检测中国对虾非包涵体型杆状病毒的PCR方法的建立

中国对虾非体型杆状病毒（ＰｃＮＯＢＶ）是中国大陆养殖的中国对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）暴发性流行病－－白斑征的主要病原,与台湾流行的ＰｍＮＯＢⅢ、泰国的ＰｍＮＯＢⅡ及日本的ＲＶ－ＰＪ（＝ＰＲＤＶ）有相似的致病特征、形态学及组织病理学特征。为了角ＰｃＮＯＢＶ与ＰｍＮＯＢⅢ两种地域分布邻近的毒株基因水平的关系,并建立早期、敏感、特异的检测技术,利用氯化铯密度梯度超速离心技术分离纯化了ＰｃＮ     

多重PCR法检测对皮下和造血器官坏死杆状病毒

根据对虾皮下和造血坏死杆状病毒（ＨＨＮＢＶ）ＨＨＮＢＶ－ＸＩＡ靶基因序列设计了４个多重ＰＣＲ法用引物（Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４）。采用了五种引物组合形式分别对ＨＨＮＢＶ－ＸＩＡ、ＨＨＮＢＶ基因和ＰＲＤＶ－ＪＡＰＡＮ片段进行了物异扩增,建立了多重ＰＣＲ检测ＨＨＮＢＶ方法。通过优化多重ＰＣＲ法检测ＨＨＮＢＶ条件,可从阳性感染的中国对虾ｆｇ级ＤＮＡ中定性检测出皮下和造血器官坏死杆状病毒。     

中国对虾杆状病毒基因克隆及探针制备与检测

从收集的中国对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）病虾样品中分离到一种杆状病毒,经负染在电镜下观察,完整病毒粒子大小为１１０×２８０～３２０ｎｍ。病毒核酸经ＥｃｏＲＩ酶切,克隆到ｐＵＣ１８质粒上,经筛选得到两个克隆Ｌ４６、Ｍ１３,克隆片段分别为２．１４ｋｂ和３．５８ｋｂ。将这两个基因片段和对虾白斑综合征杆状病毒（ＷｈｉｔｅＳｐｏｔＳｙｎｄｒｏｍｅＢａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ,简称ＷＳＳＶ）基因克隆片段Ａ２６制备探针,共同用点杂交法对我国沿海地区的病虾样品进行检测,以了解我国沿海地区对虾杆状病毒的分布,并确定中国对虾杆状病毒与ＷＳＳＶ的同源性。     

中国对虾16 S rRNA基因序列多态性的研究

利用ＰＣＲ技术扩增获得中国对虾（Ｐｅｎａｅｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）线粒体ＤＮＡ的１６Ｓ ｒＲＮＡ基因片段,通过测定该基因片段的序列,分析了取自我国烟台、长岛近海和宁波养殖的１７只中国对虾遗传多态性。结果发现,不同地理种群存在丰富的ＤＮＡ序列多态性,１７只个体具有１７种基因型,在扩增的长为５２３ｂｐ的基因片段中,共检测到３７个多态性核苷酸位点（７．０７％）。ＵＰＧＭＡ法构建的分子系统树表明不同地理     

原位杂交研究对虾白斑杆状病毒在虾体内感染过程

应用地高辛标记的对虾白斑杆状病毒（ｗｈｉｔｅ ｓｐｏｔ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ,ＷＳＳＶ）核酸探针,与人工感染后不同时间采集的对虾组织样品进行原位杂交,以动态研究病毒从侵染至对虾以病死亡的过程。将典型感染ＷＳＳＶ的病虾组织投喂健康对虾,结果显示：ＷＳＳＶ道德通过侵染消化道上皮进入虾体内增殖,此后随着细胞裂解、病毒粒子释放,游离的粒子伴随血淋巴循环进而杂其它靶组织,直至对虾发病死亡     

