用染色体畸变品系对果蝇调控基因E(ω~a)的定位

在果蝇中,杏黄色眼基因w~a和它的野生型白眼等位基因w的区别在于前者的转录单位中插入了反转录病毒样转座因子copia。半显性突变基因E(w~a)以反式方式降低w~a的活性。对多余翅脉基因px,E(w~a)和翅腋具黑点基因sp的遗传重组分析进一步确定了E(w~a)与sp的重组图距为0.2图距单位,并将E(w~a)定位于第二染色体右臂的2—106.8处。为了对E(w~a)进行细胞学的基因定位,4个Y;2易位品系,1个1;2易位品系和3个2R缺失品系与适当的E(w~a)品系进行杂交,并对其雄性子代进行复眼眼色和翅腋黑点的检查。结果表明E(w~a)位于第二染色体右臂60B的端粒端。 我们用r射线诱变获得了一个E(w~a)突变体和两个sp的突变体,并检查了它们的唾腺染色体。前者为E(w~a)的回复子,一段来源不明的染色体片段插入在6085—13的位置,很可能在60B8—9的位置上。这个位置就是E(w~a)的座位。后者在60C1—2的位置上都看到了染色体的断裂点,表明该位置为sp的基因座位。 综合细胞学基因定位和遗传重组基因定位的资料,E(w~a)被定位于6085—13的位置,很可能在60B8—9的位置,它位于sp基因的左侧,二者相距很近。     

黑腹果蝇3号染色体裂翅平衡致死位点的发现及2号、3号染色体裂卷翅双平衡染色体的建立

果蝇的平衡染色体在遗传研究中被广泛应用.文章通过分析黑腹果蝇裂翅新突变体与野生型、982紫眼及黑檀体杂交后代裂翅性状情况,首次将裂翅基因定位于3号染色体上,并阐明了裂翅平衡致死、杂合子纯繁的遗传机制,获得了以裂翅为显性标记的3号平衡染色体品系.探索了双平衡染色体显性标记基因聚合的杂交模式,成功建立了以裂翅和卷翅为标记的2号、3号双平衡染色体.裂翅的发现为3号染色体平衡子提供了更加方便识另0的显性翅型标记,同时裂卷翅双平衡体的建立丰富了果蝇常用工具平衡子,可以广泛用于基因定位及突变筛选过程.     

集胞藻PCC6803 EGY同源基因破坏突变体的构建及表型分析

摘要：拟南芥中近来发现的定位于叶绿体的膜嵌合金属蛋白酶EGY1影响叶绿体发育与脂肪酸合成,经生物信息学分析,集胞藻PCC6803 (Synechocystis sp. PCC6803)中slr0643、sll0862基因编码同源蛋白。【目的】为了鉴定这两个基因的功能,【方法】本文通过同源重组插入卡那霉素抗性基因、切断目的基因,分别构建了slr0643::km和sll0862::km两种突变体,检测突变体的生理生化表型。【结果】在30℃,20 μE/m2s自养培养下,slr0643::km与野生型相比,早期     

野败型水稻细胞质雄性不育恢复基因Rf-4的分子标记定位

为了用分子标记准确定位野败型水稻细胞质雄性不育恢复基因Rf-4,将日本水稻基因组项目（Rice Genome Program,RGP)构建的水稻遗传连锁图谱第10染色体分子遗传图上的分子标记R1877和G2155之间对应区域YAC物理图上的6个YAC克隆进行了亚克隆,获得119个片段,对这些探针进行多态性探查,获得了2个多态分子标记,用珍汕97A和恢复基因近等基因系的杂种F2分离群体中的117完全不育株进行连锁分析表明,从YAC4892获得的亚克隆Y3－8与Rf－4座位的连锁距离为0．9cM,从YAC4630获得的亚克隆Y1－10与Rf－4座位的连锁距离为3．2cM,根据以上结果把Rf－4座位定位于第10染色体的特定位置,为该基因的分子标记辅助选择和定位克隆打下了基础。     

水稻R基因同源序列与遗传学上已知抗病基因的共定位(英文)

