米曲霉LY-128广谱有机磷农药水解酶的纯化和鉴定

米曲霉LY-128的培养物经硫酸铵分级沉淀,Sephadex G-100凝胶过滤,DEAE-Sephrose CL-6B和Sephadex G-100层析手段,获得了电泳纯的广谱有机磷农药水解酶。通过SDS-PAGE和IEF电泳测得其分子量为62kDa,等电点为pH5．2。该酶的最适反应温度为45℃,最适pH6．8,在50℃以下及pH6．0～9．5范围内活性稳定。Hg^2 、Fe^3 、对氯高汞苯甲酸、碘乙酸和N-乙基马来酰亚胺对该酶有强烈的抑制作用,而Cu^2 、巯基乙醇、二硫苏糖醇、二硫赤藓糖醇、谷光甘肽和去污剂对酶有不同程度的激活作用。底物的专一性实验表明,该酶不仅可以作用于含P-O键的有机磷农药;而且也能水解含P-S键的有机磷农药。以甲基对硫磷和内吸磷为底物的Km值分别为52μmol、236μmol;Vmax分别为317μmol min^-1mg^-1、179μmol min^-1mg^-1;Kcat分别为1152s^-1、650s^-1。     

米曲霉LY-128 广谱有机磷农药水解酶的纯化和鉴定

米曲霉LY-128的培养物经硫酸铵分级沉淀,Sephadex G-100凝胶过滤,DEAE-Sephrose CL-6B和Sephadex G-100层析手段,获得了电泳纯的广谱有机磷农药水解酶.通过SDS-PAGE和IEF电泳测得其分子量为62 kDa,等电点为pH 5.2.该酶的最适反应温度为45℃,最适pH 6.8,在50℃以下及pH6.0～9.5范围内活性稳定.Hg2+、Fe3+、对氯高汞苯甲酸、碘乙酸和N-乙基马来酰亚胺对该酶有强烈的抑制作用,而Cu2+、巯基乙醇、二硫苏糖醇、二硫赤藓糖醇、谷光甘肽和去污剂对酶有不同程度的激活作用.底物的专一性实验表明,该酶不仅可以作用于含P-O键的有机磷农药;而且也能水解含P-S键的有机磷农药.以甲基对硫磷和内吸磷为底物的Km值分别为52μmol、236μmol;Vmax分别为317μmol min-1 mg-1、179 μmol min-1 mg-1;Kcat分别为1152 s-1、650 s-1.     

棘孢曲霉SM-L22 β-葡萄糖苷酶的纯化与性质*

通过分子筛层析和离子交换层析等手段,分离纯化了棘孢曲霉SM-L22纤维素酶系中的β-葡萄糖苷酶组分。通过SDS-PAGE和IEF电泳测得其分子量为57.9 kDa,等电点为pH 4.5。该酶组分的最适温度60℃,最适pH 5.5,在40℃以下以及pH 3.0~10.0范围内稳定。Fe2+和Mn2+ 对酶有激活作用,而 EDTA对酶有较明显的抑制作用。底物专一性实验表明,该酶可作用于纤维二糖、水杨素和乳糖。作用于纤维二糖和水杨素的Km值分别为17.13 10-3 mol/L 和11.93 10-3 mol/L,Vmax分别为3.456 10-4 mol/L/min和7.139 10-4 mol/L/min,Kcat分别为3.75 S-1和7.73 S-1。     

苏云金杆菌超氧化物歧化酶的纯化和性质研究*

苏云金杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）９１６５超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）,经硫酸铵分级沉淀、ＳｅｐｈａｄｅｘＦ－１００凝胶过滤及非变性凝胶电泳（ＰＡＧＥ）三步纯化,纯酶比活力为４３８８ｕ／ｍｇ,属Ｍｎ－ＳＯＤ,分子量为４７．９ｋｕ,由二个亚基组成,含１９种氨基酸。     

阿特拉津降解菌株的分离和鉴定*

从农药厂废水中分离到６株能以除草剂阿特拉津为唯一氮源生长的细菌,即假单胞菌（Ｐｓｅｕ－ｄｏｍｏｎａｓ ｓｐｐ．）ＡＤ１、ＡＤ２和 ＡＤ６,土壤杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｓｐ．）ＡＤ４,黄单胞菌（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｓｐ．）ＡＤＳ,欧文氏菌（Ｅｒｗｉｎｉａ ｓｐ．）ＡＤ７。ＡＤ１菌株能使无机盐培养基中的 ０．３ｇ／Ｌ阿特拉津在７２ｈ内降解９９,９％。当以ＡＤ１、ＡＤ２、ＡＤ４、ＡＤ５、ＡＤ６和ＡＤ７菌株的总ＤＮＡ为模板进行ＰＣＲ扩增时,除Ａ     

