过继免疫治疗中DC-CIK的研究进展

目前,免疫细胞生物学和免疫分子生物学发展迅猛,由于其具备低毒性和高效率的特性,肿瘤免疫治疗在恶性肿瘤治疗中所起的作用引起了学者们的广泛关注,其中细胞介导的过继免疫治疗为当前研究的热点之一。过继免疫治疗(adoptive cellular immunotherapy,ACI)是目前恶性肿瘤治疗的新方向,它通过向细胞免疫功能低下者回输具有抗肿瘤活性的免疫细胞,直接杀伤或间接杀伤肿瘤细胞,使其获得抗肿瘤免疫力。树突状细胞(Dendritic cell DC)是专职抗原递呈细胞(antigen presenting cell APC)之一,在机体免疫应答的启始、调节、维持中发挥核心作用。细胞因子诱导的杀伤(cytokine induced killer CIK)细胞具有高效的MHC非限制性溶瘤活性,具有极其广泛的杀瘤范围。近年来,国内外大量研究表明,联合培养的DC-CIK抗肿瘤活性提升明显,患者预后生存期延长,效果显著。本文就DC与CIK生物学特点及抗肿瘤作用予以简要综述。     

树突状细胞与CIK细胞共培养诱生的DCCIK细胞群对肿瘤的杀伤作用

由树突状细胞(DC)与细胞因子诱导的同源杀伤细胞(CIK)的共培养诱生的细胞群(DCCIK)对肿瘤细胞的细胞毒活性的研究。DCCIK细胞体外杀伤肿瘤靶细胞A549(MTT法),效靶比为10∶1、5∶1时杀伤率分别为61%、52%。DCCIK细胞诱导培养3周后,效靶比为10∶1、5∶1时杀伤率分别为64%和56%。数据亦表明DCCIK细胞对靶细胞的杀伤优于CIK细胞。动物体内实验分荷瘤A549、BEL7404和A375三组,每组分(A)DCCIK 化疗、(B)单用化疗。治疗20天、35天后测量各组肿瘤消失率。结果显示:DCCIK 化疗的抑瘤效果明显好于单纯化疗。提示DCCIK细胞有临床应用前景。     

恒定自然杀伤T细胞与肿瘤免疫治疗

恒定自然杀伤T细胞(iNKT)是T淋巴细胞的一个独特亚群,兼具自然杀伤(NK)细胞和T细胞特征,同时表达T细胞受体(TCR)和NK细胞表面标志。iNKT细胞被激活后,通过分泌细胞因子,活化其它免疫细胞参与先天性免疫和获得性免疫,在抗肿瘤免疫过程中发挥调节作用。在多种癌症患者体内,发现外周血中iNKT细胞的数量降低、功能减弱,进而导致临床治疗效果不佳。近年来,基础研究和早期临床试验结果表明,注射抗原递呈细胞或/和体外培养并活化的iNKT细胞,抗肿瘤免疫治疗效果显著。本文就iNKT细胞的分类及生物学特性,在肿瘤免疫治疗中的作用与其机制,以及其临床应用等进行综述。     

自体DC、CIK细胞在急性髓细胞白血病治疗中的研究进展

树突状细胞(DC)是初级免疫应答的激发者,是最有活力的抗原递呈细胞(APC),可以有效地抑制白血病细胞逃逸。未成熟DC细胞从细胞外捕获各种抗原信息,成熟DC细胞传递各种抗原信息给宿主淋巴结的T细胞,激活抗原相关的主要组织相容性复合体(MHC)限制性特异性免疫应答,另外,亦可通过影响B细胞的增殖,不同程度的活化体液免疫应答。细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)是一组具有细胞毒作用的异质细胞群,是较LAK细胞溶瘤活性更强的一种免疫活性细胞,对包括白血病在内的多种恶性肿瘤具有抗肿瘤效应,具有非MHC限制性的杀瘤特点。二者联合培养及应用又增强了各自的活性。DC细胞与CIK细胞对于白血病的疗效不仅在实验室得以证实,而且已经逐步应用于临床,其在清除微小残留病以及预防造血干细胞移植后复发中取得了良好的效果。随着细胞制备技术的完善和研究的进一步深入,自体DC、CIK细胞治疗急性髓细胞白血病逐渐获得众多专家的认可。中国卫生部已经把自体免疫细胞治疗技术做为第三类医疗技术应用于临床,批准号200984。本文就目前DC、CIK、DC-CIK细胞免疫疗法在急性髓细胞白血病中的应用进展加以综述。     

