鞘内注射脐带间充质干细胞治疗神经系统疾病的安全性和疗效研究（英文）

目的:探讨腰穿鞘内注射脐带间充质干细胞治疗神经系统疾病的安全性和疗效并且分析腰穿治疗过程中遇到的各种技术难题。方法:2008年12月至2011年5月88例伴有神经系统疾病的患者给予鞘内注射干细胞治疗,并且评价其在治疗过程中的技术难题,采用HAI评分系统对这些患者神经功能的恢复情况进行评估,定期观察患者的临床症状、生物学指标和影像学检查观察其治疗前后的变化。结果:88例患者中具有技术难题的患者有20例,主要表现为在鞘内注射脐带间充质干细胞的过程中需要行全麻补充、腰穿定位困难等,18例患者在治疗过程中出现副作用(头痛、低热、腰痛和下肢痛),但这些副作用在48小时内经过系统治疗后完全缓解。随访1年,50例患者神经功能得到一定改善,包括15例脊髓损伤患者、10例脑瘫患者、10例脑外伤后综合征患者、5例脑梗死后综合征患者、5例脊髓小脑共济失调患者和5例运动神经元病患者。结论:鞘内注射脐带间充质干细胞治疗神经系统疾病是安全和有效的,由于随访时间较短,有必要对这种治疗模式进行扩大的、双盲、安慰剂对照研究来进一步推广其临床应用。     

脐带间充质干细胞移植治疗脊髓损伤的临床研究

目的:探讨脐带间充质干细胞移植治疗脊髓损伤的疗效及安全性。方法:40例脊髓损伤患者给予脐带间充质干细胞移植治疗,移植方法采用静脉输注联合腰穿鞘内注射的方法。术后随访1年余定期观察患者临床症状及各项指标的变化并进行综合分析。移植过程中为促进干细胞的生长和分化,根据患者病情及身体状况给予相应的康复功能锻炼。结果:与入院时比较,脐带间充质干细胞移植治疗3、6、12个月后,不完全性脊髓损伤患者针刺觉评分、轻触觉评分、运动评分均有明显改善(P<0.05或0.01),完全性脊髓损伤患者针刺觉评分、轻触觉评分、运动评分均无明显变化(P>0.05),两组残损分级均无明显改善(P>0.05)。移植后各项生化指标正常,未出现严重的并发症和明显的不良反应。结论:脐带间充质干细胞移植治疗脊髓损伤近期疗效明显,可以改善患者的临床症状,提高患者的生存质量,是一种值得借鉴的治疗方法。     

脐带间充质干细胞移植对脑瘫患儿运动功能的影响

目的:探讨脐带间充质干细胞移植治疗对脑瘫患儿运动功能的影响极其应用价值。方法:25例脑瘫患者给予脐带间充质干细胞移植治疗,移植方法采用静脉输注联合腰穿鞘内注射的方法。移植术前及移植术后定期采用粗大运动评估量表(Gross MotorFunction Measure,GMFM)及Berg平衡量表(Berg Balance Scale,BBS)对运动功能的改善情况进行评估并进行综合分析。结果:移植术后6月25例脑瘫患儿中有22例患者主观上运动功能较前有明显好转,客观上25例患者GFMF与BSS与术前比较有明显改善(P<0.05),随访6月未发现与移植相关的副作用。结论:脐带间充质干细胞移植是一种安全有效的治疗方法,可在一定程度上改善脑瘫患者的后遗症,提高脑瘫患者的运动功能和生活质量。     

