碱基的寡核普酸引物与连有1.okb片段的单DNA序列退火,并用DNA聚合酶完成链延伸反应,来扩增1.Okb的DNA专一性探针片段。从理论上说,要增工00 000 000倍,需要重复此过程25次。扩增之后,将反应混合物转移到尼龙过滤器中,并用点印迹法与放射性标记的1.Okb片段杂交。用     

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卿1135利用甲醉的Aeetobaeter啡山a.uC.MB 58的启动子探针载体的构建咦1/sehroeder,R·…11 Actaaiotcchnol一1 989,9(3)一219一225降自DBA,1989,8(]9),89一11145〕 载体质粒pRsZ由于广寄主范围复制子质粒RSF 1010的存在,因而可用在上述醋杆菌或大肠杆菌,它提供启动子克隆的单一限制性位点及选择转化体的抗性标记.该载体是把质粒pUC19的EcoRI一sall多聚接头插人到用&oRI/sa江消化的质粒pMK一6中构建得到的.产生的抗卡那霉素质粒pRsl被克隆到质粒RSF!010的EcoRI位点上,并用来转化大瓜扦菌C 600.含杂交质粒克隆的选择在含Km和S…     

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9416685,一荧光标记DNA的单泳道化学定序[英]/Ferra—boli,S.…∥Anal.BiochelTl.一1993,214(2).一566～570E译自DBA,1994,13(2),94—00596] 经HindⅢ和EcoRI消化从质粒pBBⅢR获得含有309bp5S基因的片段。纯化的DNA标记用:(i)在dA’I'P存在下用荧光ddGTP对( )链3,末端标记; (ii     

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862962装配型质粒克隆用载体〔专,英]Hunter,1.5.了European Patent Appl.EP 0146368.Pub.26.06.85.Appl.GB833659,filed 16.12.83〔译自CBA,1985, (9),2835」 构建了一个双功能的杂种装配型质粒克隆载体,它能够在大肠杆菌和链霉菌属中复制。这个载体叫pPZ74,它可能用于在大肠杆菌中构建基因文库,然后,可以下经进一步的DNA操作,即能被转回到链霉菌中。 (郭殿瑞)862963编码兔肿瘤坏死因子(TNF)的DNA,具有上述插人的DNA的运载体,用上述载体转化的寄生,兔TNF多肤和这种肚的生产方法〔专,日〕/Yamada,M一了European Patant Appl。…     

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852171 DNA片段链的分开及其从非变性聚丙烯酞胺凝胶中的分离〔英〕/James,R.…了Anal.Bioehem一1954,140(2)一456一458〔译自DBA,1984,3(21),84一09915〕 报道利用尿素和温和加热快速而定量地变性双链DNA(d sDNA)的一个技术。利用DNA聚合酶和适当的““PdNTP,通过填充反应将带有5产延长末端的DNA片段的3/末端加以标记,没结合的标记混合物通过SephadexG一50柱并用SDS一EDTA洗脱除去。标记的dSDNA加入固体尿素,65℃保温3分钟,接着在上聚丙烯酸胺凝胶前快速冷却变性。变性的互补DNA链在丙烯酞胺与双丙烯酸胺比率为60,1的非变…     

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891040降低了胞外蛋白水解酶活性的枯草杆菌菌株;获得菌株的方法以及采用上述菌株分泌蛋白的方法〔专,英〕/Furutani,Y.…/UK Patent ApPI。GB 2198439.Pub.15。06。88。Appl.GB 8723033,filed02.10.86〔译自CBA,1988,(9),3724〕 将刺激胞外蛋白水解酶水平的基因引人到枯草杆菌菌株FERM BP一108。染色体DNA中,从而在回收时可进一步降低胞外蛋白水解酶残留量。采用编码所需蛋白的重组质粒转化所得菌株;该蛋白可大量表达并积累于培养基中,从而易于收集。例如,经处理后的枯草杆菌MT一430(携有重组DNAph GH427,编码人生长激素)分…     