栖土曲霉中性蛋白酶的研究*

栖土曲霉(Aspergillus terricola)3.942经~60Co-v射线诱变处理,得到抗克念菌素变异株NK71,并对其培养条件进行了优化,使产酶提高了76%。用单宁酸沉淀法提取此酶,并用DEAESephadex离子交换层析法进一步纯化。纯化酶的最适反应温度40—50℃,最适pH7,在pH5—7.5、低于40℃时稳定。     

染料的生物降解研究*

生物降解法是染料污染治理的重要方法。针对目前使用量较大的偶氮染料、三苯基甲烷染料和蒽醌染料这3大类染料,重点介绍了厌氧和好氧条件下的偶氮还原及其机理、三苯基甲烷染料降解菌和蒽醌染料降解菌的研究进展。     

螺旋藻的纯化*

观察了螺旋藻生长过程中藻丝和杂菌的生长规律,发现中性细菌和碱性细菌的数量始终是藻丝的10⁵～10⁶倍。采用常规的稀释平板法、毛细管法和挑单藻法均无法可靠地获得无菌纯藻。设计用低速离心法洗涤下沉性藻丝,用过滤法洗涤上浮性藻丝,对藻丝进行预处理洗去大量杂菌;对迁移性和非迁移性藻株分别采用夹层法和平板法纯化藻株,使得单根藻丝在平板上形成藻落,获得无菌纯藻。     

宇佐美曲霉L336酸性蛋白酶的动力学性质*

L336酸性蛋白酶的分子量为54000,等电点为3．8±0．2。在pH2．5,40℃条件下,酶对酪蛋白、牛血清白蛋白和牛血红蛋白的Km值分别为0．263g／L、0．278g／L和0．415g／L,Vmax分别为2075、1550和2793μgTyr／min、mL,酪蛋白为最适底物。在pH2．0～5．0、40℃以下时酶的稳定性最好。此外,还研究了金属离子对酶活性的影响。     

一株联苯降解菌的特性及鉴定*

从华北油田污染土壤中筛选出一株能够以联苯为唯一碳源和能源生长的菌株。该菌生长的最适联苯浓度为0．2％～0．4％,在联苯浓度为0．1％的培养基中培养36h后降解率达99．8%。该菌还可以降解苯甲酸钠、邻苯二酚、间苯二酚、对苯二酚和多氯联苯Aroclorl221、Aroclorl242等芳香族化合物。通过16S rDNA基因序列分析鉴定该菌为嗜吡啶红球菌(Rhodococcus pyridinovorans)。     

黑曲霉纤维素酶系中β-葡聚糖纤维二糖水解酶的提纯和性质

通过硫酸铵分段,Sephadex G-100凝胶过滤及DEAE-SephadexA-25(A-50)离子交换柱层析等提纯步骤,从黑曲霉(Aspergillus niger)培养液中分离到β-葡聚糖纤维二糖水解酶的两个组分(Ⅰ-3a,Ⅰ-3b),经凝胶电泳鉴定均为单一带,Ⅰ-3a和Ⅰ-3b的最适pH分别为4.0及4.5,最适温度50℃及45℃,在pH2.0—8.0之间稳定,保温1h时的半失活温度t 1/2分别为52℃及48℃。SDS-凝胶电泳法测得Ⅰ-3a和Ⅰ-3b的分子量分别为57000及55000;聚丙稀酰胺凝胶等电聚焦法测得二者的等电点分别为3.2和3.0。在所测定的化学试剂中,Ag~+、Hg~(2+)和Cu~(2+)对该酶均有较强的抑制作用。     

一种纯化细菌有机磷水解酶的简便方法

Cibacron blue T_3GA与溴化氰活化的Sepharose 4B偶联后,产生一种能有效地分离有机磷水解酶的吸附剂。用0.15mol/L MgCl_2溶液从黄杆菌P3—2细胞抽提出的粗酶液通过柱层析分离,即可得到纯化8倍、酶活性回收率为269.4％的纯酶制品。该酶制品用凝胶电泳测是均一的。     

黑曲霉菊糖酶的纯化及性质

黑曲霉(Aspergillus niger)319发酵液经硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素52离子交换层析和Sephadex G-100分子筛层析,得到了电泳纯的菊糖酶组分。提纯倍数为67,收率为25.5％。菊糖酶的最适pH为5.0,最适温度为60℃。此酶为单亚基蛋白,凝胶过滤法测得分子量为28000,含糖13.9％,用等电聚焦法测得等电点为5.4,该酶对温度有较高的稳定性,对pH的稳定范围较窄。Hg²⁺、Pb²⁺和Cu²⁺对该酶有强烈的抑制作用。此酶对菊糖有较强的底物专一性,产物为果糖,但它也可作用于蔗糖,I/S值为0.348。当以菊糖为底物时,K_m为6.25mmol/L,V_m为67.11 μmol·mg~(-1)·min~(-1)。     