恒定自然杀伤T细胞与肿瘤免疫治疗北大核心CSCD

恒定自然杀伤T细胞(i NKT)是T淋巴细胞的一个独特亚群,兼具自然杀伤(NK)细胞和T细胞特征,同时表达T细胞受体(TCR)和NK细胞表面标志。i NKT细胞被激活后,通过分泌细胞因子,活化其它免疫细胞参与先天性免疫和获得性免疫,在抗肿瘤免疫过程中发挥调节作用。在多种癌症患者体内,发现外周血中i NKT细胞的数量降低、功能减弱,进而导致临床治疗效果不佳。近年来,基础研究和早期临床试验结果表明,注射抗原递呈细胞或/和体外培养并活化的i NKT细胞,抗肿瘤免疫治疗效果显著。本文就i NKT细胞的分类及生物学特性,在肿瘤免疫治疗中的作用与其机制,以及其临床应用等进行综述。     

树突状细胞在肿瘤免疫治疗中的应用研究进展

树突状细胞（DC）是人体内最强的抗原提呈细胞。未成熟的DC可摄取抗原并迁移至淋巴器官,将抗原信息传递给免疫系统,引发免疫应答。研究表明,DC在启动抗肿瘤免疫中发挥着强大的功能。近年来,以DC为基础的肿瘤疫苗已成为肿瘤免疫治疗的热点。简要综述了各种DC疫苗的制备和临床应用。     

人类白细胞抗原半相合供者外周血细胞因子诱导的杀伤细胞治疗晚期原发性肝癌二例

目的 观察半相合供者细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)治疗晚期肝癌的临床疗效.方法 2 例无法手术且无法耐受化疗的晚期肝癌患者分别选取人类白细胞抗原(HLA)半相合健康供者体外培养CIK,14 d 后分次回输给相应患者,观察患者治疗前后瘤体大小、肿瘤标志物、免疫指标、临床症状、生活质量和卡氏评分等的变化.结果 2 例患者...     

DC-CIK对K562/A多药耐药基因mdr1表达的影响

目的：体外观察树突状细胞（dendritic cell,DC）联合细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine inducedkiller,CIK）对K562/A细胞株多药耐药基因mdr1表达的影响。方法：采集健康人的外周血,分离出单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）,在体外加入多种细胞因子经诱导生成DC及CIK细胞,以流式细胞仪检测其表面标志,将DC细胞内加入K562/A细胞裂解物致敏后,再与CIK细胞混合培养48小时。将致敏后的DC-CIK细胞与K562/A及K562分组培养后以荧光定量PCR检测其mdr1基因表达的情况,PBMC作为对照组。结果：RT-PCR中可见K562/A＋DC-CIK组中mdr1 mRNA表达较K562/A明显降低,经荧光定量PCR观察到K562/A内mdr1 mRNA表达为K562的10.27倍、K562/A/PBMC略低于未处理的K562/A（P〉0.05）,K562/A/DC-CIK细胞中mdr1 mRNA含量较K562/A、K562/A/PBMC少（P〈0.05）。DC-CIK细胞与细胞株混合培养后,mdr1基因表达较混合培养前明显降低。结论：实验数据显示DC-CIK可使耐药细胞株内mdr1基因表达下调。但K562与DC-CIK混合培养后该基因降低不明显,提示该基因在细胞中存在着基础表达,意义在于维持细胞内稳态。目前针对逆转白血病耐药的研究较少,需要多进行相关研究以拓宽细胞免疫治疗在逆转耐药领域的应用。DC-CIK是具有发展潜力的抗肿瘤方法。本实验将为下一阶段研究逆转耐药的机制提供依据,DC-CIK细胞免疫疗法有望成为逆转肿瘤耐药的新方法。     

DCIK细胞用于肺癌临床免疫治疗

观察细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK 细胞)和同源树突状细胞(DC)共培养后,共培养细胞树突状细胞调节的细胞因子诱导的杀伤细胞(DCIK 细胞)体外细胞毒活性,并观察DCIK细胞治疗肺癌的近期临床疗效、免疫学活性及副反应.收录 12例确诊肺癌经标准治疗方案治疗的患者,取外周血分离单个核细胞(PBMC),体外诱导出DC和CIK细胞共培养后,观察DCIK细胞表型,用MTT法测体外细胞毒活性;当效靶比为20∶1、10∶1时,DCIK细胞体外细胞毒活性杀伤率分别为55%、46.2%.所有患者均接受一定剂量的 DCIK细胞过继免疫治疗,观察其近期临床疗效、免疫反应、不良反应.12例患者中完全缓解 1例,部分缓解4例,病情稳定1例,近期有效率为41.6%,疾病控制率为50%,病情进展共6例,其中死亡2例.与DCIK细胞回输前相比,患者CD4 、CD8 、CD56 均有明显的升高(P＜0.05),这表示可以诱导患者产生特异性的免疫反应.除两例患者出现一过性的发热外,其余患者基本无不良反应.DCIK细胞在肺癌免疫治疗中能诱导机体产生特异性的免疫反应,亦是新的杀伤肿瘤细胞的效应细胞,有较好的临床疗效.     

