(GTG)5探针产生的DNA指纹图在近交系小鼠遗传检测中的应用

目的探讨用非放射性标记的寡聚核苷酸探针(GTG)5进行近交系小鼠的DNA指纹分析。方法用非放射性标记的寡聚核苷酸探针(GTG)5制作BALB/c、C57BL/6J、DBA/2、C3H近交系小鼠的DNA指纹图,对这四个品系的小鼠进行遗传检测,分析各品系内和品系间的遗传变异性。结果(GTG)5探针可产生具有良好多态性的DNA指纹图,平均图带数为8~12条。各品系内的DNA指纹图平均相似系数(-x)在0.96~1.00的范围内,具有相同指纹图的概率(P)均在3.1×10-1以上,极显著地高于品系间的相似系数(0.22~0.39)和相同指纹图的概率(P<1.07×10-4)。结论(GTG)5可用于制作近交系小鼠的DNA指纹图以对其进行遗传检测。     

家禽遗传指纹图研究初报

本文将人源多位点小卫星探针用于鸡和鹌鹑的研究,获得了由约20条带组成的具有个体特异性的遗传指纹图,初步结果表明:未经人为选择的京黄肉鸡和鹌鹑系内的遗传指纹图相似系数分别为0.253和0.248,而经过选择的一个白来航鸡品系内的相似系数则达0.554,遗传指纹图可用于区分不同物种,也有区分同一物种不同品系的潜力,白来航鸡家系研究表明:遗传指纹图具有稳定的遗传性,可以用于亲缘关系的鉴定。     

纵纹腹小鸮DNA指纹谱探针的筛选和初步应用

以人工合成的微卫星序列 (GTG) 5,(GT) 8,(CAC) 5和人源小卫星 33 1 5作引物 ,扩增纵纹腹小的基因组DNA ,产生多态性DNA片段 ,回收了 8个表现个体特异性的片段。当用小的基因组总DNA探针与它们杂交时 ,其中 2个表现阳性 ,说明PCR方法扩增出的高变异产物含有重复序列。用含重复序列的个体特异性PCR产物作探针 ,与无关个体小基因组DNA的HaeⅢ酶切产物进行DNA印迹 ,获得了变异性较高的DNA指纹图谱。且通过对京白鸡家系分析表明 ,用小基因组DNA的PCR产物分离制备的探针所获得的DNA指纹图带能够稳定的遗传。因此 ,高变异的PCR产物可以有效地用作DNA指纹探针。     

纵纹腹小HaoDNA指纹谱探针的筛选和初步应用

以人工合成的微卫星序列（GTG）5,（GT）8,（CAC）5和人源小卫星33.15作引物,扩增纵纹腹小Hao的基因组DNA,产生多态性DNA片段,回收了8个表现个体特异性的片段,当用小Hao的基因组总DNA探针与它们杂交时,其中2个表现阳性,说明PCR方法扩增出的高变异产物含有重复序列,用含重复序列的个体特异性PCR产物作探针,与无关个体小Hao基因组DNA的HaeⅢ酶切产物进行DNA印迹,获得了变性性较高的DNA指纹图谱,且通过对京白鸡家系分析表明,用小Hao基因组DNA 的PCR产物分离制备的探针所获得的DNA指纹图带能够稳定的遗传,因此,高变异的PCR产物可以有效地用作DNA指纹探针。     

鹌鹁几个器官的解剖观察

鹌鹑(Caturnix coturnix)在国内外饲养和应用颇为盛行。家禽饲养业中养鹌鹑成本低,经济效益高,而且比鸡、鸭繁殖快,抗病力强。为了研究鹌鹑的生理特点,掌握其生理规律,提高生产性能,1982年我们对它进行形态结构解剖,并与鸡、鸭作比较。通过三种家禽的解剖观察,看出鹌鹑与鸡、鸭在解剖上显然不同,这些解剖学上的特点和其生理特性是相互适应的。     

