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豆豉纤溶酶高产菌株的筛选研究 总被引:5,自引:0,他引:5
以中国豆豉为材料,取6个不同来源的样品经富集培养后,用自制血纤维蛋白平板进行初筛;利用LB纤维蛋白平板复筛与血琼脂平板进行体外溶血试验相结合的方法,筛选出安全性良好并有一定纤溶活性的菌株。再对复筛得到的菌株进行摇瓶培养,用纤维蛋白平板法测定并比较不同菌株发酵液的纤溶活性。结果成功地筛选出5株纤溶活性高和通过溶血性实验的芽孢杆菌菌株,其中菌株DC-C4粗酶液的酶活稍高,达到280IU/mL。采用16S-23S rDNA序列分析法及传统的生理生化特征鉴定法对该菌株进行鉴定,确定菌株DC-C4为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)。本实验为开发新型溶栓药物及保健食品提供了实验参考依据。 相似文献
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豆豉纤溶酶--一种潜在的新型溶栓药物 总被引:9,自引:0,他引:9
豆豉纤溶酶是一种潜在的新型溶栓药物。该文介绍豆豉纤溶酶产生菌的筛选、诱变;纤溶酶的分离纯化、酶学性质及其分子生物学的研究等:并简述了纤溶酶活性的测定方法;提出了豆豉纤溶酶的研究方向及前景。 相似文献
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一株新的豆豉纤溶酶产生菌的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
从全国各地采集豆豉样品,经富集培养并利用纤维蛋白平板法获得一株形态与现存产纤溶酶微生物差异较大的菌株HS9.通过传统方法、化学方法以及16S rRNA序列分析对HS9进行分类鉴定,属于Pseudomonas aeruqinosa,是未见报道的产豆豉纤溶酶菌株.发酵培养HS9获得粗酶,经20%~70%硫酸铵梯度盐析、Sephadex G-75凝胶过滤以及CM-Sepharose Fast Flow阳离子交换层析分离纯化后,得到了电泳纯酶.通过SDS-PAGE了解该酶分子量约为34 kD,pH 8.0~8.5时酶活性最高,最适作用温度48℃,作用方式为直接水解纤维蛋白,胃蛋白酶抑制剂在工作浓度1μmol/L时能完全抑制其活性,推测该酶为天冬氨酸蛋白酶,是一种新型的豆豉纤溶酶. 相似文献
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筛选了一株产纤溶酶能力较强的芽孢细菌,本文对其液体发酵条件进行了优化,结果表明菌株产酶最佳条件为:可溶性淀粉4%,蛋白胨2%,柠檬酸铁铵0.1%,磷酸钙0.4%,接种量2%,pH 7.5,发酵时间96 h,装瓶量75/500(mL/mL),摇床温度37℃,转速150 rpm,在该条件下产酶酶活可达581.81 IU/mL。 相似文献
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豆豉纤溶酶是从豆豉中发现的新型纤溶酶.从枯草杆菌DC-12中提取总DNA,PCR法扩增pro-DFE基因.将pro-DFE基因插入载体pET-32a,构建表达质粒pET-pro-DFE,转化大肠杆菌BL21(DE3),对重组菌株进行变温诱导表达,重组菌株于37℃培养至OD600为0.6时,加入终浓度为0.4mmol/L的IPTG于24℃进行诱导,SDS-PAGE显示可溶性重组融合蛋白约占重组蛋白的60%.且少量融合重组蛋白发生自切割,形成成熟的豆豉纤溶酶,破菌上清中含有成熟的豆豉溶栓酶,纤溶活性为200IU/mL.重组酶经纯化后比酶活为1280IU/mg. 相似文献
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【目的】通过响应面试验对产纤溶酶菌株CNY16发酵条件进行优化,并对其酶学特性进行初步研究。【方法】采用Plackett-Burman设计得出酵母膏、氯化钠、转速3个最重要影响因素,通过最陡爬坡实验逼近酶活的最高区域,然后根据Box-Behnken中心组合设计实验对显著因素进行优化分析,最后对该酶学性质进行初步分析。【结果】最终得到3个因素的最优组合:酵母膏3.28%,氯化钠1.14%,转速166 r/min,在此培养条件下,纤溶酶活达到875.932 U/mL,比优化前提高了46%;该菌株产纤溶酶最适温度为30°C,最适pH为6.5。【结论】确定了高产纤溶酶菌株CNY16的最优发酵条件及其部分酶学性质,为该酶的进一步深入研究及中试实验奠定基础。 相似文献
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《生物技术通报》2015,(5)
为选育阿维拉霉素高产菌株,对野生型绿色产色链霉菌(Streptomyces viridochromogenes)Tü57进行传统物理和化学诱变,并获得一系列以阿维拉霉素A的含量为指标的正向突变体,再采用基因组改组技术将不同的正向突变体进行融合杂交,获得融合子。在筛选融合子的过程中,采用传统薄层色谱(TLC)和管碟法(二剂量法)结合进行初筛、高效液相色谱法进行复筛的筛选策略。经过基因组改组,筛选得到一株高产菌株R708,其在摇瓶实验中阿维拉霉素A产量达到0.208 g/L,比野生菌株提高了20倍。基因组改组选育阿维拉霉素高产菌,能提高子代菌株的遗传多样性,比传统诱变选育更快速有效。 相似文献
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《生物技术通报》2015,(9)
筛选高产铁载体的微生物,研究铁载体的抑菌作用和对不溶性未定型铁氧化物(poorly crystalline iron hydroxides,PCIH)的利用。CAS法筛选高产铁载体菌株,采用琼脂扩散法和生长抑制测定铁载体的抑菌作用,利用16S r RNA基因序列比对鉴定分离菌株,并根据分离菌株的生长情况,确定铁载体对不溶性PCIH的利用。从土壤样品中共筛选到172株产铁载体的菌株,高产铁载体菌株13株,其中仅有菌株Z158的发酵液对金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、普通变形杆菌和副溶血性弧菌具有抑菌作用,抑菌率分别为51.3%、50.2%、37.1%和28.0%。比对该菌株的16S r RNA基因序列,确定Z158属于Pseudomonas aeruginosa。当不溶性的PCIH作为唯一可利用的铁源时,菌株Z158培养24 h的生物量比无铁条件下提高了46.1%。铜绿假单胞菌Z158分泌的铁载体能够抑制病原菌的生长,同时还能获取不溶性未定型铁氧化物PCIH中的铁元素。 相似文献
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为获得仿刺参(Apostichopus japonicus)肠道菌群中可有效降解褐藻胶的混合菌株,以海藻酸钠为唯一碳源配制培养基,以透明圈法进行初筛,DNS法和紫外法复筛,从已驯化仿刺参肠道中筛选得到4株高酶活力褐藻胶降解菌株S1、S2、S10和S11,经16S rDNA序列分析、电镜观察,确定菌株S2与S11分别为微杆菌属(Microbacterium sp.)和微小杆菌属(Exiguobacterium sp.)。对该4株菌株分别进行混合培养,获得菌株S2与S11最佳配比组合,并通过单因素试验及响应面优化试验对影响混合菌株产酶条件的发酵初始pH值、NaCl质量浓度、装液量和发酵温度4个因素进行优化。得到混合菌株最佳产酶条件为pH 8,NaCl质量浓度为40 g/L,装液量80 mL,温度28 ℃。在最佳发酵条件下,混合菌株酶活力可达94.78 U/mL,相比于优化前提高了43.9%,优化后混合菌株的酶活力显著提高。 相似文献