鲤、青鱼肠粘膜内分泌细胞的免疫组织化学鉴别和定位

使用过氧化物酶——抗过氧化物酶(PAP)的免疫组织化学染色技术,用10种哺乳动物激素培育出的抗血清对鲤、青鱼肠道粘膜中内分泌细胞的鉴別表明,它们的肠道粘膜上皮中存在有胃泌素、P物质、牛胰多肽、亮氨酸脑啡肽、胰高血糖素样免疫反应物、抑胃多肽等6种免疫活性內分泌细胞;而五羟色胺、胆囊收缩素和神经降压素没有免疫活性反应。在鲤的肠粘膜中存在生长抑素免疫活性内分泌细胞;青鱼中则未见到这种细胞。两种鱼的各种免疫活性內分泌细胞多数在前肠的分布密度较大;但青鱼肠粘膜中P物质和亮氨酸脑啡肽两种免疫活性内分泌细胞却在直肠中分布最多;胰高血糖素样免疫活性内分泌细胞在中肠分布最多。P物质和胃泌素免疫活性內分泌细胞大多数分布于肠褶顶部;其他各种免疫活性內分泌细胞则主要分布于肠褶的中、底部。本文比较了鲤、青鱼的肠内分泌细胞在各肠段中的分布密度,并对其形态学及分布特点进行描述和讨论。     

大鼠胰腺嗜铬颗粒素A分布的免疫组织化学研究

本研究用ＡＢＣ免疫组织化学方法,在Ｂｏｕｉｎ液固定的常规石蜡切片上,观察了啥铬颗粒素Ａ在大鼠胰腺内分泌细胞内的定位和分布,并用相邻切片双标记法,观察了它与胰高血糖素、胰岛素、生长抑素的共存关系。结果发现,大鼠胰腺嗜铬颗粒素Ａ样免疫反应细胞主要分布于胰岛的周边部,胰腺外分泌部的导管和腺泡等处均未见ＣｇＡ祥物质存在。用相邻薄切片免疫显色技术证明,大鼠胰腺中ＣｇＡ样物质与胰高血糖素共存。结果提示,ＣｇＡ可能是胰腺内分泌细胞的一个新的标志物,在胰腺功能调节上发挥着重要作用。     

抗 P 物质单克隆抗体的特性研究

观察了细胞株(BTP-1)所分泌的抗 P 物质单克隆抗体与17种 P 物质类似物的交叉反应。该单克隆抗体所针对的是 P 物质的羧基末端,与羧基端的甲硫氨酸残基有较大的关系,而和P 物质类似物的拮抗作用的强弱无相关性。与9种小肽(亮氨酸脑啡肽、甲硫氨酸脑啡肽,内啡肽、皮啡肽、血管紧张素Ⅰ、Ⅱ、缓激肽,催产素、胰高血糖素)均无交叉反应,显示该单克隆抗体有较好的特异性。经免疫组织化学试验,中脑以下部位的脊髓后角Ⅱ层、黑质、三叉神经脊束核、脚间核等末梢纤维和第Ⅱ脑室腹侧灰质、被盖外侧核、中缝核等胞体核周质染成棕色。BTP-1属于大鼠 IgG 型单克隆抗体。描述了微载体大量培养杂交瘤和制备单克隆抗体的技术,并讨论了大量制备的可能性。     

武夷湍蛙胃肠道内分泌细胞的免疫组织化学定位

用免疫组织化学S-P法,应用七种特异性胃肠激素抗血清对武夷湍蛙胃肠道7个部位内分泌细胞的局部分布、分布密度及形态学特征进行了研究。结果显示：在武夷湍蛙胃肠道中鉴别出四种内分泌细胞,即：5-羟色胺、生长抑素、胃泌素和高血糖素免疫反应细胞。P-物质、胰岛素和胰多肽免疫反应细胞未见。5．羟色胺免疫反应细胞是胃肠道中最主要的内分泌细胞类型,其在胃肠道各段均有分布,但在各段分布密度不同。生长抑制素免疫反应细胞分布于贲门至十二指肠的胃肠道各段。胃泌素免疫反应细胞局限分布于幽门和十二指肠部位。高血糖素免疫反应细胞仅在胃幽门部位有分布。在武夷湍蛙胃肠道内具有最多种类型内分泌细胞分布的部位是幽门,同时胃肠道内各种内分泌细胞在此部位也显示出最高的分布密度。武夷湍蛙胃肠道内分泌细胞形态多样：圆形、椭圆形、纺锤形、梭形、锥形和不规则形。胃部多数内分泌细胞分布于胃腺中,肠道中多数细胞则分布于上皮细胞间,少数分布于固有膜。本研究显示武夷湍蛙与其他两栖动物胃肠道内分泌细胞在分布模式上存在一定共同特征并具其独特性,以上结果提示其与武夷湍蛙消化生理学相关,和其胃肠道的调节特点相关。     

