人类白细胞抗原的检测以及与临床疾病的关系

人类白细胞抗原(HLA)的检测最初用于器官移植,但近年来,HLA作为免疫遗传基因在与免疫调节有关的疾病中所扮演的重要角色愈来愈受到重视。本就HLA的检测方法以及与某些临床疾病的关系加以论述。     

HLA-DRB1基因多态性与新疆哈萨克族人群结核病易感性的研究

目的:研究HLA-DRB1基因多态性与新疆哈萨克族人群结核病(TB)的相关性。方法:采用病例-对照的研究方法,应用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术对231例新疆哈萨克族肺结核患者和230例新疆哈萨克族健康对照者的13个HLA-DRB1等位基因进行分型,比较其等位基因频率(GF)并计算其比值比(OR)。结果:与新疆哈萨克族人群对照组相比,新疆哈萨克族人群结核病例组中HLA-DRB1*04显著增高(11.72%比6.75%,p0.05,OR=1.889),HLA-DRB1*10也增高(2.86%比1.09%),但统计学上无显著性差异(Pc0.05)。结论:HLA-DRB1*04可能是新疆哈萨克族人群结核病的易感基因。     

HLA—DRB1基因多态性与溃疡性结肠炎的相关性研究进展

溃疡性结肠炎（Ulcerativecolitis,uc）是一种直肠和结肠的慢性非特异性炎症性疾病,其病因至今仍未完全阐明,普遍认为与遗传因素和自身免疫异常有关。人类白细胞抗原（Humanleukocyteantigen,HLA）是人类主要组织相容性复合体（MHC）基因的编码产物,是调控人类免疫应答的关键因素之一,其中HLAII类基因参与外源性抗原的递呈,是目前研究的最为广泛的与炎症性肠病相关的区域。HLAII类基因中以HLA—DRB1等位基因的多态性最丰富,国内外大量研究均显示HLA—DRB1基因不仅与uc的发病密切相关,而且与UC的临床特点有关联,但研究的结果并不完全一致,而且其导致特定人群UC易感的分子生物学机制也不十分清楚。本文主要综述HLA．DRB1基因多态性与uc相关性的研究进展。     

上海,无锡地区汉族人群HLADR4基因14种亚型分析

本文应用聚合酶链反应配合限制性内切酶片段长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）分析方法,在１３０例上海、无锡地区汉族人群中发现２３例ＤＲ４基因检测呈阳性,对其ＤＲ４基因的亚型ＲＦＬＰ和分布频率特征进行了研究,结果显示,ＤＲ４基因携带者为１７．７％,存在７种ＤＲ４亚型,以ＤＲＢ１＊０４０５频率最高,构成ＤＲ４阳性人群的４７．８％,其次为ＤＲＢ１＊０４０６和ＤＲＢ１＊０４０３,分别为２１．７％和１７．４％,上     

HLA-B*2736等位基因的序列分析

使用FLOW-SSO、PCR-SSP以及测序等分型技术, 发现一个与HLA-B*270401基因相关的未知基因。设计基因特异性引物单独扩增B*27基因的外显子2-5, 包括内含子2-4, 并进行双向测序, 分析与B*270401基因序列的差异。该基因的扩增产物为1 815 bp。与B*270401相比在外显子3和4共有10个碱基的改变, 从而使相应氨基酸发生错义或同义突变。碱基634 A→C (密码子130丝氨酸→精氨酸); 670 A→T (密码子142苏氨酸→丝氨酸); 683 G→T (密码子146色氨酸→亮氨酸); 698 A→T (密码子151谷氨酸→缬氨酸); 774 G→C (密码子176谷氨酸→天冬氨酸); 776 C→A (密码子177苏氨酸→赖氨酸); 781 C→G (密码子179谷氨酰胺→谷氨酸); 789 G→T (密码子181丙氨酸同义突变); 1 438 C→T (密码子206甘氨酸同义突变); 1 449 G→C (密码子210甘氨酸→丙氨酸)。在IMGT/HLA数据库中B*27组只有3个基因（B*270502 / 2706 / 2732）提交了内含子序列。该未知基因的内含子2序列与B*2706相同, 显示了与B*27组基因的同源性, 但其同源性在内含子3、4均未得到支持, 与B*27组基因相比, 内含子3的第106个碱基C→G, 碱基168缺失, 碱基179 G→A, 碱基536 G→A; 内含子4中碱基82 T→C。但其内含子3、4序列却与B*070201完全相同。该基因序列已提交GenBank, 编号为被DQ915176, 被WHO确认为HLA-B*2736等位基因。     

HLA基因多态性与结核病遗传易感性的研究进展

随着人类基因组计划的完成和功能基因组学的研究的进展,多种结核病候选易感基因被发现,其中人类白细胞抗原（HLA）基因是主要的候选基因之一。HLA基因作为人类最复杂、最具多态性的遗传系统,其功能涉及到机体免疫的各个方面,不同个体对疾病易感性的差异在很大程度上是由遗传因素所决定的,因此HLA基因与某些免疫性疾病的相关性已经成为近年来研究的热点,国内外学者对不同种族的人群对结核分枝杆菌感染的易感性做了大量的研究,探讨HLA基因多态性与结核病遗传易感性的关系。本文对这方面的研究进展做一综述。     