鼻咽癌Epstein—Barr病毒受体（EBVR／CR2）基因的病毒结合区的序列测定

Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ病毒（ＥＢＶ）进入鼻咽上皮细胞的途径,是人们研究ＥＢＶ与鼻咽癌（ＮＰＣ）的病因关系时所必须回答的一个问题。用抗ＥＢＣ受体（ＥＢＶＲ／ＣＲ２）单抗检测上皮细胞中该受体的表达已有报道,但对上皮细胞中ＥＢＶＲ／ＣＲ２的基因结构仍需研究。我们采用ＰＣＲ扩增和不对称ＰＣＲ直接测序法,首次检测了１０例ＮＰＣ及３例正常人胚鼻咽上皮（Ｈｕｍａｎ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅ     

中国对虾cDNA文库的构建

中国对虾ｃＤＮＡ文库的构建ＣＯＮＳＴＲＵＣＴＩＯＮＯＦｃＤＮＡＬＩＢＲＡＲＹＯＦＳＨＲＩＭＰＰＥＮＡＥＵＳＣＨＩＮＥＮＳＩＳ（ＣＲＵＳＴＡＣＥＡ,ＤＥＣＡＰＯＤＡ）关键词中国对虾ｃＤＮＡ文库构建ＫｅｙｗｏｒｄｓＰｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ,ｃＤＮ...     

应用循环逆转录PCR技术检测丙型肝炎病毒RNA

循环逆转录（ｃｉｒｃｕｌａｔｏｒｙ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ,ＣＲＴ）是线性增长逆转录ｃＤＮＡ产量的一种新技术。为了将该技术用于检测ＨＣＶ ＲＮＡ,通过改变ＣＲＴ的循环次数,结合竞争ＰＣＲ,作出标准曲线。采用１６次ＣＲＴ加３４次循环ＰＣＲ检测了１３６例ＨＣＶ ＥＬＩＳＡ阳性、５４例ＨＣＶ ＥＬＩＳＡ阴性和１０８例临床可疑病人全血标本,并与逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）和巢式ＰＣＲ（     

套式PCR检测婴幼儿巨细胞病毒感染

本文采用套式ＰＣＲ（Ｎｅｓｔｅｄｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）技术对６１例婴儿肝炎综合征（Ｎｅｏｎａｔａｌｈｅｐａｔｉｔｉｓ）患者进行了ＨＣＭＶ（Ｈｕｍａｎｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ）检测,结果表明,当只用一对引物进行ＰＣＲ时,检出３３例患者为ＨＣＭＶ阳性,阳性检出率为５４．１％;而采用套式ＰＣＲ后,有１７例为ＨＣＭＶ阳性,阳性检出率提高到７７．０％。可见套式ＰＣＲ方法的阳性检出率明显高于单一ＰＣＲ,并远高于目前使用的其它方法。同时也说明ＨＣＭＶ是导致肝炎综合征的主要病原体之一。此外,灵敏性和特异性试验表明,套式ＰＣＲ技术的敏感度高、特异性强、简单快速,在临床检测和诊断中具有很大的潜力。     

峨眉山自然保护区的虫草及其它昆虫病原真菌I.

采自四川省峨眉山自然保护区的虫草及其相关昆虫病原真菌,其中除有常见的蛹虫草Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓｍｉｌｉｔａｒｉｓ（Ｖｕｉｌｌ）,Ｆｒ粉被虫草（ＣｏｒｄｙｃｅｐｓｐｒｕｉｎｏｓａＰｅｔｃｈ）蝉拟青霉Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓｃｉｃａｄａｅ（Ｍｉｑｕｅｌ）Ｓａｍｓｏｎ,球孢白僵菌Ｂｅａｕｖｅｒｉａｂａｓｓｉａｎａ（Ｂａｌｓ．）Ｖｕｉｌｌ等昆虫病原真菌外,将主要描述峨眉虫草新种（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓｅｍｅｉｅ     

