烟草培养细胞中钙离子,钙调素与细胞质流的关系

烟草愈伤组织的培养细胞中,当钙离子载体将Ca~(2 )导入细胞时,细胞质流停止.CaM拮抗剂试验表明,高钙使细胞质流停止的效应可能与CaM无关,除W7外的多种CaM拮抗剂都明显而且可逆地抑制细胞质流。酶联免疫吸附分析(ELISA)检出培养细胞中存在有CaM。间接酶标免疫组织化学分析进一步证明CaM存在于胞质条纹中。     

金标记植物钙调素的制备和应用

ThePreparationandAppicationofColloidalGold-LabeledPlantCalmodulinSONGChun－Fens，SUNDa－Ye（CellLaboratory,DepartmentofBiology,HebeiNormalUniversity,Shijiazhuang050016）LIShu-Rong（LaboratoryCenterofElectronMicroscopy,HebeiMedicalUniversity,Shijiazhuang050017）CaM是一种多功能的Ca2＋受体蛋白，广泛存在于各种真核、原核生物中，并参与众多生理功能的调控。但迄今尚未发现CaM具有任何酶活性，其调控作用是通过与之相结合的CaM结合蛋白（CaMBPs）实现的。因此，研究与CaM相结合的各种不同ChMBP…     

大麦与白粉病菌互作中钙调素的细胞化学定位

对不同抗病性的大麦近等基因系受白粉病菌侵染诱导后的钙调素(CaM)变化进行了免疫细胞化学研究。结果表明,钙调素普遍存在于各种不同类型的细胞中,代谢活跃的细胞中CaM标记密度相对较高;CaM分布于细胞核、细胞壁、叶绿体等细胞器中,其中细胞核标记密度最高。在健康叶片中,感病品系Ingrid伴胞中CaM的标记密度明显高于抗病品系mlo—3,而其他细胞中CaM标记密度没有明显差别。病原菌接种后,各种细胞的CaM标记密度均呈现一定程度的上升,但Ingrid上升幅度相对较大。在叶肉细胞中,mlo-3细胞核中CaM增加最明显。并对叶肉细胞和伴胞中CaM的变化进行了讨论。     

钙调蛋白的构效关系及其与药物的相互作用

钙调蛋白(calmodulin,CaM)作为环核苷酸磷酸二酯酸(PDE)的内源性活化因子,于六十年代后期由张怀耀首先发现,它是细胞内Ca~(2+)的重要受体,与Ca~(2+)结合后发生构象变化而激活,又调节着细胞内Ca~(2+)的浓度。它不具有酶的活性,却能通过激活细胞内广泛的酶谱,调控细胞的基本功能。二价阳离子竞争性地取代Ca~(2+)的结合后能影响CaM活性,组织内还存在有CaM的内源性抑制因子,竞争性地与CaM结合而抑制CaM的活性。CaM与靶酶的相互作用也能被很多药物所抑制,这或许与药物的作用机制有关。     

胡萝卜愈伤组织形成过程中激素和创伤诱导的钙调素水平的变化

CaM抑制剂TFP抑制了胡萝卜愈伤组织的形成。ELISA法测定CaM的动态表明,愈伤组织形成过程中,出现了两个CaM 的峰。第一个峰值在6h,可能是由创伤引起的,单位蛋白和单位鲜重的CaM 量都增加了1倍左右,第二个峰值可能是由激素引起的,从48 h以后开始增加,7天时单位鲜重的CaM 增加了4倍左右,单位蛋白的CaM 量也特异地增加了0.7倍,此结果亦为CaM 免疫荧光组织化学定位结果所证实。研究结果表明胡萝卜愈伤组织形成过程中激素与创伤效应和CaM 动态有关。     

