大鼠4.5S RNAs的cDNA克隆与序列分析

利用ＲＴ－ＰＣＲ方法,首次从大鼠肝脏细胞总ＲＮＡ中扩增出４．５Ｓ ＲＮＡｓ的ｃＤＮＡ。该ｃＤＮＡ被克隆到ｐＧＥＭ３Ｚｆ（＋）质粒上,经酶切电泳鉴定,然后测序。与报道的小鼠和仓鼠４．５Ｓ ＲＮＡｓ序列进行了比较研究,并对该分子的结构特点进行了初步分析。     

中华鳖不同组织Sox基因表达的RTPCR分析

本文采用ＲＴ－ＰＣＲ技术,研究了中华鳖不同组织Ｓｏｘ基因的表达,并通过ＰＣＲ直接克隆法,分析了来自睾丸、脑和脾组织中的Ｓｏｘ基因序列。结果表明：在中华鳖的成本组织中,Ｓｏｘ基因在脑、心肌、肾、脾和雄性的睾丸组织中均有不同程度的表达,而在肌肉、肝脏和雌性的卵巢中则无表达,显示该基因具有组织表达特异性。克隆分析显示,在睾丸组织中表达的是ＴＳＳｏｘ１和ＴＳＳｏｘ４基因,而在脑组织中表达的是ＴＳＳｏｘ２和     

中华鳖7种组织SOX基因表达的RT-PCR分析

In this paper, RT PCR analysis on SOX gene of seven tissues from the Chinese soft shelled turtle (Pelodiscus sinensis) was studied, and SOX gene fragments of expression from the testicle, brain, heart, kidney and spleen were cloned using RT PCR products.The results show that SOX genes has specific expression in the testicle, brain, spleen, cardiac muscle and kidney and isn't expression in muscle, liver and ovary of femel.The results of sequence reveal that the SOX genes of expression in the testicle are TSSOX1、TSSOX4 TSSOX5 and TSSOX9, and those are TSSOX2 and TSSOX4 in the brain, and this is TSSOX4 in the spleen and heart tissue, and those are TSSOX2 and TSSOX3 in the kidney tissue.This suggests that the SOX gene act important role not only on the sex determination, but also on the development of neural system, immunocyte system and the differentiation of male germ cell.     

逆转座子对灵长目动物基因组结构的影响

逆转座子(retroposon)是动物基因组中一类可移动的元件,它们首先通过转录产生一个RNA拷贝,然后利用逆转录酶将该RNA拷贝逆转录为c DNA后,再插入到基因组的新位点上。逆转座子在动物基因组中含量极为丰富,种类也很繁多,并随着动物进化在基因组中不断扩增。它们可通过形成插入突变、侧翼序列转导、基因逆转座、DNA断裂与修复、异常重组等机制对动物基因组结构的稳定性产生重要影响,并成为推动基因组进化的重要动力。本文综述了灵长目动物主要的逆转座子类型及其对基因组结构的影响方式,从而为深入理解逆转座子在灵长目动物基因组中的功能及灵长目动物的进化提供参考。     

神经系统基因表达的单细胞分析

神经系统基因表达的单细胞分析宋萍包永德（中国科学院上海生理研究所,上海２０００３１）关键词单细胞分析ＲＴ－ＰＣＲ神经元某种神经元区别于非神经元以及其它类型的神经细胞的各种性质反映出在基因表达方式上必然存在着某些特异性的差别［１］。现代神经生物学中亟待...     

肠杆菌4.5S RNA基因单链构象多态性的比较研究

本文对大肠杆菌(Escherichia coli)不同菌株和肠杆菌科(Enterobacteriaceae)不同属其他三种菌株,即普通变形菌(Proteus vulgaris)、粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)和产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes),分别进行4.5S RNA基因聚合酶链式反应(PCR),然后对扩增产物作依赖于序列的单链构象多态性(SSCP)分析.实验结果表明,上述细菌4.5S RNA基因的大小和正链构象均无可觉察的差异,仅产气肠杆菌的负链构象有明显不同.由此可见4.5S RNA基因在进化上相当保守,产气肠杆菌4.5S RNA基因的序列虽有改变,仍能维持其有义链的基本构象.     

外源RNA对小鼠白蛋白基因表达及DNaseI敏感性的影响

兔肝RAN诱导培养的小鼠成纤维细胞,大鼠肝RNA注射入小鼠前列腺,用免疫组织化学染色检测外源RNA对小鼠白蛋白基因表达的影响;不同RNA诱导培养的小鼠成纤维细胞,提取细胞核,DNaseI消化,PCR法扩增小鼠白蛋白基因,检测白蛋白基因消化情况。发现外源RNA可促进小鼠白蛋白基因表达并增加该基因DNaseI敏感性。     

