两个雌核发育白鲢群体同工酶分析遗传标记的确定

取源于武汉两个不同渔场两尾白鲢的卵子,经紫外照遗传物质失活的鲤鱼刺激雌核发育和热休克诱导第二极体保留的基因组操作技术,获得了两个不同的人工雌核发育白鲢群体。采用聚丙烯酰胺垂直板电泳技术,分析了这两个澡同人工雌核发育白鲢群体（分别称为Ｈｙ－Ｇ１和Ｈｙ－Ｇ２）内不同个体的肝脏、肌肉组织以及红细胞中脱氢酶（ＬＤＨ）、要酸氢酶（ＭＤＨ０、酯酶（ＥＳＴ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）等几种同工酶的表达谱式、并与     

两个雌核发育白鲢群体同工酶分析及遗传标记的确定

取源于武汉两个不同渔场两尾白鲢的卵子,经紫外照射遗传物质失活的鲤鱼精子刺激雌核发育和热休克诱导第二极体保留的基因组操作技术,获得了两个不同的人工雌核发育白鲢群体。采用聚丙烯酰胺垂直板电泳技术,分析了这两个不同人工雌核发育白鲢群体（分别称为Hy-G     

两个人工雌核发育红白锦鲤群体的RAPD标记分析

采用PAPD方法,对两个人工雌核发育红白锦鲤群体进行了多态性及分子标记分析。结果表明,同一雌核发育群体具有基本一致的扩增产物,而不同雌核发育群体间的扩增产物则有较大不同;并从30个随机引物的扩增谱带中找到了7个引物（Opo-7,Opo-9,Opo-12,Opo-14,Opj-4,Opj-8和Opj-10）的扩增谱带可以作为两个不同雌核发育群体间的遗传标记。由UPGMA聚类法构建的分支系统树清晰地反映了两个雌核发育群体及其个体间的相互关系。     

人工诱导白鲢（hypophthalmichthys molitrix）雌核发育及性转

为了获得白鲢自交品系,以解决该鱼种退化问题,本文用失活鲤鱼精子诱导白鲢雌核发育,再用17α－甲基睾丸激素促使其发生性别转换。经紫外线照射过的锂鱼精子,遗传物质遭到破坏。用这种失活的鲤鱼精子与白链卵“受精”,精子不参与卵发育,但能激发卵的发育,得到单倍体“受精卵”。这种单倍体“受精卵”自身不能成活,要在41℃条件下热处理3分钟,当单倍体复制成二倍体以后才能继续发育。当雌核发育的鱼长到10cm时,将含有17α－甲基睾丸激素的Silastic管插入其腹腔中。激素通过管壁逐渐向外释放,影响鱼体性发育。待实验鱼性腺与对照白鲢一样都发育至第Ⅱ期时,可以观察到：实验鱼性腺发生了退化 现象（Fig.1)。制备血清,做等电聚焦电泳可以观察到：实验鱼的同功酶谱与白鲢鱼的相同,而不同于鲤鱼（Fig.2)。排除鲤鱼精子参与受精的可能。     

鲢两个人工雌核发育家系的RAPD分析

鲢(Hypophthalmichthys molitrix Curia et Valenciennes)为我国著名的四大家鱼之一。       

红白锦鲤人工雌核发育纯系的微卫星标记分析

利用连续两代人工雌核发育操作,构建了极具观赏价值的红白锦鲤人工雌核发育系。应用6对微卫星引物进行遗传标记研究,检测分析了该雌核发育系内个体间的遗传同质性及其基因座位的纯合度。实验结果显示,11尾经人工挑选具有相同表形、极具观赏价值的F1代性成熟个体的微卫星扩增图谱呈现出高度的一致性。同时,随机挑选的人工雌核发育F2代个体在所检测的基因座位均呈现纯合,扩增图谱呈现了高度的一致,从分子水平上证实了本实验所获得的红白人工雌核发育F2代是一个纯系。     

锦鲤4个人工雌核发育家系的微卫星标记研究

利用Crooijmans et al.(1997)分离的包含CA重复单元的普通鲤鱼（Cyprinus carpio L.)的8个微卫星DNA标记,对从锦鲤（Cyprinus carpio L.)的红白,大正和昭和3个不同品系中所获得的4个不同人工雌核发育家系的20尾个体进行PCR扩增。电泳结果表明,8对引物在20尾个体中均能重复稳定地扩增出相应的同源序列。随引物不同,各等位基因数为1－11个,大小在68－264bp。在MFW4,MFW7,MFW19,MFW20,MFW23和MFW24 6个微卫星的扩增结果中,20尾个体的扩增图谱呈现了高度的遗传多态性,不同雌核发育家系内个体的遗传异质性也较大。其中大正（TaS)和红白1（RW1）的个体不仅花色分化显著,而且个体间的平均遗传距离分别高达0．28。通过对微卫星等位基因和基因型分析发现,由于锦鲤品系中的每一个体是通过不断地杂交选育而获得,基因组来源复杂,基因高度杂合。因此,只进行1代的人工雌核发育,其家系内仅部分个体的部分座位出现纯合。所获得的人工雌核发育锦鲤为后续的色素遗传调控机制研究提供了必要的实验材料;同时,所鉴定的微卫星分子标记为进行锦鲤的分子标记育种的基因组作图提供了理想的工具。     

