红褐斑腿蝗卵黄蛋白的分离纯化及性质分析

用蒸馏水沉淀法、凝胶过滤、蛋白质电泳等方法提取纯化了红褐斑腿蝗Catantops pinguis (Stål)的卵黄蛋白,并对其性质进行了分析。电泳结合不同的染色方法证明红褐斑腿蝗的卵黄蛋白为一种糖脂复合蛋白,其分子量约为548 kD,由7个亚基组成,亚基分子量分别为147.3,100.2,95.9,59.6,53.6,49.0和42.2 kD。卵黄蛋白经高效液相色谱分析检测到17种氨基酸和NH₃峰,其中谷氨酸（Glu）百分含量最高,达13.46%,天冬氨酸（Asp）、亮氨酸（Leu）、半胱氨酸（Cys）、精氨酸（Arg）含量比较高,脯氨酸（Pro）、组氨酸（His）、赖氨酸（Lys）含量较低。     

淡紫拟青霉胞外多糖的分离、纯化及结构分析

淡紫拟青霉NH-PL-03菌株的胞外多糖粗提物对枯萎病病原菌-尖孢镰刀菌具有较好的抑制效果,文中对淡紫拟青霉胞外多糖进行了分离纯化和结构分析,以期为其构效关系研究奠定基础。采用乙醇沉淀法从淡紫拟青霉发酵液中提取粗多糖,经Sevage法脱蛋白后,过Superdex-G75凝胶层析柱分离得到胞外多糖EP-1。紫外分光法和Sephacryl S-200 HR凝胶层析柱检测EP-1为均一多糖,Sephacryl S-200柱层析测得EP-1的分子量为35.2 kDa,完全酸水解后纸层析检测EP-1的单糖组成中仅有葡萄糖,红外光谱、高碘酸氧化和Smith降解结果表明EP-1的化学结构是以β-(1,3)糖苷键连接而成的无分枝的葡聚糖。刚果红络合试验表明EP-1在稀的碱溶液中以3股螺旋构象存在。     

黑皮扁豆凝集素提纯及部分性质研究

采用NaCl抽提、硫酸铵分部沉淀和2步离子交换法从黑皮扁豆中纯化得到一种甘露糖专一凝集素(DPL)。在非变性电泳中纯化的DPL只有一条蛋白带,在还原及非还原条件下的SDS-PAGE中呈现两条蛋白带,其分子量分别为36．8kD和39．8kD;利用FPLC经Sephacryl S-300凝胶过滤测得其表观分子量为155kD,表明DPL由2个α亚基和2个β亚基组成,无二硫键。DPL的等电点为pH6．18,含1．6％糖,为酸性糖蛋白。DPL的热稳定性和pH稳定性,与已报道的甘露糖/葡萄糖专一的豆科凝集素相似。     

山茱萸糖蛋白的纯化及部分理化性质研究

α-淀粉酶抑制剂广泛存在于高等植物中,能抑制糖类在消化道内的吸收,是一种潜在的治疗糖尿病、肥胖和高血脂的药物。本文采用D101大孔吸附树脂,从山茱萸干果中提取得到粗提物,再经SP Sepharose和Sephacryl S-300柱层析,得到一种具有抑制α-淀粉酶活性的糖蛋白(CoGP)。Sephacryl S-300柱层析,PAGE电泳均证明该糖蛋白为单一组分;在还原条件下的SDS-PAGE电泳中呈现两条蛋白带,其分子量分别是62．O kD和56．8kD,利用Sephaeryl S-300柱层析测定表观分子量为158,9kD,表明CoGP由两个亚基组成;利用苯酚-硫酸法测得其糖含量约为51％;在α-淀粉酶的抑制实验中,山茱萸糖蛋白表现出反竞争的抑制特性。     

长角血蜱卵黄蛋白的纯化及其性质

用凝胶过滤与离子交换层析、蛋白质电泳和糖脂蛋白染色等方法提取纯化长角血蜱Haemaphysalis longicornis卵黄蛋白,并对其性质进行了研究。PAGE和SDS-PAGE分析表明,长角血蜱的卵黄蛋白只有一种,由8个亚基组成,亚基的相对分子质量分别为112 kD, 103 kD, 80 kD, 78 kD, 71 kD, 68 kD, 62 kD和52 kD,卵黄蛋白经苏丹黑B和希夫试剂染色呈阳性,表明是一种含血红素的糖脂蛋白。     

