正常骨髓细胞的分化与SCE值

有关SCE率变化的生物学意义至今仍不明了,尽管有人认为不均等SCE可能导致基因的扩增,但SCE变化是否与细胞的增殖和分化有关,现仍不清楚。总结应用BrdU-SCE方法十多年来的工作,特别是我们自己工作的结果,我们得出一个印象:SCE     

MS_3RNA在小鼠胚胎癌细胞中特异表达的可能机理(英文)

MS3 RNA是小鼠胚胎癌细胞特异RNA。为了阐明MS3基因在未分化细胞中特异表达的机理，我们应该首先确定此特异表达是在哪一级水平上被调控的。Naveh-Many等（1981）指出积极进行转录的基因一般是甲基化程度不足的。由于MS[3]基因有一个中等重复的家族，因此如果MS[3]基因的调控主要在转录水平上进行，我们应该发现MS[3]基因的甲基化程度在分化细胞及未分化细胞之间有明显差别，于是用测定甲基化程度的一组酶Hpa Ⅱ和Msp 1水介代表分化细胞的TDM[1]及代表未分化细胞的F[9]的高分子量DNA，然后用MS[3] Cdna作探针分析MS[3]基因区的甲基化程度。在可用MS[3] Cdna探查到的范围内，MS[3]基因区的甲基化程度在TDM[1]及F[9]细胞中未见明显不同。对这一结果可有四种不同解释：①MS[3]基因家族中除少数成员外其余绝大部分成员在未分化细胞中是不转录的，在分化细胞中则全部不转录；②MS[3]基因家族的绝大部分成员在未分化细胞以及在分化细胞中都是转录的；③虽然MS[3]基因家族中的绝大部分成员都是不转录的，但个别成员在未分化细胞以及分化细胞中都是转录的；④由于MS[3] Cdna只能探查MS3基因的分端区域，可能此区域的甲基化程度与MS[3]基因的转录水平无关。为了区别这些可能性，我们检查了F[9]细胞及TDM[1]细胞中的核RNA，发现在这二种细胞核内都存在着数量几乎相等的大量MS[3]基因转录物。因此我们推断，MS[3]基因家族中至少有一部分成员，很可能是大部分成员，不论在未分化细胞还是在分化细胞中都是转录的。在已分化细胞的细胞质中不能探查到MS[3] RNA的原因可能在于MS[3]基因在转录后水平上的调控，即在已分化细胞的核内缺乏加工MS[3] RNA前体的能力或缺乏把成熟的MS[3] RNA从细胞核输送到细胞质中去的能力。     

高原低氧免疫损伤及其干预措施的研究

目的:探讨高原低氧损伤免疫系统的特征及其可能机制,研究高原低氧免疫损伤的干预措施。方法:测定低氧暴露不同时间小鼠免疫器官指数、外周血和免疫器官T淋巴细胞亚群的变化;观察小鼠免疫器官淋巴细胞凋亡率及小鼠肺脏和肾脏病理学改变。采用预防给药方式,研究中药组方对低氧免疫损伤小鼠的干预作用。结果:①模拟海拔8000m低氧暴露8h后,小鼠胸腺CD4+CD8+细胞数显著下降,CD4+CD8-、CD4-CD8+细胞数显著增加(P0.01);低氧暴露3d后,外周血CD4+细胞明显减少(P0.05),CD4+/CD8+比值显著降低(P0.05),胸腺CD4+CD8+细胞数进一步下降,CD4+CD8-、CD4-CD8+细胞数进一步增加,小鼠脾脏、胸腺淋巴细胞晚期凋亡和坏死率均显著增加(P0.05);低氧暴露6d后,小鼠脾指数显著性增加(P0.01);胸腺指数显著性降低(P0.01),脾CD4+、CD8+细胞数显著降低(P0.01),脾脏和胸腺淋巴细胞晚期凋亡率和坏死率进一步增加(P0.01),活细胞率显著降低(P0.01),脾脏淋巴细胞早期凋亡率显著增加(P0.01)。整个低氧暴露过程中外周血CD8+无显著性变化。②新复方党参、香杞多糖、二者联合应用均能显著增加低氧免疫损伤小鼠外周血CD3+、CD4+、脾脏CD4+的细胞水平(P0.01,P0.05),对脾脏CD8+细胞水平没有显著影响。香杞多糖及其与新复方党参联合应用均能进一步降低胸腺CD4+CD8+,进一步增加CD4+CD8-的细胞水平(P0.01),未见对CD4-CD8+细胞水平的影响;新复方党参对低氧免疫损伤小鼠胸腺没有显著性影响。结论:模拟海拔8000m低氧暴露后小鼠外周发挥免疫作用的淋巴细胞数减少可能与低氧暴露早期淋巴细胞凋亡率和坏死率增加和肺脏淋巴细胞分布增多有关。新复方党参和香杞多糖作为低氧免疫损伤干预措施,具有一定发展前景。     

