一种新型大鼠腰椎间盘突出症动物模型的建立

目的建立一种大鼠腰椎间盘突出症的动物模型。方法采用自体髓核移植至背根神经节＋铬制肠线环扎神经根的方法,建立根性神经痛模型,观察背根神经节的组织学改变及超微结构改变,用Von Frey针丝和RTX-1型热痛测试仪检测动物的痛觉行为改变。结果该方法可诱导出明显的机械刺激痛觉超敏与热刺激痛觉过敏,术后1周时最为明显,术后3周时仍有较明显的神经行为异常;术后1周时背根节出现明显的充血水肿,而术后3周以脱髓样改变和纤维细胞增生为主。结论自体髓核移植＋铬制肠线环扎神经根可较好地引起根性神经痛的发生,可作为研究椎间盘突出症的动物模型。     

Wnt5a抑制Wnt3a促黑素细胞黑素生成的作用探究

目的：研究WntSa对Wnt3a处理过的melan—a细胞分泌黑色素的影响。方法：体外培养黑色素细胞（melan-a细胞）,分别进行GFP、Wnt3a、Wnt3a＋WntSa处理,比较细胞的突起,酪氨酸酶的活性以及黑素合成相关基因（TYR、TRP2、MITF）表达情况。结果：Wnt3a促进黑色素细胞突起的生长和TYR、TRP2、MITF的表达,而Wnt5a逆转了Wnt3a对黑色素细胞的作用。结论：Wnt5a抑制Wnt3a促黑素细胞黑素生成的作用,表明在melan．a黑素细胞中Wnt5a可有效抑制wnt经典通路。     

Wnt5a与动脉粥样硬化的研究进展

Wnt5a是一种分泌型糖蛋白,参与生物体多种生命活动。研究显示wnt5a在apoE敲除小鼠的主动脉弓内膜处巨噬细胞聚集区域成强阳性,并且Wnt5a在人动脉粥样硬化斑块处高表达,提示Wnt5a在动脉粥样硬化发病过程中的重要作用。Wnt5a通过参与炎症反应、介导脂质转运以及脂质代谢等多个方面影响了动脉粥样硬化(As)的发生和发展。本文就近年有关Wnt5a与As关系研究的相关进展。     

Wnt5a在增生性瘢痕中的表达及其临床意义

目的：探讨wnt5a在增生性瘢痕中的表达及其临床意义。方法：选择12例增生性瘢痕患者,术中取成熟期增生性瘢痕6份,增殖期增生性瘢痕6份,正常皮肤组织6份。光镜下观察其形态学的差异,通过免疫组化技术检测和比较其Wnt5a阳性表达的细胞面积率。结果：与正常皮肤相比,增殖期增生性瘢痕中有大量的成纤维细胞,胶原纤维含量丰富,且排列紊乱,其间有大量的炎性细胞,成熟期增生性瘢痕也含有丰富的成纤维细胞和胶原,但炎性细胞很少。增殖期增生性瘢痕和成熟期增生性瘢痕组织中真皮浅层和真皮深层Wnt5a阳性表达的细胞面积率均显著高于正常皮肤组织（P〈0．05）,且增殖期增生性瘢痕组织中wnt5a阳性表达的细胞面积率显著高于成熟期增生性瘢痕（P〈0．05）。但正常皮肤组织、成熟期增生性瘢痕、增殖期增生性瘢痕各组间真皮浅层与真皮深层Wnt5a阳性表达的细胞面积率比较均无显著性差异（P〉0．05）。结论：Wnt5a的表达上调可能在增生性瘢痕的形成中起重要作用,并可能与增生性瘢痕的增殖活性有关。     

坐骨神经结扎后大鼠背根神经节和脊髓CGRP表达的变化

目的研究大鼠坐骨神经结扎后降钙素基因相关肽(calcitoningene-relatedpeptide,CGRP)表达变化。方法SD大鼠随机分为假手术对照组和坐骨神经结扎组,实验组结扎后分别存活1、3、5、7、14、21和28d(n=8),免疫荧光(双标法)和免疫组织化学(SABC法)观察术后不同时间点CGRP和NGF在坐骨神经、背根神经节(dorsalrootganglion,DRG)和脊髓的表达变化,Westernblot结合图像分析技术对不同时间的变化进行定量测定。结果术后1d结扎远端坐骨神经内NGF大量堆积,持续到28d仍高于正常。结扎后7dDRG内CGRP阳性细胞百分率减少,持续到28d仍低于正常;结扎后14d脊髓后角CGRP下降,28d仍低于正常,各时间点脊髓前角CGRP表达未见明显变化。结论神经结扎可导致DRG和脊髓后角的CGRP表达下调,可能与靶源性的NGF来源减少有关。     