寡聚核苷酸探针在近交系小鼠遗传检测中的应用

用两个非放射性标记的寡聚核苷酸探针(GGAT)4和(GTG)5制作BALB/c、C57BL/6J、DBA/2、C3H等4种近交系小鼠的DNA指纹图,比较了两种探针在近交系小鼠遗传检测应用中的重复性和稳定性。结果表明,两种探针对上述4种近交系小鼠产生的DNA指纹图的图带数均为8～12条,具有良好的多态性。品系内的平均DNA指纹图相似系数(-x)在0·92～1·00的范围内,具有相同指纹图的概率(P)均在0·31以上,极显著地高于品系间的相似系数(0·22～0·39)和相同指纹图的概率(P<1·07×10-4)。说明(GGAT)4和(GTG)5两种寡聚核苷酸探针均可用于制作近交系小鼠的DNA指纹图,以对其进行遗传检测。用两种不同的探针进行DNA指纹分析,可以检出基因组中更多的个体特异性信息,结果更加可靠。     

实时荧光PCR法检测肉制品中鸡、鸭源性成分

根据鸡、鸭线粒体DNA(mt DNA)序列设计了鸡、鸭特异性引物及Taqman探针,建立了肉制品中鸡、鸭源性成分的实时荧光聚合酶链式(real-time PCR)检测方法。结果发现:利用此方法,两种动物源性的最低检出限值(质量分数)分别为0.01%和0.001%。实时荧光PCR法能够作为肉制品中检测鸡、鸭源性成分的有效方法。     

鸡的小卫星探针产生的猪DNA指纹图

以一个鸡的小卫星cMS18为探针,对五指山小型猪、长白猪及枫泾猪进行了DNA指纹分析。结果表明,五指山小型猪的相似系数(0.721)显著高于长白猪(0.503)和枫泾猪(0.484),在遗传背景上也与后两者相距甚远。家系分析表明, 鸡的小卫星探针产生的猪的DNA指纹图的遗传符合孟德尔规律。 Abstract:A chicken minisatellite probe cMS18 was used to generate DNA fingerprints of Wuzhisshan microping,Landrace pig and Fengjing pig.It was revealed that similarity coefficient of Wuzhishan microping(0.721)was much higher than both that of Landrace pig(0.503)and of Fengjing pig(0.484).It was shown that Wuzhishan micropig was genetically distant to Landrace pig and Fengjing pig.Analysis of a porcine pedigree using cMS18 probe manifested that the segregation of DNA fingerprint bands was consistent with the Mendelian fashion.     

鹌鹑和三黄鸡IFN-α cDNA的克隆及序列分析

根据GenBank已登录的鸡和鹌鹑IFN-α基因序列,用Oligo6.0设计一对能同时扩增鸡和鹌鹑INF-α基因的共用引物,利用RT-PCR方法从经ConA诱导培养的三黄鸡、鹌鹑外周血淋巴细胞中分别扩增到IFN-αORF全长cDNA,并克隆到pET-28a( )载体上。将测序结果分别与GenBank中已收录的家禽类IFN-α核苷酸序列进行同源性比较及遗传进化分析。结果发现鸡、鹌鹑IFN-αcDNA遗传进化稳定,与GenBank中收录的鸡、鹌鹑IFN-α核苷酸序列同源性为98.6%~99.8%、99.8%。鸡与其它家禽类的IFN-α核苷酸序列比较分析发现,与鹌鹑亲缘性较高,同源性达86.9%~87.1%,但与家水禽(鸭、鹅)差距较大,同源性最高也只有67.6%;鹌鹑IFN-α核苷酸序列与家水禽同源性在也只在62.7%~62.9%之间;基因遗传进化树分析可见家禽类IFN-α被分成两个大分枝,分别是由鸡和鹌鹑两个小分支组成的一个大分支与家水禽独立分支组成。     

用随机扩增多态性DNA产物做探针产生鸡的DNA指纹图

我们用12个随机扩增多态性DNA(RAPD)引物对来自不同品系的4只鸡进行了RAPD分析,在扩增出的共99条带中,表现多态性的带为38条,占总带数的38％.回收了4个表现个体特异性的RAPD产物,当用鸡的基因组总DNA探针与它们杂交时,其中3个表现阳性,说明RAPD方法扩增出的高变异产物含有重复序列.用含重复序列的个体特异性RAPD产物作探针,与无关个体鸡基因组DNA的HaeⅢ酶切产物进行DNA印迹,获得了变异性较高的DNA指纹图谱.因此,高变异的RAPD产物可以有效地用作DNA指纹探针.     