脐带间充质干细胞辅助治疗糖皮质激素耐药的慢性移植物抗宿主病5例并文献复习

目的:探讨脐带间充质干细胞输注治疗糖皮质激素耐药的慢性移植物抗宿主病的疗效和安全性。方法:5例糖皮质激素耐药的慢性移植物抗宿主病患者在原有免疫抑制剂治疗基础上联合脐带间充质干细胞治疗,2~4次为1个疗程,每次间隔1周。对患者进行定期随访观察其治疗效果、移植相关死亡、输注相关不良事件和复发率。结果:5例患者接受脐带间充质干细胞输注后2例获得完全缓解(CR)、2例获得部分缓解(PR),1例患者死亡。2例CR患者分别在脐带间充质干细胞治疗368、452d后停用免疫抑制剂,随访1~1.5年慢性移植物抗宿主病无复发;2例PR患者在脐带间充质干细胞治疗84、96d后开始进入免疫抑制剂减量阶段,目前病情仍稳定并存活。1例患者死于原发病无复发性肺部严重感染。治疗过程中及治疗后未观察到与治疗有关的副作用。新鲜制备脐带间充质干细胞的细胞活力(92%~95%)高于液氮冻存37℃水浴复苏细胞活力(72%~76%)。结论:脐带间充质干细胞辅助治疗可以改善糖皮质激素耐药的慢性移植物抗宿主病的临床症状且不增加恶性血液病复发率,新鲜制备间充质干细胞活性高于液氮冻存复苏细胞。     

脐带间充质干细胞辅助治疗难治性类风湿性关节炎的临床观察

目的:观察脐带间充质干细胞辅助治疗难治性类风湿性关节炎的疗效和安全性。方法:将细胞总数为(5~7)×107个脐带间充质干细胞通过静脉输注途径移植到自愿接受干细胞移植的2例难治性类风湿性关节炎患者体内,4次为1个疗程,每次间隔1周。治疗后随访1年定期观察患者临床症状及各项生化和免疫学指标的变化并进行综合分析。结果:脐带间充质干细胞辅助治疗后1月余,2例患者的临床症状明显改善,28个关节的疾病活动度评分(DAS-28)由3.6和4.0分别降低为2.2和2.6,血沉、C反应蛋白水平和类风湿因子抗体滴度也较治疗前明显降低。随访1年余未观察到与治疗有关的副作用,并且症状持续缓解无复发。结论:脐带间充质干细胞辅助治疗可缓解难治性类风湿性关节炎的临床症状,且未观察到与治疗有关的副作用,安全性好,值得临床进一步研究其远期疗效。     

脐血间充质干细胞移植治疗遗传性痉挛性截瘫1例及文献复习

目的:观察脐血间充质干细胞移植治疗遗传性痉挛性截瘫(hereditary spastic paraplegia,HSP)的疗效和安全性.方法:将细胞总数为(2～6)× 107个脐血间充质干细胞通过静脉输注和腰穿鞘内注射途径移植到自愿接受干细胞移植的1例HSP患者体内.术后随访1年余定期观察患者临床症状及各项指标的变化并进行综合分析.结果:脐血间充质干细胞移植后患者临床症状明显好转:双下肢肌张力明显降低,不需借助拐杖或他人帮助可独立行走,并且步态平稳,移植后各项生化指标正常,未出现严重的并发症和明显的不良反应.随访1年余该患者的症状持续缓解无复发.结论:脐血间充质干细胞移植治疗HSP近期疗效明显,可以改善患者的临床症状,延缓病情的进展,是一种值得借鉴的治疗方法.     

脐带间充质干细胞移植治疗50例缺血性下肢血管病的临床研究

目的:观察脐带间充质干细胞移植治疗缺血性下肢血管病的临床疗效并观察近期临床效果.方法:50例自愿接收脐带间充质干细胞移植患者中糖尿病足35例,动脉硬化闭塞症10例,血栓性闭塞性脉管炎5例.全部患者均给予静脉输注及局部种植脐带间充质干细胞.术后第7天至6个月定期观察各项指标的变化.结果:治疗1月后,47例(94％)疼痛有不同程度的缓解,46例(92％)患肢冷感明显缓解,45例(90％)患者行走距离延长.6月后30例糖尿病足患者溃疡或足部坏疽痊愈.结论:脐带间充质干细胞移植治疗缺血性下肢血管病是一种简便、安全、有效的治疗方法,其治疗的近期疗效显著,使很多患者免除截肢或降低截肢平面,明显改善患者生活质量.     