化学诱变物诱发小鼠脾脏细胞和大麦根端分生组织细胞姐妹染色单体交换的比较研究

诱变剂诱发SCE的增加在大麦细胞中比在小鼠脾脏细胞中所需浓度较低,说明植物SCE比动物体内SCE敏感。所检测的诱变剂大多均能在小鼠脾脏细胞和大麦细胞中诱发SCE的增加,两者之间的SCE/细胞、SCE/pgDNA、SCE比率、SCE/pgDNA增加等项数值均显示极显著相关性,表明所检测的几种诱变剂在小鼠脾脏细胞和大麦细胞中最终诱发SCE的效应是一致的。     

蛋白酶3对造血干/祖细胞增殖和分化的影响

蛋白酶3(proteinase 3, PRTN3)是一种中性丝氨酸蛋白酶,与病原体清除、组织损伤和细胞凋亡有关。近期研究发现, Prtn3在造血干/祖细胞中高表达,但其生物学功能及意义仍不清楚。围绕上述问题,该文采用单细胞转录组测序方法分析Prtn3基因在野生型小鼠(WT)血细胞中的表达情况;构建Prtn3基因敲除小鼠(Prtn3–/–),并采用流式细胞术和血常规分别分析Prtn3–/–小鼠骨髓中的LT-HSC、ST-HSC、MPP、CMP、GMP、MEP及分化成熟细胞的数目和比例;体外干/祖细胞单细胞和集落培养法分析LSK细胞的增殖和分化潜能;竞争移植实验分析Prtn3–/–小鼠LSK细胞的竞争能力以及外周血、脾脏和骨髓中各种血细胞的数目和比例;免疫荧光法分析Prtn3–/–小鼠脾脏和骨髓中的供体血细胞分布。结果显示, Prtn3在小鼠造血干/祖细胞,尤其是在髓系祖细胞(CMP和GMP)中持续高表达; Prtn3–/–小鼠骨髓中LSK和LK细胞所占比例显著高于WT小鼠骨髓中LSK和LK细胞的比例且表现为LT-HSC、ST-HSC、MPP、CMP及GMP在骨髓细胞中的比例均显著增加(P...     

小鼠体内脾脏,骨髓及精原细胞姐妹染色单体交换的比较研究

本文对几种化学诱变剂诱发小鼠体内脾脏、骨髓和精原细胞的SCE进行了比较研究,同时分析了几类常见化合物在小鼠脾脏细胞中诱发SCE的活力。结果显示诱变剂在脾脏细胞中诱发SCE比骨髓和精原细胞敏感。几类化合物都能显著地诱发小鼠脾脏SCE的增加,与对照相比差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01),说明利用小鼠脾脏细胞检测环境诱变物是相当灵敏的。     

洋金花总碱对细胞染色体损伤的观察

洋金花为曼陀罗属植物的千燥花,所含生物碱中以东.R若碱为主,其次为莫蓉碱^[1]。洋金花总碱已广泛用于临床治疗。本文从遗传毒理学角度观察了洋金花总碱对离体细胞(Wg3-h细胞株）姐妹染色单体互换率（SCE)、染色体畸变率（CA）和活体小鼠骨髓多染红细胞微核率（PCEMN）的影响,以及银屑病患者接受治疗前后SCE变化的比较,认为它对染色体有损伤作用,现报告如下。     