DC-CIK细胞免疫治疗晚期结直肠癌患者的远期疗效及其影响因素分析

目的:探讨树突状细胞(DC)联合细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞免疫治疗晚期结直肠癌(CRC)患者的远期疗效及其影响因素分析。方法:收集我院2011年1月至2014年1月收治的112例晚期结直肠癌患者,依据是否接受DC-CIK细胞免疫治疗将患者分为对照组(n=47)和观察组(n=65),分别给予一般化疗方案治疗和化疗联合DC-CIK细胞免疫方案治疗,比较两组患者治疗前后血清肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、淋巴细胞亚群,治疗有效率(RR)、疾病控制率(DCR)、无进展生存期(PFS)和安全性改变,并分析影响疗效的危险因素。结果:两组治疗后CEA水平均显著低于治疗前(P0.05),治疗后对照组CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞和NK细胞均显著减少(P0.05),观察组治疗后CD3+T细胞和CD8+T细胞数量显著高于治疗前和同期对照组(均P0.05);对照组RR、DCR和PFS分别为44.68%、65.96%、6.5个月,观察组治疗对应指标分别为46.15%、86.15%、9个月,观察组DCR和FPS均显著高于对照组(P0.05);多因素分析发现TNM分期达到Ⅳ级(P=0.023)和年龄超过60岁(P=0.006)是影响疗效的独立危险因素。结论:DC-CIK细胞免疫治疗晚期结直肠癌安全可靠,能显著改善患者免疫功能控制肿瘤进展,延长生存期,提高生存质量,值得临床推广。     

综述: 癌症免疫治疗临床新进展

肿瘤免疫治疗是一种利用患者自身免疫系统实现抗肿瘤作用的治疗方式,现已成为对抗肿瘤的新型有效疗法．然而,抑制性肿瘤微环境的存在可使肿瘤免疫治疗的效果大打折扣．本文将以肿瘤微环境的组成、分类及其对治疗效果的影响为出发点,探讨通过放化疗、免疫检查点、基因修饰免疫细胞以及多种联合治疗等方式应对抑制性肿瘤微环境,使免疫治疗发挥最大疗效．     

自然杀伤细胞在肿瘤免疫治疗中的作用

自然杀伤(NK)细胞是人体先天免疫的核心组成部分,是肿瘤细胞免疫治疗和抗体免疫治疗的基础.NK细胞通过直接杀伤作用和释放细胞因子来共同控制肿瘤的生长和转移.目前,已开发出多种利用激活的NK细胞治疗肿瘤的方案.然而,癌症患者的NK细胞功能受损,抗癌能力下降,均限制了NK 细胞的临床疗效 .新的方案通过提高NK细胞的数量和杀伤功能来改善治疗效果. 利用体外长期激活、大规模培养临床使用的NK细胞是达成上述效果的最佳方法之一. 本综述讨论了NK细胞研究背景,NK细胞治疗的现状,尤其是体外培养扩增具有较强功能NK细胞的新方案.     

Preparation of Tumor Antigen-loaded Mature Dendritic Cells for Immunotherapy

While clinical studies have established that antigen-loaded DC vaccines are safe and promising therapy for tumors ¹, their clinical efficacy remains to be established. The method described below, prepared in accordance with Good Manufacturing Process (GMP) guidelines, is an optimization of the most common ex vivo preparation method for generating large numbers of DCs for clinical studies ².Our method utilizes the synthetic TLR 3 agonist Polyinosinic-Polycytidylic Acid-poly-L-lysine Carboxymethylcellulose (Poly-ICLC) to stimulate the DCs. Our previous study established that Poly-ICLC is the most potent individual maturation stimulus for human DCs as assessed by an upregulation of CD83 and CD86, induction of interleukin-12 (IL-12), tumor necrosis factor (TNF), interferon gamma-induced protein 10 (IP-10), interleukmin 1 (IL-1), and type I interferons (IFN), and minimal interleukin 10 (IL-10) production.DCs are differentiated from frozen peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) obtained by leukapheresis. PBMCs are isolated by Ficoll gradient centrifugation and frozen in aliquots. On Day 1, PBMCs are thawed and plated onto tissue culture flasks to select for monocytes which adhere to the plastic surface after 1-2 hr incubation at 37 °C in the tissue culture incubator. After incubation, the lymphocytes are washed off and the adherent monocytes are cultured for 5 days in the presence of interleukin-4 (IL-4) and granulocyte macrophage-colony stimulating factor (GM-CSF) to differentiate to immature DCs. On Day 6, immature DCs are pulsed with the keyhole limpet hemocyanin (KLH) protein which serves as a control for the quality of the vaccine and may boost the immunogenicity of the vaccine ³. The DCs are stimulated to mature, loaded with peptide antigens, and incubated overnight. On Day 7, the cells are washed, and frozen in 1 ml aliquots containing 4 - 20 x 10⁶ cells using a controlled-rate freezer. Lot release testing for the batches of DCs is performed and must meet minimum specifications before they are injected into patients.     