竹叶青蛇消化道内分泌细胞的免疫组织化学定位

应用8种特异性胃肠激素抗血清对竹叶青蛇（Trimersurus stejnegeri）消化道内分泌细胞进行了免疫组织化学定位。5－羟色胺细胞和生长抑素细胞在整个消化道中均有分布。5－羟色胺细胞以十二指肠和回肠密度为最高,空肠、直肠和幽门其次,胃体较低,食道和贲门中偶见;生长抑素细胞在十二指肠处数量最多,胃体、幽门和空肠其次,其余消化道各段偶见;胰高血糖素细胞只见于十二指肠和空肠;血管活性肠肽在贲门和胃体处有少量阳性细胞分布,食道中偶见。以上各处内分泌细胞的分布密度差异显著。未检出胃泌素、P－物质、胰多肽和胰岛素免疫反应阳性细胞。上述内分泌细胞的分布特点可能与竹叶青的摄食习性和生活环境有关。     

双链核糖核酸病毒的研究 Ⅱ.家蚕细胞质多角体病毒免疫学的研究

按前报用分子筛凝胶柱层析纯化家蚕细胞质多角体病毒(Cytoplasmic polyhedrosis virus,以下简称CPV)作为抗原制备了兔抗血清。对接种CPV后不同时间的家蚕中肠组织内CPV的增殖过程进行了观察,表明利用免疫对流电泳在CPV感染后的12～20小时(即病毒在病蚕中肠组织内增殖初期)就可检出。家蚕CPV的抗血清与其他几种昆虫的CPV有免疫交叉反应,但当家蚕CPV的抗血清经双链多聚核苷酸(肌苷酸/胞嘧啶核苷酸,即poly I/poly C)吸收后,则与其他几种昆虫CPV的交叉反应即行消失。     

2种β2-受体激动剂抗血清的比较研究

目的:通过比较分析,为β2-受体激动剂的快速免疫学检测方法及最佳免疫抗血清的选择提供依据。方法:分别以偶氮化法和碳二亚胺法将β2-受体激动剂克伦特罗(CL)和沙丁胺醇(Sal)连接到牛血清白蛋白和卵清蛋白上,免疫家兔;4次免疫后,采血制备抗CL和抗Sal的抗血清;用间接ELISA检测抗血清效价,用间接抑制ELISA检测抗血清交叉反应。结果:为抗CL抗血清的效价为1∶2560,抗Sal抗血清的效价为1∶5120。抗CL抗血清对Sal有0.088%的交叉反应,而抗Sal抗血清对CL有200%的交叉反应;就对CL的抑制而言,抗Sal血清比抗CL血清更敏感。结论:在检测β2-受体激动剂CL时,Sal完全抗原可能是制备抗血清的最佳抗原。     

草鱼催乳素抗血清的制备与鉴定

应用从草鱼垂体中分离纯化的催乳素免疫兔子制备了特异抗血清。用常规酶联免疫吸附测定法检测表明该抗血清与马哈鱼生长激素及促性腺激素完全没有交叉反应，而与草鱼生长湟级向弱交叉反应。免疫细胞化学染色表明该抗血清主要与草鱼垂体前叶催乳素细胞发生结合反应，与垂体间叶细胞有微弱染色反应，但与神经垂体琢垂体后叶细胞则完全没有免疫结合反应。     

四种鲤科鱼肠道中高血糖素免疫活性内分泌细胞的研究

应用过氧化物酶抗过氧化物酶(PAP)免疫组织化学技术,用4种哺乳动物中培育出的抗血清对草鱼、青鱼、鲤和翘嘴红鲌4种鲤科鱼的肠内分泌细胞进行免疫、组织化学的鉴别和定位.证实了高血糖素免疫活性内分泌细胞在草鱼整个肠道中均呈阳性反应;在鲤、青鱼前肠中仅有少量阳性反应;在翘嘴红鲌肠道中未见阳性反应。胃蛋白酶原(Pepsinogen)、凝乳酶(Prochymosin)和神经特异烯醇酶(Neuron specific enolase)3种抗血清在4种鱼的肠道中均未发现阳性反应.本文重点描述草鱼高血糖素免疫活性内分泌细胞在肠道各段的分布,密度及其形态学特征,还就其可能的生理功能与草食性哺乳动物胃肠道中该类内分泌细胞进行比较和讨论。     