雌核发育草鱼同工酶分析

运用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,分析了雌核发育草鱼尾鳍中LDH、EST、SOD三种同工酶的酶谱。研究结果表明雌核发育草鱼各个体间及与普通草鱼与LDH、EST同工酶谱上表达是一致的。雌核发育草鱼中SOD酶谱与普通草鱼存在有明显差异。在雌核发育草鱼SOD酶谱区段1中检测到一条特殊的酶带(暂称之为SOD-G),SOD-G在所检测的6尾雌核发育草鱼中普遍存在,但在普通草中未检测到,初步认为SOD-G可以作为雌核发育草鱼群体的生化遗传标记。     

银鲫两个雌核发育克隆间两性生殖子代的遗传多样性分析

本研究在揭示银鲫两性生殖方式的基础上,对以一尾人工雌核发育克隆F的卵子与一尾天然雌核发育克隆D的精子授精所获得的18尾FD后代及其亲本进行RAPD分析.扩增结果表明,在18尾FD子代中可检测到丰富的DNA多态片段,这些多态片段来自于银鲫两性生殖的重组.FD子代的扩增图谱不仅与母本的扩增图谱不同,而且个体间的扩增图谱也存在着较大的差异.这些差异的DNA片段根据其来源可基本分为四类.与异精刺激雌核发育的子代的情况不同,两性生殖FD子代间平均遗传距离高达0.23±O.123,远远高于异精刺激雌核发育的子代间的平均遗传距离(约＜0.01).在FD的三类表型中,SD个体间的平均遗传距离最大,为0.235±0.097;其次是SF间的平均遗传距离,为0.148±0.073;而NL间的平均遗传距离最小,为0.094±0.083.银鲫的遗传多样性和两性生殖方式为银鲫种群提供了丰富的遗传变异,创造了更多的遗传多样性.在分析了2320条(平均每个个体116条)可分辨的扩增带的基础上,采用NJTREE构建了呈现FD个体间及其与亲本相似性的分支图.NL3与母本的相似度最高,SD3与父本的相似度最高.在FD三种类型中,SD与NL和SF的平均遗传距离较大(＞0.31),而NL和SF的平均遗传距离仅为0.124.母本与父本的遗传距离约为0.35,与以前的研究结果类似,而FD 18尾个体与父母本的平均遗传距离均约为O.32,基本一致.但将18尾个体按体型分别统计平均遗传距离,不同的体型与父母本的相似性存在着较大差别.母本与SF的相似率最高,约为71%;父本与SD的相似率最高,约为70%.这可能由于扩增出一些与表型相关的DNA片段,从而导致了FD三种类型与亲本的相似性与表型相关.银鲫具有两种生殖方式的揭示将为解决长期困惑进化遗传学家的难题寻找到一个新的突破口,也进一步确立了银鲫在单性脊椎动物和多倍体脊椎动物进化遗传学研究中的特殊意义.     