拟南芥保卫细胞微丝骨架的解聚可能参与了细胞外钙调素诱导的气孔关闭

细胞外钙调素(CaM)在植物的许多生理活动中都执行着重要功能, 但它对气孔运动的作用及其调控机制, 人们了解的很少. 以模式植物拟南芥为材料, 研究了细胞外CaM在保卫细胞壁上的存在及其对气孔运动的调控机制. 结果表明, 拟南芥保卫细胞壁中存在有分子量为17 kD的CaM, 并应用W7-琼脂糖和CaM抗血清初步证明了保卫细胞壁中存在的CaM可能具有促进气孔关闭和抑制气孔开放的作用. 在应用外源CaM诱导气孔关闭的实验中, 保卫细胞微丝骨架由长而呈辐射状分布的聚合态逐步解聚, 气孔开度也随着降低. 药理学实验结果表明, 保卫细胞微丝骨架的解聚能明显地促进外源CaM诱导的气孔关闭, 而微丝骨架的聚合则抑制这一过程. 研究结果还表明, 外源CaM能诱导保卫细胞[Ca²⁺]_cyt升高; 当使用Ca²⁺螯合剂EGTA时, 外源CaM诱导的[Ca²⁺]_cyt升高和气孔关闭运动均受到抑制. 为此推测细胞外CaM可能是通过诱导保卫细胞[Ca²⁺]_cyt升高, 导致微丝骨架的解聚, 进而促进气孔的关闭运动.     

植物的钙调素亚型

钙调素是一种高度保守的多功能Ca2 结合蛋白,在Ca2 信号转导途径中处于中心环节.近年来的研究表明,CaM亚型在植物中普遍存在,不同的CaM亚型与靶蛋白相互作用,它们的表达特性和生物学功能存在差异.该文介绍了植物 CaM亚型的研究现状和进展.     

钙调蛋白与拮抗剂TFP相互作用的水质子弛豫速率研究

钙调蛋白(CaM)是一种多功能调节蛋白,它对靶酶的作用受各种药物拮抗.三氟啦嗪(TFP)是CaM的一种有效拮抗剂.本文利用核磁弛豫法测定与TFP结合前后CaM中金属离子配位水的变化,从而推测CaM与TFP相互作用的方式.结合CD谱的测定结果,可以认为TFP与CaM结合摩尔比不超过2时是特异的强结合,但不影响金属结合部位及主链结构.当比例超过2时,额外的TFP以不同于前的方式结合于CaM.     

粉防已碱与钙调蛋白相互作用的荧光光谱研究

粉防已碱Tet是一种新的钙调蛋白(CaM)拮抗剂,它抑制CaM活化的Ca~(2 )—Mg~(2 )—ATP c。利用丹磺酰钙调蛋白(D—CaM)可方便地鉴测Tet与CaM的相互作用,直接证明了在CaM与Tet之间生成复合物CaM—Tet 我们制备的D—CaM,每个蛋白分子含1.3个丹磺酰基团,活化红细胞膜Ca~(2 )—Mg~(2 )—ATP c的生物活性与天然CaM基本相同。 当Ca~(2 )与D—CaM结合时,丹磺酰基团环境疏水性增加,该荧光团产生较高的量子产率(增加1.6倍),最大发射兰移(从512移兰至495nm)。存在Ca~(2 )时,Tet使D—CaM的荧光强度进一步增加,谱线继续兰移,表明Ca~(2 )及Tet诱导蛋白构象变化,改变了丹磺酰基团的微环境。 荧光滴定实验证明CaM与Tet结合的解离常数为1.8μM,两者的结合是绝对依赖Ca~(2 )的。 药物Tet与CaM的结合可增强结合在CaM上的荧光探剂NPN的荧光,提示CaM不同疏水结合位之间存在变构相互作用。     

梨花柱S-RNase对花粉管内CaM分布的影响

采用免疫胶体金定位和电子显微技术研究了离体条件下梨花柱S-RNase对自花、异花花粉管中钙调素(CaM)分布的影响.结果显示:(1)花粉管中CaM主要分布在质膜附近,在细胞壁上也有少量分布.(2)不亲和(自花)花柱S-RNase处理后花粉管远离质膜的位置发现CaM,处理24h后在花粉管中部出现CaM,且CaM位置向花粉管内部移动;而亲和(异花)S-RNase处理后花粉管的CaM分布没有明显变化.研究表明,CaM参与了自交不亲和反应过程.     