通过中国仓鼠一小鼠体细胞杂交降低小鼠癌细胞的SCE频率

姐妹染色单体互换(SCE）反映了正在进 行复制的染色体同位点上DNA分子之间交换 的频率。一般来说,生物体或培养的细胞周围 环境的微量有毒物质或致癌因素（包括物理、化 学和生物因素）可明显地提高SCE频率,例如 丝裂霉素可使人细胞的SCE频率提高到100 SCE／细胞,但此时仅有很少数的染色畸变发 生[4,141,因此SCE可作为致变性分析[201以及有 关遗传性疾病诊断[s1的一个敏感指标。多年来, 人们对诱发SCE形成的多种因素进行了研究, 但SCE形成的机制至今仍不十分清楚[191。这里 值得注意的是Braynt等（1977)",和Alhadeff等 (1980)[x1关于细胞存在有控制SCE形成的系 统的报道,他们分别用人的正常细胞和中国仓 鼠细胞株与SCE频率非常高的Bloom细胞融 合,使Bloom细胞的SCE频率恢复到正常值。 他们认为自发SCE频率高应是细胞丧失正常 功能的结果,用种间体细胞杂交可实现这种缺 陷的互补,并且有几个遗传系统共同控制着细 胞SCE的产生。本文报道通过小鼠细胞与中国 仓鼠二倍体细胞杂交降低小鼠癌细胞自发SCE 频率的实验结果。     

特异性免疫治疗对屋尘螨致敏哮喘小鼠NKT细胞的影响

目的:研究特异性免疫治疗(SIT)对哮喘小鼠自然杀伤T(NKT)细胞的影响。方法:24只BALB/C小鼠随机分为对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、哮喘免疫治疗(SIT)组(C组),各8只。通过屋尘螨提取液(HDM)诱导建立哮喘小鼠模型并进行SIT治疗。检测各组小鼠的气道反应性、支气管肺泡灌洗液(BAlF)细胞计数及分类、ELISA检测IL-4、IFN-γ以及应用流式细胞仪检测NKT细胞数目,通过RT-PCR方法检测T-bet和GATA-3mRNA表达水平;HE染色观察小鼠肺组织的改变。结果:与B组相比,C组气道反应性明显下降(P0.01);BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞(EOS)数显著减少(P0.01);血清IL-4分泌显著降低(P0.01),IFN-γ显著升高(P0.01);NKT细胞数及其成熟型比例明显升高(P0.05);T-betmRNA表达水平明显升高(P0.01),且与NKT细胞数及其成熟型比例呈正相关性,GATA-3mRNA表达水平明显降低(P0.05),且与NKT细胞数及其成熟型比例呈负相关性。B组肺部管腔周围炎性细胞聚集,组织上皮损伤,组织水肿,而C组肺部变应性炎症明显减轻。C组其他各项指标接近A组。结论:哮喘的发生可能与NKT细胞失调相关,通过改变NKT细胞数目及其成熟型比例来调节GATA-3/T-bet的表达可能是SIT治疗哮喘的作用机制之一。     

小鼠脑微血管内皮细胞与隐球菌作用前后基因表达谱分析

目的 比较小鼠脑微血管内皮细胞系bEnd.3细胞与隐球菌作用前后基因表达谱的变化,为隐球菌的嗜中枢性研究提供新的线索.方法 采用基因芯片法比较bEnd.3细胞与不同血清型隐球菌作用前后基因表达谱的变化,并进一步通过荧光定量PCR的方法对某些重要基因的变化加以验证.结果 我们对bEnd.3与隐球菌作用前后基因表达进行了对比,共获得差异基因383条,其中263条基因表达下降,120条基因表达上升,并根据比较结果选取了黏附分子CDH 10及硒转运蛋白SELENBP 1两个基因进行荧光定量PCR验证,结果与芯片结果一致.发现bEnd.3与隐球菌作用后CDH 10表达明显下降,而SELENBP1表达明显上升.结论 隐球菌能引起脑血管内皮细胞黏附分子CDH 10表达下降及硒结合蛋白selenbp1表达上升,这可能与其侵袭血脑屏障有关.而SELENBP1的表达上升可能与神经系统症状有关.     

SCE诱导MCF-7细胞凋亡及其相关基因表达的研究

目的观察鲨鱼软骨提取物(SCE)对MCF-7细胞凋亡的诱导作用,并进一步研究在此过程中BCL-2和Caspase-3的表达.方法将不同浓度的SCE作用于MCF-7细胞,观察其作用的时间效应及剂量效应;在光镜和电镜下观察其形态变化;用流式细胞术分析细胞DNA含量的改变;用免疫组织化学法观察在此过程中BCL-2和Caspase-3的表达.结果 SCE 能抑制MCF-7细胞生长,在一定剂量和时间范围内引起细胞凋亡,并显示剂量和时间效应, 在此过程中BCL-2蛋白表达减弱.结论 SCE 能明显抑制MCF-7细胞体外生长,并可诱导MCF-7细胞凋亡,其作用机制可能与下调Bcl-2蛋白的表达水平有关.     