小鼠受精抗原1基因与人类同源基因的关系

参照已报道小鼠受精抗原1（FA1）基因序列设计引物,运用PCR和PCR产物克隆测序等方法,对人受精抗原1（hFAI)基因进行了克隆,并对两进行了比较,结果显示：（1）已报道的小鼠FA1基因序列在其可读框内可能存在两处错误。（2）人OTK27基因可能与小鼠FA1基因同源,即OTK27基因就是人hFA1基因,或FA1基因就是小鼠otk27基因。     

甲基化特异性PCR检测FMR1 和XIST基因甲基化实验方法的建立

建立一种快速、灵敏的检测脆性X智障基因（Fragile X mental retardation, FMR1）和X染色体失活基因（X chromosome inactivation,XIST）甲基化的方法,用亚硫酸氢钠和对苯二酚对基因组DNA进行脱氨基修饰。以修饰后的DNA为模板,用两套不同的引物对：1对甲基化特异性引物和1对非甲基化特异性引物扩增FMR1基因（CGG）n重复序列区、FMR1 和XIST 基因的启动子区。PCR产物进一步克隆、测序。以亚硫酸氢钠和对苯二酚脱氨基修饰后的DNA为模板,进行PCR扩增后的产物与预期基因目的基因片段大小相符合,无非特异性扩增产物。测序结果表明,FMR1、XIST基因中的非甲基化的C碱基转变为U碱基,而CpG岛被甲基化的C碱基不改变。成功地建立了检测FMR1、XIST甲基化的方法,为实验室诊断脆性X综合征提供了新的方法。     

HLA－DRB1基因位点多态性的PCR－RFLP分析

设计并建立一套适合国内应用的改良ＰＣＲ－ＲＦＬＲ方法,分５组特异性扩增ＤＮＡ样品,随后进行酶切定型分析,准确检测了编码ＤＲ抗原特异性的ＨＬＡ－ＤＲＢ１基因位点的多态性,该法采用分组扩增,不发生与其它ＤＲＢ位点等位基因的交叉扩增,不仅适合纯合子的区分而且可以清楚准确地检测杂合子样品,已报道过的ＤＲＢ１位点编码的特异性组合都可以通过这个方法得到准确分析。所使用的Ⅱ类限制性内切酶均价格便宜、易购。     

Association of HLA-DRB1 and DQB1 alleles with red blood cell alloimmunization in Chinese

Few systematic investigations have assessed the correlations between red blood cell (RBC) antibodies and human leukocyte antigen (HLA)-DRB1 alleles in the Chinese population. In this case-control study, we investigated whether specific HLA-DRB1 alleles were associated with RBC alloimmunization by calculating the odds ratios for the frequencies of HLA alleles associated with alloimmunization to different RBC antigens. Three hundred and eight patients harboring RBC alloantibodies were analyzed as the case group, and the frequencies of the HLA-DRB1and HLA-DQB1 alleles in control individuals were analyzed by collecting data from the China Marrow Donor Program (including more than 1.6 million healthy people). HLA alleles were genotyped by single specific primer-polymerase chain reaction. The development of anti-C was associated with DRB1*07, DQB1*06, and DQB1*08; anti-C,e was associated with DRB1*07 and DQB1*06; and anti-E and anti-M were associated with DQB1. Other associations were identified between anti-E and DRB1*09 and between anti-Le^a and DRB1*01. Thus, our findings confirmed that HLA-DRB1 and DQB1 restriction played an important role in the generation of RBC alloantibodies in Chinese individuals.     

Copy number variations of HLA-DRB5 is associated with systemic lupus erythematosus risk in Chinese Han population

Systemic lupus erythematosus （SLE） is a polygenic, systemic, autoimmune disease. Copy number variants （CNVS） have been discovered to be associated with a number of complex disorders. We undertook the current study to explore the potential associations between genomic CNVS and SLE in Chinese Han population. In the discovery stage, seven SLE patients were examined with the high-density comparative genomic hybridization microarrays in the screening test for SLE associated CNVS. Then, in the validation stage, 135 SLE patients and 219 matched healthy subjects were investigated for the CNVS of gene HLA-DRB5 by AccuCopyTM technol- ogy. Quantitative polymerase chain reaction was carried out to determine the copy number （CN） and mRNA level of HLA- DRB5 in SLE patients. Although the mRNA level of HLA- DRB5 between the CN deletion group and the CN normal group in SLE patients was not statistically positive （P = 0.46）, our results still showed more CN of HLA-DRB5 in SLE patients than in healthy controls （P = 3.98×10^-6）. Odds ratio for CN deletion was 0.38 （95% confidence interval （C1）, 0.23-0.61, P = 7.79×10^-5） and for CN duplication was 1.89 （95% CI, 0.56-7.66, P = 0.37）, respectively. These findings indicated that CNVS of HLA-DRB5 was associated with the risk of SLE, and CN deletion appeared to be protective for SLE.     