用DNA指纹法研究野生天鹅种群的遗传分化

DNA指纹技术自问世以来,已被广泛地用于法医学上个体识别和亲缘关系的鉴定。此外,人源DNA指纹探针(即多位点型小卫星探针)还被用于动植物等的研究,特别是在研究动物的繁育规律方面成效显著。近一两年来,DNA指纹技术也在分子水平上用来研究种群分化,为物种起源研究开辟了新的途径。本文利用人源多位点型小卫星探针,对分布在英国和美国的四种天鹅(小天鹅、疣鼻天鹅、大天鹅和喇叭天鹅)的种群结构和天鹅小卫星的分化初步进行了研究。用酶HaeIII和探针pSPT19.6分析了分布在英国的疣鼻天鹅种的两个群体(洛锡安群体和阿伯茨伯里群体)的DNA指纹图,结果表明两群体之间的遗传变异性大于群体内的遗传变异性;洛锡安群体内小卫星的变异程度较高。虽然小卫星在基因组中的作用尚不清楚,但某些天鹅小卫星在种间发生了分化,因而同一个种内不同个体的DNA指纹图有一些共同的特征,导致DNA指纹图的物种特异性。DNA指纹分析表明:小天鹅、大天鹅和喇叭天鹅在遗传上比较接近,而疣鼻天鹅与它们在遗传上相距较远,这与原来对天鹅种下分类情况是一致的。就遗传变异程度而言,在英国仕林布里奇的小天鹅为最高,英国卡拉乌尔洛克的大天鹅次之,英国阿伯茨伯里的疣鼻天鹅居第三,美国蒙大拿的喇叭天鹅最低。我们认为,基因迁移和遗传漂变对     

五指山猪生物学特性、易地繁育及遗传多样性研究

五指山猪是我国濒临灭绝的珍稀品种,为保护和利用这一特有种猪基因资源,我们开展了易地繁育和生物学特性及遗传多样性的研究。通过对其生长发育规律、繁殖生理、血液生理生化、遗传标记、DNA指纹图谱等项的观察和测试,发现五指山猪具有体型小、性成熟早、耐近交繁殖、遗传性较稳定、肉质好等特点。白细胞分类中淋巴细胞占77％,白细胞抗原(SLA) 血清学分型中,与其它品种之间存在有差异性。 用人源小卫星探针33.6和鸡小卫星探针cMS18,对五指山猪及长白猪和枫泾猪进行DNA指纹图比较分析,发现五指山猪的DNA指纹图相似系数,大大高于其它已研究过的正常体型猪种,说明它经历过较高程度的近交;以猪的生长激素（GH）cDNA为探针,用EcoRI、EcoRV、PstI等酶切基因组DNA进行RFLP分析时,五指山猪均出现了一条深色带,而长白猪和枫泾猪未发现。表明五指山猪在生长激素位点上与正常体型猪种亦存在差异。     

家禽MHC结构研究进展

禽主要组织相容性复合体(Major histocompatibility complex,MHC)的结构与禽病防控、禽免疫学、禽类遗传学研究密切相关。文章对鸡、火鸡、鹌鹑、鸭和鹅的MHC结构方面的研究进展进行了综述,表明其有以下共同特点:都有保守的MHC区域,包括MHC I基因和MHC II基因及一些功能未知基因;基因排列简单而紧凑;MHC I基因内含子的长度都比哺乳动物小;鸡、火鸡、鸭和鹅的MHC I基因组序列都有8个外显子和7个内含子,MHC IIβ基因组序列都有6个外显子和5个内含子;鸡、火鸡和鹌鹑的BG基因结构模式相同;都存在微卫星重复单元。但也存在种属差异:鸡的MHC I基因和MHC II基因是双拷贝,而鸭、鹅和鹌鹑有若干个拷贝;BG基因的拷贝数及其外显子数目不同。对主要家禽MHC结构进行分析比较,将有利于对禽病学及禽免疫遗传学的进究。     

鸭肝炎病毒感染和垂直传播的研究

用α-~(32)P-dATP-DHBV DNA探针做斑点杂交试验、检测了不同鸭种血清中携带DHBV情况。其中北京鸭与樱桃谷鸭的杂交种鸭杂交阳性率为5.1％;而不同鸭龄不同饲养条件的高邮麻鸭血清阳性率32.7—58.8％,经EM检测均在血清中找到病毒颗粒。将DHBV DNA不同的亲代配对所组成的四个组分群饲养,观察产卵后再孵化出的雏鸭DHBVDNA阳性率。第一组(♀-(?)-)为0％,第二组(♀ (?) )为100％,第三组(♀-(?) )28％,第四组(♀ (?)-)100％。然而亲代雌雄鸭均为DHBV DNA阴性的雌鸭所产卵在孵化到第9天时,经尿囊腔注射1×10~9病毒颗粒/m110μl的血清,孵出雏鸭时DHBV DNA阳性率达83.3％。     