胸腺激素对淋巴细胞免疫功能调节的研究:Ⅰ胸腺素F5对有丝分裂原诱导下小鼠胸腺细胞增殖反应的影响

本文介绍了用氚胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)掺入微量法测定小鼠胸腺细胞增殖反应的方法与影响因素;并应用此方法研究胸腺素F_5在体外对小鼠胸腺细胞在有丝分裂原诱导下增殖反应的影响。实验结果表明:小鼠胸腺细胞对ConA刺激反应远较对PHA刺激反应明显。在ConA作用下~3H-TdR掺入强度与胸腺细胞数量,ConA浓度及作用时间有关。同位素浓度与标记时间也直接影响。~3H-TdR掺入。胸腺素F_5在体外与小鼠胸腺细胞预育20小时左右(16—24小时)可增强胸腺细胞对ConA刺激的反应,但对PHA刺激无此作用。胸腺素F_5对小鼠胸腺细胞作用的有效剂量为50—200微克/1×10~7细胞/毫升。胸腺素F_5的这种增强作用,对各年龄组小鼠胸腺细胞都有所表现,但年龄较老的8月龄小鼠胸腺细胞对胸腺素F_5作用反应微弱。胸腺素F_5能增强胸腺细胞对ConA刺激的反应是否由于它能通过某种机制加速T细胞功能分化成熟有关,有待今后进一步研究确定。     

吸烟与姐妹染色单体交换

用荧光加Giemsa(FPG)术区分姐妹染色单体,分析了13名中年男子外周血淋巴细胞的SCE,比较吸烟者和不吸烟者“自发”的和用丝裂霉素(MMC)诱发的SCE频率变化。发现吸烟者的SCE频率(8.33±1.08)显著地高于不吸烟者(4.41±0.72),p<0.001。用MMC诱发后吸烟者各剂量的SCE值也明显地高于不吸烟者(P<0.01),并随着MMC剂量的增加,两者之间的差值增大。由于SCE的形成同DNA损伤后的修复机制有关,SCE频率的不同反映交换产生过程中机体重组修复系统的差异。因此,吸烟者与不吸烟者SCE频率的差异,表明两者在DNA修复机制上存在着差异。吸烟很可能改变了机体DNA损伤后的修复能力。     

前列腺素介导胸腺素的免疫调节作用

胸腺素具有促T淋巴细胞分化和成熟的功能。它通过什么环节发挥作用呢?近年来,根据国外不少实验研究结果,如:胸腺上皮细胞内前列腺素(PGs)含量增加;胸腺细胞对PGs敏感性增强;PGs可影响T淋巴细胞的分化和成熟;PGE_2同类物可恢复被抑制的小鼠体内的免疫反应;抗PGE血清能抑制细胞免疫反应,等等。有人认为,PGs可能是胸腺素作用的介质。Garaci等为证实上述假设,观察了胸腺素和PGs的关系。他们采用出生4—8周的雄性小鼠,利用放射免疫测定法进行了三步实验。首先,取正常小鼠和去胸腺小鼠的脾细胞,分别和100μg胸腺素片段5(Fr5)孵育,并与加入消炎痛的组对照。5min后,测PGs的释放量。其次,用正常小鼠脾细胞和去胸腺小鼠脾细胞,分别与不同浓度的Fr5孵育,15min后,测PGs的释放量。最后,用3×10~6去胸腺小鼠脾细胞、不     

口服避孕药的细胞遗传学效应及其观察指标

口服避孕药的广泛使用,使人们对其安全性产生很大的关注。染色体畸变和用姐妹染色单体分化染色(SCD)来观察姐妹染色单体交换(SCE),是目前用于探讨口服避孕药细胞遗传学效应的主要指标,特别是SCE已作为检测染色体损伤的一种敏感而可靠的方法被广泛应用。但是,SCE技术的应用和观察结果,又提出了一些值得探讨的问题。为此,本文试就口服避孕药对染色体畸变和SCE的研究概况综述如下。     