在肾癌细胞系GRC—1细胞周期不同阶段Wnt—5A基因的？…

Ｗｎｔ基因所编码的蛋白质与许多生长因子一样具有分泌型生长因子的结构特点,其家族成员Ｗｎｔ－５Ａ是许多恶性肿瘤的自分泌生长因子,在肾细胞癌中表达显著升高。为研究在细胞周期的不同阶段生长因子ＷＮＴ－５Ａ在转录水平的表达情况,我们采用胸腺嘧啶双阻断及高压笑气处理的方法,使肾细胞癌细胞系ＧＲＣ－１细胞同步化。用半定量反转录多聚酶链反应对处于细胞周期不同阶段的细胞ｃＤＮＡ进行扩增,Ｓ期与Ｇ１,Ｍ期Ｗｎｔ－５     

764—3对血管平滑肌细胞增殖的影响

为寻找新型有效的AⅡ拮抗剂,本实验应用细胞计数,^3H-TdR掺入,逆转录－聚合酶链反应及放射免疫实验方法,研究了中药单体764－3对卒中易感型自发性高血压大鼠（SHRsp)及其对照（WKY大鼠）主动脉平滑肌细胞（ASMC）增殖的影响及其作用机制,结果表明：764－3可显著抑制ASMC增殖,并有剂量依赖性,20mg/L的764－3可极显著地抑制SMC上AⅡ受体（AT1）的mRNA表达（SHRsp下降76．3％,WKY大鼠下降61．6％）,并可降低SHRsp ASMC内AⅡ含量（下降20％）,推测764－3对ASMC增殖的抑制作用可能部分地是由于降低了AT1受体的基因表达引起,比较其对两种大鼠ASMC的抑制效率,发现它对SHRsp的ASMC的作用更强。     

小鼠IL-18基因的克隆及真核表达载体的构建

研究ＩＬ－１８是否具有对造血功能调控的作用。采用常规分子生物学技术,从小鼠骨髓细胞中克隆了含信号肽序列的ＩＬ－１８,构建了表达载体。经序列测定表明所克隆的ＩＬ－１８序列与文献报道的一致,构建的真核表达载体正确。     

肠杆菌4.5SRNA基因单链构象多态性的比较研究

本文对大肠杆菌(Escherichia coli)不同菌株和肠杆菌科(Enterobacteriaceae)不同属其他三种菌株,即普通变形菌(Proteus vulgaris)、粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)和产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes),分别进行4.5S RNA基因聚合酶链式反应(PCR),然后对扩增产物作依赖于序列的单链构象多态性(SSCP)分析.实验结果表明,上述细菌4.5S RNA基因的大小和正链构象均无可觉察的差异,仅产气肠杆菌的负链构象有明显不同.由此可见4.5S RNA基因在进化上相当保守,产气肠杆菌4.5S RNA基因的序列虽有改变,仍能维持其有义链的基本构象.     

萤火虫萤光素酶基因构建BIV－LTR启动子表达研究体系

萤火虫萤光素酶基因构建ＢＩＶ－ＬＴＲ启动子表达研究体系刘国文,纪永刚,梁臣,刘淑红,陈启民,耿运琪（南开大学生命科学学院天津３０００７１）关键词萤光虫萤光素酶基因（ｌｕｃ）,ＢＩＶ－ＬＴＲ,ＢＩＶ－ｔａｔ目前使用最广泛的报道基因是细菌的氯霉素乙酰转移...     

缺血再灌注对小鼠肠神经丛nNOS 和iNOS表达的影响

目的观察缺血再灌注后小鼠回肠神经型一氧化氮合酶(neuron alnitric oxide synthase,nNOS)和诱导型一氧化氮合酶(induciblenitric oxide synthase,iNOS)的表达,探讨肠缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,IRI)的发生机制。方法采用小鼠肠系膜上动脉缺血再灌注模型,根据不同再灌注时间对小鼠随机分1d组、3d组、5d组、7d组、对照组和假手术组,用SP法检测小鼠回肠nNOS和iNOS的表达情况。结果与对照组和假手术组相比较,nNOS在再灌注1d后开始在肌间神经丛持续高表达(P<0.01);而iNOS在再灌注3d后开始在肌间神经丛持续高表达(P<0.05)。结论nNOS和iNOS在肠缺血再灌注后的表达增强,提示一氧化氮及一氧化氮合酶与肠神经节细胞在缺血再灌注中的损伤有着密切关系。     

Quox-1基因同源序列在小鼠精子发生中的表达

Ｑｕｏｘ－１基因是从鹌鹑中分离得到的Ａｎｔｐ类型的一个同源异形盒基因。以＾３２Ｐ标记的Ｑｕｏｘ－１基因的ｃ３片段为探针,采用分子杂交技术确定了小鼠基因组中存在Ｑｕｏｘ－１基因同源序列。以抗ＱＵＯＸ－１蛋白的特异性抗体对幼年小鼠睾丸、成年小鼠睾丸及附睾的蛋白质样品和组织切片,分别进行了Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析和免疫组织化学反应。结果证明,性成熟小鼠在精子发生过程中的精子形成阶段有类ＱＵＯＸ－１蛋     