GLP-1合成与分泌的分子机制及其影响因素北大核心CSCD

肠促胰素之一的胰高血糖素样肽(GLP-1)是胰高血糖素原基因在肠道L细胞中编码的产物。研究发现GLP-1具有抑制摄食、刺激胰岛素分泌从而降低餐后血糖等重要生物学功能,而GLP-1类似物和受体激动剂等已作为糖尿病治疗主要药物用于临床。本文总结近年关于GLP-1合成与分泌的研究进展,简要介绍胰高血糖素原基因转录、翻译后修饰及其相关调控机制,并从营养物质、激素、自主神经系统、机体生理状态和病理状态等方面,介绍影响GLP-1水平的一些主要因素。     

中华眼镜蛇蛇毒因子(CVF)对补体系统的作用及与人补体C[3]和其他蛇毒抗原性关系

中华眼镜蛇蛇毒经DEAE-Sepharose CL-6B、HPLC等多次柱层析分离出有抗补体及溶血活性的眼镜蛇蛇毒因子（Cobra venon factor,CVF)，纯化后的CVF在聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱上呈单一区带，分子量为225000—230000，等电点为6.20。用二硫苏糖醇还原经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳得三类亚基，其分子量总和为237000。体外抗补体及溶血试验表明，CVF的作用是通过补体旁路途经使总补体活力下降。双向免疫电沪鉴定，发现CVF与人血清作用后，其中补体成分C[3]分子的抗原性发生改变，则表明CVF的作用是通过激活补体成分C[3]而发挥的。给豚鼠腹腔注射CVF（0.15 μg/g体重）后，其血清总补本水平下降到正常值的3%以下，7天后回升，13天后恢复到正常水平。单相免疫电泳表明，CVF与人补体C[3]抗血清间无任何交叉免疫反应，但人血清与CVF抗血清间有微弱的免疫沉淀反应。另外，CVF的氨基酸组成与人补体C[3]也较为相似。鉴定还表明眼镜蛇科中四种蛇毒与CVF抗血清有强烈的免疫沉淀反应，蝰蛇毒及海蛇毒也有免疫沉淀反应，但只有眼镜蛇毒具有抗补体活性。     

大鼠精核蛋白抗血清的制备

用大鼠精核蛋白－核糖核酸复合物免疫大鼠得到了特异的抗ＲＰ抗血清,并用Ｉｍｍｕｎｏｄｏｔｔｉｎｇ和Ｉｍｍｎｕｏｂｌｏｔｔｉｎｇ方法验证了其特异性。该抗血清和ＲＰ有特异的反应,并和哺乳动物小鼠和羊的精核蛋白有一定程度交叉反应,而与体细胞类型核蛋白无交叉反应。并对制备该抗血清的意义予以讨论。     

干预胰高血糖素信号通路治疗糖尿病的研究进展

胰高血糖素是胰岛素最重要的拮抗激素,其从胰岛α细胞合成后分泌入血,与靶组织的胰高血糖素受体结合,激活靶信号通路,生成环一磷酸腺苷(cAMP),促进糖原分解和糖异生,升高血糖.愈来愈多的研究显示,通过抑制α细胞产生和分泌胰高血糖素、中和血循环胰高血糖素、胰高血糖素受体拮抗剂、抑制胰高糖素受体基因表达等干预胰高血糖素的信号通路的措施有可能成为治疗糖尿病的新方法.     

蚯蚓纤溶酶组分的抗原性

以大豆胰蛋白酶抑制剂为配基 ,通过亲和层析制备出的蚯蚓纤溶酶 (EFE)含有 11～ 13个组分 .为了了解这些组分的相互关系 ,用EFE免疫家兔获得了抗血清 .利用该抗血清与已纯化的 10个组分进行免疫双扩散 ,根据形成沉淀线的形状可以将上述 10个组分分为 4大组 .各组内组分之间的沉淀线完全融合 (免疫反应同一性 ) ;组间沉淀线交叉 (免疫反应非同一性 )或为支线 (免疫反应部分同一性 ) .这种按免疫学性质分组与根据分子量大小、氨基酸组成和N端氨基酸序列分组基本吻合 .上述结果为EFE的分类提供了依据 .     

酪氨酸蛋白激酶底物的 ELISA 测定及应用

用合成的磷酸酪氨酸牛血清白蛋白(P-tyr-BSA)免疫家兔得抗血清,此抗血清与3种磷蛋白均有交叉反应.将 IgG 纯化并与辣根过氧化物酶偶联,经 Sephadex G-200纯化得酶标结合物.纯化的 IgG 只与载体牛血清白蛋白和磷酸酪氨酸蛋白有交叉反应.ELISA (酶联免疫吸附测定法)的最小检出量为2—4ng,与被检磷酸酪氨酸蛋白均有交叉反应,但与磷酸丝氨酸和磷酸苏氨酸蛋白及其他含磷酸物质无交叉反应.样品变异系数,批间和批内均小于5%.血清磷酸酪氨酸蛋白检测结果:20例正常人均阴性,20例急性淋巴细胞性白血病18例阳性,14例非急性淋巴细胞性白血病均阳性.     

