细胞松弛素D、秋水仙素作用下大鼠肝癌细胞中黏弹性的研究

采用微管吮吸技术测定大鼠肝癌细胞的黏弹性;研究了秋水仙素、细胞松弛素D以及两者混合作用后对于肝癌细胞黏弹性的影响。结果表明:用CD处理癌细胞后发现癌细胞的弹性系数K1明显下降。与对照组相比:微丝骨架被CD抑制后,在加入Col后肝癌细胞的弹性系数K1显著降低;而微管骨架被col抑制后,在加入CD后肝癌细胞的弹性系数K1、K2和μ无明显变化。提示在微管骨架系统完整的情况下,微丝对肝癌细胞的黏弹性系数的的影响起主要作用。而微管骨架系统受到破坏后,微丝需借助于微管网络的作用来影响细胞的黏弹性。本研究对揭示癌细胞中骨架系统之间的交互作用对于细胞黏弹性的影响提高实验依据。     

细胞松弛素D对棉铃虫核型多角体病毒复制和装配的影响

杆状病毒感染引起宿主细胞肌动蛋白骨架的构象变化 ,使之形成缆绳结构 .棉铃虫核型多角体病毒 (HaNPV)的衣壳蛋白也能使宿主昆虫的肌动蛋白发生凝聚 ,用细胞松弛素D抑制宿主肌动蛋白形成纤丝结构 ,病毒感染Hz AM1,空斑计数表明 ,0 1μg/ml细胞松弛素D可使棉铃虫核型多角体病毒的增殖下降 10 4倍 ,细胞松弛素D浓度增高到 0 5 μg/ml则测不到子代病毒粒子 .Western印迹分析表明 ,细胞松弛素D并不影响受染细胞中肌动蛋白的含量 .斑点印迹 (dotblot)也表明 ,病毒DNA的合成也没有受到影响 ,推测宿主细胞的肌动蛋白纤丝结构与病毒的复制有关 .在电子显微镜下观察超薄切片发现 ,在 0 5 μg/ml细胞松弛素D处理细胞中形成的病毒粒子形态与正常形态明显不同 ,提示细胞松弛素D抑制HaNPV的增殖是由于抑制病毒组装成完整有感染性的病毒粒子 .从而可以认为宿主昆虫细胞的丝状肌动蛋白对子代病毒的复制和组装是必需的 .     

丙烯酰胺和细胞松弛素D作用下大鼠肝细胞中黏弹性的研究

采用微管吮吸技术测定了大鼠肝细胞的黏弹性,进一步研究了丙烯酰胺(acrylamide)和细胞松弛素D(cytochalasin D,CD)以及两者混合作用后对于细胞黏弹性的影响。结果表明:在用CD、丙烯酰胺以及CD、丙烯酰胺混合处理细胞后发现细胞的黏弹性系数均明显下降。尤其是对K1的影响最大中间纤维对于黏弹性系数K1的影响要大于微丝对K1影响。而微丝于黏弹性系数K2的影响要大于中间纤维对K1的影响。另外在丙烯酰胺和细胞松弛素D两者混合作用后细胞的黏弹性系数均比两者单独使用时呈显著下降的趋势。提示中间纤维、微丝在维持细胞黏弹性这一生物力学特性方面均起着一定的作用。另外从以丙烯酰胺组和细胞松弛素D组为照组的数据中发现:丙烯酰胺和细胞松弛素D两者混合作用后细胞的黏弹性系数K1或K2也存在一定程度的降低。中间纤维和微丝可能对正常肝细胞黏弹性有一定之间的交互影响的作用。     