蛋壳的故事

人类经常食用鸡蛋,却很少关注蛋壳.其实,不同的禽类,如鸡、鸭、鹅、鹌鹑等,其蛋壳也是大有文章.蛋壳的结构     

辣根过氧化物酶标记DNA探针及光增强检测DNA指纹图在法医应用的研究

本文介绍了用辣根过氧化物酶直接标记DNA探针,光增强检测DNA指纹图的技术,所得图谱清晰易读,分辨率高,灵敏度为0.8μg,接近~(32)P同位素标记的水平。就150名无关个体的DNA指纹图分析表明两个个体图谱完全相同的机率是3.7×10~(-14);方法稳定性测定表明,足以取代同位素标记,用作准确的个人识别和亲子鉴定,为侦破强奸、凶杀等案件提供重要科学依据,该法简便,快速,适用于各实验室,易于推广应用。     

主要组织相容性复合体单倍型鸭抗原处理相关转运体单抗的制备

目的制备鸭抗原处理相关转运体(TAP)特异性单抗,为深入利用实验鸭开展免疫学研究提供实验材料。方法利用大肠埃希菌诱导表达主要组织相容性复合体(MHC)单倍型HBW-SPF鸭TAP蛋白肽结合区片段,表达产物经镍柱纯化后免疫BALB/c小鼠,采用ELISA技术筛选特异性单抗分泌杂交瘤细胞株。将阳性细胞株制备小鼠腹水,作为一抗,与多次截短表达TAP蛋白肽结合区进行蛋白免疫印迹试验,鉴定单抗针对的抗原表位。通过间接免疫荧光试验比较该单抗对实验鸭和鸡外周血淋巴细胞的反应性,利用免疫组织化学技术检测对SPF鸡、SPF鸭、鹌鹑、鹅和SPF猪的特异性。结果获得一株鸭TAP单抗1A6,抗原表位位于²⁹⁷NARHQMLQQAVLDATAGTGMVVQEAI³²²,对鸡和鸭外周血淋巴细胞具有免疫荧光反应性;在鸡和鸭的肠黏膜固有层检测到大量特异性信号,在猪、鹌鹑和鹅没有检测到信号。结论获得了一株具有鸡和鸭反应性的抗原转运相关体特异性的单抗,可运用于禽类实验动物在禽病学和禽免疫学方面的研究。     

鸡鸭异种间嵌合体的制备

本研究采集孵化14期鸡胚血液中的原始生殖细胞,在液氮中冷冻保存三个月后,解冻成活率达80％以上。以Ficoll密度梯度离心将其从血液中分离纯化,分离获得纯度为27.5%,平均每枚胚胎可获得近50个PGCs。将分离的PGCs 100-200个以微注射法转移至15期早期麻鸭胚胎中制备了鸡鸭种间嵌合体,孵出8（6♂,2♀）只雏鸭,总孵化率为7.3%（8／110）。以鸡W染色体特异性DNA探针原位杂交法在早期鸭胚性腺中检测鸡PGCs。在被检测的21个鸭胚的性腺中,16个有不同程度的阳性信号,嵌合率达76.2%(16/21)。实验结果表明鸡原始生殖细胞能够迁移并定居到鸭胚性腺中,并有可能在鸭性腺中增殖分化成有功能的配子。     

DNA指纹技术的应用及局限性

DNA指纹图谱是一种在一单一实验中可检测出大量DNA位点差异性的分子生物学技术。自1985年Jeffeys et al,从人的肌红蛋白位点获得第一个多位点探针并用于检查人类基回的VNTRs以来,由于各种高水平探针如微卫星探针、寡聚核苷酸探针的相继问世,使DNA指纹技术在动植物科学研究、遗传疾病的诊断、基因图谱的绘制,遗传标记的寻找及法医学等方面得到广泛应用,充分表现了此技术的优越性。当然此技术还需进一步完善。