植物抗病（R）基因结构上的高度保守性,为利用基于PCR的方法快速分离R基因同源序列提供了基础。采用这种方法,我们曾从水稻中分离到8个R基因候选同源序列（Rgenecandidates,RGCs）。为了研究RGCs与遗传学上已知的R基因的关系,对它们进行了限制性片段长度多态性（RFLP）分析和染色体定位。DNA杂交结果显示RGCs都属于多基因家族（Fig．1）。6个RGCs（Osh359－1、Osh359－2、Osh359－3、Osh359－5、Os8558－3、Os8558－14）在两个籼稻品种H359和Acc8558中检测出多态性,并定位在水稻染色体上（Fig．2）。它们分别检测出了1、1、4、1、2和1个座位,共10个座位,其中9个定位在第11号染色体的3个区域上,即RFLP标记G181和C82之间（由Osh359－2、Osh359－3、Osh359－5和Os8558－3检测的6个座位）,G1465与C50之间（Osh359－3检测出的一个座位）,和C496附近（由Osh359－1和Os8558－14检测出的两个紧密连锁的座位）另有一个由Os8558－3检测出的座位定位到第8号染色体上,位于L457和G1082B之间。这些染色体区域包含近一半的遗传学上已知的抗病基因,如Xa-3、Xa－10、Pi－a和xa－13。这一结果表明RGCs与已知的抗病基因位于相同的染色体区域。此外,RGCs定位的结果表明,它们在水稻基因组中呈簇状分布,表现出     

水稻剑叶突变体的表型及T-DNA旁邻基因分析

从已构建的水稻（Oryza sativa L.）T-DNA插入突变体中鉴定获得一株穗部额外发育出叶片的突变体,并根据该叶片的形态学位置将其命名为剑叶突变体（J4）。研究表明这种额外发育的叶片呈现明显的缺陷,主要表现为叶片短小、表皮细胞变小、叶片中维管束数目减少等。进一步通过TAIL-PCR和inverse-PCR的方法克隆该突变体中T-DNA插入位置的旁邻序列,从而准确地将T-DNA定位到2号染色体上。基因表达分析显示,T-DNA插入位置附近的AK100376基因在J4突变体以及表型类似突变体neck leaf 1中的表达均被明显下调,可初步将其确定为与剑叶突变体表型相关的候选基因。     

猪瘟病毒E2基因主要抗原区的克隆及原核表达

利用反转录PCR（RT－PCR）和套式PCR（nest Polymerase Chain Reaction,nPCR)技术扩增出当前猪瘟流行毒（广西玉林株,GXYL)一中国猪瘟兔化弱毒（C－株）兔脾组织毒E2基因的主要抗原区,将其克隆到表达载体pPROEX-HTb中,获得重组质粒pPROEX-GXYL和pPROEX-C,经PCR,酶切和序列分析鉴定表明,插入的位置,大小和读码框均正确。SDS－PAGE,检测表明,经重组质业pPROEX-GXYL和pPROEX-C转化,诱导的受体菌能表达E2基因主要抗原区蛋白,Western-blot检测表明,诱导表达的抗原蛋白能与猪瘟阳性血清发生特异性反应。     

一个新的水稻卷叶突变体的遗传分析与基因定位

水稻叶片发育异常的突变体是研究水稻叶片发育分子机理的重要材料．本研究在IR64的EMS突变体库中发现了一个新的卷叶突变体材料w32,在整个生育期过程叶片都表现高度卷曲．突变体w32与IR24、培矮64杂交构建F2群体进行遗传分析,结果表明,卷叶性状受一个隐性基因控制,选用w32/PA64F2群体中的1846个卷叶单株进行基因定位,在卷叶和正常叶的DNA池中筛选到两个多态性标记RM6697和RM20781,并确定该卷叶基因位于第7染色体短臂上,是一个尚未报道过的基因,暂命名为r111（t）．利用新发展的11个SSR标记和19个InDel标记,最终将r111（t）基因定位在一个约52kb的区段上,为最终克隆该卷叶基因奠定了基础。     