脐带间充质干细胞治疗粉碎性骨折1例并文献复习

目的:观察脐带间充质干细胞治疗粉碎性骨折的疗效和安全性。方法:将脐带间充质干细胞通静脉输注和局部多点注射到常规治疗效果欠佳自愿接受干细胞移植的1例粉碎性骨折患者,4次为一个疗程,每周间隔1次,每次治疗细胞总数(3~7)×107。术后1、3、6月定期观察患者临床症状及影像学的变化并进行动态观察。结果:脐带间充质干细胞治疗后一月,患者在不帮助的情况下可独立缓慢行走,复查X线提示骨折部位有新生骨形成;干细胞治疗后三月,复查X线提示骨折愈合较前好转;半年后,患者右下肢受力明显好转,可以独立自由行走,复查X线提示右下肢骨折部位有连续性骨痂形成,骨折部位愈合良好。结论:脐带间充质干细胞移植治疗粉碎性骨折是一种安全、有效的手段,可促进粉碎性骨折的愈合,改善其生活质量。     

结核性脑膜脑炎并结核性脊髓炎的2例临床分析

目的：总结结核性脑膜脑炎并结核性脊髓炎的临床特点、治疗方法及预后。方法：对2例结核性脑膜脑炎并结核性脊髓炎患者的临床资料、实验室检查、影像学资料、组织病理学、治疗方法及预后进行分析。结果：2例患者均有头痛、颅神经麻痹、脑膜刺激征、双下肢乏力、感觉障碍;脑脊液中蛋白明显升高;MRI检查显示有脑膜强化、颅内强化灶及相应节段脊髓肿胀;全身抗痨联合鞘内注射异烟肼和地塞米松治疗有效。结论：结核性脑膜脑炎患者如出现脊髓受损表现或脑脊液蛋白明显增高,而腰穿压力正常或降低等应考虑合并结核性脊髓炎的可能性。早期全身抗痨联合鞘内给药疗效确切。     

应用小动物活体成像追踪观察EGFP标记的间充质干细胞

为探讨干细胞移植治疗过程中干细胞在体内的存活和迁移能力,利用非细胞损伤性的EGFP(enhanced green fl uorescence protein)标记间充质干细胞进行了实验研究。该研究用电穿孔方法将加强的绿色荧光蛋白表达质粒p CMV-EGFP(cytomegalovirus-EGFP plasmid)转染细胞产生具有EGFP标记的牙髓干细胞、皮肤成纤维细胞(skin fi broblast cells,SFCs)和脐带间充质干细胞。将EGFP标记的脐带间充质干细胞注射到裸鼠皮下,用小动物活体成像系统观察了EGFP标记细胞在体内移植后细胞存活能力和荧光强度随时间的变化情况。结果表明,电穿孔转染能够在体外产生高效表达EGFP的标记细胞,EGFP在牙髓干细胞、SFCs和脐带间充质干细胞中的表达率分别为80%、85%和80%。通过小动物活体成像系统检测表明,EGFP标记的脐带间充质干细胞注射到裸鼠皮下后EGFP荧光表达在7 d后逐渐下降,但免疫组化分析表明,移植细胞可存活6个月以上。该研究提示,EGFP标记的干细胞可用于体内追踪其存活、迁移及分化,为探讨干细胞移植治疗作用提供了实验证据。     