细胞松弛素E对大鼠生精细胞发育的影响

本文采用微丝抑制剂——细胞松弛素E对大鼠生精细胞发育的影响作了形态学观察,特别对支持细胞骨架复合体的作用进行了较为详细的研究。结果表明睾丸内注射0.1ml,1000μmol/L～2000μmol/L,细胞松弛素E,6-14小时后,光镜下可见曲细精管上皮排列疏松,组合紊乱,有的生精上皮基底部出现双核和三核的圆形细胞和多核巨精子细胞,管腔内出现未成熟的精子;在第ⅤⅢ～Ⅸ期曲细精管上皮中,有许多第8、第9期的精子细胞顶体不指向基底方向,属定向不正的精子。电镜下,实验组动物可见一些面向第8-18期精子细胞顶体的支持细胞骨架复合体出现不同程度的缺如,有的断裂成小段;有的破坏仅发生在顶体上方;有的几乎全部丢失,并有类管球复合体的形成。另外,在高渗液处理下,可见精子细胞顶体和支持细胞间的间隙扩大。最后对微丝在精子发育中的作用进行了讨论。     

细胞松弛素B对鲍受精卵超微结构的影响

细胞松弛素B（CB）作为一种微丝解聚剂,可用于诱导贝类三倍体,但由于其毒副作用导致了受精卵死亡和发育异常。通过透射电镜观察比较了皱纹盘鲍（Haliotis discus hannai)正常受精卵与CB处理后的受精卵亚显微结构的变化,结果显示,CB对线粒体等细胞器的破坏,造成了受精卵的代谢缺陷,是导致鲍受精卵孵化率低的原因之一。     

白暨豚正常心电图的初步探讨

1980年以来,我们测定了白鱀豚(Lipotes vexillifer)“淇淇”和“珍珍”的心电图,并与人和其他海豚的心电图作了比较,从而确定了白鱀豚心电图常规导联的联接方法,并比较完整地描述了白鱀豚正常心电图的特征。研究发现,白鱀豚的心电图各波、段和间期的正常范围基本与人的相近,但T波的特征与人不同,人的T波与同导联的主波方向一致,而白鱀豚的T波却正好相反。P—R间期明显比人的延长。本研究将为白鱀豚心血管疾病的诊断提供重要依据。     

细胞松弛素B对蚕豆气孔运动的影响

以蚕豆叶片下表皮条为材料,研究了微丝在气孔运动中的作用。利用肌动蛋白纤丝专一性抑制剂──细胞松弛素Ｂ（ＣＢ）预处理后,再用诱导气孔运动的因子处理表皮条,在显微镜下观测气孔孔径的变化。结果显示,用ＣＢ处理开放或关闭状态气孔,其开度均不发生变化;ＣＢ处理使微丝解聚,气孔运动被抑制;且ＣＢ处理后气孔的运动是可以恢复的。实验进一步表明,开放气孔经１０ｍｇ／Ｌ的ＣＢ预处理后,ＡＢＡ、Ｃａ２＋及暗诱导气孔关闭的作用均不同程度地受到抑制,推测微丝可能参与ＡＢＡ、Ｃａ２＋及暗诱导的气孔关闭过程;关闭气孔经１０ｍｇ／Ｌ的ＣＢ预处理后,Ｋ＋和（或）光诱导气孔开放的作用受到抑制,推测微丝可能参与光及Ｋ＋诱导的气孔开放过程。     

细胞松弛素B对蚕豆气孔运动的影响

以蚕豆叶片下表皮条为材料,研究了微丝在气孔运动中的作用,利用肌动蛋白纤丝专一性抑制剂－－细胞松弛素Ｂ预处理后,再用诱导气孔运动的因子处理表皮条,在显微镜下观测气孔孔径的变化。     

正常细胞和肿瘤细胞纤维蛋白溶酶原激活物活性的比较

PA是一类蛋白水解酶,它可以把血液中的纤维蛋白溶酶原(PGN)激活成纤维蛋白溶酶(PN)。PN也是一种蛋白水解酶,它可以把纤维蛋白凝块水解成可溶性的产物,它对由赖氨酸或精氨酸的羧基形成的肽键有专一性。正常细胞用化学致癌物。肿瘤病毒等转化之后,纤维蛋白溶酶原激活物(PA)的活性可以提高几十倍,甚至上百倍。 Philip,L.Carl等根据肿瘤细胞PA活性较高这一特点,正在研制一种选择性杀伤肿瘤细胞的新型抗癌药。即把具有一般杀伤作用但     

