从小白鼠血液制备染色体的快速方法

每只小白鼠注射(I.P)0.1毫升秋水仙素(0.6毫升/毫升),四小时后杀死。从心脏取血,用肝素抗凝。取10滴左右血液置于一刻度离心管中,管内预先装好3—5毫升0.7％柠檬酸钠,放在37℃下温浴,摇匀后加一滴稳定的玻璃酸酶(150N.F.单位/毫升)。在37℃下温浴20分钟。用温浴的最后五分钟配制3∶1甲醇-醋酸固定液。温浴完毕时加2滴固定剂并温和地摇匀。600转离心机离心5分钟弃去上清液(留1毫升左右)再加3毫升固定剂,加塞后放置冰箱30分钟。在600转离心机离心5分钟弃去上清液(留1毫升),再加预冷固定液3毫升,用吸管来回搅匀。离心弃去上清液。再加2毫升冷固定剂,并在冰箱中过夜。第二天离心后弃去上清液,用甲醇洗,吸去甲醇,取一     

一种用于染色体观察的改良绒毛细胞直接制备法

为弥补羊水检查时间过晚之不足,1984年 Simoni利用绒毛标本直接制备法观察染色体获 得成功,此后,即日益为人们所注目。我们改良 了绒毛细胞直接制备方法,以胶原酶代替乙酸 处理,对绒毛细胞直接制备法（简称乙酸法）和 改良法（简称胶原酶法）进行了比较。大致过程 如下： 取妊娠6-7周人流绒毛组织50mg左 右,严格挑选后,生理盐水洗净,移人含最终浓 度0.5,ug/ ml秋水仙素的RPMI 1640培养液中 孵育1小时（pH7.2, 370C),然后分成两份。一 份按乙酸处理法进行制片：(1)去除培养液,加 3m11.5外拘椽酸钠溶液低渗15分钟;(2）加人 数滴3:1的甲醇：冰乙酸预固定10分钟;(3）吸 弃固定液,重复固定巧分钟;(4)吸弃固定液, 加入1m160并乙酸水溶液,处理2分钟,即追加 纯甲醇2ml; (5)吸取细胞悬液于离心管内离心 (1500-1800rpm); (6）冰水滴片,风干,Giemsa 染色。另一份按改良的胶原酶法制备染色体,大 致如下：(1)弃培养液加人15ng/ml胶原酶4ml, 孵育15-20分钟（370C); (2）加人4m1生理盐 水,离心（1000rpm),分钟,弃上清液,经0.75% 氯化钾4 ml低渗20分钟（370C),用甲醇冰醋 酸固定液lml预固定后,依上法离心,弃上清 液;(3）甲醇冰醋酸（3:1)重复固定15分钟,混 匀后自然沉降,吸上层细胞悬液离心,如此重复 二次后,再固定15分钟,气干法制片。28例实 验结果见表1,无论是可数分裂相,还是完整分 裂相出现率,胶原酶法均比乙酸法为高,二者间 有显著差异。     

蝗虫性细胞减数分裂制片方法的改良

最近,我室采用分离、滴片方法观察蝗虫性细胞减数分裂,取得良好效果。现介绍如下。 1.取材在麦熟和稻熟季节采集蝗虫。取其精巢固定于卡诺液中0.5—1小时。去固定液,用95％酒精洗3次,移于70％酒精中,置于低温下可长期保存。 2.制片方法 (1)用眼科镊把精巢取出,装入瓶中,加入碎玻璃反复振荡,使组织捣碎。 (2)用吸管吸取捣碎液放入离心管内,以1000转/分的速度离心3—5分钟。去上清液,     

苏芸金杆菌以色列变种灭蚊的有效成份

苏芸金杆菌以色列变种(Bacillus thuringiensis var. israelensis)对双翅目的蚊幼虫具有较高的毒杀力,而对鳞翅目昆虫无效。为探讨其毒杀机理及其与其它苏芸金杆菌的差异,我们做了如下一些试验。一、菌液上清液与沉淀物的毒效比较苏芸金杆菌以色列变种1897菌株(引自中国科学院动物研究所),以含糖肉汤培养基摇瓶培养,将培养24及48小时的菌液,离心(3000转/分)20分钟。分出上清液及沉淀物。上清液用     