银鲫两个雌核发育克隆间两性生殖子代的遗传多样性分析

Based on the discovery of gonochoristic reproductive mode in silver crucian carp (Carassius auratus gibelio), 18 individuals from the mated offspring between clone F and clone D and their parents were analyzed using 11 RAPD primers. The mated offspring differentiated into three phenotypes. One phenotype is similar to that of clone F (SF). The second is similar to that of clone D (SD). The third shows a novel longer and thinner body type (NL). Electrophoretogram results show abundant polymorhic DNA fragments among individuals in the FD mated offspring. Obviously, the polymorphic DNA fragments originate from the genome recombination owing to the gonochoristic reproductive mode. The FD mated offspring amplify different fingerprints from maternal, and their fingerprints are different from each other. These different DNA fragments can be divided into four groups according to their origin. The average genetic distance among individuals from the FD offspring (0.23 +/- 0.123) is much higher than that of allogynogenetic offspring, which is only about 0.01. Of the three phenotypes in the FD offspring, the average distances among SD is the highest (0.235 +/- 0.097). The next is SF phenotype, in which the average distances is 0.148 +/- 0.073. The average distances among NL is the lowest (0.094 +/- 0.083). The gonochoristic reproductive mode introduces high genotypic variability and underlines genetic diversity. A dendrogram was constructed by NJTREE cluster analysis based on a total of 2320 distinguishable fragments (116 per individual). NL3 and maternal are most closely related, and SD3 and paternal are most closely related. The average genetic distances between SD and SF or NL (> 0.31) is higher than that of between SF and NL (0.124). Consistent with previous study, the genetic distance between maternal and paternal is 0.35. The average genetic distances between FD offspring and parents are both about 0. 32. But the similarities among the three phenotypes in mated group FD offspring and parents are different. The similarity between SF and maternal (71%) is higher than similarities among other phenotypes and maternal. The similarity between SD and paternal (70%) is higher than similarities among other phenotypes and paternal. The results suggest the similarities among three phenotypes in the FD offspring and parents are related with their phenotypes because some DNA fragments specific for phenotypes were amplified in this study. The revelation about reproductive diversity will be able to open the door in which complicated mechanism has been locked in unisexual organisms for long time, and establish the important roles of silver crucian carp in the studies on evolutionary genetics in unisexual or polyploid vertebrates.     

鲢的远缘杂交子代和人工三倍体的同工酶表达

用聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳分析了鲢♀×鳙♂、鲢♀×团头鲂♂的二倍体和异源三倍体杂种,以及同源三倍体鲢及其亲本种的８种蛋白质和同工酶的表型。二倍体杂交子代的基因表达是多样的,这些多样的表达可能与双亲的这些蛋白质和同工酶的表型差异有关。如与二倍体杂交子代相比,鲢×鳙异源三倍体的肌肉蛋白和血清蛋白有效一致的表型,此外在两种异源三倍体中ＥＳＴ和ＭＤＨ同工酶的表型接近母本,这些结果表明异源三倍体由于增加了一套     

泡沙参同工酶基因位点的遗传分析

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术 ,对来自天然群体 (居群 )的泡沙参 (Adenophora potaninii Korsh.)及其人工杂交子代进行了 8种同工酶的电泳检测和谱带遗传分析 ,以确定编码这些酶系统的基因位点和等位基因。选用 4种不同的凝胶缓冲系统 ,对下列不同酶系统进行了酶谱的遗传分析 :天冬氨酸转氨酶 (AAT)、酯酶 (EST)、甲酸脱氢酶 (FDH)、谷氨酸脱氢酶 (GDH)、异柠檬酸脱氢酶 (IDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸酶 (ME)和超氧化物歧化酶 (SOD)。结果表明 ,这 8种酶系统至少由 1 8个基因位点编码 ,其中 1 2个位点为遗传稳定的等位酶位点 ,是可靠的遗传标记。酶谱的分离式样表明 ,EST为单聚体结构 ,AAT、FDH、IDH、SOD为二聚体结构 ,GDH为六聚体结构。最后对同工酶的器官和发育特异性以及同工酶基因位点的遗传分析进行了讨论     

银鲫生殖方式多样性的转铁蛋白和同工酶标记的遗传分析

用银鲫克隆D、克隆A和鲤鱼的精子分别与银鲫克隆F的卵子受精产生了三种繁殖组合FD、FA和FL;再用转铁蛋白和同工酶标记对这三种组合的遗传模式进行比较研究.结果发现,FL组合的子代具有与其母本完全相同的体形和电泳图谱,表现出雌核生殖银鲫的克隆品性.而在FD组合中则出现了体形的分化和酶谱的多态性;在一些个体的蛋白座位上同时检测到了父本和母本各自特有的谱带,证明FD生殖过程中有性重组的发生.同时,在所研究的蛋白的不同座位上存在着极端的连锁不平衡现象,可以推断在FD的重组过程中多个基因座位组成的连锁群(甚至是染色体组)可能作为一个整体参与基因的传递.此外,不同的蛋白座位上都未观察到重组的纯合表型,暗示在不同的基因连锁群之间还可能存在一种平衡致死的机制.FA组合的F1代具有类似母本克隆F的体形和蛋白表型,FA组合个体近交产生的F2代却同时出现了克隆F和克隆A的体形和表型.即父本和母本的染色体组都能够通过有性生殖传递给FA子代,然而可能由于父母本基因的不相容性而使F1代父本的基因表达受到抑制.相对于雌核生殖的克隆遗传,本研究所揭示出来的有性生殖特性及伴随的有性重组能够使银鲫在一定程度上卸去积累的遗传负荷并从其它种群获取新的基因型,以维持其遗传多样性.多种可选择的生殖方式可能对于银鲫在自然条件下的生态适应有着重要意义,对于银鲫的遗传选育和养殖管理也有一定的参考价值.     