神经生长因子受体Trka在糖尿病大鼠膀胱和腰骶背根神经节的表达

目的研究糖尿病大鼠膀胱组织及背根神经节中神经生长因子受体Trka的表达变化及意义。方法建立糖尿病大鼠模型20只,以15只正常大鼠为对照,应用免疫组化方法,分别检测大鼠膀胱组织及背根神经节中Trka的表达情况。结果无论是在膀胱组织还是在背根神经节中,糖尿病组Trka的表达均低于对照组,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论神经生长因子受体Trka的表达降低与糖尿病膀胱病变的发生有关。     

Wnt5a及其信号通路与血管新生的研究进展

Wnt5a是Wnt蛋白家族中的成员之一,在细胞成熟、胚胎发育等过程中发挥着重要作用。研究表明Wnt5a的表达调控及其信号通路与血管新生密切相关,并且在血管新生性相关疾病中发挥了重要作用。本文从Wnt5a与其相关信号转导通路对血管新生的影响以及分子机制等方面进行阐述和展望,旨在为以Wnt5a为靶点进行血管新生性疾病的防治提供理论依据。     

Wnt5a、Ror2在骨肉瘤中的表达及临床意义

目的:探讨骨肉瘤组织中Wnt5a、Ror2表达。方法:免疫组织化学法检测Wnt5a、Ror2在实验组55例骨肉瘤和对照组15例骨软骨瘤组织标本中的表达。结果:Wnt5a、Ror2在骨肉瘤组的表达均明显高于骨软骨瘤组(Wnt5a:74.55%、20.00%,Ror2:13.33%、70.91%,P0.05)。Wnt5a、Ror2在骨肉瘤出现转移的表达明显高于未转移(Wnt5a:100%、66.67%,Ror2:100%、61.90%,P0.05),在骨肉瘤Enneking分期中,Wnt5aⅠ期11.11%,Ⅱ期84.38%,Ⅲ期100.00%,Ror2Ⅰ期22.22%,Ⅱ期72.73%,Ⅲ期100.00%,Ⅰ期与Ⅱ期间和Ⅰ期与Ⅲ期间差异皆有统计学意义(P0.05),而Ⅱ期与Ⅲ期间差异皆无统计学意义(P0.05),Wnt5a、Ror2两者之间的表达呈正相关分布(骨肉瘤组:r=0.844,P0.01;骨软骨瘤组:r=0.808,P0.01),但在骨肉瘤患者性别、年龄以及骨肉瘤病理分型组中表达无明显差异(P0.05)。结论:Wnt5a、Ror2在骨肉瘤中存在高度表达,可能具有促癌作用,并与其恶性程度和侵袭转移有关,二者协同作用。     

大鼠背根神经节神经元上失活 BK 通道特性的研究

大电导的电压和 Ca²⁺ 激活的 K⁺ 通道 (BK 通道 ) 在哺乳动物的组织中广泛表达,起着多种多样的作用 . 目前只有少数组织中 BK 通道的性质被深入地研究,而且鲜见有失活的 BK 通道 (BK_i) 的报道,尤其是在神经元中 . 发现在大鼠小直径的背根神经节 (DRG) 神经元中,普遍存在失活的 BK 通道 . 失活的 BK 电流成分是 Ca²⁺敏感的,可以被大电导的 BK 通道特异阻断剂 ChTX 所阻断,而且木瓜蛋白酶可以从胞外改变通道失活的特性 .     