细菌荧光酶报告基因载体构建及在Hela细胞中的表达

采用ＰＣＲ点突变技术,构建含有细菌荧光酶融合ｌｕｘＡＢ报告基因的重组哺乳动物载体ｐｃＤＮＡ３－ｌｕｘＡＢ,脂质体ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ转染和Ｇ４１８抗性筛选稳定转染的Ｈｅｌａ细胞。ＰＣＲ和酶切电泳证明构建的正确性;经稳定转染ｐｃＤＮＡ３－ｌｕｘＡＢ的Ｈｅｌａ细胞,用发光仪可测得较强的发光强度（最大值为４．１２ｍＶ／４０μｇ细胞总蛋白粗提物）。而亲本及ｐｃＤＮＡ３稳定转染的Ｈｅｌａ细胞则在本底值范围,ｐｃＤＮＡ３－ｌｕｘＡＢ稳定转染与亲本及ｐｃＤＮＡ３稳定转染的Ｈｅｌａ细胞在细胞形态和培养条件等方面无明显差异。本工作为细菌荧光酶作为报告基因在肿瘤细胞中的表达和应用建立了基础。     

RNA干扰对离体大鼠神经干细胞NgR基因表达的影响

目的观察RNA干扰（RNA interference,RNAi）对离体大鼠神经干细胞的Nogo-66受体（Nogo-66 reeeptor,NgR）基因表达的影响。方法设计并合成3条大鼠NgR基因mRNA的小分子干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）转染体外培养的神经干细胞,免疫荧光及Western blot检测NgR表达。结果siRNA可以成功的转染神经干细胞,3条siRNA不同程度的阻断了神经干细胞的NgR基因表达,阻断效率随时间延长逐渐下降。阻断效果最好的1条siRNA在转染后第5d仍能保持（85．22±3．1）％高阻断效率。结论应用RNAi可以高效率的使大鼠神经干细胞的NgR基因表达沉默。     

青春型双歧杆菌生态制品对小鼠肝癌抑制作用的初步研究

本文观察了青春型双歧杆菌(Bif.a)对小鼠肝癌移植瘤的抑制作用。结果发现,青春型双歧杆菌在瘤细胞移植前或移植后应用均显示了抑制肿瘤生长的作用。将青春型双歧杆菌注入肤腔可激活肤腔巨噬细胞,提高其吞噬功能和非特异性酯酶活性,而加入体外培养的小鼠肝癌细胞未显示有杀伤瘤细胞作用。认为青春型双歧杆菌的抑瘤作用可能是该菌刺激了宿主的免疫活性细胞杀伤了瘤细胞,而非直接杀伤作用。     

雌激素受体在小鼠睾丸表达的免疫组织化学研究

观察雌激素受体在小鼠睾丸的定位与分布。取Ａ／Ｊ系小鼠睾丸, 制备石蜡切片。用间接酶标免疫组织化学和高温处理抗原暴露技术显示雌激素受体的所在部位。睾丸所有Ｌｅｙｄｉｇ 细胞和约２０％ 的肌样细胞的胞核呈雌激素受体阳性反应。睾丸支持细胞和生精细胞为阴性。本研究首次用免疫组织化学技术证明了睾丸中雌激素受体的存在,并定位于Ｌｅｙｄｉｇ 细胞和部分肌样细胞的胞核。为研究雌激素对雄性生殖功能的调节提供了形态学依据。     

脑啡肽对大鼠海马神经细胞IL-6基因表达的影响

本文研究了大鼠海马内微量注射甲硫－脑啡肽（Ｍ－ＥＮＫ）对海马细胞的白细胞介素－６（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－６,ＩＬ－６）基因表达的影响。大鼠双侧海马内微量注射细菌内毒素脂多糖各１μｌ（ＬＰＳ,浓度：５０ｎｇ／ｍｌ）,于９０ｍｉｎ后用原位杂交技术检测到海马结构ＩＬ－６的基因表达,以齿状回颗粒细胞层显著。当海马内预先注射Ｍ－ＥＮＫ（每侧１μｌ,浓度：１０μｇ／μｌ）,３０ｍｉｎ后再给予脂多糖则未见ＩＬ－６基因表达。结果表明Ｍ－ＥＮＫ及ＬＰＳ可影响脑内ＩＬ－６的基因表达,在中枢调节机体免疫功能中,ＩＬ－６可能具有重要作用。     

衰老对小鼠胸腺细胞表面抗原表达的影响

采用流式细胞计技术和胚胎胸腺器官体外培养实验研究不同年龄小鼠胸腺细胞的发育。结果表明,随着小鼠年龄的增长,胸腺细胞的细胞表型由Ｐｇｐ－１高向Ｐｇｐ－１低下调表达受阻;老年组小鼠胸腺与幼年组小鼠胸腺相比,含有较多的ＣＤ４和ＣＤ８双阴性细胞和Ｐｇｐ－１阳性细胞,较少ＣＤ４和ＣＤ８双阳性细胞和ＭＥＬ－１４阳性细胞。