单克隆抗体在检测侵染植物真菌中的应用

检测发病植物上真菌的免疫诊断技术发展较缓慢。主要原因可能是难以制备特异性抗血清。抗菌丝碎片、冷冻干燥菌丝提取物、固体培养表面洗涤液和培养物过滤液的抗血清有广泛的交叉反应。用多克隆抗体(PAb)和单克隆抗体(MAb)检测植物病毒的进展则快得多。用免疫荧     

扬子鳄消化道内分泌细胞的免疫组织化学研究

应用７种特异性胃肠激素抗血清对扬子鳄消化道内分泌细胞进行了免疫组织化学定位。５－羟色胺细胞在消化道各段都有分布,以十二指肠密度最高,食道、直肠其次。生长抑素细胞在胃幽门部非常密集,胃体中等,胃贲门部较少,十二指肠偶见。胃泌素细胞主要分布于十二指肠前段,空肠、回肠和直肠偶见。许多血管活性肠肽细胞分布于胃贲门部,胃体和胃幽门部少数。胰高血糖素、胰多肽和Ｐ－物质在消化道各段均未检出阳性细胞。结合扬子鳄的     

极北鲵消化道6种内分泌细胞的免疫组织化学研究

应用卵白素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)免疫组织化学法,对极北鲵(Salamandrella keyserlingii)消化道5-羟色胺(5-HT)、胃泌素(Gas)、生长抑素(SS)、胰高血糖素(Glu)、人胰多肽(PP)和P-物质(SP)6种内分泌细胞的分布进行了研究。文中采用Duncan多重比较的方法,对消化道内分泌细胞的分布密度进行统计学分析。结果显示,5-羟色胺细胞在消化道各部位均有分布,胃体(2.80±0.70)和十二指肠(2.60±0.75)分布密度最高,幽门最低(0.85±0.67);胃泌素细胞仅分布于小肠,十二指肠(1.85±0.75)密度最高;生长抑素细胞分布于食管、胃体、幽门、十二指肠和回肠各部位,且幽门(2.25±0.64)分布密度最高;胰高血糖素细胞只见于胃贲门部和胃体,人胰多肽细胞和P-物质细胞在整个消化道均未检测到。各种内分泌细胞的形态多样,呈圆形、椭圆形、锥体形和梭形等。极北鲵消化道内分泌细胞的这种密度分布和形态特点与其他两栖类动物及黑龙江产地的极北鲵相比,既有共性又有差异,其原因可能与物种、食性和栖息地环境等因素有关。     

外源性胰高血糖素对大鼠胰岛B细胞形态和功能的影响

探讨溃疡自愈过程中胰高血糖素对胰岛B细胞调节作用改变的可能机理,同时从形态学方面为IAPP和胰岛素相伴释放及其调节提供依据。给大鼠皮下注射胰岛高血糖素后,取胰腺用免疫组织化学、原位杂交和图像分析方法观察Ins-和I－APP-IR细胞及proIns mRNA表达的变化。结果显示;给予外源性胰高血糖素后,与对照组比较,Ins-IR细胞的场面积明显减少,而IAPP－IR细胞的场面积减少不明显,胰岛B细胞内proIns mRNA杂交信号的平均光密度明显减低。以上结果提示：（1）外源性胰高血糖素促进胰岛素和IAPP相伴释放;但促胰岛素释放作用更明显。（2）外源性胰高血糖素抑制proIns mRNA的表达。     

花臭蛙消化道6种激素阳性细胞的免疫组织化学定位

目的应用6种胃肠激素抗血清对花臭蛙（Rana schmackeri）消化道激素阳性细胞进行了免疫组织化学定位。方法SP（Streptavidin peroxidase）免疫组织化学法。结果五羟色胺阳性细胞在消化道各段都有分布,以胃幽门部密度最高,胃体其次,食道和直肠较少;生长抑素阳性细胞主要分布于胃和小肠,其中幽门部较多,食管和直肠未见分布。胃泌素阳性细胞只在十二指肠和空肠两个部位检测到。而胰多肽、胰高血糖素和P-物质阳性细胞在消化道各段均未见其分布。结论花臭蛙消化道这六种内分泌细胞分布与其他两栖类动物比较,既显示了两栖类动物在生活习性及动物消化生理方面消化道激素阳性细胞分布的某些共性,又显示了不同物种在消化道的结构特点、生活环境、食性等方面存在的种间差异。