细胞松弛素D对小鼠乳腺腺癌细胞系(MA782/5S-8102)细胞的作用

本文研究了细胞松弛素D(CD)对小鼠乳腺腺癌细胞系(MA782/5S-8102)细胞的作用,统计了在0.4微克/毫升CD作用下的多核细胞形成率,并与HEp2细胞及正常婴兔肾原代培养细胞进行比较。结果表明:CD处理48小时后,肿瘤细胞形成大量的多核,≥3核的细胞数在MA782/5S-8102细胞中为37.05％,在HEp2细胞中为18.37％。正常婴兔肾原代培养细胞经同样处理后≥3核的细胞数只有0.059％。肿瘤细胞多核形成的比例会随CD处理时间的延长而显著增高,并出现排核现象。CD处理96、144小时后的多核细胞数,MA782/5S-8102细胞分别为47.90％,53.12％,HEp2细胞分别为43.94％,51.94％,而正常婴兔肾原代培养细胞则仅为0.26％和0.39％,亦未见排核现象,肿瘤细胞和正常细胞对CD的不同反应,有可能作为鉴别肿瘤细胞与正常细胞的一个简便易行的工具。     

细胞松弛素B诱导虾夷扇贝多倍体初探

Triploid shellfish are useful for aquaculture because of their sterility,superior growth and improved meat quality.Tetraploid are also valuable for 100% producing triploids through mating with diploid.We tested polyploid induction in Japanese scallop,Patinopecten yessoensis,by inhibiting polar body Ⅰ (PB group) and both polar bodyⅠandⅡ (PPB group) in newly fertilized eggs.Cytochalasin B (0.6 mg/L) was applied at 11～22 min post fertilization (PF),and terminated in PB group when polar body Ⅰ was released about 70% in untreated eggs,in PPB group when polar lobe was observed in control group.The treatment and its control were repeated 5～7 times using different pairs of parents.The ploidy was determined by counting chromosome number at embryo stage,and then was detected by flow cytometry (FCM) at larvae stage and juvenile stage.\;In PB group,aneuploid (31.13%),triploid (3.96%),tetraploid (17.46%) and pentaploid (46.65%) embryos were produced,and in PPB groups,pentaploid embryos became higher (56.2%),triploid and tetraploid were 2.42% and 9.11%.At day 3 PF,the larvae showed tetraploid,pentaploid and aneuploid peaks through checking with FCM in PB group,and showed mainly higher pentaploidy peak in PPB groups.However,at day 14 PF diploids were mainly left,sometimes with small triploid peak.It suggested that most tetraploid,aneuploid and pentaploid larvae were died within the first two weeks PF.At three months PF,a few diploid juveniles were harvested in three control groups.Only 12 juvenile scallops were harvested in one of treated group (PB-7),and 11 of them died accidentally,the alive one in treated group was triploid through checking with FCM.     

细胞松弛素对嗜热四膜虫皮层细胞骨架蛋白的影响

测定了细胞松弛素B对嗜热四膜虫RF1株和BF5在生殖接合期的皮层骨架蛋白,尤其是在接合子接合膜形成和原核交换阶段影响甚大。作者发现VB处理后,与对照组相比较,皮层骨架蛋白146KD消失,27KD,43KD,47KD和174KD含量下降,32KD,41KD,51KD和54KD保持不变,结果显示,松弛素B对微纤毛蛋白27KD、43KD、47KD、146KD和174KD有影响。     

细胞松弛素B对多头绒泡菌有丝分裂的影响

将细胞松弛素Ｂ（Ｃｙｔｏｃｈａｌａｓｉｎ Ｂ,ＣＢ）注入同步化的多头绒泡菌原质团,在光镜和电镜下跟踪观察有有丝分裂进程,发现多头绒泡菌进入有丝分裂的时间推迟,与未经ＣＢ处理的样品相比,在Ｓ期注入ＣＢ的样品进入有丝分裂的时间推迟３５ｍｉｎ,在Ｇ２早期注入ＣＢ的样品则推迟２０ｍｉｎ;在Ｇ２中期注入的推迟４５ｍｉｎ;在Ｇ２晚期注入的推迟６０ｍｉｎ,说明抑制肌动蛋白的功能则使有丝分裂受到明显影响。ＣＢ处理     