鼻咽癌Epstein－Barr病毒受体（EBVR／CR＿2）基因的病毒结合区的序列测定

Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ病毒（ＥＢＶ）进入鼻咽上皮细胞的途径,是人们研究ＥＢＶ与鼻咽癌（ＮＰＣ）的病因关系时所必须回答的一个问题。用抗ＥＢＶ受体（ＥＢＶＲ／ＣＲ＿２）单抗检测上皮细胞中该受体的表达已有报道,但对上皮细胞中ＥＢＶＲ／ＣＲ＿２的基因结构仍需研究。我们采用ＰＣＲ扩增和不对称ＰＣＲ直接测序法,首次检测了１０例ＮＰＣ及３例正常人胚鼻咽上皮（Ｈｕｍａｎｅｍｂｒｙｏｎｉｃｎａｓｏｐａｒｙｎｇｅａｌｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ,ＨＥＮＥ）组织样本中ＥＢＶＲ／ＣＲ＿２的ＥＢＶ结合区的编码序列。这一片段的ＤＮＡ序列测定结果显示,人ＮＰＣ细胞和正常ＨＥＮＥ细胞的ＥＢＶＲ／ＣＲ＿２的ＥＢＶ结合区的编码序列,与正常人Ｂ淋巴细胞的ＥＢＶＲ／ＣＲ＿２的相应序列完全相同,提示ＥＢＶ感染鼻咽上皮细胞可能与ＥＢＶＲ／ＣＲ＿２基因的ＥＢＶ结合区结构改变无直接关系。     

EB病毒胸苷激酶基因的定向克隆

采用异硫氰酸胍（ＧｕＳＣＮ）和硅藻从Ｂ９５－８细胞中快速抽摸板ＤＮＡ。根据ＥＢ病毒（ＥＢＶ）Ｂ９５－８株ＤＮＡ全序列及编码ＥＢＶ胸苷激酶（ＴＫ）的开放读框ＢＸＬＦ１的结构,设计合成一对引物,并在引物的５′一端分别引入ＥｃｏＲＩ和ＰｓｔＩ切点,用ＰＣＲ技术扩增出一含完整的ＥＢＶＴＫ基因的１．８４３ＫｂＤＮＡ片段,ＮｃｏＩ酶切分析鉴定,ＥｃｏＲＩ／ＰｓｔＩ双酶切ＰＣＲ产物和载体,使目的基因定向克隆至选     

应用套式PCR对恶性卡他热病毒在不同动物体内变异的研究

应用本实验建立的三组套式ＰＣＲ（ＰＣＲ１、２、３）和一组以前报道的套式ＰＣＲ（ＰＣＲ４）,对５９份外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）ＤＮＡ样品进行了恶性卡他热病毒（Ｍａｌｉｇｎａｎｔｃａｔａｒｒｈａｌｆｅｖｅｒｖｉｒｕｓ,ＭＣＦＶ）核酸序列的检测。这些样品来自５１只羊,以及与羊接触而发病的６头牛和２只鹿。除ＰＣＲ４外,其它三组ＰＣＲ都能扩增现有４个角马型ＭＣＦＶ分离株。有６只羊在４组ＰＣＲ中都呈阴性,其余５３份样品经ＰＣＲ４检测均呈阳性。ＰＣＲ１只能从４５只羊体检出ＭＣＦＶＤＮＡ,未能从牛和鹿体检出病毒ＤＮＡ。ＰＣＲ２检测的所有样品均呈阴性。在ＰＣＲ３扩增中,除２头牛外,其它５１份样品均呈阳性。通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和限制性酶切分析,对ＰＣＲ１－４产物的特异性进行了鉴定。此外,敏感性实验表明,四组ＰＣＲ的差异也不明显。因此,本实验结果说明ＭＣＦＶ基因组在不同种动物之间发生了变异,羊体内的变异株可能是导致其它反刍动物发病的病原     

一种有推广价值的快速全血PCR技术

一种有推广价值的快速全血ＰＣＲ技术张立冬张杰朱天慧（南开大学医学院,天津３０００７１）ＡＶａｌｕａｂｌｅＲａｐｉｄＰＣＲＭｅｔｈｏｄＵｓｉｎｇＷｈｏｌｅＢｌｏｏｄＺｈａｎｇＬｉｄｏｎｇＺｈａｎｇＪｉｅＺｈｕＴｉａｎｈｕｉ（ＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｅｇｅｏ...     