17β-雌二醇对雄性唐鱼卵黄蛋白原的诱导及性腺发育的影响

以17β-雌二醇（E2）诱导雄性唐鱼产生卵黄蛋白原（Vtg）,采用Sephacryl S-300凝胶过滤层析柱提纯了雄鱼整体匀桨液的Vtg。结果显示,已确定被纯化的唐鱼Vtg在4%—7.5% Native—PAGE电泳中分子量为440 kD左右,能同时被考马斯亮蓝、糖蛋白、磷蛋白、脂蛋白染色方法同时染色,是一种富含糖、磷、脂的蛋白。与对照组作比较,17β-雌二醇暴露组其体重明显下降（P<0.01）,精巢发育滞后。结果表明,17β-雌二醇能够诱导雄性唐鱼产生大量的Vtg,并影响到其生长及精巢发育。雄性唐鱼Vtg可作为环境雌激素监测的有效生物学标记物。     

17β-雌二醇对剑尾鱼卵黄蛋白原的诱导研究

目的研究17β-雌二醇(E2)暴露对雄性剑尾鱼(Xiphophorus helleri)卵黄蛋白原(vitellogenin,Vtg)诱导作用作为环境风险评价(ERA)的有效生物学标记的可行性。方法以E2诱导的剑尾鱼雄性个体的整体匀浆液为材料,采用Sephacryl S-300凝胶过滤层析柱和QSepharose阴离子交换柱从剑尾鱼体内提纯Vtg。结果确定了被纯化的剑尾鱼Vtg在4%~7.5%Native PAGE电泳中相对分子质量为540×103。4%~7.5%Native PAGE电泳后的凝胶分别利用苏丹黑B进行脂蛋白染色、高碘酸-Schiff试剂进行糖蛋白染色和甲基绿进行磷蛋白染色,表明剑尾鱼Vtg是一种富含糖、脂、磷的蛋白。结论表明雄性剑尾鱼卵黄蛋白原的诱导变化可作为环境风险评价(ERA)的有效生物学标记。     

解淀粉芽孢杆菌抗菌活性物质的分离纯化及抑菌活性研究

植物真菌病害给农业生产带来了巨大损失,因此对生物农药的开发迫在眉睫。从堆肥中分离得到一株解淀粉芽孢杆菌,它具有强烈的抗真菌活性。其发酵液经硫酸胺沉淀得到粗提液,粗提液经Hiprep 26/10 Desalting,HiLoad 26/10 Q Sepharose和HPLC多步柱层析,分离纯化得到一种抗真菌活性物质。ESI-MS质谱法测得其分子量为1498 Da。经活性检测发现,该纯物质对尖孢镰刀菌、草莓蛇病菌等植物病原真菌具有很强的抑制作用,对毛霉、黑曲霉等食品腐败菌也有抑制作用。经过显微镜观测,该物质可造成草莓蛇病菌菌丝生长异常,表现在菌丝弯曲,顶端膨大,分生孢子数量减少。     

β-环糊精葡基转移酶的纯化方法及酶学性质的研究

β-环糊精葡基转移酶的粗酶液应用酚酞分光光度法测得该酶的环化活性为11.79U/mL。该粗酶液先经过淀粉-酒精沉淀或淀粉-硫酸铵沉淀初步纯化,然后经Sephacryl S-100凝胶层析后,比活力分别提高了16、21、50倍,由原来的11.44U/mg蛋白质增加到572.67U/mg蛋白质,回收率分别为72.4%、66.4%、40.9%,经SDS-PAGE电泳显示为单一的蛋白带,酶的分子量约为70kDa。酶学性质研究表明该酶的最适pH和最适温度分别为6.0和60℃,在pH6.0~10.0范围内,55℃以下保温30min基本保持稳定。纯化后的β-环糊精葡基转移酶的环化活性每克相当于35727U。     

人血浆载脂蛋白A-Ⅱ的分离纯化及鉴定

 用硫酸右旋糖酐沉淀法和超速离心法从正常人血浆制备高密度脂蛋白(HDL)。脱脂后经制备性等电聚焦和Sephacryl S-200层析分离纯化载脂蛋白A-Ⅱ(apolipoprotein A-Ⅱ,简称apoA-Ⅱ)。经鉴定SDS-PAGE呈一条谱带,其亚基分子量为8700±280(n=4),等电点为4.80—5.17,氨基酸组成分析不含组氨酸和精氨酸,与抗apoA-Ⅱ血清发生特异免疫反应。