双靶向溶瘤腺病毒MD55对肿瘤细胞与正常细胞的杀伤作用比较

应用分子克隆和同源重组技术构建双靶向溶瘤腺病毒MD55.分析MD55病毒在细胞中的复制能力,并用MTT和结晶紫方法检测MD55对肿瘤细胞和正常细胞生长的影响,West-ern印迹检测病毒感染后细胞中E1A蛋白和多聚ADP核糖聚合酶(PARP)片断的表达.结果显示,MD55能在MN/CA9阳性的肿瘤细胞SW620和OSRC-2中特异性表达E1A蛋白.并且在这些细胞中的复制能力和对这些细胞的杀伤性与对照病毒ZD55基本相同,而其在正常细胞中的复制能力很弱,对正常细胞的伤害很小;同时MD55可诱导肿瘤细胞SW620和OSRC-2的凋亡,而对正常细胞的凋亡无影响.实验结果表明双靶向溶瘤腺病毒MD55靶向性和安全性比单靶向病毒ZD55更高,有望成为一种很好的肿瘤靶向基因一病毒治疗载体.     

细胞松弛素B促微丝解聚对DNA合成的作用

利用微丝（ＭＦ）解聚药物细胞松弛素Ｂ（ＣＢ）处理Ｇ０期小鼠Ｃ３Ｈ１０Ｔ１／２成纤维细胞,对Ｇ０至Ｓ期ＤＮＡ合成,胸腺嘧啶核苷激酶（ＴＫ）活性、ＴＫ基因表达、钙调素（ＣａＭ）水平和一些细胞周期早期基因的表达进行了观察。Ｇ０期细胞经３ｍｇ／ＬＣＢ处理２ｈ,促ＭＦ解聚增强了血清对Ｓ期细胞ＴＫ活性、ＴＫ基因表达和ＤＮＡ合成的刺激作用,并促进细胞提前进入Ｓ期。血清刺激Ｇ０期细胞进入晚Ｇ１期和Ｓ期时,ＣａＭ     

细胞松弛素B对人胚肺二倍体细胞SL_7和肿瘤细胞CNE、LTEP-78增殖周期的不同影响

CB(1.5微克/毫升)处理正常二倍体细胞SL_7和人肺鳞癌细胞LTEP-78及鼻咽癌细胞CNE,以~3H-TdR掺入和DNA含量变化为指标,观察十天内,核复制动态。SL_7细胞~3h-TdR掺入进行性下降至0,细胞周期被迫阻断(非时相特异性阻留),一部分细胞成为双核。肿瘤细胞LTEP-78和CNE,~3H-TdR掺入受一定程度抑制,但细胞周期移行可以持续,结果,产生一部分多核细胞和染??色体多倍化。CB引起的微丝束解聚与~3H-TdR掺入下降之间,未见到相关性。     

松弛素影响神经垂体的催产素与加压素释放

活体研究表明,松弛素不但能抑制子宫肌肉的收缩,而且可能对下丘脑和神经垂体起作用。给麻醉哺乳大鼠静注松弛素,可抑制射乳;如注入脑室则扰乱射乳反射的模式。离体实验已检验了上述假说。对雄性 Wistar 大鼠,从垂体制备出神经叶,再分离出激素分泌神经的神经末梢,进行下列实验:(1)松弛素对静息条件下和 K~+诱导的加压素和催产素释放的剂量-效应曲线的影响。作者报告了松弛素的作用是双相的。     

利用细胞松弛素B分离柑橘及金柑植物微核的研究

采用细胞松弛素B(CB)处理结合蔗糖梯度超速离心方法分离柑橘和金柑亚原生质体的结果表明,柑橘和金柑原生质体的直径为20～30μm,采用蔗糖梯度超速离心分离亚原生质体,其适宜离心力是1400000×g;4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)的染色效果最好,细胞核和细胞质可明显区分;愈伤组织经CB处理36h后再分离亚原生质体,可显著提高微原生质体的产量,分离的微原生质体直径为1.8～3.5μm,产量达到2～3×104个·g-1(FW)。