用单克隆抗体检测乙肝核心抗原及抗体

<正>HBcAg的纯化 HBcAg的纯化操作时对生物危险要特别注意。根据Takahashi等方法纯化HBcAg。要选择具有高滴度HBsAg的无症状携带者的血浆。2.6升体积之混合血浆样品6000×g4℃20分钟离心。上清37000×g16小时离心。所得沉淀物悬浮在含有10~(-4)M水解蛋白酶的0.01MTris—HCl缓冲液(pH7.2)     

胸腹水内异形间皮细胞的鉴别方法研究

在胸腹水脱落细胞学检查中,细胞核直径测量、核浆比值测定以及核仁计数,这三种方法所得实验数据,有助于异形间皮细胞的鉴别。取新鲜胸腹水抗凝标本10ml,以每分钟2000转离心5分钟,将沉淀物制片4张。MGG复合染色(瑞氏染粉1克,姬姆萨染粉0.5克,加入500ml甲醇溶液,置37℃温箱内,每日振摇2～3次,一周后即可使用)待涂片自然干燥后,加上述染液染1分钟,再以等量pH6.8的磷酸盐缓冲液混合复染5～8分钟,核仁计数染3～5分钟,水洗。选择好的染色涂片于光学显微镜配接目测微计进行数据分析。核直径测量法:在涂片上选择适合部位测定细胞核直径,核最大直径与最小直径的平均值为该细胞核直径,每例随机测量50～100个细胞,求出     

羟基磷灰石柱层析纯化小鼠腹水中抗结肠癌单克隆抗体

 <正> 我们在Stanker工作的基础上研究了抗结肠癌单克隆抗体H b3(IgM)Ga_3(Ig G_2a)的分离纯化,均获得较满意的结果。 材料与方法 HAp层析柱:HAp经0.01mol/L磷酸缓冲液(PB)pH6.8,含0.02％NaN_3浸泡过夜,用自然沉降法装柱,经上述PB液平衡后,即可进行层析。 小鼠腹水予处理:取小鼠腹水数毫升,用水稀释(1:5),在4℃下,经4000r/min离心机离心30分钟,弃去沉淀物。     

乌鳢鱼肌肉细胞线粒体DNA的纯化及电镜观察

有关乌鳢鱼(Ophiocephalusargus)线粒体DNA的研究国内尚未见报道。我们用肌肉细胞为材料,对鱼类线粒体DNA进行了研究,现介绍于下。材料与方法一、线粒体的制备(参考曹新文等,1985)取乌鳢鱼肌肉100克,用缓冲液A[0.25M蔗糖—0.15MKCl—10mMTris-HC1(pH7.5)—1mMEDTA]洗涤三次,剪碎后加10倍体积的缓冲液A用组织捣碎机捣碎,每次30秒,共捣六次,用单层纱布过滤。以上操作均在冰浴中进行。滤液于1,000×g离心20分钟(4℃),弃去沉淀,上清液于20,000×g离心20分钟(4℃)。沉淀用20倍体积的缓冲液B(0.25M蔗糖-10mMTris-HCl(pH7.5)-lmMEDTA…     

激素和活性多肽

921338盆组组缅生长激紊的大规模一提纯和再折扭〔英〕/Sugimoto,5.…了Agrie Biol.Chem。一1991,55(6)一1635~1637[译自DBA,1991,10(15),91一10383〕 在Manton Gaulin均化器中搅匀含有细鳗重组生长激素(rEST)的大肠杆菌细胞折射体。在s000rPm下离心匀浆(40min),用IM蔗糖洗涤片状沉淀物,然后用4%TritonX一100、20 mM磷酸缓冲液和1 mM EDTA(P H7.2)使之溶解,从而产生折射体。用6M盐酸服、50 mM Tris-HCI和0.005%吐温50(pHs.0),于4℃下搅拌2小时,溶解折射体,然后经离心(80oorpm、40m她)回收之。为使rEST分子再折叠,用10皿MTris…     

