两个雌核发育白鲢群体同工酶分析遗传标记的确定

取源于武汉两个不同渔场两尾白鲢的卵子,经紫外照遗传物质失活的鲤鱼刺激雌核发育和热休克诱导第二极体保留的基因组操作技术,获得了两个不同的人工雌核发育白鲢群体。采用聚丙烯酰胺垂直板电泳技术,分析了这两个澡同人工雌核发育白鲢群体（分别称为Ｈｙ－Ｇ１和Ｈｙ－Ｇ２）内不同个体的肝脏、肌肉组织以及红细胞中脱氢酶（ＬＤＨ）、要酸氢酶（ＭＤＨ０、酯酶（ＥＳＴ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）等几种同工酶的表达谱式、并与     

两个雌核发育白鲢群体同工酶分析及遗传标记的确定

取源于武汉两个不同渔场两尾白鲢的卵子,经紫外照射遗传物质失活的鲤鱼精子刺激雌核发育和热休克诱导第二极体保留的基因组操作技术,获得了两个不同的人工雌核发育白鲢群体。采用聚丙烯酰胺垂直板电泳技术,分析了这两个不同人工雌核发育白鲢群体（分别称为Hy-G     

异源四倍体鲫鲤雌核发育后代的RAPD分析

在优化RAPD(随机扩增多态性DNA)检测条件基础上,从134个随机引物中筛选出53个扩增较好且多态性强的引物,对异源四倍体鲫鲤第1代(G1)、第2代(G2)人工诱导的雌核发育二倍体后代群体的DNA多态性及分子标记进行了分析。结果显示,53个随机引物在G1群体和G2群体中检测到的位点数分别为541、511,其中多态性位点数分别为70、52,多态位点比例分别为12.94%、10.18%。两个群体的平均遗传距离分别为0.0732、0.0464。研究表明,经过连续2代人工雌核发育,G2的遗传多样性明显减少,种质进一步纯化。还从53个随机引物的扩增谱带中找到了2个引物(S50、S223)的特异扩增谱带,可以作为第1、2代雌核发育群体间的分子遗传标记。由计算机软件程序构建的分支系统树清晰地反映了两个雌核发育群体及其个体间的相互关系。       

大黄鱼连续两代雌核发育群体的微卫星标记分析

通过对大黄鱼(Pseudosciaena crocea)异质雌核发育一代群体(meio-G1)与二代群体(meio-G2)微卫星位点的纯合度进行分析,研究异质雌核发育对大黄鱼基因纯化的效率。结果显示:meio-G1和meio-G215个微卫星座位的平均纯合度分别为0.661和0.803,纯合位点比例最高个体分别为0.867(13/15)和0.933(14/15),两个群体内个体间的平均相似系数分别为0.5903和0.8672,最高分别达0.9286和1.0(遗传距离为0.0741和0),远高于两性交配繁殖群体(平均纯合度0.376,平均相似系数0.4687,个体间最小遗传距离0.2288);其中meio-G2群体有7个位点(46.7%)已经完全纯合固定,并与普通养殖群体产生较明显的遗传分化;表明人工诱导异质雌核发育可大大加速大黄鱼大多数基因位点的纯合,是快速建立高纯品系的有效手段。但不同位点的纯合度差异很大,部分位点在异质雌核发育后代中迅速纯合,在meio-G1中就达到很高的纯合度,而有些位点则在meio-G1和meio-G2中仍保持很高的杂合度;meio-G1和meio-G2群体中不同个体纯合位点比例差异也很大。研究培育的雌核发育群体为大黄鱼进一步选育提供了良好的遗传材料。       

白鲢不同繁育群体中乳酸脱氢酶（LOB）和酯酶（EST）同工酶个体发生多态性的研究

本文叙述了白鲢两个繁殖群体的精子,成熟卵,10个不同发育阶段的胚胎和胚后期样品中乳酸脱氢酶和酯酶同工酶电泳图谱多态性研究结果。作者把本文描述的同工酶个体发生的群体差异称作“个体发生多态性”;这种多态性对白鲢的发育是非致死性的,因此,应属于一般的群体生化多态性。本文还提到了今后需进一步深入研究的有关问题及其在渔业应用方面的前景。     

银鲫种内的遗传标记及其在选种中的应用

用聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳分析了银鲫和异育银鲫的血清蛋白和肝脏酯酶,发现这两种鱼的血清蛋白和肝脏酯酶各具有4种不同的表型。由同一母本银鲫繁殖的子代——银鲫或异育银鲫,具有与母本相同的表型,只是在异育银鲫的肝脏酯酶谱型中另有一些无规律的变化,显然这是异源精子的作用所致。此外,这4种不同表型的鱼具有不同的生长能力,其差距最大可达50％．这些结果表明,天然雌核发育的银鲫种内含有若干个不同的雌核发育系,这对于开展银鲫的选育研究具有重要的实践意义。     