脐血干细胞移植治疗中间型脊髓性肌萎缩症1 例并文献复习

目的:探讨脐血干细胞移植治疗中间型脊髓性肌萎缩症的临床治疗可行性及效果。方法:已确诊的中间型脊髓性肌萎缩症患儿,采用脐血干细胞移植治疗,4次为一疗程,移植途径采用静脉输注(1次)加蛛网膜下腔注射(3次)的方法,治疗前和治疗后半年均需完善神经系统体检、实验室检查、FIM评分、肌电图等。结果:移植治疗后患儿神经系统症状明显改善,FIM评分提高,实验室检查肌酶下降,肌电图提示重收缩每10.0ms所检肌运动单位较前增加。随访10月患儿未出现副反应。结论:应用脐血干细胞移植治疗中间型脊髓性肌萎缩症是有效安全的,可以改善患儿神经功能。     

脐血干细胞移植治疗中间型脊髓性肌萎缩症1例并文献复习

目的：探讨脐血干细胞移植治疗中间型脊髓性肌萎缩症的临床治疗可行性及效果。方法：已确诊的中间型脊髓性肌萎缩症患儿,采用脐血干细胞移植治疗,4次为一疗程,移植途径采用静脉输注（1次）加蛛网膜下腔注射（3次）的方法,治疗前和治疗后半年均需完善神经系统体检、实验室检查、FIM评分、肌电图等。结果：移植治疗后患儿神经系统症状明显改善,FIM评分提高,实验室检查肌酶下降,肌电图提示重收缩每10.0ms所检肌运动单位较前增加。随访10月患儿未出现副反应。结论：应用脐血干细胞移植治疗中间型脊髓性肌萎缩症是有效安全的,可以改善患儿神经功能。     

脐带间充质干细胞的生物学特性及旁分泌作用的研究进展

脐带是由胚胎外中胚层和/或胚胎中胚层发育而来的组织,脐带间充质干细胞是具有自我更新、多向分化以及高度增殖潜能的多功能干细胞。研究证明,脐带间充质干细胞具有以下功能：参与炎症反应,抑制炎症因子分泌并促进免疫调节;参与受损伤组织的治疗与修复使其再生并改善特定疾病症状;抑制肿瘤增殖和迁移以及促进其凋亡等。然而目前尚未明确以上功能是间充质干细胞本身发挥作用,还是其分泌的相关因子对机体修复产生作用。主要对脐带间充质干细胞的定义、来源、生物学特性、分泌功能等方面的研究进展进行了综述,旨在更好地利用间充质干细胞修复组织,以期为脐带间充质干细胞的后续研究提供参考依据。     

人脐带间充质干细胞条件培养基联合白藜芦醇对人滋养层细胞的作用

目的:探讨人脐带间充质干细胞条件培养基联合白藜芦醇对人绒毛膜外滋养层细胞凋亡的影响。方法:通过CCK8细胞活力检测试剂盒测定白藜芦醇及其与人脐带间充质干细胞条件培养基共同处理人绒毛膜外滋养层细胞HTR8后对细胞增殖及活性的影响;细胞迁移试验检测白藜芦醇和人脐带间充质干细胞条件培养基对细胞迁移能力的影响;显微镜观察细胞形态,并用流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化;Western blot检测白藜芦醇和人脐带间充质干细胞条件培养基对细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2以及迁移相关蛋白MMP-9表达的影响。结果:白藜芦醇能够抑制HTR8细胞增殖,抑制细胞迁移及MMP-9蛋白的表达,改变Bax和Bcl-2蛋白表达诱导细胞凋亡的作用。而人脐带间充质干细胞条件培养基能够逆转白藜芦醇对细胞的抑制作用。结论:人脐带间充质干细胞条件培养基能够通过调控Bax、Bcl-2、MMP-9的蛋白表达逆转白藜芦醇对人绒毛膜外滋养层细胞的抑制作用。人脐带间充质干细胞条件培养基可作为潜在的治疗人绒毛膜外滋养层细胞功能障碍的临床手段,孕妇需要小心使用白藜芦醇。     

Evaluation of suitable reference gene for real-time PCR in human umbilical cord mesenchymal stem cells with long-term in vitro expansion