华丽曲霉Z58有机磷农药降解酶的纯化和性质

华丽曲霉(Aspergillus ornatus)Z58有机磷农药降解酶经硫酸铵分级沉淀、Sephadex G100凝胶过滤、DEAE52离子交换层析得到了分离纯化,用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)鉴定为单一组分。凝胶过滤法测得分子量为67 000,提纯倍数为34.2,收率为17.8%。该酶的最适反应温度45℃,最适反应pH72,对热较稳定,并且能在pH6～10范围保持活性。重金属Cu2+对该酶具有明显的促进作用,而SDS对酶具有抑制作用。此酶对所试的有机磷农药都有较好降解作用。     

黑曲霉M89菊粉酶的提纯与性质

黑曲霉(Aspergillusniger）M89菊粉酶经硫酸铵分级盐析、SephadexG-200凝胶过滤、DEAE-纤维素离子交换层析、聚丙烯酞胺凝胶电泳（PAGE）制备分离,提纯到4个菊粉酶组分EⅠ、EⅡ、EⅢ和EⅣ。用SDS-PAGE测定分子量分别为102．6、97．9、61．2和36．5kD;用等电聚焦电泳测得其等电点分别为4．15、4．24、4．48和4．15。4个组分的最适反应温度均为55～60℃;EⅠ的最适pH为pH4．0,其余3个组分为pH4．5．各组分的热稳定性有一定差异,分子量越小的组分,热稳定性越好,55℃处理90min,EⅠ有一定的热失活,其余3个组分无活力丧失,4个组分都是外切酶。     

PURIFICATION AND CHARACTERIZATION OF PULLULANASE FROM Lactococcus lactis

This paper describes a simple and efficient method of isolation of a plullulanase type I from amylolytic lactic acid bacteria (ALAB). Extracellular pullulanase type I was purified from a cell-free culture supernatant of Lactococcus lactis IBB 500 by using ammonium sulfate fractionation and dialysis (instead of ultrafiltration), and ion-exchange chromatography with CM Sepharose FF followed by gel filtration chromatography with Sephadex G-150 as the final step. A final purification factor of 14.36 was achieved. The molecular mass of the enzyme was estimated as 73.9 kD. The optimum temperature for the enzyme activity was 45°C and the optimum pH was 4.5. Pullulanase activity was increased by addition Co²⁺ and completely inhibited by Hg²⁺. The enzyme activity was specifically directed toward α-1,6 glycosidic linkages of pullulan giving maltotriose units. Enzymatic hydrolysis of starch and amylose produced a mixture of maltose and maltotriose.     

甘薯凝集素的提取及性质研究

抗蔓割病甘薯的叶片组织浸取液,经硫酸铵分级沉淀,甲壳素柱层析及葡聚糖凝胶过滤得到一种在PAGE或SDS－PAGE上均呈现单一蛋白带的甘薯凝集素。该凝集素没有血型专一性及被测动物红细胞专一性,其凝集活性可被N－乙酰葡萄糖胺或岩藻糖所抑制。甘薯凝集素在75℃加热10min,即丧失全部凝集活性,其凝集活性依赖于Ca^2 和Mg^2 ,Mn^2 则无作用。经Sephadex G-100和SDS－PAGE测定,凝集素相对分子质量为63000,中性糖含量为6.21%,该凝集素对蔓割病菌有抑制作用,是一种酸性糖蛋白。     

雪松聚球藻金属硫蛋白的纯化及其性质的研究

在雪松聚球藻的培养基中逐渐增加氯化镉的浓度以诱导藻细胞内金属硫蛋白的合成,经Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－５０,ＤＥＡＥ－ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５柱层析,获得的ＭＴ没有亚型,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析是高度均一的。每个蛋白分子约含５个Ｃｄ原子,１０个巯基,分子量约为７．６ＫＤ,等电位ｐＨ４．５左右,半胱氨酸含量约占总氨基酸量的１５．５％,还含有少量的芳香族氨基酸,ＭＴ的最大紫外吸收在２５     

黑曲霉菊糖酶的分离纯化及其活性测定

从一株黑曲霉p319的菊芋培养液中,采用硫酸铵盐析、SephadexG-25、DEAE-cellulose-52、SephadexG-100柱层析等方法,分离纯化得到三个菊糖酶组份EI、EII、EⅢ,三者经聚丙烯酰胺凝胶电泳验证均达到均一。并对其活性进行了初步测定,三者比活分别达到29．8u／mg,4．9u／mg,1．2u／mg。