白鲢不同繁育群体中乳酸脱氢酶(LDH)和酯酶(EST)同工酶个体发生多态性的研究

本文叙述了白鲢两个繁殖群体的精子,成熟卵,10个不同发育阶段的胚胎和胚后期样品中乳酸脱氢酶和酯酶同工酶电泳图谱多态性研究结果。作者把本文描述的同工酶个体发生的群体差异称作“个体发生多态性”;这种多态性对白鲢的发育是非致死性的,因此,应属于一般的群体生化多态性。本文还提到了今后需进一步深入研究的有关问题及其在渔业应用方面的前景。     

两个人工雌核发育红白锦鲤群体的RAPD标记分析

采用PAPD方法,对两个人工雌核发育红白锦鲤群体进行了多态性及分子标记分析。结果表明,同一雌核发育群体具有基本一致的扩增产物,而不同雌核发育群体间的扩增产物则有较大不同;并从30个随机引物的扩增谱带中找到了7个引物（Opo-7,Opo-9,Opo-12,Opo-14,Opj-4,Opj-8和Opj-10）的扩增谱带可以作为两个不同雌核发育群体间的遗传标记。由UPGMA聚类法构建的分支系统树清晰地反映了两个雌核发育群体及其个体间的相互关系。     

多辐溲疏群体同工酶变异的数量分析

研究了四川南川金佛山特产的多辐溲疏不同海拔和生境的５个群体的４１个个体叶片过氧化物酶,过氧化氢酶,酯酶,淀粉酶,柠檬酸脱氢酶及谷氨酸脱氢酶同工酶谱带位置上的变异式样,来自同一群体的不同个体在谱带上表现出极大的相似性,而来源于不同群体的个体却表现出明显的趋异性,显示出酶谱带位置与群体生长的生境有显著的相关性,一定的群体具有某些特有的酶谱带,空间隔离限制了群体间个体的相互基因交流,在进化中那些适应新的     

雌核发育团头鲂的形态和遗传特征分析

利用团头鲂(Megalobrama amblycephala)正常二倍体群体作为对照组, 对团头鲂减数分裂雌核发育二倍体群体的形态特征、染色体组型、性腺发育及遗传特征进行了分析. 结果表明: 雌核发育群体与正常群体在外部可数、可量性状上没有显著性差异(P0.05); 但雌核发育群体出现了尾鳍条数为12的畸形个体, 与正常个体之间有较大的差异; 两个群体的染色体条数都是48, 核型均为18 m+26 sm+4 st; 观察了20尾雌核发育个体的性腺, 均为雌性个体且卵巢发育良好; 采用10个微卫星标记对2个群体的遗传多样性分析, 结果表明正常群体和雌核发育群体平均等位基因数分别为3.8个和1.7个, 雌核发育群体的多态性显著低于正常群体, 表明减数分裂雌核发育二倍体具有高度的遗传相似性, 可作为一个很好的育种材料.       

四类不同倍性鲫鱼在胚胎发育期间同工酶基因表达的比较分析

Isozyme zymograms of esterase (EST), lactate dehydrogenase (LDH), malate dehydrogenase (MDH) and superoxide dismutase (SOD) were analysed by polyacrylamide gradient gel electrophoresis at different developmental stages of embryogenesis in 4 types of various ploidy crucian carp embryos, including haploids, diploids, natural triploids, and multiple tetraploids, and 2 types of haploid and diploid common carp embryos. Haploid embryos of crucian carp (Carassius auratus) and common carp (Cyprinus carpio) were produced by treating eggs with UV-irradiated milt from blunt snout bream (Megalobrama amblycephala). Natural triploid embryos were obtained from the eggs of gynogenetic silver crucian carp (Carassius auratus gibelio) inseminated with milt from red common carp. Multiple tetraploid embryos were also produced by gynogenesis from eggs of the newly discovered multiple tetraploid females inseminated with milt from red common carp. Gradient gel electrophoresis indicated that the band types and staining intensity of 4 isozymes expressed in haploid embryos of crucian carp and red common carp were similar to that in the correlative diploid embryos. In natural triploid silver crucian carp embryos, the zymograms of MDH and SOD isozymes were identical with that of diploid crucian carp embryos, but the EST and LDH isozymes manifested more new enzyme bands in comparison with diploid embryos. The corresponding expressed products of some bands in the triploid embryos, such as EST5 and EST6, could be observed also in red common carp embryos, which provided evidence for hybrid origin about the gynogenetic fish. The multiple tetraploids incorporated one foreign genome of red common carp, therefore, the effects of genes from the foreign genome could be observed in the multiple tetraploid embryos. Gene expression of the isozymes in the tetraploid embryos was somewhat similar to that in hybrids. Owing to interaction of triploid silver crucian carp genomes and common carp haploid genome, some isozyme bands, such as EST5 and EST6, changed in quantity, and some bands increased, such as s-SOD1, s-SOD2, s-SOD3 and s-SOD4 in the tetraploid embryos. Moreover, the heterogeneity was revealed among embryos developed from gynogenetic eggs of 3 different multiple tetraploid individuals.     