中国丙型肝炎病毒基因型研究新进展

为了进一步了解中国丙型肝炎病毒基因型感染状态 ,我们建立了 5′ ＮＣＲＡＢＣ程序酶切分型法 :首先采用ＲＴＰＣＲ技术 5′ ＮＣＲ扩增ＨＣＶＲＮＡ阳性样品中的ｃＤＮＡ ,然后按照ＡＢＣ程序进行分型 ,Ａ应用ＢＨＨ(ＢｓｒＢⅠ ,ＨａｅⅡ ,ＨｉｎｆⅠ )复合内切酶消化 5′ ＮＣＲｃＤＮＡ ,Ｂ应用ＢｓｔＵⅠ消化 ,Ｃ应用ＨａｅⅢ消化 ,电泳检测片段大小。应用该方法对临床采集的ＨＣＶＲＮＡ阳性血清进行分型 ,在国内首次发...     

用显微切割技术和催化信号扩增法检测何杰金病瘤细胞（H／RS）中的 …

为明确何杰金病（Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ,ＨＤ）瘤细胞中是否存在人巨细胞病毒（ｈｕｍａｎ ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ,ＨＣＭＶ）感染,采用显微切割技术结合ＰＣＲ方法检测ＨＤ组织及其瘤细胞Ｈｏｄｇｋｉｎ／Ｒｅｅｄ－Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ（Ｈ／ＲＳ）中的ＨＣＭＶ核酸;采用免疫组织化学催化信号扩增（ｃａｔａｌｙｓｅｄ ｓｉｇｎａｌ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ,ＣＳＡ）法检测ＨＤ中ＨＣＭＶ的立即     

昆虫杆状病毒衣壳主蛋白基因的PCR扩增,克隆和定位

用ＰＣＲ技术成功地扩增了苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）的衣壳主蛋白基因（ｖｐ３９基因）,并克隆了该基因,利用纯的ｖｐ３９基因探针,在低严谨杂交条件下,已将粘虫核型多角体病毒（ＬｓＮＰＶ）的ｖｐ３９基固定位在ＰｓｔＩ－Ｆ,ＢａｍＨＩ－Ｃ,ＥｃｏＲＩ－Ｃ,ＸｈｏＩ－Ｄ,Ｉ,ＥｃｏＲＶ－Ｈ,Ｘ等片段上。ＰＣＲ反应时,在扩增出预期的包括完整ｖｐ３９基因的１４０６ｂｐ片段的同时也扩增出一条Ｃａ．４００ｂｐ的片段,本文讨论了ＰＣＲ的特异性扩增和非特异性扩增。     

抗甜菜坏死黄脉病毒单链抗体表达载体的构建及其表达

用ＰＣＲ方法以分泌抗甜菜坏死黄脉病毒（ＢＮＹＶＶ）单克隆抗体的杂交瘤细胞的基因组为模板,扩增了编码ＢＮＹＶＶ单抗的重链可变区（ＶＨ）基因。测序表明,该ＶＨ序列属于小鼠ＩＩ（Ａ）亚类,全长为３６０ｂｐ,编码１２０个氨基酸。将其和先前克隆的轻链基因分别插入到一个含有连接ＶＨ和ＶＬ基因的连接序列的质粒之中,构建成单链抗体（ｓｃＦｖ）基因的表达载体ｐＴＣｓｃＦｖ。将质粒在大肠杆菌中表达,ＥＬＩＳＡ法检测出     