加载HCMV抗原肽的HLA-A*0201单体及其四聚体制备和鉴定

细胞毒T淋巴细胞(CTL)在控制病原体感染以及抗肿瘤过程中发挥重要作用,因而特异性CTL的检测相当重要;而过去检测CTL的方法都是间接的,最近发展起来的四聚体技术则是直接检测抗原特异性CTL的有效而特异的方法,成为目前研究T细胞免疫应答的关键技术。报道一种简化的四聚体制备程序,利用该程序成功制备加载人巨细胞病毒(HCMV)抗原肽的HLA-A2四聚体,具有特异性结合CTL活性。HLA-A*0201重链基因是通过RT-PCR方法从HLA-A2⁺供者白细胞中克隆,进而以PCR方法构建在羧基端融合生物素化酶BirA底物肽(BSP)的HLA-A*0201(A2)重链胞外区原核表达载体, A2重组蛋白在大肠杆菌中得到高表达,主要以包涵体形式存在。加载抗原肽的可溶性A2单体是A2胞外区在轻链β2微球蛋白和HLA-A2限制性HCMV pp65_495-503抗原肽(NLVPMVATV,NLV)存在时通过稀释法复性获得,以BirA对其进行生物素化,然后以阴离子交换树脂纯化,得到的纯化A2-NLV单体与Streptavidin_PE按4:08比例混合形成四聚体,结合程度在85％以上,流式细胞仪分析显示该四聚体具有与HLA-A2+供者的特异性CTL结合活性。总之,这种简化的四聚体制备程序,不仅有利于该技术的推广,为特异性T细胞免疫研究建立必要的技术平台,而且A2-NLV四聚体在临床监测CMV特异性CTL水平等方面也有应用价值。     

电化学发光在基因检测中的应用

电化学发光基因检测是把电化学发光的高灵敏性和传统分子生物学方法的稳定性结合于一体的一种新型的基因检测技术。与传统的基因检测方法相比,它具有无放射性危害、高灵敏度、操作简便等优点。近年被广泛地应用于核酸序列分析,基因突变分析,遗传病、转基因物种、病毒、微生物等的检测。本文概述了电化学发光的基本原理以及传统的基因检测技术,详细地介绍了电化学发光在当前基因检测中的应用现状,并对其前景作了展望。     

人冠状病毒感染的血清学检测技术进展

人冠状病毒是一类能引起人急性呼吸道感染的病毒,通常引起普通感冒症状,严重者能造成呼吸窘迫综合征甚至死亡。针对人冠状病毒感染的实验室检测,尤其是免疫学检测技术近年来已有大量研究与应用报道。我们简要综述人冠状病毒感染血清学检测技术的最新进展。     

湖南沙子岭猪SLA-DR基因克隆及生物信息学分析

为了克隆湖南沙子岭猪SLA-DRA和SLA-DRB基因, 分析SLA基因特性和抗原多态性, 评价湖南沙子岭猪在异种移植中的应用前景奠定基础。应用RT-PCR分别扩增湖南沙子岭猪SLA-DRA和SLA-DRB基因, 鉴定后克隆到PUCm-T载体并进行测序, 用NCBI中的BLAST和ExPASY中相关软件进行生物信息学分析。得到的湖南沙子岭猪SLA-DRA 和SLA-DRB 基因特异性基因片段, 大小分别为1 177 bp和909 bp。生物信息学分析发现, 所扩增的SLA-DRA 和SLA-DRB 基因片段均包含完整的开放阅读框, 分别编码252和266个氨基酸残基。将湖南沙子岭猪SLA-DRA和SLA-DRB基因在GenBank 登录, 登录号分别为EF143987和EF143988。同源性分析发现, 湖南沙子岭猪SLA-DRA 和SLA-DRB 与人类相应的DRA、DRB相比, 核苷酸序列同源性分别为83% 和83 %, 编码氨基酸同源性分别为83% 和79%。与GenBank 登录的其他猪种相比, SLA-DRA基因同源性最高可达100 %, 而SLA-DRB基因具有多态性。     

安徽汉族免疫性不育症与HLA-DQA1基因的相关性研究

目的:探讨抗精子抗体阳性的免疫性不育症患者与HLA-DQA1基因的相关性。方法:采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术,对50例抗精子抗体阳性的免疫性不育症患者和60例正常健康者的HLA-DQA1基因进行分型研究。结果:2组均未发现DQA1I0104和DQA1I0302两种基因型。免疫性不育症组DQA1I0401等位基因频率明显高于正常对照组(RR=5.5,P<0.05)。结论:DQA1I0401可能是安徽汉族免疫性不育症的易感基因。