一氧化氮对大鼠背根神经节神经元膜电位的作用

目的：观察一氧化氮对大鼠背根神经节神经元的作用及有关离子机制,并探讨一氧化氮在痛觉信息传递过程中的作用。方法：在分离的大鼠背根神经节标本上,应用细胞内记录技术,给予灌流一氧化氮供体硝普钠,观察硝普钠诱导的神经元膜反应。结果：大部分神经元对硝普钠敏感（79／102,77．45％）,滴加硝普钠（10～100mmol／L）后可引起浓度依赖性的超极化反应,剩余神经元没有反应。硝普钠（100mmol／L）可使神经元膜电导由（21．06±1．94）nS增加到（23．08±0．92）nS。L-NAME（非选择性一氧化氮合酶抑制剂,1mmol／L）、CdCl2（非选择性钙通道阻断剂,0．1mmol／L）、无Na^＋平衡盐液对硝普钠引起超极化反应无明显影响。四乙基碘化铵（非选择性钾通道阻断剂,10mmol／L）明显抑制硝普钠引起的超极化反应。结论：硝普钠在大鼠背根神经节神经元上可引起浓度依赖的超极化反应,且此超极化反应是钾电导介导的。     

异位（过）表达PGRN抑制IL-1β引起的髓核细胞损伤

炎症因子IL-1β是引起髓核细胞功能异常的关键因素之一。颗粒体蛋白原（progranulin,PGRN）是一种多功能生长因子,在组织修复、炎症反应等过程中发挥重要作用,但其在髓核细胞中的作用尚不清楚。本研究以IL-1β诱导的髓核细胞炎性损伤模型为研究对象,探讨PGRN对IL 1β诱导的髓核细胞损伤的保护作用及其机制。基因转染结合MTT方法证明,与IL-1β处理的细胞比较,过表达PGRN可逆转IL-1β引起的原代培养的髓核细胞生长抑制,促进细胞增殖。TUNEL技术和流式细胞分析显示,PGRN抑制IL-1β诱导的髓核细胞凋亡。Western印迹和RT-qPCR方法揭示,与IL-1β处理的细胞相比,过表达PGRN显著上调聚蛋白聚糖（aggrecan）和II型胶原（collagen type II）的蛋白质表达,但下调基质金属蛋白酶-13（MMP-13）、分解素-金属蛋白酶ADAMTS-5的表达,同时抑制IL-1β诱导的炎性因子IL-6、IL-8和TNF-α的表达,说明PGRN可缓解IL-1β引起的炎性反应,并减少细胞外基质（ECM）相关蛋白质的降解。此外,过表达PGRN还可降低p65、p-IkB a和β-catenin的蛋白质表达水平,提示PGRN可抑制IL-1β下游TNF-α介导的NF-κB信号途径及β-catenin途径。总之,上述结果提示,过表达PGRN可通过抑制IL-1β诱导的炎性反应、髓核细胞凋亡及基质代谢紊乱,缓解IL-1β诱导的髓核细胞损伤;PGRN的这种抗炎、抗基质降解作用可能与PGRN参与调控NF-κB和β-catenin信号途径有关。     

Expression and function of Wnt5a in the development of the glandular stomach in the chicken embryo

The epithelium of the chicken embryonic glandular stomach (proventriculus) differentiates into both a glandular and a luminal epithelium, the cells of which express specific marker genes. The subsequent formation and differentiation of the glands then proceed under the influence of the mesenchyme. To search for possible candidates for the mesenchymal factors involved, we have now investigated the expression and function of Wnt5a in this process. Our current results show that Wnt5a is expressed in the mesenchyme during active gland formation and that overexpression of this gene in ovo results in the increased and ectopic expression of some of the marker genes of the luminal and glandular epithelia. In particular, the overexpression of Wnt5a markedly enhances the expression of the embryonic chicken pepsinogen gene, a marker of the glandular epithelium, indicating its role as a mesenchymal factor that regulates the differentiation of the proventricular epithelium.     

miR-155对人椎间盘退变髓核细胞凋亡的作用及机制研究

目的:探讨mi R-155对人椎间盘退变髓核细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:首先构建慢病毒表达载体,在293T细胞中获得重组慢病毒,然后感染椎间盘退变髓核细胞得到稳定过表达细胞系,同时设置空载体和空白细胞组对照。用荧光显微镜观察慢病毒载体的标签蛋白GFP的表达,分别提取三组细胞总RNA,采用RT-q PCR方法检测mi R-155的表达;通过流式细胞术检测细胞凋亡,Western-Blot检测细胞中凋亡相关蛋白FADD、Caspase-3、Bcl-2及Bax的表达,JC-1试剂盒检测细胞线粒体膜电位的变化情况。结果:在荧光显微镜下,经慢病毒感染的过表达细胞系和空载体细胞系均出现绿色荧光,而空白细胞组未见绿色荧光;RT-qPCR结果显示构建的稳定过表达细胞系(GV369-miR-155-NP)中mi R-155的表达水平较高,且与空载体细胞系及空白细胞对照组均呈显著性差异(P0.05);与空载体组(GV369-NP)及空白细胞对照组相比,过表达组(GV369-miR-155-NP)细胞凋亡率显著降低(P0.05),FADD、Caspase-3、Bax的表达水平均明显下降,而Bcl-2表达水平显著增加(P0.05)。结论:mi R-155可能通过靶向结合Caspase-3和FADD阻止FasL-Fas途径或通过线粒体途径抑制人椎间盘退变髓核细胞凋亡。     