禽流感H5N1病毒感染BALB/c小鼠的细胞免疫动态变化

[目的]测定H5N1病毒感染BALB/c的小鼠模型的细胞免疫动态变化,探讨病毒对机体免疫系统的影响。[方法]通过流式细胞仪测定CD3+T、CD4+T、CD8+T等细胞免疫变化。[结果]感染H5N1病毒的小鼠血液中CD3+T、CD4+T、CD8+T细胞数量下降(P<0.05),脾脏中T细胞数量下降的趋势与血液相同,CD4+T/CD8+T的比例上升,只是两者的时间有所差别。[结论]说明病毒对细胞免疫T细胞数量影响较大,而且CD8+T受到的影响更为明显,反应了机体特异性细胞免疫功能受抑制,并且彼此之间的平衡受到破坏。     

钙调蛋白及其调节酶PDE在鸡脑胚胎发育过程中的变化

钙调蛋白(CaM)参与脑中多种细胞过程的调节,推测它与大脑的分化发育有关。本实验研究了鸡脑从胚胎早期(原基)至大脑成熟各发育阶段可溶部分的CaM及其调节酶——环核苷酸磷酸二酯酶(PDE)的含量或活力变化。未经孵育的鸡胚中检测不出CaM,在孵育3—14天的胚脑中CaM含量逐渐增加:总CaM增加了3倍,活性CaM增加了4倍;而且在鸡脑细胞分裂分化最活跃的期间(皮质和髓质形成期间,即孵育8—14天),活性CaM的增加尤为显著(增加近3倍)。提示CaM与脑细胞的分裂分化有关。PDE的活力出现晚于CaM5天,随着胚龄增加,不断上升,提示它与脑细胞的分裂分化无直接关系,可能与大脑的功能活动有关。本实验还研究了鸡脑发育期中可逆性钙结合蛋白的变化。     

东莨菪碱抗吗啡依赖作用与海马细胞内钙的关系

目的:观察东莨菪碱(scopolamin,Sco)对吗啡(morphine,Mor)致小鼠依赖性作用的影响及其机制分析。方法:连续7 d腹腔内注射吗啡建立吗啡依赖小鼠模型;热板法测定痛阈;纳络酮(naloxone,Nal)催促实验计数小鼠跳跃次数和跳跃动物率;流式细胞术测量海马细胞内游离Ca2 ([Ca2 ]i)浓度。结果:吗啡依赖小鼠的痛阈明显下降,跳跃次数和跳跃动物率明显增加,海马[Ca2 ]i明显增加。给予东莨菪碱(4mg.kg-1×7 d)后,吗啡依赖小鼠海马[Ca2 ]i明显减少(P<0.05),痛阈提高(P<0.01),跳跃次数和跳跃动物率减少(P<0.05)。结论:东莨菪碱具有对抗吗啡依赖性的作用,其机制可能与降低脑细胞内游离Ca2 水平有关。     

人胎胰巢蛋白阳性细胞的异种体内移植研究

人胎胰巢蛋白阳性(nestin~+)细胞在体外培养中可自发形成类胰岛细胞团(islet-1ike cell cluster,ICC),有多向分化潜能,并可产生分泌胰岛素的类β细胞。为了验证其体内生物学特性和生理功能,我们进行了诱导后ICC的NOD-Scid糖尿病模型小鼠和正常小鼠肾膜下移植,通过免疫细胞化学检测,超微结构观察以及血糖水平监测等手段考察移植后细胞的形态与功能变化情况,结果表明:(1)移植处有明显的血管增生。(2)ICC可使糖尿病模型小鼠血糖明显降低。(3)ICC在正常小鼠体内分化为多种结构,同时继续增殖侵入肾实质。     

人胎胰巢蛋白阳性细胞的异种体内移植研究

人胎胰巢蛋白阳性(nestin^ )细胞在体外培养中可自发形成类胰岛细胞团(islet-like cell cluster,ICC),有多向分化潜能,并可产生分泌胰岛素的类β细胞。为了验证其体内生物学特性和生理功能,我们进行了诱导后ICC的NOD—Scid糖尿病模型小鼠和正常小鼠肾膜下移植,通过免疫细胞化学检测,超微结构观察以及血糖水平监测等手段考察移植后细胞的形态与功能变化情况,结果表明：(1)移植处有明显的血管增生。(2)ICC可使糖尿病模型小鼠血糖明显降低。(3)ICC在正常小鼠体内分化为多种结构,同时继续增殖侵入肾实质。