利钠肽家族基因与心血管疾病研究新进展

利钠肽家族是一组由心肌细胞分泌的激素,主要包括A型、B型和C型利钠肽,具有相似的基因结构和生理学效应,可对心血管系统产生血压调节、抗心肌肥厚、抗心肌纤维化和抗心肌弛缓等保护作用。利钠肽受体A、B和C亦介导多种生理活性,调节心血管稳态。利钠肽受体A选择性结合A型、B型利钠肽。利钠肽受体B结合C型利钠肽。利钠肽受体C结合各型利钠肽,通过受体介导的内化和退化作用清除血液循环中利钠肽。对利钠肽家族及其受体基因单核甘酸多态性及功能研究显示,其与多种心血管疾病(房颤、高血压、心力衰竭等)的易感性相关。利钠肽家族及其受体基因缺失的转基因小鼠表现为心肌肥厚、心肌纤维化,与高血压、心肌病及心力衰竭的发生发展相关。各种导致心肌肥厚和缺血性损伤的刺激均参与利钠肽及其受体基因的表达调控。临床将脑钠肽作为左室功能障碍和心力衰竭失代偿的一个预测指标。静脉注射重组脑钠肽已经成为治疗急性心力衰竭的有效手段。深入了解利钠肽家族基因变异及其信号调控有助于探索心血管疾病的病理生理机制,为临床诊疗开辟新思路。     

利钠肽家族基因与心血管疾病研究新进展

利钠肽家族是一组由心肌细胞分泌的激素, 主要包括A型、B型和C型利钠肽, 具有相似的基因结构和生理学效应, 可对心血管系统产生血压调节、抗心肌肥厚、抗心肌纤维化和抗心肌弛缓等保护作用。利钠肽受体A、B和C亦介导多种生理活性, 调节心血管稳态。利钠肽受体A选择性结合A型、B型利钠肽。利钠肽受体B结合C型利钠肽。利钠肽受体C结合各型利钠肽, 通过受体介导的内化和退化作用清除血液循环中利钠肽。对利钠肽家族及其受体基因单核甘酸多态性及功能研究显示, 其与多种心血管疾病(房颤、高血压、心力衰竭等)的易感性相关。利钠肽家族及其受体基因缺失的转基因小鼠表现为心肌肥厚、心肌纤维化, 与高血压、心肌病及心力衰竭的发生发展相关。各种导致心肌肥厚和缺血性损伤的刺激均参与利钠肽及其受体基因的表达调控。临床将脑钠肽作为左室功能障碍和心力衰竭失代偿的一个预测指标。静脉注射重组脑钠肽已经成为治疗急性心力衰竭的有效手段。深入了解利钠肽家族基因变异及其信号调控有助于探索心血管疾病的病理生理机制, 为临床诊疗开辟新思路。     

利钠肽的结构、受体与生理作用

利钠肽 (ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃｐｅｐｔｉｄｅ ,ＮＰ)是近 2 0年才发现的一类多肽 .到目前为止 ,人类共发现了 5种利钠肽 ,即心房利钠肽 (ａｔｒｉａｌｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃｐｅｐｔｉｄｅ ,ＡＮＰ )、脑利钠肽(ｂｒａｉｎｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅ,ＢＮＰ)、Ｃ型利钠肽 (Ｃ ｔｙｐｅｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃｐｅｐｔｉｄｅ ,ＣＮＰ)、Ｖ型利钠肽 (ｖｅｎｔｒｉｃｌｅｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃｐｅｐｔｉｄｅ,ＶＮＰ)和Ｄ型利钠肽 (ｄｅｎｄｒｏａｓｐｉｓｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃｐｅｐｔｉｄｅ ,ＤＮＰ) .ＶＮＰ和ＤＮＰ至今…     

C型利钠肽在糖尿病下肢动脉硬化中的研究进展CSCD

糖尿病血管病变是糖尿病患者致死率和致残率增高的主要原因,糖尿病下肢动脉硬化是血管病变中的一种,血管内皮功能紊乱是造成糖尿病动脉硬化的根本所在。C型利钠肽(CNP)是利钠肽家族第三个成员,具有较强的抑制血管重构和一定的扩血管作用。本文重点对CNP在糖尿病下肢动脉硬化形成过程中的意义作一综述。     

人组织激肽释放酶成熟蛋白在大肠杆菌中的高效表达

将编码人组织激肽释放酶成熟蛋白的基因片段扩增并分别克隆到原核表达载体pET2 8(b)及分泌型表达载体pET2 0 (b)中 ,使其C端融合 6×HisTag序列 .转化不同受体菌 ,IPTG诱导表达后利用SDS PAGE、免疫印记等方法对重组蛋白进行分析 .在 6株基因工程菌株中 ,均表达出分子量约30kD的激肽释放酶融合蛋白 ,其中激肽释放酶在pET2 8载体中的表达水平高于pET2 0载体 .pET2 8和pET2 0载体表达的重组激肽释放酶蛋白分别占菌体总蛋白约 2 6 %和 10 % .Western印迹分析表明 ,目的蛋白可与抗人血清KK单克隆抗体发生特异性反应 .未经纯化的激肽释放酶融合蛋白具有一定的水解苯甲酰精胺酸乙酯 (BAEE)的能力 .在大肠杆菌中获得了人组织激肽释放酶的高效表达 ,表达产物具有免疫原性和生物活力 ,这为研究其生物功能和开发基因工程药物奠定基础     