防御假单胞菌双突变体H78ΔrsmA/E中hmgA基因对藤黄绿菌素生物合成的抑制

【背景】防御假单胞菌(Pseudomonas protegens) H78是分离于油菜根际的一株生防菌,其能合成藤黄绿菌素(pyoluteorin,Plt)等多种广谱抗生素,H78的rsmA/E双突变体中Plt合成被完全抑制。【目的】通过转座子诱变技术,筛选H78ΔrsmA/E双突变体中重新激活Plt合成的下游调控因子。【方法】通过同源重组的方法在pltL基因下游插入红色荧光蛋白(redfluorescentprotein,RFP)基因来指示Plt操纵子表达的激活情况;利用转座子随机插入突变、半随机PCR技术筛选并定位目标基因;通过基因回补等方法进一步验证基因功能。【结果】从约2万株H78ΔrsmA/E的转座子突变体中筛选到一株高产Plt和某种黑色素的菌株,并确定其插入位点为hmgA基因,hmgA基因回补能重新抑制H78ΔrsmA/E的Plt合成。【结论】假单胞菌双突变体H78ΔrsmA/E中hmgA基因对Plt的合成存在强烈抑制作用,是潜在的RsmA/E下游调控基因。本研究为进一步阐明Plt合成的调控机制与网络及通过基因工程提高Plt产量奠定了基础。     

基因拷贝数与染色体位置对酵母表达乙肝病毒融合表面抗原SA-28基因的影响

应用ＦＬＰ重组酶介导的染色体定点整合技术,将带有不同拷贝数的乙肝病毒融合表面抗原ＳＡ－２８基因表达单元的质粒整合在酵母不同的染色体位点,并测定了ＳＡ－２８基因的表达情况,初步研究了基因拷贝数与染色体位置对酵母表达外源基因的影响。结果表明ＳＡ－２８基因在ＨＩＳ３位点整 合时的表达水平随基因拷贝数的增加而提高,遵循基因剂量效应;在某些染色体位点整２合时,插入方向对其表达有不同程度的影响,呈现出明显的染     

人类GABARAPL2基因的染色体定位

为了确定人类GABAA受体相关蛋白相似蛋白2基因在染色体上的位置,根据该基因cDNA的3′非翻译区序列设计一对RH定位引物,以人／鼠体细胞腹辐杂种板Genebridge4(GB4)panel和G3panel试剂盒中的杂种细胞株基因组DNA为模板,在一定的条件下进行PCR扩,琼脂糖凝胶电泳结果分别插入Sanger和Stanford网站的RH定位分析系统进行统计学分析。结果PCR法在一些杂种细胞株中扩增出特异的目的片段,并经测序验证了其准确性。凝胶电泳结果在Sanger网站统计分析表明该基因与16号染色体上的AFM340ye5,AFM292xh5,AFM320wf1,AFMa066xd5,AFM249xc5位标紧密连锁;在Stanford网站统计分析表明该基因片与16号染色体上的SHGC－1457,SHGC－53415,SHGC－6782,SHGC－2228,SHGC－14629位标紧密连锁,LOD值均大于3。整合分析该染色体区带的物理图、遗传图及细胞图谱后,最终将基因定位在染色体16q22.3区带的D16s3016和D16s515位标之间。结论放射杂交定位法是一种新颖便捷的基因定位的方法,通过此法成功地进行了人类GABAA受体相关蛋白相似蛋白2基因的定位。     

Burkholderia sp.ZYB002中lipA基因的敲除对细胞脂肪酶活性的影响

Burkholderia sp.ZYB002菌株不仅能产生大量的胞外脂肪酶,还能产生大量的细胞结合脂肪酶。对细胞结合脂肪酶的种类进行定性研究,将为开发全细胞脂肪酶催化剂奠定基础。通过分析与Burkholderia sp.ZYB002菌株具有较高同源性的Burkholderia cepacia J2315菌株的脂肪酶基因家族,推测潜在的细胞结合脂肪酶编码基因。通过同源重组插入失活Burkholderia sp.ZYB002菌株的lipA基因,筛选出突变体转化子;测定突变体菌株细胞结合脂肪酶的活性,并与野生型菌株比较。试验结果表明,lipA基因插入失活的Burkholderia sp.ZYB002-ΔlipA菌株的细胞结合脂肪酶活性降低了42%。     