鲢神经肽Y基因的克隆及其在禁食-恢复投喂条件下的表达特征分析

为深入研究神经肽Y对鲢摄食活动的调节作用,研究利用同源克隆方法获得鲢NPY基因cDNA全长序列,并检测在禁食-恢复投喂条件下,NPY在脑和肝脏中的表达情况. 结果表明: 鲢NPY基因cDNA全长782 bp,包括5'端非翻译区68 bp,3'端非翻译区423 bp,开放阅读框291 bp,编码96个氨基酸; 氨基酸相似性比较和系统进化分析结果显示NPY较为保守; NPY在所检测的13个组织中均有表达,并且在脑垂体中表达量最大; 禁食导致NPY mRNA在脑中的表达量显著上升,恢复投喂6h后下降到基本水平,表明NPY对鲢摄食有促进作用; 在肝脏中,禁食前5天NPY mRNA表达量显著上升,禁食第7天急剧下降,恢复投喂4h后下降到基本水平; NPY mRNA在脑和肝脏中的表达具有组织差异性,其在肝脏中的具体作用机制有待进一步研究. 研究结果为探讨NPY在鲢中的生物学功能和在遗传育种中的作用提供了理论依据。     

小鞘指环虫种群的季节动态

作者在１９９２－１９９４年期间对鲢指环虫病原小鞘指环虫种群的季节动态进行了研究。小鞘指环虫种群从每年的冬季开始出现,到次年春末（４月）,其染率与丰度均匀发展至高峰。此 度随着水温的上升而迅速下降,到６月上旬,种群消失,在感染强度低于２００虫／鱼的情况下,小鞘指环虫对宿主肥满度没有显著影响。     

二龄鲢和鳙血液的比较研究

以１１５尾二龄链和９１尾二龄鳙为材料,测定了血液中红细胞数,白细胞数、血红蛋白值、红细胞脆性植、比积及比重,红细胞沉降率,白细胞分数计数值及各型血细胞大小等正常值。结果显示：红细胞和白细胞值,比积值及淋巴细胞所占百分比值均是鲢高于鳙,而红细胞沉降率和中性粒细胞却是鳙高于链,在鲢上,其血液指标植也存在雌雄差异,上述血液指标值也存在周年变化。     

长江水系钱草鱼遗传结构及变异性的RAPD研究

采用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术对长江中游的湖北嘉鱼与江西瑞昌两个地理群体和中游的汉江和湘江两大水系的鲢和草鱼的群体进行了遗传学研究。发现长江水系链的遗传变异要高于草鱼,与现今生物量成反比的反常现象。鲢遗传多样性从大到小的分布是嘉鱼→湘江→瑞昌→汉江。草鱼遗传多样性从大到小的分布是瑞昌→汉江→湘江→嘉鱼,鲢和草鱼的遗传多样性地理分布并不一致。遗传分化指数Gst分别为12.3%和17.5%,表明鲢和草鱼的四个地理群体的遗传分化度较低,可能与地理较近和基因交流频繁有关。     

诱导鲢排卵时性类固醇激素含量的变化

本文报道了人绒毛膜促性腺激素(HCG)和哺乳动物促黄体激素释放激素类似物(LHRH—A)诱导鲢鱼排卵过程中,血清中性类固醇激素的变化规律。实验表明,经注射催产药物后,雌鱼血清中主要出现睾酮和17α20β-双羟孕酮(17α20βρ)浓度的变化,而雌二醇和孕酮浓度始终很低,变化不大。两种催产剂皆先诱导睾酮浓度达到峰值(4．83—16．65ng／ml),睾酮浓度随后下降,而17α20βρ浓度达到峰值(4．35—5．0ng／m1)时出现排卵。HCG和LHRH—A直接和间接地通过诱发17α20βρ的合成,再经其中介作用,最后诱导卵母细胞成熟排卵。雄鲢经人工催产注射后未发现17α20βρ的变化,睾酮反有所下降。本研究为采用17α20βρ作为鲢的催产药物提供了理论依据。     

鲢早期发育阶段鱼体脂肪酸组成变化

用气相色谱仪分析了鲢受精卵和仔鱼的脂肪酸组成及其变化。受精卵中共检测到19种脂肪酸;SFA含量最高,其次为PUFA,MUFA最少。SFA中以16C：0为主,MUFA中以18C：1为主,PUFA中以DHA、AA和EPA为主;n-3/n-6为2．45。初孵仔鱼中HUFA因卵膜的脱落而减少,以后逐渐积累;鲢仔鱼具有将18C PUFA转化为长链HUFA的能力;在早期发育阶段,鲢仔鱼主要消耗16C：0作为能量代谢的基质。