AKAP5在电刺激大鼠三叉神经核尾侧复合体的表达

目的：利用电刺激大鼠的偏头痛动物模型,研究与偏头痛病理生理关系密切的AKAP5 基因在动物模型中的表达。方法：体重为250克左右SD大鼠27 只,随机分为a 对照组（n=4）、b 电刺激30 分钟组（n=6）、c 电刺激60 分钟组（n=6）、d 电刺激120 分钟组（n=5）和e 吗啡干预＋电刺激120 分钟组（n=6）,共5组。对照组不予刺激,其余各组电刺激不同时间,各组结束后立即断头取脑,取出延髓及上颈段（至颈2）,利用western-blot技术对AKAP5 在三叉神经核尾侧复合体中的表达进行研究。结果：AKAP5 在大鼠三叉神经核尾侧复合体中有表达,各组AKAP5 积分密度比值分别为2.804,0.913,1.383,0.634,1.030,组间表达无显著差异（P=0.9921＞0.05）。结论：AKAP5 在电刺激与对照组中的表达无显著差异,吗啡对AKAP5 的表达无显著影响。     

AKAP5 在电刺激大鼠三叉神经核尾侧复合体的表达

摘要 目的： 利用电刺激大鼠的偏头痛动物型, 研究与偏头痛病理生理关系密切的 AKAP5 基因在动物型中的表达。方法： 体 重为 250 克左右 SD 大鼠 27 只, 随机分为 a 对照组 （n=4 ） 、 b 电刺激 30 分钟组(n=6)、 c 电刺激 60 分钟组(n=6)、 d 电刺激 120 分钟 组(n=5)和 e 吗啡干预 + 电刺激 120 分钟组(n=6),共 5 组。对照组不予刺激, 其余各组电刺激不同时间, 各组结束后立即断头取脑, 取出延髓及上颈段 （至颈 2 ）, 利用 western-blot 技术对 AKAP5 在三叉神经核尾侧复合体中的表达进行研究。 结果： AKAP5 在大鼠 三叉神经核尾侧复合体中有表达, 各组 AKAP5 积分密度比值分别为 2.804, 0.913, 1.383, 0.634, 1.030, 组间表达无显著差异（ P=0. 9921＞ 0.05 ）。结论： AKAP5 在电刺激与对照组中的表达无显著差异, 吗啡对 AKAP5 的表达无显著影响。     

大鼠髓核细胞原代培养及表型鉴定

目的:探讨Ⅱ型胶原酶联合透明质酸酶消化分离培养髓核细胞及免疫细胞化学表型鉴定的可行性。方法:无菌条件下分离SD大鼠凝胶状髓核,采用Ⅱ型胶原酶联合透明质酸酶消化分离髓核细胞并连续培养,倒置相差显微镜下观察,随后进行免疫细胞化学染色检测不同代次髓核细胞HIF-1、Ⅰ、Ⅱ型胶原、MMP2及蛋白聚糖的表达情况,并给予MTT法测定髓核细胞生长曲线。结果:Ⅱ型胶原酶联合透明质酸酶分离培养原代髓核细胞需要12 d左右贴壁,达95%融合需要34 d,而传代髓核细胞贴壁速率明显增快至10 h,且其倍增时间约为2.5 d;免疫细胞化学显示髓核细胞均表达HIF-1、Ⅰ、Ⅱ型胶原、MMP2和蛋白聚糖,且随着髓核细胞传代其HIF-1α、HIF-1β、Ⅰ型胶原及MMP2表达均增加,但Ⅱ型胶原表达降低,而蛋白聚糖表达无明显差异;MTT法显示随着髓核细胞传代其增殖有所减缓。结论:Ⅱ型胶原酶联合透明质酸酶可成功分离髓核细胞,提高培养效率,且HIF-1α、HIF-1β、Ⅰ、Ⅱ型胶原及MMP2可作为髓核细胞表型分子用于髓核细胞的鉴定。