四类不同倍性鲫鱼在胚胎发育期间同工酶基因表达的比较分析

用聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳比较分析了单倍体、二倍体、三倍体和复合四倍体4类不同倍性鲫鱼以及单倍体和二倍体鲤鱼在胚胎发育时期4种同工酶(EST,LDH,MDH,SOD)酶谱。结果表明,单倍体鲫鱼和单倍体鲤鱼胚胎与各自的二倍体胚胎相比,同工酶酶谱看不出差异;天然三倍体银鲫胚胎的MDH和SOD同工酶酶谱与二倍体鲫相似,但EST和LDH同工酶比二倍体增多了酶带,有的酶带如EST5和EST6还可在鲤鱼胚胎中找到相应的表达产物,提供了天然雌核发育三倍体银鲫杂交起源的证据;复合四倍体由于含有鲤鱼的一个外来基因组,其胚胎的基因表达有些与杂种类似,在所分析的4种同工酶酶谱中,都可观察到来自鲤鱼基因的影响。此外,在由源于不同复合四倍体个体的卵子发育形成的胚胎间,还观察到同工酶基因表达的异质性。     

金鱼酯酶同工酶的研究——Ⅰ.鲫鱼和红虎头金鱼各组织器官酯酶同工酶的比较

本文采用pH不连续系统聚丙烯酰胺垂直平板电泳方法,对鲫鱼和红虎头金鱼的眼、肝脏、肾脏、肌肉、卵巢(或精巢)、脑和心脏等7种新鲜组织的酯酶(EST)同工酶进行了比较研究。其结果是:鲫鱼(Carassius auratus)和红虎头金鱼(Carassius auratus var.)不仅具有丰富的EST同工酶和组织特异性,而且在它们的各个相应组织之间也显示出差异。表明酯酶同工酶在金鱼种内是有差异的。这对于探讨金鱼种内各品种之间的亲缘关系将是一个很有用的手段。     

人工雌核发育鲢的遗传多样性及异源遗传物质整入的RAPD分析

运用RAPD技术对连续二代人工雌核发育鲢的遗传多样性及异源遗传物质的整入进行了分析 ,结果表明 :一代雌核发育鲢 ,个体间遗传相似度为 0 94 5— 0 995 6 ,多样性指数为 0 175 ;二代雌核发育鲢 ,个体间遗传相似度为0 96 15— 1 0 0 ,平均为 0 985 2 ,多样性指数为 0 0 6 2。研究揭示经过连续二代人工雌核发育后 ,其遗传多样性明显减少 ,种质进一步纯化。通过对雌核发育鲢二代、亲本鲢和雄鲤的RAPD扩增比较 ,发现雌核发育鲢含有少数与父本相同的特异DNA扩增带 ,而亲本鲢没有 ,在基因水平上表明雌核发育鲢整入了雄鲤的遗传物质     

三种鲫鱼品系同工酶比较研究

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳技术,对彭泽鲫、银鲫D系以及野鲫三种鲫鱼品系的心、肝和肾脏组织的乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)、苹果酸酶(ME)、酯酶(EST)和超氧化物歧化酶(SOD)同工酶表型进行了比较研究.结果表明彭泽鲫乳酸脱氢酶同工酶比银鲫D系在肝组织多出二条酶带(LDH7'和LDH8');超氧化物歧化酶在心和肾组织中分别多出一条酶带(SOD12'),表明彭泽鲫和银鲫已在生化水平产生明显的分化,推测它们可能起源于不同的地区,由不同的祖先,独立演化而形成.此外,彭泽鲫和银鲫D系的同工酶电泳图谱都包含野鲫的基本酶带,而彭泽鲫和野鲫的酯酶同工酶电泳图谱尤为相似,推测彭泽鲫和银鲫可能起源于野鲫,而彭泽鲫和野鲫的关系较近,银鲫和野鲫的关系较远.     