In real-time quantitative PCR, the accuracy of normalized data is highly dependent on the stability of the reference genes. However, reference gene expression in a given cell type or experimental condition can vary considerably. The goal of this study was to establish a reliable set of reference genes for real-time PCR studies using human umbilical cord mesenchymal stem cells with long-term in vitro expansion. The stability of ten potential reference genes was examined in human umbilical cord mesenchymal stem cells. We found that Ywhaz and Rpl13a, not beta-actin or Gapdh, were the most stably expressed of the internal control genes in different passages of human umbilical cord mesenchymal stem cells. Ywhaz and Rpl13a could be used as reference genes for relative gene quantification and normalization purposes in real-time PCR studies of human umbilical cord mesenchymal stem cells.     

Stable gene expression by self-complementary adeno-associated viruses in human MSCs

Genetically modified mesenchymal stem cells (MSCs) are potentially valuable tools for the novel treatment of human illnesses. Here, we investigated whether gene transfers by self-complementary adeno-associated viruses (scAAV) lead to promising genetic modification in human bone marrow and umbilical cord blood MSCs. Of the various scAAVs, scAAV2, and scAAV5 effectively and safely expressed transgenes in both hMSCs. Transduction efficiency with scAAV2 at 1000 multiplicity of infection was 66.3+/-9.4% and 67.6+/-6.7% in bone marrow and umbilical cord blood MSCs, respectively. A co-infection study showed that the distinct scAAV2 and scAAV5 can effectively express different transgenes in the same hMSC. hMSCs transduced by scAAVs showed long-term gene expression for three months in rat brains. Genetic modification by scAAVs did not affect osteogenic differentiation of hMSCs. Therefore, the present study strongly supports the promising potential of scAAVs as a technical platform for safe, long-term transgene expression in hMSCs.     

人脐带间充质干细胞在急性肾小管坏死模型犬的体内分布及趋化性

目的 观察人脐带间充质干细胞在家犬急性肾小管坏死模型的体内分布及归巢.方法 健康家犬18 只随机分为3 组.模型1 组:肌注新鲜配制的0.2﹪二氯化汞溶液7 ml/kg建立急性肾小管坏死模型,采用经外周静脉注射法输注体外分离培养并用4',6- 二脒基-2- 苯基吲哚(DAPI)标记的人脐带间充质干细胞.模型2 组:造模...     

一种大量快速分离脐带间充质干细胞的新方法

目的:探讨体外快速大量分离脐带间充质干细胞的新方法。方法:采用复合胶原NB4、dispaseII、透明质酸酶三种酶消化3h,加入PBSA溶液稀释,离心获得脐带间充质干细胞,培养;用流式细胞仪对P3代细胞进行表面标记的鉴定,用化学诱导的方法使第3代细胞向脂肪、骨、软骨细胞分化,2~4周后,分别行oilred、Safranin'O和茜素红染色,倒置显微镜下观察诱导结果。结果:经3种酶消化和PBSA稀释,短时间内从脐带中获得了大量间充质干细胞;伴随着细胞的传代,形态逐渐均一,传至第3代,细胞的形态已基本相似;流式细胞仪鉴定,细胞强表达间充质细胞的特异性标记CD90,CD73,CD105,而不表达造血系或内皮系细胞的标记CD45、CD14、CD11、CD34、CD19,也不表达主要组织相容性抗原HLA-DR;向脂肪细胞诱导后第4周,oilred染色见细胞内大量红染的脂滴;向软骨细胞诱导后第4周,Safranin'O染色见多数切片呈阳性,细胞团块中存在大量软骨特异性的陷窝样结构;向骨细胞诱导后第4周,茜素红染色发现肉眼可见的广泛散在的红色阳性钙结节。结论:本研究所采用的3种酶消化结合PBSA稀释的方法可以快速获得脐带间...