迟缓爱德华菌溶血相关基因的测序和初步的功能分析

溶血素是迟缓爱德华菌（Edwardsiella tarda简称ET）的重要致病因子。用鸟枪法从ET－12菌的染色体中克隆到1株含有溶血活性的克隆子,经测定其序列的大小为4264bp,和已报道的ET两种溶血素基因无同源性,其中开放阅读框3（ORF3）424bp序列和伤寒沙门氏菌溶血调控基因（slyA0序列有68％同源性。含有完整的ORF3的亚克隆子有溶血性,而卡那霉素基因插入ORF3内的酶切位点,其转化子无溶血性,斑点杂交和Southern blot证实,该基因片段来源于供体菌ET－12,而且也存在于其他ET菌染色体上,但这些ET菌表型不一定溶血。含有溶血相关基因重组质粒的大肠杆菌（Escherichia coli简称E.coli）JM109、E.coli LE392有溶血现象。含有溶血相关基因重组质粒的ET菌,不一定有溶血现象。该基因不是溶血结构基因,而是溶血相关基因。     

SNP标记对角膜混浊小鼠 突变相关基因的精细定位

为深入研究前期工作中以ENU诱变技术建立的遗传性角膜混浊突变系小鼠(B6-Co)的遗传机制, 利用 SNP标记对其突变基因进行精细定位, 将该品系中具有角膜混浊表型的小鼠(B6-CoP)与DBA/2小鼠(简称D2)配种得到F₁代, 再回交D2亲本品系得到F₂代, 提取F₂代角膜混浊小鼠鼠尾DNA。在MGI数据库中选取小鼠13号染色体已定位区间附近5个在C57BL/6(简称B6)和D2两个品系之间有差异的SNP, 应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术及连锁分析方法对B6-Co小鼠突变基因进行精细定位。结果表明: B6-Co小鼠突变基因定位于13号染色体上112 546 283~113 397 654 bp之间, 因该区间内有5个已知基因, 其中Map3k1基因与小鼠眼睛形态生成和眼睑闭合密切相关, 提示Map3k1是B6-Co小鼠突变的强力候选基因。     

斑马鱼sat1.a突变体的鉴定

目的在我们的前期研究工作中,通过Tol2转座子介导的插入突变,筛选到了一批组织特异性表达绿色荧光蛋白GFP的斑马鱼品系。其中一个品系Tol2:20141221t的GFP在神经系统中表达,但还没有鉴定到Tol2转座子插入到基因组什么位置,造成了哪个基因的突变。本文的主要研究目标就是对这一由Tol2转座子插入诱导的斑马鱼突变品系进行鉴定。方法使用交错式热不对称PCR(thermal asymmetric interlaced PCR,TAIL-PCR)鉴定Tol2转座子插入的基因组位置;利用原位杂交检测被突变的基因的时空表达是否与该品系GFP表达具有一致性;筛选鉴定纯合体突变体,并进一步分析该基因突变造成的发育缺陷。结果在该品系中,Tol2转座子插入到了亚精胺/精胺N1-乙酰基转移酶1a(spermidine/spermine N1-acetyltransferase 1a,sat1.a)的第八个内含子区域,致使sat1.a基因转录提前终止。我们筛选到了sat1.a纯合突变体,但是没有检测到明显的发育缺陷。结论筛选鉴定的Tol2转座子介导的斑马鱼sat1.a突变体没有明显的发育缺陷,但可以作为研究神经系统发育的有力工具。     

水稻光敏素基因(phyA)和-1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶小亚基基因(rbcS)的染色体定位