采用GFP标记技术研究钙调蛋白在活细胞中与细胞周期相关的分布

采用融合绿色荧光蛋白 (GFP)和钙调蛋白 (CaM)的方法来研究钙调蛋白在细胞周期不同阶段的分布 .首先 ,发现CaM在细胞内的分布随细胞周期的不同而改变 .CaM在G1期主要分布于细胞质中 ,在S期开始向细胞核内转移 ,并于G2期高度集中于细胞核内 .其次 ,G2期细胞核内的CaM似乎与有丝分裂的启动有关 ,因为此时抑制CaM的活性可同时抑制核膜破裂及染色质凝缩 .最后 ,发现在进入有丝分裂后 ,CaM主要集中于纺锤体靠近两极的地方 .此时 ,抑制CaM的活性会引起纺锤体结构的破坏 .同时讨论了CaM的这些特异性分布与细胞周期调控之间的关系 .     

钙调蛋白及其调节酶PDE在鸡脑胚胎发育过程中的变化

钙调蛋白(CaM)参与脑中多种细胞过程的调节,推测它与大脑的分化发育有关。本实验研究了鸡脑从胚胎早期(原基)至大脑成熟各发育阶段可溶部分的CaM及其调节酶——环核苷酸磷酸二酯酶(PDE)的含量或活力变化。未经孵育的鸡胚中检测不出CaM,在孵育3—14天的胚脑中CaM含量逐渐增加:总CaM增加了3倍,活性CaM增加了4倍;而且在鸡脑细胞分裂分化最活跃的期间(皮质和髓质形成期间,即孵育8—14天),活性CaM的增加尤为显著(增加近3倍)。提示CaM与脑细胞的分裂分化有关。PDE的活力出现晚于CaM5天,随着胚龄增加,不断上升,提示它与脑细胞的分裂分化无直接关系,可能与大脑的功能活动有关。本实验还研究了鸡脑发育期中可逆性钙结合蛋白的变化。     

小麦黄化胚芽鞘的细胞壁钙调素和钙调素结合蛋白

小麦黄化胚芽鞘经苯基琼脂糖亲和层析提取和纯化,其细胞壁CaM在有钙和缺钙时SDS电泳呈现不同的迁移率;依赖Ca~(2 )与苯基疏水结合;在紫外吸收光谱上具有五个特征峰;对PDE的激活剂量反应曲线和从非活性状态向活性状态转变时所需的Ca~(2 )浓度均和胞内CaM相同,说明细胞壁CaM和胞内CaM具有相同的基本理化特性。采用CaM琼脂糖亲和层析,发现在小麦细胞壁中存在CaM结合蛋白,其中以分子量为40.7 kD的 CaM结合多肽为主。细胞壁CaM结合蛋白不具有过氧化物酶、ATP酶或酸性磷酸酯酶的活性。     

番茄果实成熟过程中钙调素含量变化及其与乙烯生成的关系

应用酶联免疫吸附法(ELISA)测定番茄(Lycopersicon esculentum Mill大红品种)果实成熟过程中钙调素(CaM)含量的变化。果实开始成熟(发白期),CaM含量随着呼吸跃变上升,成熟时(粉红期)达到最大,过熟衰老时则下降。果实内部乙烯浓度、ACC含量及其合成酶活性也随跃变而增加,随过熟衰老而降低。GaM含量在果实不同部位中的分布有明显差异,跃变上升期以子房腔组织含量最高,并由中心向外逐渐降低,外周果皮含量最低。此时用外源乙烯催熟处理促进各部位CaM增加。成熟衰老时子房腔组织首先衰老,CaM含量大为降低,但在中柱和果皮中却高于跃变上升期。外源乙烯促进衰老使CaM下降。Ca~(2+)促进番茄圆片CaM含量增高和乙烯产生,CaM抑制剂CPZ,TFP在降低CaM含量的同时也抑制乙烯的产生。     