乙醇酸氧化酶纯化方法的改进

乙醇酸氧化酶（GO）是光呼吸的关键酶。但目前报道的GO的Mr和等电点等基本参数相差很大,重复性也不好[2,3,5～11]。本实验拟改进其纯化方法以期提高其重复性。材料与方法菠菜（Spinaciaoleracea）和菜心（Brassicacampestris）均购自市场。GO的提纯基本按文献2、3、6,只作添加FMN一项改进。具体操作如下：绿叶用100mmol·L－－‘的磷酸缓冲液（pH8．0）提取粗蛋白,过滤,4000Xg离心取上清液,加10％HAC调到PH53;然后以4000Xg离心取上清液,经15％～30％（NH;）iS04分步沉淀;高GO活性的沉淀蛋白用5mmol·L‘Tris－HCI（pH…     

斯氏狸殖吸虫肠上皮的光镜与电镜观察

斯氏狸殖吸虫(Pagumogonimus skrjabi(?),P.s)是人兽共患病的重要病原。本文报告P.s肠上皮光镜与电镜观察结果,以积累其形态生理和分类学方面的资料。 从陕西宁强县斯氏肺吸虫病流行区捕捉光泽华溪蟹(Sinopotamon dauidi)和陕西华溪蟹(S.shensicnse),分离囊蚴感染犬后100天剖检虫体。10％福尔马林固定石蜡切片,光镜观察;在解剖镜下用细针分离肠管中段,打开肠腔用小针固定在滤纸片上,滴生理盐水冲洗腔面,用含2.5％戊二醛的磷酸缓冲液予固定3小时,经磷酸缓冲液洗后入1％四氧化锻磷酸缓冲液后固定3小时,冼后逐级乙醇脱     

用减压法固定处理草履虫

在制作草履虫玻片标本时,在常压下对草履虫进行固定处理,虫体容易收缩变形,效果不佳。采用抽真空减压的方法,对草履虫进行固定处理,可避免上述缺点,效果比较好。制作过程简述如下: 1.离心浓缩把含有草履虫的培养液,用2000—3000转离心5—10分钟,制取出浓缩的草履虫液备用。 2.分装处置取浓缩的草履虫液50—100毫升,倒入大培养皿(直径100—150毫米)内,并将皿放到真空干燥器内。另用指管或安瓶装满40％甲醛或     

猪白细胞干扰素制备与检定方法

<正>Soloviev等人,连续发表了4篇文章,报导有关猪白细胞干扰素的试验结果,现综述如下: 一、猪白细胞干扰素制备方法 1.制备方法 分离猪白细胞:采血后2～4小时内,加2～3倍容积的0.83％氯化铔溶液、摇匀,4℃静置10分钟。取出,离心沉淀1000转/分10分钟。倒掉上清液(血浆和血红素等)。白细胞用199营养液(其中加10％牛     

免疫酶技术在家蚕病理研究上的应用

<正> 免疫酶技术是60年代发展起来的一项灵敏的免疫测定技术。近几年来,我们把免疫酶技术应用于家蚕病理方面,进行了家蚕浓核病毒(DNV)的定位研究和不同来源病毒的鉴定,建立了酶联对流免疫电泳早期诊断技术,取得了良好的结果,现介绍如下。 一、高纯度病毒抗原及其抗血清的制备取浓核病蚕中肠去除内容物,加磷酸缓冲液(0.05mol、pH7.2)制成匀浆,在5℃中12000rpm离心去沉淀,取上清液与等体积的冷氯仿混合,振摇离心(5000rpm)后收集上层病毒     