血管钠肽抑制低氧对大鼠心成纤维细胞内钙浓度升高的作用

为了观察血管钠肽(vasonatrinpeptide,VNP)对低氧作用时心成纤维细胞增殖的影响,将分离纯化乳鼠心成纤维细胞,随机分为4组对照组、低氧组(2%～3%)、VNP组(10－8～10－6mol/L)和VNP+低氧组。用MTT比色法、～3H-TdR掺入法观察细胞增殖情况,采用激光共聚焦方法研究VNP对细胞内钙浓度(［Ca     

血管钠肽对大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞Ca2+激活K+通道的作用

目的研究血管钠肽(VNP)对大鼠肠系膜动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)Ca2+激活K+通道(Kca)的作用及其机制.方法采用全细胞膜片钳技术观察VNP对Kca的影响,以及HS-142-1、8-Br-cGMP和美蓝(MB)在这一过程中的作用.结果①VNP(10-6 mol/L)显著增强Kca(P＜0.05,n=5).②8-Br-CGMP(10-3mol/L)模拟VNP增强Kca的作用(P＜0.05,n=6).③HS-142-1(2×10-5mol/L)或MB(10-5mol/L)完全阻断VNP增加Kca电流密度的作用.结论VNP通过作用于VSMCs的钠尿肽GC耦联受体,升高细胞内的cGMP水平,激活Kca.     

血管钠肽对低氧大鼠心脏钠尿肽C受体表达的影响

目的 :探讨低氧对大鼠心脏钠尿肽C受体 (NPR C)表达的调节作用 ,以及血管钠肽 (VNP)对这一过程的影响。方法 :将大鼠随机分为 3组 :对照组、低氧组 (3～ 2 8d)和VNP(2 5～ 75 μg/kgbw) 低氧组 ,采用放射免疫的方法测定大鼠血浆心房钠尿肽 (ANP)的浓度 ,并采用定量PCR的方法分析NPR C的mRNA水平。结果 :低氧 2 8d大鼠血浆ANP浓度显著高于正常大鼠 (P <0 .0 5 ) ,而且每天注射 75 μg/kgbw的VNP使ANP浓度进一步升高 (P <0 .0 1)。低氧 3d对大鼠心脏NPR C的mRNA的量没有显著影响 ;低氧 7d使大鼠心脏NPR C的mRNA的拷贝数显著升高 (P <0 .0 5 ) ;低氧 14d、2 8d使大鼠心脏NPR C的mRNA的拷贝数进一步升高 (P <0 .0 1)。每日注射 2 5μg/kgbw的VNP对低氧诱导的大鼠心脏NPR C表达没有显著影响 ;5 0 μg/kgbw的VNP显著降低低氧大鼠心脏NPR C的表达 (P <0 .0 5 ) ;75 μg/kgbw的VNP进一步降低低氧大鼠心脏NPR C的表达 (P <0 .0 1)。 结论 :VNP可以升高低氧大鼠的血浆ANP水平 ;低氧可以使大鼠心脏NPR C表达增加 ,而且具有时间依赖性 ,而VNP对这一过程有抑制作用 ,并且呈剂量依赖性     

血管钠肽对离体人乳内动脉的舒张作用

为了研究血管钠肽(VNP)对人乳内动脉(human intramammary artery,HIMA)的舒张作用及其机制,采用离体血管灌流的方法,观察VNP对内皮完整和去内皮HIMA的舒张作用,以及HS—142—1、TEA、8—Br—cGMP和镁蓝(MB)对这一过程的影响。实验中观察到,VNP(0．0001—1μmol/L)可引起剂量依赖性的舒张效应,且无内皮依赖性;8—Br—cGMP(0．1—1000μmol/L)也可引起剂量依赖性的血管舒张效应。钠尿肽鸟苷酸环化酶(guanylate cyclase,GC)受体的特异性阻断剂HS—142—1(20μmol/L)使VNP舒张HIMA的作用几乎完全消失。MB是GC的抑制剂,10μmol/L的MB不但使VNP舒张HIMA的作用完全消失,而且可增强HIMA对去甲肾上腺素(NE)产生的收缩反应。钙激活钾通道(KCa)的阻断剂TEA(1mmol/L)可减弱(但是不完全阻断)VNP的舒血管作用。上述结果表明,VNP对HIMA具有不依赖内皮的舒张作用;此作用是通过作用于平滑肌细胞的钠尿肽GC受体,引起细胞内的cGMP水平升高实现的,并且与Kca有关。     

血管钠肽对中度低氧诱导的心肌细胞蛋白合成有抑制作用

实验探讨了心房钠尿肽家族新成员血管钠肽（vasonatrin peptide,VNP)对中度低氧诱导的心肌细胞蛋白合成的影响,在培养的新生大鼠心肌细胞上,用四唑盐（MTT）比色实验,总蛋白含量测定和^3H-亮氨酸掺入实验等方法观察细胞数和蛋白合成情况,并用放免法测定VNP对细胞内环鸟苷酸（cGMP)和环腺苷酸（cAMP)以及培养上清液中内皮素含理的影响,探讨VNP的作用机制,结果显示,重度低氧24h,心肌细胞数和蛋白合成均降低,而中度低氧显著增加蛋白的合成,具有促心肌细胞肥大的作用,VNP浓度依赖性地抑制中度低氧诱导的心肌细胞蛋白合成增加,并且升高细胞内cGMP水平,降低低氧诱导的培养上清液中内皮素的含量,结果提示,VNP抑制中度低氧诱导的新生大鼠心肌细胞蛋白合成增加,该作用与其升高细胞内cGMP浓度、降低低氧诱导的内皮素合成和/或释放增加有关。