北京鸭脑钙调素的分离纯化和性质的研究

钙调素(Calmodulin,简称CaM)是一种多生理功能的调节蛋白,在脑的功能活动中有重要作用。本文采用苯基琼脂糖(phenyl-Sepharose CL 4B)层析和葡聚糖凝胶(Sephadex G-50)过滤法,从北京鸭脑中分离纯化出CaM。纯化的CaM经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和等电聚焦(IEF)电泳鉴定均为一条区带。分子量为19kD,等电点(pI)为4.15,消光系数为1.83。 对纯化的鸭脑CaM的活性和性质进行了研究。它可明显地激活牛环核苷酸磷酸二酯酶活性,在有Ca~(2+)存在的条件下,SDS-PAGE中出现电泳迁移速度的改变,紫外吸收光谱具有已知CaM特有的吸收多峰形,并观察了Ca~(2+)对荧光发射光谱的影响。其氨基酸组成中,1/3是酸性氨基酸,苯丙氨酸和酪氨酸的比例为8:2。与猪CaM和牛CaM的物理化学性质作了比较。     

粉防已碱与红细胞膜ATPase相互作用的研究

粉防已碱是一种新的钙调蛋白拮抗剂,专一性抑制人红细胞膜上依赖CaM的Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATPase。在较高浓度下,它也不同程度地抑制Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATPase基本活性、Na~+-K~+-ATPase和Mg~(2+)-ATPase的活性。 除CaM外,不饱和脂肪酸和有限水解均导致膜Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATPase的活化,所有这些活化作用被Tet在大约相同的浓度范围内抑制,表明Tet除与CaM结合外,也与膜Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATPase结合。 Tet具有抗抵渗溶血的性能,反映了拮抗CaM与药物的膜稳定性间存在相关性。     

钙调素（CaM）在中体上的分布及参与胞质分裂的调控

钙调素(CaM)是细胞内Ca^2 的主要受体,在细胞增殖、分化、凋亡、迁移等过程中都发挥着重要的调控作用。采用GFP标记技术,我们观察了GFP—CaM在胞质分裂期HeLa细胞中的动态分布,发现在胞质分裂后期,GFP—CaM与中体紧密相连。抑制CaM的活性会阻止中体的解聚。进一步观察发现,CaM与γ-微管蛋白共分布在中体两侧,抑制CaM活性也会引起中体γ-微管蛋白解离的延迟。本实验结果说明分布在中体上的CaM很可能通过影响中体微管的稳定,参与调控胞质分裂的完成。     

Ca^2＋／钙调蛋白依赖性蛋白激酶在细胞增殖中的作用liferation

钙调蛋白（calmodulin,CaM）是Ca^2＋的受体蛋白,活化的CaM经Ca^2＋／CaM依赖性蛋白激酶（Ca^2＋／calmodulin dependent protein kinases,CaMKs）途径,影响细胞的生长和分裂。CaMKs在调节不同组织正常细胞及恶性细胞的细胞周期进程、核转录及信号转导的过程中发挥重要作用,通过不同机制及Ca^2＋／CaM依赖性激酶激酶诱导的相关级联反应影响多种细胞的增殖。对CaMKs主要成员CaM KⅠ、CaM KⅡ、CaM KⅢ、CaM KⅣ的生物学特点以及其在细胞增殖中作用的最新研究进展进行了综述。     

生物细胞中钙调素分布研究及其意义

研究细胞中钙调素(CaM)的分布是探明CaM细胞生理功能的一个重要方面。本文根据近年的文献资料并结合自己的工作综述了研究细胞中CaM分布的意义,动物和植物细胞内CaM的分布以及各种亚细胞结构中CaM的功能。比较全面地介绍了目前用于定位CaM的研究方法,并对各种方法的特点和有关注意事项进行了评述。     

GM_1激活环核苷酸磷酸二酯酶的作用

神经节苷脂GM1能激活CaM依赖性环核苷酸磷酸二酯酶,其AC50为1．56μg／ml．这种作用并不一定依赖Ca2＋的存在．在有Ca2＋存在时,GM1对PDE的最大激活活性低于CaM,仅为CaM的80．4％;没有Ca2＋存在时,GM1与CaM对PDE有同样的最大激活活性（100％）．GM1能使CaM对PDE的激活曲线左移,AC50降低,但不改变CaM对PDE的最大激活活性．三氟啦嗪能使GM1激活的PDE的活性降低,其IC50为16．3μmol／L．