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950714在Acetobacter methanoIicus B58中表达异源基因的广寄主范围质粒的构建[英]/FoelIner,C.G.…/Acta Biotechn01.1994,14(2).一141~151[译自DBA,1994,13(16),94—090093 在广寄主范围质粒RSFlolO复制子基础上构建了质粒,以此在嗜酸性甲基营养型A.raetkaaol-icus B58中有效表达异源基因。用启动子:探针载体质粒pRS201鉴别并分离出醋杆菌噬菌体AcmlDNA的含启动子序列。将此质粒与大肠杆菌启动子tac和pr相连,分别构成表达载体质粒pRS201tac和pRS201pr。将氯霉素乙酰转移酶(CAT)基因插入到克隆的启动子下游之后,测定了大肠杆…     

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951155模板转换扩增及优化[会,英1/Chan.Y.…,Ab—Str.Gell.Meet.Am.:Soc.Microbi01.一1994.94 Meet.一551E译fj DBA,1994,13(20),94—11412] 开发了称为链转换单引物扩增(SPA)的新系统。此方法需要引物和专门设计的与模板相同链杂交的寡核苷酸(阻遏物)。阻遏物的5’一末端含有与引物相同的序列。阻遇物的3L末端与模板上引发位点的下游片段杂交,留下5’非杂交性拖尾。利用Pyrocovcus,”riosus DNA一聚合酶的引物延伸在阻遏物杂交位点受到阻断。通过专门设计阻遏物以形成茎环产物,开发出从靶链判阻遏物5’非杂交性拖尾的模板转换。…     

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采用市售的一种双功能接头试剂以及氨基酸衍生的2,4一二硝基酚(DNP).制备了一种光激活试剂,用来将半抗原引到DNA探针之上.在日光灯光照下,上     

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900865 利用聚合酶链反应(PCR)扩增细菌rRNA[英]Wilson, K. H.…∥Abstr. Annu. Meet. Am. Soc. Microbiol.-1989,89 Meet. -111[译自DBA,1989,8(17),89-09960] 利用聚合酶链反应扩增细菌16S核糖体RNA(rRNA)。用玻璃珠破碎细胞并用酚抽提核酸。分四段扩增rRNA,每段长     

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871892人类肿瘤坏死因子[专,英〕/Mark,D .F.…了PCT Patent Appl.WO8602381.Pub.24.04.86.Appl.US 661026,filed 15.10.54〔译自CBA,1956,(8),2868〕 运用rDNA技术产生了人肿瘤坏死因子,介绍了有关的方法、载体和所用的细胞以及这些具有N一末端缺失和超级生物学活性的突变型蛋     

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871434新的载体和控制干扰素表达的方法[专,英]/Crowl,R.M,/US Patent US4582800.Pub.15.04.86.Appl.US 397388,filed 12.07.82[译自CBA,1956,(7),2477] 改良的表达载体包括噬菌体λ的Pl启动子和操纵基因、带碱基序列ATG的真核DNA及人免疫干扰素的基因,和一个结合有启动子下游和真核DNA上游的连接位点的杂种核糖体。     

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960805 在转基因小鼠中引导窦G细胞专性表达的大鼠胃泌素-人胃泌素嵌合转基因[英]/Wang,T.C.…//Am.J.Physiol. -1995,268,Pt.1.-G1025～1036 [译自DBA,1995,14(17),95-09955] 克隆了邻近大鼠胃泌素启动子的450个核替酸,并用于构建大鼠胃泌素-人胃泌素受体嵌合转基因。将该基因注射入小鼠种系中。Northern印迹分析、原位杂交和双标记免疫细胞化学研究表明该转基因在窦G细胞中特异性表达。在回肠和结肠中观     

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940470利用固粉寡dT引物分析cONA序列〔英〕/Thom“s,M .G.…泌Nueleie Aeids Res一1993,21(16)一3015~3916〔译自DBA,1993,12(19),93一10795〕 为提高poly(A/T)段的分辫率,研究出一种用PCR给DNA定序的好方法。利用载体侧翼引物(其中一个已用生物素化方法截短)直接从分离的入噬