以生物素标记的水稻单拷贝光敏素基因（ｐｈｙＡ） 和１ ,５二磷酸核酮糖羧化酶／ 加氧酶小亚基基因（ｒｂｃＳ） 的基因组克隆为探针,其大小分别为６ ．６ 和１ ．１ ｋｂ ,通过原位杂交技术将它们分别定位到水稻染色体上。ｐｈｙＡ 和ｒｂｃＳ基因的检出率分别为２９ ．７９ ％ 和２１ ．５６ ％ 。ｐｈｙＡ在第３ 染色体上有３ 个座位：长臂近着丝粒、短臂末端、长臂中部。ｒｂｃＳ分别定位于第７ 染色体长臂近着丝粒（８ ．６２ ％ ） 、第５ 染色体长臂末端、第６ 染色体长臂距着丝粒近２／３ 处。此外,对信号转导相关基因定位的意义,水稻染色体的准确识别、功能基因在染色体上的分布及位置意义等也进行了讨论。     

染色体显微切割与DOP—PCR结合对赤麂Sry基因克隆，测序及初步定位

应用显微切割技术获得赤麂1号,Y1,Y2染色体,通过DOP－PCR增加模板DNA拷贝数,然后用人的性别决定基因（Sex-tetermininig Region of the Chromosome Y,SRY)中HMG框内设计1对引物,对DOP－PCR产物进行扩增,在雄性赤麂Y2染色体DOP－PCR产物中扩增出与人SRY基因同源的Sry基因片段,克隆,测序,首次在分子水平上证明赤麂Y2染色体是真正的Y染色体,同时对赤麂Syr基因进行了初步定位。     

一份新型水稻极度分蘖突变体的遗传分析及分子标记定位

在三系杂交水稻保持系绵香1B（M1B）和一个雄性不育材料GMS-1的杂交后代中发现一株极度分蘖突变体（命名为ext．M1B）,其分蘖数为121。对ext-M1B与5个正常分蘖水稻品种杂交F1和F2代的遗传分析表明,ext-M1B的极度分蘖特性受一对隐性核基因控制。以2480B／ext-M1B的F2代作定位群体,用分子标记将ext-M1B的突变基因定位于水稻第6染色体短臂,该基因与微卫星标记RM197、RM584和RM225的遗传距离分别为3．8cM、5．1cM和5．2cM,认为ext-M1B突变基因是一个新的水稻极度分蘖基因,暂命名为ext-M1B（t）。     

家蚕丝心蛋白H链基因的荧光原位杂交(FISH)

蚕丝业在国民经济中占有极为重要的地位. 家蚕作为重要的模式生物和生物反应器, 历来为人们所关注. 有关蚕丝基因的结构、表达调控和分子进化都已有较详细的研究和报道, 但关于蚕丝结构基因的分子细胞遗传学基因定位的研究, 几乎尚无报道. 经用荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization, FISH)对家蚕丝心蛋白H链基因(Fib-H)的分子细胞遗传学定位研究结果, 初步将家蚕丝心蛋白H链基因定位在了分子细胞遗传学第25连锁群染色体的端部, 即25~0.0的位置, 从而解决了该基因迄今尚未定位的问题, 并证实了丝心蛋白H链基因在染色体位置上为单一座位.     

白细胞介素13

IL－13是新近发现的一种新的细胞因子,由Th2细胞产生,人IL－13（hIL-13)的分子量为17kd(糖量化）和12．4kD( 非糖基化）;鼠IL－13（mIL-13)的分子量为14kD;二者的氨基酸序列同源性为58％,hIL-13和mIL-13的基因定位于人第5号染色体和鼠第11号染色体上,并与IL－4基因紧密连锁,二者的cDNA同源性为66％,重组IL－13（γIL－13）具有多种生物学活性刺激前髓样细胞增殖,诱导单核细胞表达MHC II类抗原和CD23,促进B细胞增殖,分化和分泌Ig,抑制炎症因子的产生和HIV－1的复制,抗肿瘤等,对其深入研究将有助于认识IL－13在炎症反应的发生和发展以及调节免疫应答方面的作用,并为其临床应用的可能性提供理论依据。