肿瘤的细胞免疫治疗研究进展

随着抗原递呈机制与细胞对特异性抗原识别机制的揭示、众多重要的人细胞因子及其功能的发现、分子克隆与细胞克隆技术的发展,细胞免疫治疗日益受到重视,并成为肿瘤等疾病临床治疗新思路、新方法的研究热点,肿瘤的细胞免疫治疗技术也在近20年内得到了广泛深入的研究和临床实践。在此,我们简要综述近年来肿瘤的细胞免疫治疗研究进展。     

High Log-Scale Expansion of Functional Human Natural Killer Cells from Umbilical Cord Blood CD34-Positive Cells for Adoptive Cancer Immunotherapy

Immunotherapy based on natural killer (NK) cell infusions is a potential adjuvant treatment for many cancers. Such therapeutic application in humans requires large numbers of functional NK cells that have been selected and expanded using clinical grade protocols. We established an extremely efficient cytokine-based culture system for ex vivo expansion of NK cells from hematopoietic stem and progenitor cells from umbilical cord blood (UCB). Systematic refinement of this two-step system using a novel clinical grade medium resulted in a therapeutically applicable cell culture protocol. CD56⁺CD3⁻ NK cell products could be routinely generated from freshly selected CD34⁺ UCB cells with a mean expansion of >15,000 fold and a nearly 100% purity. Moreover, our protocol has the capacity to produce more than 3-log NK cell expansion from frozen CD34⁺ UCB cells. These ex vivo-generated cell products contain NK cell subsets differentially expressing NKG2A and killer immunoglobulin-like receptors. Furthermore, UCB-derived CD56⁺ NK cells generated by our protocol uniformly express high levels of activating NKG2D and natural cytotoxicity receptors. Functional analysis showed that these ex vivo-generated NK cells efficiently target myeloid leukemia and melanoma tumor cell lines, and mediate cytolysis of primary leukemia cells at low NK-target ratios. Our culture system exemplifies a major breakthrough in producing pure NK cell products from limited numbers of CD34⁺ cells for cancer immunotherapy.     

A- NK 细胞联合IL- 2, IL- 12 在肿瘤免疫治疗中的作用

本文对A-NK细胞联合IL-2和IL-12在抗肿瘤免疫治疗中的作用进行了论述。强调联合应用可高效激活A-NK细胞,提高对肿瘤细胞的杀伤活性。减少IL-2和IL-12的用量及副作用,提高疗效。     

A-NK细胞联合IL-2，IL-12在肿瘤免疫治疗中的作用

本文对A-NK细胞联合IL-2和IL-12在抗肿瘤免疫治疗中的作用进行了论述。强调联合应用可高效激活A-NK细胞,提高对肿瘤细胞的杀伤活性。减少IL-2和IL-12的用量及副作用,提高疗效。     

Intracellular Cytokine Staining and Flow Cytometry: Considerations for Application in Clinical Trials of Novel Tuberculosis Vaccines

Intracellular cytokine staining combined with flow cytometry is one of a number of assays designed to assess T-cell immune responses. It has the specific advantage of enabling the simultaneous assessment of multiple phenotypic, differentiation and functional parameters pertaining to responding T-cells, most notably, the expression of multiple effector cytokines. These attributes make the technique particularly suitable for the assessment of T-cell immune responses induced by novel tuberculosis vaccines in clinical trials. However, depending upon the particular nature of a given vaccine and trial setting, there are approaches that may be taken at different stages of the assay that are more suitable than other alternatives. In this paper, the Tuberculosis Vaccine Initiative (TBVI) TB Biomarker Working group reports on efforts to assess the conditions that will determine when particular assay approaches should be employed. We have found that choices relating to the use of fresh whole blood or peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and frozen PBMC; use of serum-containing or serum-free medium; length of stimulation period and use of co-stimulatory antibodies can all affect the sensitivity of intracellular cytokine assays. In the case of sample material, frozen PBMC, despite some loss of sensitivity, may be more advantageous for batch analysis. We also recommend that for multi-site studies, common antibody panels, gating strategies and analysis approaches should be employed for better comparability.