TORCH综合征与先天性畸形

近年来,先天性感染引起新生儿畸形死亡的人数日益增加, Ｔ Ｏ Ｒ Ｃ Ｈ 是一组能引起先天性感染的病原微生物。１９７１ 年 Ｎａｈｍ ｉａｓ 等将引起先天性感染的病原体用英文字头命名,称为 Ｔ Ｏ Ｒ Ｃ Ｈ 感染或 Ｔ Ｏ Ｒ Ｃ Ｈ 综合征。 Ｔ 代表弓形体（ Ｔｏｘｏｐｌａｓｍ ａ ｇｏｎｄｉｉ, Ｔ Ｏ Ｘ Ｏ）, Ｏ为其它（ Ｏｔｈｅｒ,包括很多种病毒）, Ｒ 表示风疹病毒（ Ｒｕｂｅｌｌａ ｖｉｒｕｓ）, Ｃ代表巨细胞病毒（ Ｃｙｔｏｍ ｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ, Ｃ Ｍ Ｖ）, Ｈ 表示单纯疱疹病毒（ Ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍ ｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ, Ｈ Ｓ Ｖ）。随着病原微生物学、免疫学和流行性病学研究的进展,又发现了多种能引起先天性感染的病原微生物,如水痘--带状疱疹病毒（ Ｖａｒｉｃｅｌｌａ ｚｏｓｔｅｒ ｖｉｒｕｓ, Ｖ Ｚ Ｖ）,麻疹病毒（ Ｍｅａｓｌｅｓ ｖｉｒｕｓ, Ｍ Ｖ）, 流 行性腮 腺炎 病毒（ Ｐａｒｏｔｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ, Ｐ Ｖ）, 人类免 疫缺 陷病毒 （ Ｈｕｍ ａｎｉｍ ｍ ｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ, Ｈ Ｉ Ｖ）,丙型肝炎病毒（ Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｖｉｒｕｓ, Ｈ Ｃ Ｖ）,人类疱疹病毒６型（ Ｈｕｍ ａｎ ｈｅｒｐｅｓ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ ６, Ｈ Ｈ Ｖ ６）,肠道病毒（ Ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ, Ｅ Ｖ）,乙型肝炎病毒（ Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ, Ｈ Ｂ Ｖ）,人类乳头瘤病毒（ Ｈｕｍ ａｎ ｐａｐｉｌｌｏｍ ａｖｉｒｕｓ, Ｈ Ｐ Ｖ）, Ｅ Ｂ 病毒（ Ｅｐｓｔｅｉｎ Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ, Ｅ Ｂ Ｖ）,人类微小病毒 Ｂ１９（ Ｈｕｍ ａｎ ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ Ｂ１９, Ｈ Ｐ Ｖ Ｂ１９）和人类嗜血细胞病毒１ 型（ Ｈ Ｔ Ｌ Ｖ １）等。 Ｔ Ｏ Ｒ Ｃ Ｈ 感染的特点是孕妇患其中任何一种疾病后,本人的症状极其轻微,或根本没有症状和特征。病原体虽不相同,却能使胎儿或新生儿出现相同或相似的临床表现,有时还很严重,甚至导致死亡。如在怀孕早期感染,则发生流产、死胎和胎儿畸形。中晚期感染,导致胎儿不同程度畸形和脏器损害。     

HBV－DNA的PCR二步法扩增及其快速检测

ＨＢＶ－ＤＮＡ的ＰＣＲ二步法扩增及其快速检测方勤,吴云涛,蔡宜权（中国科学院武汉病毒研究所,武汉４３００７１）关键词ＨＢＶ－ＤＮＡ,二步温控ＰＣＲ,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交,生物素寡聚核苷酸杂交乙型肝炎是危害人类健康的主要疾病之一,其病原常用的检测方法多...