异精效应在雌核发育彭泽鲫胚胎发育中的同工酶证据

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳技术 ,对同源和异源精子激发雌核发育彭泽鲫子代胚胎发育过程中四种同工酶 (EST ,LDH ,MDH ,ME)的表达情况进行了比较研究。结果表明同源和异源精子激发的胚胎在MDH和LDH同工酶表达上存在明显差异。MDH同工酶的差异主要表现为 :在孵出期 ,异源精子激发的胚胎比同源精子激发的胚胎多出两条谱带MDH4’和MDH5’ ;LDH同工酶的差异表现为 :在原肠中期至肌肉收缩期的五个时期中 ,异源精子激发的胚胎比同源精子激发的胚胎多出 4条谱带 (LDH9’— 12’)。这种差异说明同源与异源精子对子代胚胎发育过程中同工酶表达的影响不同 ,可能属于“异精生物学效应”的一种表现形式     

复合四倍体异育银鲫个体间遗传异质性的研究

用聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳,分析比较了４个不同的银鲫雌核发育系,红鲤和复合四倍体异育银鲫鳍的５种不同的同工酶及蛋白表型的差异,表明复合四倍体异育银鲫表型上的差异主要是来自银鲫种内的遗传差异（不同的雌核发育系）。来源于同一个银鲫雌核发育系的复合四倍体异育银鲫,个体间的ＥＳＴ同工酶出现差异,并与父体红鲤的ＥＳＴ同工酶的多态性相关,因此,复合四倍体异育银鲫个体间的异质性也包含了来自父本的遗传影响。在所检测     

Genetic Evidence for Gonochoristic Reproduction in Gynogenetic Silver Crucian Carp (Carassius auratus gibelio Bloch) as Revealed by RAPD Assays

Sex evolution has been a debating focus in evolutionary genetics. In lower vertebrates of reptiles, amphibians, and fish, a species or a bioform reproduces either sexually or asexually but never both. A few species were found to consist of all females in fish. These all-female species can propagate by asexual reproduction modes, such as gynogenesis and hybridogenesis. However, the coexistence of sexuality and asexuality in a single species was recently noted only in a cyprinid fish silver crucian carp, Carassius auratus gibelio. This fish had been demonstrated to be capable of gynogenesis stimulated by sperm from other related species. Surprisingly, natural populations of this fish consist of a minor but significant portion (approx. 20%) of males. As different clones with specific phenotypic and genetic characteristics have been found, and RAPD markers specific to each clone have recently been identified, this fish offers many advantages for analyzing whether or not genetic recombination occurs between different clones. In this study, artificial propagation was performed in clone F and clone D. Ovulated eggs from clone F were divided into two parts and respectively inseminated with sperm from a clone D male and from a red common carp (Cyprinus carpio) male. The control clone D individuals were selected from gynogenetic offspring of clone D activated by sperm of red common carp. The phenotype and sex ratio in the experimental groups were also observed. Using RAPD molecular markers, which allow for reliable discrimination and genetic analysis of different clones, we have revealed direct molecular evidence for gonochoristic reproduction in the gynogenetic silver crucian carp and confirmed a previous hypothesis that the silver crucian carp might reproduce both gynogenetically and gonochoristically. Therefore, we conclude that the silver crucian carp possesses two reproductive modes, i.e., gynogenetic and gonochoristic reproduction. The response mechanism of two reproductive development modes may be the first discovery in vertebrates. Additionally, we discuss the evolutionary implication between gynogenetic and gonochoristic reproduction modes and the contribution of the minor proportion of males to genetic flexibility in the gynogenetic silver crucian carp. Received: 5 January 2000 / Accepted: 3 August 2000     

白鲢个体发育过程中同工酶基因的表达与调控研究

采用淀粉或聚丙烯酰胺凝胶电泳及特异性组织化学染色技术研究了白链早期发育过程中（从未受精卵到卵黄吸尽期）及成体不同组织（脑、眼、心、肌、肾、肝）中六种同工酶系统（ＬＤＨ,ＭＤＨ,ＩＤＨ,ＡＤＨ,ＳＤＨ,ＥＳＴ）的分化表达谱式,白链各同工酶基因的表达具有明显的组织特异性早期发育过程中,ＡＤＨ和ＳＤＨ基因均无活性,其它四种同工酶则具有不同的个体发育谱式。值得一提的是,由取自同一地区的两对白链的受精卵的形