磨芋的组织培养和植株再生

植物名称:磨芋(Amorphophallus rivieri)材料类别:地下延伸茎及延伸茎顶球形部分。九月初挖取延伸茎,洗净,用10％漂白粉溶液的上清液灭菌20分钟,0.1％氯化汞溶液灭菌10分钟,无菌水冲洗5次。无菌条件下切成0.3—0.5cm厚的圆片供接种用。     

两栖动物酒精标本DNA模板的快速提取

本文以中国角蟾属4个种的蝌蚪酒精固定标本为材料,取尾部肌肉组织0．1g,滤纸吸干组织块表面的酒精,在研钵中用剪刀剪碎,液氮研磨成粉(必要时可加少量石英砂),转入1．5ml离心管,加入1．0ml提取缓冲液(0．5％SDS,10mmol/L Tris-HCl,100mmol/L EDTA,pH8.0),37℃温浴h,5000r/min离心10min,取上清转入另一1.5ml离心管,氯仿/异戊醇(24：1)抽提两次,上清液加2倍体积预冷(-20℃)的无水乙醇沉淀DNA,12000r/min离心3min,无菌条件下风干后,50μl TE溶解,4℃保存备用。以通用引物PCR扩增12S rRNA和16S rRNA基因部分片段并测序。本文不采用蛋白酶K提取酒精保存标本的DNA模板,全部流程只需3个小时,可同时提取数十个乃至数百个标本,并且所提取的DNA模板适合短片段PCR扩增。     

植物材料光学和电镜蛋白A-金胶体结合体标记技术

这里介绍一种可在光学显微镜薄切片和电子显微镜超薄切片上标记的技术。我们初步应用这一技术来做燕麦球蛋白的定位,结果是成功的(图版图1,2)。现将操作方法简述如下: 一、样品制备 1.把切成2—3微米~3的新鲜材料,用磷酸缓冲液(pH 7.1)配制的3—4％甲醛(加2.5％蔗糖),在室温固定2小时; 2.用磷酸缓冲液清洗两次,每次30分;     

基因标记、转化、表达与检测

950857转化群母曹的简簟而有效的方法[英]/Elble,R./BioTechniques.一1992,13(1).一18～20仁译自D.BA,1992,11(17),92—09534] 这是经简化的醋酸锂方法,每份样品仅需2～3分钟的处理。无论酵母菌处于什么生长期都可被转化。从O.5ml培养液得到细胞团,加上lO声1载体DNA(100#g)和lpg转化DNA。加O.5ml PEG一醋酸钮一。Tris-EDTA缓冲液(pH 7|.5),然后在室温下过夜。从静止液底层取50#1混合物直接涂在选择平板上。每芦g质粒pCD4 DNA可使酿酒酵母菌株8534.8C的饱和培养物产生7800～24000个转化子。对数生长期产生的转化子数只比静止期…     

染色体分析用于鉴定大熊猫幼仔性别

我们应用人类外周血微量短期培养技术,对出生2个半月的大熊猫染色体组型进行了分析,并确定了性别。 材料来自福州动物园初生大熊猫“榕榕”,培养基组合:RPMI—1640 4ml,小牛血清1ml,植物血凝素0.2ml混合,pH调至7.4左右。加静脉血0.2ml,37℃下培养72小时。终止培养前6小时,加入秋水仙素,浓度为0.08～0.15微克/ml。将收获的细胞用0.075M氯化钾溶液低渗处理20分钟,低速离心沉淀,用甲醇:冰醋酸(3:1)混合液固定30分钟,重复二次。最后用空气干燥法常规制作标本片。选择30个中期核分裂象计数,观察染色体的数目和形态。     

影响溴麝香草酚蓝法鉴定石刁柏性别的几种因子

用溴麝香草酚蓝(BTB)法可以鉴定石刁柏等的雌雄性别,但需较长的保温时间,给应用带来一定麻烦。为了进一步简化该法,我们研究了温度、光和不同pH值磷酸缓冲液对鉴定的影响。材料与方法材料为石刁柏(Asparagus officinaliscv.UC800),俗名芦笋。称取0.5g石刁柏拟